用于乙型肝炎病毒感染的RNAi剂
阅读说明：本技术 用于乙型肝炎病毒感染的RNAi剂 (RNAi agents for hepatitis b virus infection ) 是由 B·D·吉文 J·C·哈米尔顿 T·石吕普 M·G·博蒙 O·伦斯 R·C·M·卡尔梅耶 于 2020-02-07 设计创作，主要内容包括：本发明描述了用于抑制乙型肝炎病毒基因表达或治疗与乙型肝炎病毒感染相关联的症状和/或疾病的方法。还描述了用于施用这些RNAi剂的给药方案。本发明描述了用于抑制乙型肝炎病毒基因表达的RNA干扰(RNAi)剂。本文所公开的HBVRNAi剂可例如通过使用缀合的靶向配体靶向细胞,诸如肝细胞。本发明还描述了包含一种或多种HBVRNAi剂和任选地一种或多种另外的治疗剂的药物组合物。将所述HBVRNAi剂体内递送至受感染的肝脏提供了对HBV基因表达的抑制以及对与HBV感染相关联的疾病和病症的治疗。(Methods for inhibiting hepatitis B virus gene expression or treating symptoms and/or diseases associated with hepatitis B virus infection are described. Dosage regimens for administering these RNAi agents are also described. The present invention describes RNA interference (RNAi) agents for inhibiting the expression of hepatitis B virus genes. The hbv rnai agents disclosed herein can target cells, such as hepatocytes, for example, by using conjugated targeting ligands. The invention also describes pharmaceutical compositions comprising one or more hbv rnai agents and optionally one or more additional therapeutic agents. In vivo delivery of the HBV rnai agent to the infected liver provides inhibition of HBV gene expression and treatment of diseases and disorders associated with HBV infection.)
相关申请的交叉引用
本申请要求2019年2月7日提交的美国临时专利申请62/802,614；2019年5月28日提交的美国临时专利申请62/853,659；以及2019年11月7日提交的美国临时专利申请62/932,315的优先权和权益；这些专利申请中的每个专利申请的公开内容据此全文以引用方式并入本文。
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技术领域
本文公开了用于抑制乙型肝炎病毒基因表达的RNA干扰(RNAi)剂、包含HBV RNAi剂的组合物及其使用方法。还公开了用于治疗和/或预防对其有需要的受试者的与由乙型肝炎病毒引起的感染相关联的症状或疾病的方法。
背景技术
乙型肝炎病毒(HBV)是一种严格嗜肝性、含有双链DNA的病毒。虽然DNA是遗传物质，但是复制循环涉及将前基因组RNA复制到DNA中的逆转录步骤。乙型肝炎病毒被归类为嗜肝病毒中的一员，属于嗜肝病毒科。人乙型肝炎病毒的原发感染会引起急性肝炎，伴有器官炎症、发热、黄疸和血液中肝转氨酶升高的症状。那些无法克服病毒感染的患者遭受多年的慢性疾病发展，患肝硬化或肝癌的风险增加。从乙型肝炎病毒感染的母亲到新生儿的围产期传播也会导致慢性肝炎。
在被肝细胞摄取后，核衣壳被转移到细胞核中并释放DNA。在那里，完成DNA链合成并修复缺口，得到3.2kb的共价、闭合、环状(ccc)超螺旋DNA。cccDNA作为五种主要病毒mRNA转录的模板，其长度分别为3.5、3.5、2.4、2.1和0.7kb。所有mRNA都是5'-封端的并且在3'端处多聚腺苷酸化。在所有五种mRNA之间的3'端处存在序列重叠。
一个3.5kb的mRNA作为核心蛋白和聚合酶产生的模板。此外，该同一转录物用作前基因组复制中间体并允许病毒聚合酶启动逆转录产生DNA。核衣壳形成需要核心蛋白。另一3.5kb的mRNA编码前核心蛋白，即可分泌的e抗原(HBeAg)。在不存在复制抑制剂的情况下，血液中的e抗原丰度与肝脏中的乙型肝炎病毒复制相关，并且用作监测疾病进展的重要诊断标志物。
2.4kb和2.1kb的mRNA携带前S1、前S2和S的开放阅读框(“ORF”)，用于表达病毒的大、中和小表面抗原。s抗原与感染性完整颗粒相关联。此外，感染患者的血液还含有仅来源于s抗原的非感染性颗粒，不含基因组DNA或聚合酶。这些颗粒的功能尚不完全清楚。血液中可检测的s抗原的完全和持久消耗被认为是乙型肝炎病毒清除的可靠指标。
0.7kb的mRNA编码X蛋白。该基因产物对于病毒基因的有效转录很重要，并且还充当宿主基因表达的反式激活因子。后一种活性似乎对肝癌发展过程中的肝细胞转化很重要。
超过6个月在血液中具有可检测的s抗原、e抗原和/或病毒DNA的患者被认为是慢性感染。作为逆转录酶活性抑制剂的核苷类似物通常是许多患者的第一治疗选择。施用拉米夫定、替诺福韦和/或恩替卡韦已经显示出抑制乙型肝炎病毒复制，有时达到不可检测的水平，其中肝功能的改善和肝脏炎症的减少通常被视为最重要的益处。然而，在治疗结束后，只有少数患者实现完全和持久的缓解。此外，乙型肝炎病毒随着治疗持续时间的增加而产生耐药性。这对同时感染了乙型肝炎和人体免疫缺陷病毒(HIV)的患者来说尤其困难。两种病毒都容易受核苷类似物药物的影响，并且可能共同产生抗性。
第二种治疗选择是施用α干扰素。此处，患者在6个月的时间内接受高剂量的α干扰素。亚洲B基因型的响应率非常低。已证实，与丁型肝炎病毒(HDV)或人体免疫缺陷病毒的共同感染使α干扰素疗法完全无效。具有强烈肝损伤和重度纤维化病症的患者不符合α干扰素α疗法的条件。
先前已证实某些乙型肝炎病毒特异性RNA干扰(RNAi)剂抑制HBV基因的表达。例如，授予Chin等人的美国专利申请公布2013/0005793公开了用于抑制乙型肝炎病毒基因表达的某些双链核糖核酸(dsRNA)分子，该专利全文以引用方式并入本文。
发明内容
需要一种治疗和/或预防对其有需要的受试者的与由乙型肝炎病毒(HBV)引起的感染相关联的症状或疾病的方法。另外，需要一种抑制一种或多种乙型肝炎病毒基因表达的方法。具体地讲，需要一种使用能够选择性地且有效地抑制乙型肝炎病毒(HBV)基因表达的乙型肝炎病毒(HBV)特异性RNA干扰(RNAi)剂(本文也称为RNAi剂，RNAi触发剂或触发剂)治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法。此外，需要一种使用用于治疗HBV感染并预防与HBV相关联的疾病的新颖HBV特异性RNAi剂的组合来治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法。
本文描述了用于治疗和/或预防对其有需要的受试者(例如，人或动物受试者)的与HBV感染相关联的症状或疾病的方法。该方法包括施用能够选择性地且有效地降低HBV基因表达的一种或多种HBV基因特异性RNAi剂。在一些实施方案中，与HBV感染相关联的症状和疾病包括但不限于慢性肝病/障碍、炎症、纤维化病症、增殖性障碍(包括癌症，诸如肝细胞癌)、丁型肝炎病毒(HDV)感染和急性HBV感染。在一些实施方案中，这些症状和疾病与慢性HBV感染和/或HDV感染相关联。
另外，本文描述了用于治疗和/或预防对其有需要的受试者的与HBV感染相关联的症状或疾病的方法，该方法包括施用包含能够选择性地且有效地降低HBV基因表达的所公开的HBV RNAi剂中的一种或多种的药物组合物。
本文还描述了用于在治疗和/或预防与人类受试者的HBV感染相关联的症状或疾病中使用的药物组合物，例如通过将有效量的药物组合物施用于该人类受试者。还描述了药物组合物在制造药物中的用途，该药物用于在治疗和/或预防与人类受试者的HBV感染相关联的症状或疾病中使用。
在一些实施方案中，存在一种用于治疗或预防受试者的与HBV感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用包含所公开的HBV RNAi剂中的一种或多种的药物组合物。在一些实施方案中，用于在治疗或预防受试者的与HBV感染相关联的疾病中使用的药物组合物包含所公开的HBV RNAi剂中的一种或多种。在一些实施方案中，存在一种用于治疗受试者的与HBV感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用包含所公开的HBV RNAi剂中的一种或多种的药物组合物。在一些实施方案中，用于在治疗受试者的与HBV感染相关联的疾病中使用的药物组合物包含所公开的HBV RNAi剂中的一种或多种。在一些实施方案中，存在一种用于预防受试者的与HBV感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用包含所公开的HBV RNAi剂中的一种或多种的药物组合物。在一些实施方案中，用于在预防受试者的与HBV感染相关联的疾病中使用的药物组合物包含所公开的HBV RNAi剂中的一种或多种。
在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至400mg的量施用给受试者。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约35mg、50mg、200mg、300mg或400mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg、每剂施用约100mg或每剂施用约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBVRNAi剂以每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至10mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以约1周至18周的间隔施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以约1个月的间隔(即，每月给药)施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以约每四周一次的间隔施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以约每四周一次的间隔每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以约7天、14天、21天或28天的间隔施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约200mg的组合量施用。
本文还描述了用于抑制一种或多种乙型肝炎病毒基因表达的方法。在一些实施方案中，该方法抑制一种或多种HBV转录物的表达。在一些实施方案中，该方法抑制大多数或所有HBV转录物的表达。在一些实施方案中，该方法包括施用一种或多种本文所述的HBVRNAi剂。在一些实施方案中，该方法包括施用包含本文所述的HBV RNAi剂中的一种或多种的药物组合物。在一些实施方案中，该方法包括施用两种本文所述的HBV RNAi剂。在一些实施方案中，该方法包括施用包含本文所述的两种HBV RNAi剂的药物组合物。在一些实施方案中，该方法包括使由HBV感染的细胞与本文所述的一种或多种HBV RNAi剂接触。在一些实施方案中，该方法包括使由HBV感染的细胞与本文所述的两种HBV RNAi剂接触。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约35mg、50mg、200mg、300mg或400mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至10mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以约1周至18周的间隔施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以约1个月的间隔(即，每月给药)施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBVRNAi剂以约每四周一次的间隔施用，诸如该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg、100mg或200mg中的任一者的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以约7天、14天、21天或28天的间隔施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg、每剂施用约100mg或每剂施用约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约200mg的组合量施用。
本文所公开的每种HBV RNAi剂包括至少有义链和反义链。有义链和反义链可彼此部分地、基本上或完全互补。本文所述的RNAi剂有义链和反义链的长度可各自为16至30个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为17至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为19个至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为21个至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为21个至24个核苷酸。有义链和反义链可具有相同的长度或不同的长度。本文所公开的HBV RNAi剂已被设计成包括与HBV基因组中的在大多数已知的HBV血清型中为保守的序列至少部分互补的反义链序列。本文所述的RNAi剂在递送至表达HBV的细胞时，抑制一种或多种HBV基因在体内或体外的表达。
HBV RNAi剂包括有义链(也称为过客链)和反义链(也称为引导链)，所述有义链包括第一序列，所述反义链包括第二序列。本文所述的HBV RNAi剂的有义链包括具有与HBVmRNA中至少16个连续核苷酸的核苷酸序列至少约85％同一性的核心拉伸。在一些实施方案中，与HBV mRNA的序列具有至少约85％同一性的有义链核心核苷酸拉伸的长度为16、17、18、19、20、21、22或23个核苷酸。HBV RNAi剂的反义链包含在至少16个连续核苷酸的核心拉伸上与HBV mRNA中的序列和对应的有义链具有至少约85％互补性的核苷酸序列。在一些实施方案中，与HBV mRNA或相应有义链中的序列具有至少约85％互补性的反义链核心核苷酸序列的长度为16、17、18、19、20、21、22或23个核苷酸。
表3和表4中提供了可用于HBV RNAi剂中的HBV RNAi剂有义链和反义链的示例。表5中提供了HBV RNAi剂双链体的示例。表2中提供了由本文所公开的HBV RNAi剂的有义链和反义链组成或包含在其中的19个核苷酸的核心拉伸序列的示例。
在一些实施方案中，使用本领域已知的任何寡核苷酸递送技术将一种或多种HBVRNAi剂递送至靶细胞或组织。核酸递送方法包括但不限于：通过包封在脂质体中、通过离子电渗疗法或通过结合到其他载体(诸如水凝胶、环糊精、可生物降解的纳米胶囊和生物粘附微球、蛋白质性载体或动态聚缀合物(DPC)中(参见例如，WO 2000/053722、WO 2008/0022309、WO 2011/104169和WO 2012/083185，其各自以引用方式并入本文)。在一些实施方案中，通过将RNAi剂与靶向基团共价连接，将HBV RNAi剂递送至靶细胞或组织。在一些实施方案中，靶向基团可包括细胞受体配体，诸如脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPr)配体。在一些实施方案中，ASGPr配体包括半乳糖衍生物簇或由其组成。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包括N-乙酰基-半乳糖胺三聚体或N-乙酰基-半乳糖胺四聚体。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇为N-乙酰基-半乳糖胺三聚体或N-乙酰基-半乳糖胺四聚体。
靶向基团可连接到HBV RNAi剂的有义链或反义链的3'端或5'端。在一些实施方案中，靶向基团连接到有义链的3'端或5'端。在一些实施方案中，靶向基团连接到有义链的5'端。在一些实施方案中，靶向基团经由接头连接到RNAi剂。
在有或没有接头的情况下，靶向基团可连接到表2、表3和表4中所公开的任何有义链和/或反义链的3'端或5'端。在有或没有靶向基团的情况下，接头可附接到表2、表3和表4中所公开的任何有义链和/或反义链的3'端或5'端。
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用包含具有表5中所公开的双链体序列的一种或多种HBV RNAi剂的组合物。
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病的方法，该方法包括施用包含具有表5中所公开的双链体序列的一种或多种HBV RNAi剂的组合物。
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗受试者的HBV相关联疾病的方法，该方法包括施用包含具有表5中所公开的双链体序列的一种或多种HBV RNAi剂的组合物。
在一些实施方案中，本文描述了用于预防受试者的HBV相关联疾病的方法，该方法包括施用包含具有表5中所公开的双链体序列的一种或多种HBV RNAi剂的组合物。
在一些实施方案中，该组合物包含至少两种具有不同核苷酸序列的HBV RNAi剂的组合或混合物。在一些实施方案中，该两种或更多种不同的HBV RNAi剂各自单独地且独立地连接到靶向基团。在一些实施方案中，该两种或更多种不同的HBV RNAi剂各自连接到由N-乙酰基-半乳糖胺组成的靶向基团。在一些实施方案中，当组合物中包含两种或更多种RNAi剂时，RNAi剂中的每一者连接到相同的靶向基团。在一些实施方案中，当组合物中包含两种或更多种RNAi剂时，RNAi剂中的每一者连接到不同的靶向基团，诸如具有不同化学结构的靶向基团。
在一些实施方案中，靶向基团在不使用另外的接头的情况下连接到HBV RNAi剂。在一些实施方案中，靶向基团被设计成具有易于存在以便于与HBV RNAi剂连接的接头。在一些实施方案中，当组合物中包含两种或更多种RNAi剂时，可使用相同的接头将两种或更多种RNAi剂连接到靶向基团。在一些实施方案中，当组合物中包含两种或更多种RNAi剂时，使用不同的接头将两种或更多种RNAi剂连接到靶向基团。
已知HBV mRNA是多顺反子的，导致多种多肽的翻译，并且单独的mRNA在RNA序列中重叠，因此靶向HBV基因的单个RNAi剂可导致大多数或所有HBV转录物的抑制。然而，虽然不希望受任何理论束缚，但假设包含靶向HBV基因的不同位置或区域的两种或更多种HBVRNAi剂(并且具体地，两种或更多种HBV RNAi剂，其中一种HBV RNAi剂靶向SORF并且第二HBV RNAi剂靶向X ORF)的组合物可提供优于仅包含单一HBV RNAi剂的组合物的额外优势，例如：(a)确保靶向到所有的HBV病毒转录物(即，3.5kb前基因组RNA；3.5kb前核心mRNA；2.4kb前S1 mRNA；2.1kb前S2/S mRNA；0.7kb×mRNA；以及由整合的HBV DNA产生的任何表达S-抗原的mRNA)；(b)用于扩大基因型覆盖范围，以潜在地解决更大的患者群体；和/或(c)潜在地减少由于siRNA结合位点中的突变引起的病毒抗性。
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用包括具有不同序列的至少两种HBV RNAi剂的组合的药物组合物，其中每种HBV RNAi剂靶向HBV基因的不同位置或不同区域。在一些实施方案中，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用包括至少两种HBV RNAi剂的组合的药物组合物，其中每种HBV RNAi剂被设计成靶向不同的HBV转录物(例如，包括两种HBV RNAi剂的组合物，其中第一HBV RNAi剂包括与位于HBV基因的S ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链，而第二HBV RNAi剂包括与位于HBV基因的X ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链)。如本文所用，包括与位于S ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链的RNAi剂靶向SEQ ID NO:1的HBV基因组的第1-1307位和第3185-3221位之间的一部分。如本文所用，包括与位于X ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链的RNAi剂靶向SEQ ID NO:1的HBV基因组的第1308-1930位之间的一部分。在一些实施方案中，这些症状和疾病与慢性HBV感染和/或HDV感染相关联。在一些实施方案中，受试者被诊断为HBeAg阳性或HBeAg阴性慢性HBV感染至少6个月。
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病的方法，该方法包括施用包括具有不同序列的至少两种HBV RNAi剂的组合的药物组合物，其中每种HBV RNAi剂靶向HBV基因的不同位置或不同区域。在一些实施方案中，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病的方法，该方法包括施用包括至少两种HBV RNAi剂的组合的药物组合物，其中每种HBV RNAi剂被设计成靶向不同的HBV转录物(例如，包括两种HBVRNAi剂的组合物，其中第一HBV RNAi剂包括与位于HBV基因的S ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链，而第二HBV RNAi剂包括与位于HBV基因的X ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链)。
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗受试者的HBV相关联疾病的方法，该方法包括施用包括具有不同序列的至少两种HBV RNAi剂的组合的药物组合物，其中每种HBVRNAi剂靶向HBV基因的不同位置或不同区域。在一些实施方案中，本文描述了用于治疗受试者的HBV相关联疾病的方法，该方法包括施用包括至少两种HBV RNAi剂的组合的药物组合物，其中每种HBV RNAi剂被设计成靶向不同的HBV转录物(例如，包括两种HBV RNAi剂的组合物，其中第一HBV RNAi剂包括与位于HBV基因的S ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链，而第二HBV RNAi剂包括与位于HBV基因的X ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链)。
在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至50mg、50mg至75mg、75mg至100mg、100mg至125mg、125mg至150mg、150mg至175mg、175mg至200mg、200mg至225mg、225mg至250mg、250mg至275mg、275mg至300mg、300mg至325mg、325mg至350mg、350mg至375mg、375mg至400mg、25mg至75mg、50mg至100mg、100mg至150mg、150mg至200mg、200mg至250mg、250mg至300mg、300mg至350mg、350mg至400mg、25mg至100mg、50mg至150mg、100mg至200mg、150mg至250mg、200mg至300mg、300mg至400mg、25mg至200mg或200mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约30mg至50mg、每剂施用约90mg至110mg或每剂施用约190mg至210mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约30mg至50mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBVRNAi剂以每剂施用约90mg至110mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约190mg至210mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg、约50mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg或约400mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约50mg、约75mg、约100mg或约125mg的组合量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约35mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约35mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBVRNAi剂以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约200mg的组合量施用。
在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至10mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至1.5mg/kg、约1.5mg/kg至2.0mg/kg、约2.0mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至3.0mg/kg、约3.0mg/kg至3.5mg/kg、约3.5mg/kg至4.0mg/kg、约4.0mg/kg至4.5mg/kg、约4.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至5.5mg/kg、约5.5mg/kg至6.0mg/kg、约6.0mg/kg至6.5mg/kg、约6.5mg/kg至7.0mg/kg、约7.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至8.0mg/kg、约8.0mg/kg至8.5mg/kg、约8.5mg/kg至9.0mg/kg、约9.0mg/kg至9.5mg/kg、约9.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5.0mg/kg或约5.0mg/kg至10mg/kg的组合量施用。
在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以约1周至18周的间隔施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以约1周的间隔、约2周的间隔、约3周的间隔、约4周的间隔、约5周的间隔、约6周的间隔、约7周的间隔、约8周的间隔、约9周的间隔、约10周的间隔、约11周的间隔、约12周的间隔、约13周的间隔、约14周的间隔、约15周的间隔、约16周的间隔、约17周的间隔或约18周的间隔施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以约1个月至6个月的间隔施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以约1个月的间隔、约2个月的间隔、约3个月的间隔、约4个月的间隔、约5个月的间隔或约6个月的间隔施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以约4周的间隔或1个月的间隔施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以约7天、14天、21天或28天的间隔施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔施用。
在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂施用约1个月至12个月的持续时间。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂施用至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月或至少约12个月的持续时间。在一些实施方案中，该至少两种HBVRNAi剂施用约1周至18周的持续时间。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂施用至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约11周、至少约12周、至少约13周、至少约14周、至少约15周、至少约16周、至少约17周或至少约18周的持续时间。在一些实施方案中，该至少两种HBVRNAi剂施用约12周至3个月的持续时间。
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用包括两种HBV RNAi剂的组合的药物组合物，其中一种HBV RNAi剂靶向HBV RNA的S ORF(即，具有靶向S转录物(S、前S1和前S2)、前基因组RNA(核心和聚合酶)和HBV基因组的前核心转录物(HBeAg)的反义链)，另一HBV RNAi剂靶向HBV RNA的X ORF(即，具有靶向HBV基因组的X转录物、S转录物(S、前S1和前S2)、前基因组RNA(核心和聚合酶)和HBV基因组的前核心转录物(HBeAg)的反义链)。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含至少一种HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂，该HBVRNAi剂含有靶向HBV基因的S ORF的序列，该第二HBV RNAi剂含有靶向HBV基因的X ORF的序列。
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病的方法，该方法包括施用包括两种HBV RNAi剂的组合的药物组合物，其中一种HBV RNAi剂靶向HBVRNA的S ORF(即，具有靶向S转录物(S、前S1和前S2)、前基因组RNA(核心和聚合酶)和HBV基因组的前核心转录物(HBeAg)的反义链)，另一HBV RNAi剂靶向HBV RNA的X ORF(即，具有靶向HBV基因组的X转录物、S转录物(S、前S1和前S2)、前基因组RNA(核心和聚合酶)和HBV基因组的前核心转录物(HBeAg)的反义链)。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物包含至少一种HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂含有靶向HBV基因的S ORF的序列，该第二HBV RNAi剂含有靶向HBV基因的X ORF的序列。
在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以约1:1、2:1、3:1、4:1或5:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以约2:1的比率施用。
在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBVRNAi剂以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBVRNAi剂以每剂施用约50mg至100mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBVRNAi剂以每剂施用约125mg至225mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约35mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg中的任一者的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约200mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约3mg至650mg的量施用，并且第二RNAi剂以每剂施用约2mg至325mg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约35mg至265mg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约50mg至75mg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约20mg至125mg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约25mg至50mg的量施用。
在一些实施方案中，两种RNAi剂以每剂施用25mg至400mg的组合剂量施用。在一个实施方案中，两种RNAi剂以25mg至400mg的组合剂量施用，并且第一RNAi剂与第二RNAi剂以1:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约20mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约25mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约50mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约100mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约200mg的量。在一些实施方案中，两种RNAi剂以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约20mg的量，或对于约100mg的组合剂量为约50mg的量，或对于约200mg的组合剂量为约100mg的量，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约20mg，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约50mg的量，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约100mg的量，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，两种RNAi剂以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，并且第一RNAi剂与第二RNAi剂以2:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约16mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约8mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约24mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约27mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约13mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约33mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约65mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约35mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约133mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约67mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约200mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约100mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约270mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约135mg的量。在一些实施方案中，两种RNAi剂以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约27mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约13mg的量，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约65mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约35mg的量，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约133mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约67mg的量，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，两种RNAi剂以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，第一RNAi剂与第二RNAi剂以3:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约18mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约6mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约27mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约9mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约30mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约10mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约36mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约75mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约25mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约150mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约50mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约225mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约75mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约300mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约100mg的量。在一些实施方案中，两种RNAi剂以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约30mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约10mg的量，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约75mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约25mg的量，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约150mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约50mg的量，并且两种RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至10mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至1.5mg/kg、约1.5mg/kg至2.0mg/kg、约2.0mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至3.0mg/kg、约3.0mg/kg至3.5mg/kg、约3.5mg/kg至4.0mg/kg、约4.0mg/kg至4.5mg/kg、约4.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至5.5mg/kg、约5.5mg/kg至6.0mg/kg、约6.0mg/kg至6.5mg/kg、约6.5mg/kg至7.0mg/kg、约7.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至8.0mg/kg、约8.0mg/kg至8.5mg/kg、约8.5mg/kg至9.0mg/kg、约9.0mg/kg至9.5mg/kg、约9.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5.0mg/kg或约5.0mg/kg至10mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约0.6mg/kg至7mg/kg的量施用，并且第二RNAi剂以每剂施用约0.3mg/kg至5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约0.5mg/kg至2.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约0.3mg/kg至1.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约0.6mg/kg至5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至2.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂和第二RNAi剂以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂和第二RNAi剂以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
本文公开了用于抑制HBV基因表达的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有包含表3中任一序列中的序列的反义链。
本文公开了用于抑制HBV基因表达的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有包含表4中任一序列中的序列的有义链。
本文公开了用于抑制HBV基因表达的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有包含表3中任一序列的序列的反义链以及包含表4中与该反义链至少部分互补的任一序列中的序列的有义链。
本文公开了用于抑制HBV基因表达的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有由表3中任一序列的序列组成的反义链以及由表4中与该反义链至少部分互补的任一序列中的序列的组成的有义链。
本文公开了用于抑制细胞中HBV基因表达的方法，该方法包括施用一种或多种具有表5的双链体结构的HBV RNAi剂。
本文公开了用于治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有包含表3中任一序列中的序列的反义链。
本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该一种或多种HBV RNAi剂具有包含表3中任一序列中的序列的反义链。
本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该一种或多种HBV RNAi剂具有包含表3中任一序列中的序列的反义链。
本文公开了用于治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有包含表4中任一序列中的序列的有义链。
本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该一种或多种HBV RNAi剂具有包含表4中任一序列中的序列的有义链。
本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该一种或多种HBV RNAi剂具有包含表4中任一序列中的序列的有义链。
本文公开了用于治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂包含表3中任一序列中的序列的反义链以及包含表4中与该反义链至少部分互补的任一序列中的序列的有义链。
本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该一种或多种HBV RNAi剂具有包含表3中任一序列的序列的反义链以及包含表4中与该反义链至少部分互补的任一序列中的序列的有义链。
本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该一种或多种HBV RNAi剂具有包含表3中任一序列的序列的反义链以及包含表4中与该反义链至少部分互补的任一序列中的序列的有义链。
本文公开了用于治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有由表3中任一序列中的序列组成的反义链以及由表4中与该反义链至少部分互补的任一序列中的序列组成的有义链。
本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该一种或多种HBV RNAi剂具有由表3中任一序列的序列组成的反义链以及由表4中与该反义链至少部分互补的任一序列中的序列组成的有义链。
本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂，该一种或多种HBV RNAi剂具有由表3中任一序列的序列组成的反义链以及由表4中与该反义链至少部分互补的任一序列中的序列组成的有义链。
本文公开了用于治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，该方法包括施用一种或多种具有表5的双链体结构的HBV RNAi剂。
本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种具有表5的双链体结构的HBV RNAi剂。
本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用一种或多种具有表5的双链体结构的HBV RNAi剂。
本文公开了用于抑制HBV基因表达的方法，该方法包括施用：(i)HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有包含表2或表3中的任一序列中的序列或由其组成的反义链，以及(ii)第二HBV RNAi剂，该第二HBV RNAi剂具有包含表2或表3中的任一序列中的序列或由其组成的反义链。
本文公开了用于治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，该方法包括施用：(i)HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有包含表2或表3中的任一序列中的序列或由其组成的反义链，以及(ii)第二HBV RNAi剂，该第二HBV RNAi剂具有包含表2或表3中的任一序列中的序列或由其组成的反义链。
本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用：(i)HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有包含表2或表3中的任一序列中的序列或由其组成的反义链，以及(ii)第二HBV RNAi剂，该第二HBV RNAi剂具有包含表2或表3中的任一序列中的序列或由其组成的反义链。
本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用：(i)HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂具有包含表2或表3中的任一序列中的序列或由其组成的反义链，以及(ii)第二HBV RNAi剂，该第二HBV RNAi剂具有包含表2或表3中的任一序列中的序列或由其组成的反义链。
本文公开了用于抑制HBV基因表达的方法，该方法包括施用：(i)第一HBV RNAi剂，该第一HBV RNAi剂具有反义链和有义链，该反义链包含表2或表3中任一序列中的序列或由其组成，该有义链包含表2或表4中与第一HBV RNAi剂的反义链至少部分互补的任一序列中的序列或由其组成，以及(ii)第二HBV RNAi剂，该第二HBV RNAi剂具有反义链和有义链，该反义链包含表2或表3中任一序列中的序列或由其组成，该有义链包含表2或表4中与第二HBV RNAi剂的反义链至少部分互补的任一序列中的序列或由其组成。
本文公开了用于治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，该方法包括施用：(i)第一HBV RNAi剂，该第一HBV RNAi剂具有反义链和有义链，该反义链包含表2或表3中任一序列中的序列或由其组成，该有义链包含表2或表4中与第一HBV RNAi剂的反义链至少部分互补的任一序列中的序列或由其组成，以及(ii)第二HBV RNAi剂，该第二HBVRNAi剂具有反义链和有义链，该反义链包含表2或表3中任一序列中的序列或由其组成，该有义链包含表2或表4中与第二HBV RNAi剂的反义链至少部分互补的任一序列中的序列或由其组成。
本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用：(i)第一HBV RNAi剂，该第一HBV RNAi剂具有反义链和有义链，该反义链包含表2或表3中任一序列中的序列或由其组成，该有义链包含表2或表4中与第一HBV RNAi剂的反义链至少部分互补的任一序列中的序列或由其组成，以及(ii)第二HBV RNAi剂，该第二HBVRNAi剂具有反义链和有义链，该反义链包含表2或表3中任一序列中的序列或由其组成，该有义链包含表2或表4中与第二HBV RNAi剂的反义链至少部分互补的任一序列中的序列或由其组成。
本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用：(i)第一HBV RNAi剂，该第一HBV RNAi剂具有反义链和有义链，该反义链包含表2或表3中任一序列中的序列或由其组成，该有义链包含表2或表4中与第一HBV RNAi剂的反义链至少部分互补的任一序列中的序列或由其组成，以及(ii)第二HBV RNAi剂，该第二HBV RNAi剂具有反义链和有义链，该反义链包含表2或表3中任一序列中的序列或由其组成，该有义链包含表2或表4中与第二HBV RNAi剂的反义链至少部分互补的任一序列中的序列或由其组成。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂包含：
a.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AUUGAGAGAAGUCCACCAC(SEQ IDNO:7)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAU(SEQ ID NO:34)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
b.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UUUGAGAGAAGUCCACCAC(SEQ IDNO:8)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAA(SEQ ID NO:35)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
c.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQ IDNO:12)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:39)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
d.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQ IDNO:13)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUA(SEQ ID NO:40)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
e.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQ IDNO:17)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:44)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
f.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQ IDNO:18)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:45)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
g.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGC(SEQ IDNO:22)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ ID NO:49)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
h.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UCCAAUUUAUGCCUACAGC(SEQ IDNO:23)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GCUGUAGGCAUAAAUUGGA(SEQ ID NO:50)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
i.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQ IDNO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
j.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQ IDNO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
k.反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQ IDNO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含HBV RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含HBV RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含HBV RNAi剂。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
i)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQ IDNO:12)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:39)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQID NO:13)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUA(SEQ ID NO:40)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含：
i)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQ IDNO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
iii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
iii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQID NO:12)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:39)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
iv)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQID NO:13)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUA(SEQ ID NO:40)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含：
iv)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
v)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQ IDNO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
vi)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBVRNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
v)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQ IDNO:12)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:39)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
vi)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQID NO:13)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUA(SEQ ID NO:40)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含：
vii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
viii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ix)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
i)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQ IDNO:17)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:44)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQID NO:18)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:45)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含：
i)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQ IDNO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
iii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
iii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQID NO:17)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:44)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
iv)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQID NO:18)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:45)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含：
iv)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
v)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQ IDNO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
vi)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBVRNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
v)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQ IDNO:17)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:44)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
vi)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQID NO:18)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:45)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含：
vii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
viii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ix)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用用于抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
i)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQ IDNO:12)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:39)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQID NO:13)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUA(SEQ ID NO:40)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链，该反义链具有与HBV mRNA的X ORF的一部分至少部分互补的序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用用于抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
iii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQID NO:12)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:39)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
iv)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQID NO:13)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUA(SEQ ID NO:40)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链，该反义链具有与HBV mRNA的X ORF的一部分至少部分互补的序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用用于抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
v)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQ IDNO:12)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:39)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
vi)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCA(SEQID NO:13)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUA(SEQ ID NO:40)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链，该反义链具有与HBV mRNA的X ORF的一部分至少部分互补的序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
i)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQ IDNO:17)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:44)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQID NO:18)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:45)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链，该反义链具有与HBV mRNA的X ORF的一部分至少部分互补的序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
iii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQID NO:17)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:44)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
iv)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQID NO:18)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:45)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链，该反义链具有与HBV mRNA的X ORF的一部分至少部分互补的序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBVRNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含：
v)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQ IDNO:17)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:44)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
vi)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCC(SEQID NO:18)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:45)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链，该反义链具有与HBV mRNA的X ORF的一部分至少部分互补的序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链，该反义链具有与HBV mRNA的S ORF的一部分至少部分互补的序列，并且其中第二HBV RNAi剂包含：
i)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQ IDNO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
iii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链，该反义链具有与HBV mRNA的S ORF的一部分至少部分互补的序列，并且其中第二HBV RNAi剂包含：
iv)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
v)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQ IDNO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
vi)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种或更多种HBVRNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链，该反义链具有与HBV mRNA的S ORF的一部分至少部分互补的序列，并且其中第二HBV RNAi剂包含：
vii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')GACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:27)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUC(SEQ ID NO:54)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
viii)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:28)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:55)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ix)反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAG(SEQID NO:29)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该反义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:56)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂包含：
a.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGGCCUUAU(SEQ IDNO:149)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
b.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGGCCU(SEQ ID NO:150)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
c.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGGC(SEQ ID NO:151)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
d.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCCUU(SEQ ID NO:152)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
e.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
f.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACG(SEQ ID NO:160)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
g.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
h.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCCUU(SEQ ID NO:163)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
i.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACGA(SEQ ID NO:170)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
j.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
k.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCUU(SEQ ID NO:172)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
l.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCCU(SEQ ID NO:173)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
m.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCAUU(SEQ ID NO:174)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
n.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
o.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCUU(SEQ ID NO:178)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
p.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCACUU(SEQ ID NO:179)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
q.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCACC(SEQ ID NO:180)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
r.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:181)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
s.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCUU(SEQ ID NO:182)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
t.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCCUU(SEQ ID NO:183)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
u.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCCUC(SEQ ID NO:184)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
v.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UCCAAUUUAUGCCUACAGCUU(SEQ ID NO:185)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
w.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UCCAAUUUAUGCCUACAGCCUU(SEQ ID NO:186)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
x.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCU(SEQ ID NO:187)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
y.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
z.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:189)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
aa.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCCU(SEQ ID NO:190)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
bb.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UCCAAUUUAUGCCUACAGCCU(SEQ ID NO:191)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
cc.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCCG(SEQ ID NO:192)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
dd.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UCCAAUUUAUGCCUACAGCCG(SEQ ID NO:193)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ee.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGGG(SEQ ID NO:194)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中该HBV RNAi剂还包含与所述相应反义链至少部分互补的有义链。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂包含：
a.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGGCCUUAU(SEQ IDNO:149)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
b.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGGCCU(SEQ ID NO:150)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
c.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGGC(SEQ ID NO:151)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
d.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCCUU(SEQ ID NO:152)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
e.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
f.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACG(SEQ ID NO:160)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
g.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
h.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCCUU(SEQ ID NO:163)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
i.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACGA(SEQ ID NO:170)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
j.反义链，该反义链由与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
k.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCUU(SEQ ID NO:172)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
l.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCCU(SEQ ID NO:173)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
m.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCAUU(SEQ ID NO:174)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
n.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
o.反义链，该反义链由与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCUU(SEQ ID NO:178)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
p.反义链，该反义链由与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCACUU(SEQ ID NO:179)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
q.反义链，该反义链由与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCACC(SEQ ID NO:180)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
r.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:181)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
s.反义链，该反义链由与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCUU(SEQ ID NO:182)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
t.反义链，该反义链由与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCCUU(SEQ ID NO:183)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
u.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCCUC(SEQ ID NO:184)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
v.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UCCAAUUUAUGCCUACAGCUU(SEQ ID NO:185)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
w.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UCCAAUUUAUGCCUACAGCCUU(SEQ ID NO:186)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
x.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCU(SEQ ID NO:187)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
y.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
z.反义链，该反义链由与序列(5'→3')AACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:189)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
aa.反义链，该反义链由与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCCU(SEQ ID NO:190)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
bb.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UCCAAUUUAUGCCUACAGCCU(SEQ ID NO:191)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
cc.反义链，该反义链由与序列(5'→3')ACCAAUUUAUGCCUACAGCCG(SEQ ID NO:192)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；或者
dd.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')UCCAAUUUAUGCCUACAGCCG(SEQ ID NO:193)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或。
ee.反义链，该反义链由与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGGG(SEQ ID NO:194)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列组成；
并且其中该HBV RNAi剂还包含与所述相应反义链至少部分互补的有义链。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂包含：
i.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfccsusuAu(SEQ ID NO:61)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
ii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfcscsu(SEQ ID NO:62)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
iii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfccsu(SEQ ID NO:63)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
iv.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfsc(SEQ ID NO:64)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
v.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgusu(SEQ ID NO:68)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
vi.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscscaauUfuAfuGfcCfuacagcsc(SEQ ID NO:85)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
vii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfsusugagAfgAfaGfuCfcaccacsg(SEQ ID NO:94)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
viii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfsusUfgAfgAfgAfaGfuCfcAfcCfaCfgsa(SEQ ID NO:98)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
ix.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgcsc(SEQ ID NO:102)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
x.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgcusu(SEQ ID NO:103)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xi.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgccsu(SEQ ID NO:104)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgccusu(SEQ ID NO:105)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xiii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgusu(SEQ ID NO:107)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xiv.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')cPrpusAfsusUfgAfgAfgAfaGfuCfcAfcCfaCfsg(SEQ ID NO:108)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xv.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfausu(SEQ ID NO:109)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xvi.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsg(SEQ ID NO:110)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xvii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsusu(SEQ ID NO:111)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xviii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsgsa(SEQ ID NO:112)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xix.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacusu(SEQ ID NO:120)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xx.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcusu(SEQ ID NO:125)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；
xxi.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc(SEQ ID NO:126)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc(SEQ ID NO:127)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxiii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcacsc(SEQ ID NO:128)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxiv.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcusu(SEQ ID NO:129)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxv.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc(SEQ ID NO:130)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxvi.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcusu(SEQ ID NO:131)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxvii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusu(SEQ ID NO:132)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxviii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusc(SEQ ID NO:133)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxix.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcusu(SEQ ID NO:134)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxx.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusu(SEQ ID NO:135)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxxi.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsc(SEQ ID NO:136)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxxii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgscsc(SEQ ID NO:137)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxxiii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgscsc(SEQ ID NO:138)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxxiv.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsu(SEQ ID NO:139)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxxv.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsg(SEQ ID NO:140)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxxvi.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsc(SEQ ID NO:141)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxxvii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfUfAfuGfcCfuAfcAfgusu(SEQ ID NO:142)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxxviii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgCfsc(SEQ ID NO:143)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xxxix.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcCfsu(SEQ ID NO:144)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xl.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcCfsu(SEQ ID NO:145)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xli.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')asCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccsg(SEQ ID NO:146)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xlii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccsg(SEQ ID NO:147)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；或者
xliii.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfggsg(SEQ ID NO:148)相差0个、1个、2个或3个核苷酸的序列；
其中a、g、c和u为2'-O-甲基(2'-OMe)修饰的核苷酸；Af、Cf、Gf和Uf为2'-氟修饰的核苷酸；s为硫代磷酸核苷间键，其余的核苷酸单体通过磷酸二酯键连接；并且cPrpu为5'-环丙基膦酸酯-2'-O-甲基修饰的核苷酸；并且其中该HBV RNAi剂还包含与所述相应反义链至少部分互补的有义链。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂包含：
i.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfccsusuAu(SEQ ID NO:61)组成；或者
ii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfcscsu(SEQ ID NO:62)组成；或者
iii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfccsu(SEQ ID NO:63)组成；或者
iv.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgGfsc(SEQ ID NO:64)组成；或者
v.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgusu(SEQID NO:68)组成；或者
vi.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscscaauUfuAfuGfcCfuacagcsc(SEQ IDNO:85)组成；或者
vii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfsusugagAfgAfaGfuCfcaccacsg(SEQID NO:94)组成；或者
viii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfsusUfgAfgAfgAfaGfuCfcAfcCfaCfgsa(SEQ ID NO:98)组成；或者
ix.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgcsc(SEQID NO:102)组成；或者
x.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgcusu(SEQID NO:103)组成；或者
xi.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgccsu(SEQID NO:104)组成；或者
xii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuuuauGfcCfuAfcAfgccusu(SEQ ID NO:105)组成；或者
xiii.反义链，该反义链由序列(5'→3')cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgusu(SEQ ID NO:107)组成；或者
xiv.反义链，该反义链由序列(5'→3')cPrpusAfsusUfgAfgAfgAfaGfuCfcAfcCfaCfsg(SEQ ID NO:108)组成；或者
xv.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfausu(SEQID NO:109)组成；或者
xvi.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsg(SEQID NO:110)组成；或者
xvii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsusu(SEQ ID NO:111)组成；或者
xviii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacsgsa(SEQ ID NO:112)组成；或者
xix.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfsusUfgAfgagaaGfuCfcAfcCfacusu(SEQ ID NO:120)组成；或者
xx.反义链，该反义链由序列(5'→3')asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcusu(SEQ ID NO:125)组成；
xxi.反义链，该反义链由序列(5'→3')asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc(SEQ ID NO:126)组成；或者
xxii.反义链，该反义链由序列(5'→3')asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcacusu(SEQ ID NO:127)组成；或者
xxiii.反义链，该反义链由序列(5'→3')asGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcacsc(SEQ ID NO:128)组成；或者
xxiv.反义链，该反义链由序列(5'→3')usGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcusu(SEQ ID NO:129)组成；或者
xxv.反义链，该反义链由序列(5'→3')usGfsasAfaAfuUfgAfgAfgAfaGfuCfcasc(SEQ ID NO:130)组成；或者
xxvi.反义链，该反义链由序列(5'→3')asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcusu(SEQ ID NO:131)组成；或者
xxvii.反义链，该反义链由序列(5'→3')asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusu(SEQ ID NO:132)组成；或者
xxviii.反义链，该反义链由序列(5'→3')asCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusc(SEQ ID NO:133)组成；或者
xxix.反义链，该反义链由序列(5'→3')usCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcusu(SEQ ID NO:134)组成；或者
xxx.反义链，该反义链由序列(5'→3')usCfscsAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccusu(SEQ ID NO:135)组成；或者
xxxi.反义链，该反义链由序列(5'→3')cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsc(SEQ ID NO:136)组成；或者
xxxii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgscsc(SEQ ID NO:137)组成；或者
xxxiii.反义链，该反义链由序列(5'→3')cPrpusAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgscsc(SEQ ID NO:138)组成；或者
xxxiv.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsu(SEQ ID NO:139)组成；或者
xxxv.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsg(SEQ ID NO:140)组成；或者
xxxvi.反义链，该反义链由序列(5'→3')asAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgcsc(SEQ ID NO:141)组成；或者
xxxvii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfUfAfuGfcCfuAfcAfgusu(SEQ ID NO:142)组成；或者
xxxviii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfgCfsc(SEQ ID NO:143)组成；或者
xxxix.反义链，该反义链由序列(5'→3')asCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcCfsu(SEQ ID NO:144)组成；或者
xl.反义链，该反义链由序列(5'→3')usCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfcCfsu(SEQ ID NO:145)组成；或者
xli.反义链，该反义链由序列(5'→3')asCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccsg(SEQ ID NO:146)组成；或者
xlii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usCfscAfaUfuUfaUfgCfcUfaCfaGfccsg(SEQ ID NO:147)组成；或者
xliii.反义链，该反义链由序列(5'→3')usAfscsCfaAfuUfuAfuGfcCfuAfcAfggsg(SEQ ID NO:148)组成；
其中a、g、c和u为2'-O-甲基(2'-OMe)修饰的核苷酸；Af、Cf、Gf和Uf为2'-氟修饰的核苷酸；s为硫代磷酸核苷间键，其余的核苷酸单体通过磷酸二酯键连接；并且cPrpu为5'-环丙基膦酸酯-2'-O-甲基修饰的核苷酸；并且其中该HBV RNAi剂还包含与所述相应反义链至少部分互补的有义链。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂包含：
a.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')UUGCCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUT(SEQ IDNO:275)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
b.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')UAUAUGCCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:276)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
c.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU(SEQ ID NO:278)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
d.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:285)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
e.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')CGUGGUGGACUUCUCUCAAUA(SEQ ID NO:289)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
f.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
g.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
h.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')UCGUGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:300)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
i.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
j.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU(SEQ ID NO:303)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
k.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU(SEQ ID NO:304)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
l.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:306)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
m.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
n.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')AAUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:308)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
o.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:318)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
p.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GGUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:319)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
q.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:320)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
r.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:321)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
s.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ ID NO:322)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
t.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ ID NO:323)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
u.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GAGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ ID NO:324)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
v.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GCUGUAGGCAUAAAUUGGA(SEQ ID NO:325)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
w.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGA(SEQ ID NO:326)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
x.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')AGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:327)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
y.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
z.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:329)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
aa.反义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ ID NO:330)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
bb.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')AGGCUGUAGGCAUAAAUUGGA(SEQ ID NO:331)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
cc.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')CGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ ID NO:332)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
dd.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')CGGCUGUAGGCAUAAAUUGGA(SEQ ID NO:333)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；或者
ee.有义链，该有义链包含与序列(5'→3')CCCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:334)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；
并且其中该HBV RNAi剂还包含与该相应反义链至少部分互补的反义链。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂包含：
a.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')UUGCCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUT(SEQ IDNO:275)组成；或者
b.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')UAUAUGCCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQID NO:276)组成；或者
c.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU(SEQ ID NO:278)组成；或者
d.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')CGUGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ ID NO:285)组成；或者
e.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')CGUGGUGGACUUCUCUCAAUA(SEQ ID NO:289)组成；或者
f.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)组成；或者
g.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)组成；或者
h.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')UCGUGGUGGACUUCUCUCAAUU(SEQ IDNO:300)组成；或者
i.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；或者
j.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU(SEQ IDNO:303)组成；或者
k.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUAUU(SEQ IDNO:304)组成；或者
l.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')UGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:306)组成；或者
m.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ IDNO:307)组成；或者
n.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')AAUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ IDNO:308)组成；或者
o.有义链，该有义链包括核碱基序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:318)；或者
p.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ IDNO:319)组成；或者
q.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:320)组成；或者
r.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCA(SEQ ID NO:321)组成；或者
s.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ ID NO:322)组成；或者
t.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ ID NO:323)组成；或者
u.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GAGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ IDNO:324)组成；或者
v.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GCUGUAGGCAUAAAUUGGA(SEQ ID NO:325)组成；或者
w.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGA(SEQ ID NO:326)组成；或者
x.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')AGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:327)组成；或者
y.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)组成；或者
z.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUU(SEQ ID NO:329)组成；或者
aa.反义链，该反义链包含核碱基序列(5'→3')AGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ IDNO:330)；或者
bb.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')AGGCUGUAGGCAUAAAUUGGA(SEQ IDNO:331)组成；或者
cc.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')CGGCUGUAGGCAUAAAUUGGU(SEQ IDNO:332)组成；或者
dd.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')CGGCUGUAGGCAUAAAUUGGA(SEQ IDNO:333)组成；或者
ee.有义链，该有义链由核碱基序列(5'→3')CCCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:334)组成；
并且其中该HBV RNAi剂还包含与该相应反义链至少部分互补的反义链。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ IDNO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)组成；并且其中第二HBVRNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:292)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用用于抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；并且其中第二HBVRNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:328)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用用于抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用用于抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ IDNO:162)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)组成。在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)组成；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链由核碱基序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)组成，该有义链由核碱基序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)组成。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBVRNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBVRNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBVRNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBVRNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:294)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBVRNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBVRNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:294)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ IDNO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBVRNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBVRNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBVRNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQ ID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBVRNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBVRNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UAUUGAGAGAAGUCCACCACUU(SEQID NO:175)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGUU(SEQ ID NO:154)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:292)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBVRNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBVRNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBVRNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCG(SEQ ID NO:188)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')CGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ ID NO:328)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GGCUGUAGGCAUAAAUUGGUA(SEQ IDNO:294)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBVRNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
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在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ IDNO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBVRNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBVRNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBV RNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQ ID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括施用抑制细胞中HBV基因表达的组合物，其中该组合物包含两种HBV RNAi剂，其中有义链中的所有或基本上所有核苷酸被修饰以及/或者第一HBV RNAi剂和/或第二HBVRNAi剂中的反义链中的所有或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸，并且其中第一HBVRNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')AGAAAAUUGAGAGAAGUCCAC(SEQID NO:171)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGACUUCUCUCAAUUUUCU(SEQ ID NO:302)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第二HBV RNAi剂包含反义链和有义链，该反义链包含与序列(5'→3')UACCAAUUUAUGCCUACAGCC(SEQ ID NO:162)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列，该有义链包含与序列(5'→3')GUGGUGGACUUCUCUCAAUAUU(SEQ ID NO:307)相差0个、1个、2个或3个核碱基的核碱基序列；并且其中第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂的有义链缀合至包含N-乙酰基-半乳糖胺的靶向配体。
在一些实施方案中，本文公开了治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04872和有效量的AD05070。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约1:2。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04872和有效量的AD05070。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约1:2。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04872和有效量的AD05070。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD05070的比率为约1:2。
在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约25mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约25mg至50mg、50mg至75mg、75mg至100mg、100mg至125mg、125mg至150mg、150mg至175mg、175mg至200mg、200mg至225mg、225mg至250mg、250mg至275mg、275mg至300mg、300mg至325mg、325mg至350mg、350mg至375mg、375mg至400mg、25mg至75mg、50mg至100mg、100mg至150mg、150mg至200mg、200mg至250mg、250mg至300mg、300mg至350mg、350mg至400mg、25mg至100mg、50mg至150mg、100mg至200mg、150mg至250mg、200mg至300mg、300mg至400mg、25mg至200mg或200mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约30mg至50mg、约90mg至110mg或约190mg至210mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约30mg至50mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约90mg至110mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约190mg至210mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872至AD05070以每剂施用约25mg、约50mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg或约400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约50mg、约75mg、约100mg或约125mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约35mg、约50mg、约100mg或约125mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约200mg的组合量施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约1周至18周的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约1周的间隔、约2周的间隔、约3周的间隔、约4周的间隔、约5周的间隔、约6周的间隔、约7周的间隔、约8周的间隔、约9周的间隔、约10周的间隔、约11周的间隔、约12周的间隔、约13周的间隔、约14周的间隔、约15周的间隔、约16周的间隔、约17周的间隔或约18周的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约1个月至6个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约1个月的间隔、约2个月的间隔、约3个月的间隔、约4个月的间隔、约5个月的间隔或约6个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约4周的间隔或1个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约7天、14天、21天或28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约28天的间隔施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD05070施用约1个月至12个月的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD05070施用至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月或至少约12个月的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD05070施用约1周至18周的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD05070施用至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约11周、至少约12周、至少约13周、至少约14周、至少约15周、至少约16周、至少约17周或至少约18周的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD05070施用约12周或3个月的持续时间。
在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约50mg至100mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约25mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约125mg至225mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约35mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约40mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约100mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约40mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约100mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约200mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约3mg至650mg的量施用，并且AD05070以每剂施用约2mg至325mg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约35mg至265mg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约50mg至75mg的量施用。在一些实施方案中，AD05070以每剂施用约20mg至125mg的量施用。在一些实施方案中，AD05070以每剂施用约25mg至50mg的量施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约1mg至10mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用约1mg/kg至1.5mg/kg、约1.5mg/kg至2.0mg/kg、约2.0mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至3.0mg/kg、约3.0mg/kg至3.5mg/kg、约3.5mg/kg至4.0mg/kg、约4.0mg/kg至4.5mg/kg、约4.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至5.5mg/kg、约5.5mg/kg至6.0mg/kg、约6.0mg/kg至6.5mg/kg、约6.5mg/kg至7.0mg/kg、约7.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至8.0mg/kg、约8.0mg/kg至8.5mg/kg、约8.5mg/kg至9.0mg/kg、约9.0mg/kg至9.5mg/kg、约9.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5.0mg/kg或约5.0mg/kg至10mg/kg的组合量施用。
在一些实施方案中，AD05070以每剂施用约0.3mg/kg至5mg/kg的量施用，并且AD04872以每剂施用约0.6mg/kg至7mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD05070以每剂施用约0.5mg/kg至2.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD05070以每剂施用约0.3mg/kg至1.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约0.6mg/kg至5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约1mg/kg至2.5mg/kg的量施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD05070以每剂施用25mg至400mg的组合剂量施用。在一个实施方案中，AD04872和AD05070以25mg至400mg的组合剂量施用，并且AD04872与AD05070以1:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，与AD05070一起施用的AD04872的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约20mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约25mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约50mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约100mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约200mg的量。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约20mg的量，或对于约100mg的组合剂量为约50mg的量，或对于约200mg的组合剂量为约100mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约20mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约50mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04872和AD05070中的每一者的剂量为约100mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，AD04872和AD05070以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，并且AD05070与AD04872以1:2的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04872的剂量为约16mg的量，并且AD05070的剂量为约8mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD05070的剂量为约12mg的量，并且AD04872的剂量为约24mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD05070的剂量为约13mg的量，AD04872的剂量为约27mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04872的剂量为约33mg的量，并且AD05070的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD05070的剂量为约35mg的量，并且AD04872的剂量为约65mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD05070的剂量为约67mg的量，并且AD04872的剂量为约133mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD05070的剂量为约100mg的量，并且AD04872的剂量为约200mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD05070的剂量为约135mg的量，并且AD04872的剂量为约270mg的量。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD05070的剂量为约13mg的量，并且AD04872的剂量为约27mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD05070的剂量为约35mg的量，并且AD04872的剂量为约65mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD05070的剂量为约67mg的量，并且AD04872的剂量为约133mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，AD04872和AD05070以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，AD05070与AD04872以1:3的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04872的剂量为18mg的量，并且AD05070的剂量为约6mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD05070的剂量为约9mg的量，并且AD04872的剂量为约27mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD05070的剂量为约10mg的量，AD04872的剂量为约30mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04872的剂量为约36mg的量，并且AD05070的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD05070的剂量为约25mg的量，并且AD04872的剂量为约75mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD05070的剂量为约50mg的量，并且AD04872的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD05070的剂量为约75mg的量，并且AD04872的剂量为约225mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD05070的剂量为约100mg的量，并且AD04872的剂量为约300mg的量。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD05070的剂量为约10mg的量，并且AD04872的剂量为约30mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD05070的剂量为约25mg的量，并且AD04872的剂量为约75mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD05070的剂量为约50mg的量，并且AD04872的剂量为约150mg的量，并且AD04872和AD05070以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1mg/kg(mpk)的AD04872和约1mg/kg的AD05070。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1.5mg/kg的AD04872和约1.5mg/kg的AD05070。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约2.0mg/kg的AD04872和约1.0mg/kg的AD05070。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约3.0mg/kg的AD04872和约1.0mg/kg的AD05070。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约3.2mg/kg的AD04872和约0.8mg/kg的AD05070。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约2.7mg/kg的AD04872和约1.3mg/kg的AD05070。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约4.0mg/kg的AD04872和约1.0mg/kg的AD05070。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约3.3mg/kg的AD04872和约1.7mg/kg的AD05070。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04872以及介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD05070。在一些实施方案中，单独施用约AD04872和约AD05070(例如，单独注射)。在一些实施方案中，相应剂量的AD04872和相应剂量的AD05070一起施用(例如，在同一注射中)。在一些实施方案中，相应剂量的AD04872和相应剂量的AD05070在单个药物组合物中制备。
在一些实施方案中，本文公开了治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04872和有效量的AD04776。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为1:2。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04872和有效量的AD04776。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为1:2。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04872和有效量的AD04776。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04776的比率为1:2。
在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约25mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约25mg至50mg、50mg至75mg、75mg至100mg、100mg至125mg、125mg至150mg、150mg至175mg、175mg至200mg、200mg至225mg、225mg至250mg、250mg至275mg、275mg至300mg、300mg至325mg、325mg至350mg、350mg至375mg、375mg至400mg、25mg至75mg、50mg至100mg、100mg至150mg、150mg至200mg、200mg至250mg、250mg至300mg、300mg至350mg、350mg至400mg、25mg至100mg、50mg至150mg、100mg至200mg、150mg至250mg、200mg至300mg、300mg至400mg、25mg至200mg或200mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约30mg至50mg、约90mg至110mg或约190mg至210mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约30mg至50mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约90mg至110mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约190mg至210mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872至AD04776以每剂施用约25mg、约50mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg或约400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约50mg、约75mg、约100mg或约125mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约35mg、约50mg、约100mg、约200mg、约300mg或约400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约200mg的组合量施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约1周至18周的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约1周的间隔、约2周的间隔、约3周的间隔、约4周的间隔、约5周的间隔、约6周的间隔、约7周的间隔、约8周的间隔、约9周的间隔、约10周的间隔、约11周的间隔、约12周的间隔、约13周的间隔、约14周的间隔、约15周的间隔、约16周的间隔、约17周的间隔或约18周的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约1个月至6个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约1个月的间隔、约2个月的间隔、约3个月的间隔、约4个月的间隔、约5个月的间隔或约6个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约4周的间隔或1个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约7天、14天、21天或28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD04776施用约1个月至12个月的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD04776施用至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月或至少约12个月的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD04776施用约1周至18周的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD04776施用至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约11周、至少约12周、至少约13周、至少约14周、至少约15周、至少约16周、至少约17周或至少约18周的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD04776施用约12周或3个月的持续时间。
在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约50mg至100mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约25mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约125mg至225mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约35mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约40mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约100mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约40mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约100mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约200mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约3mg至650mg的量施用，并且AD04776以每剂施用约2mg至325mg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约35mg至265mg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约50mg至75mg的量施用。在一些实施方案中，AD04776以每剂施用约20mg至125mg的量施用。在一些实施方案中，AD04776以每剂施用约25mg至50mg的量施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约1mg至10mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用约1mg/kg至1.5mg/kg、约1.5mg/kg至2.0mg/kg、约2.0mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至3.0mg/kg、约3.0mg/kg至3.5mg/kg、约3.5mg/kg至4.0mg/kg、约4.0mg/kg至4.5mg/kg、约4.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至5.5mg/kg、约5.5mg/kg至6.0mg/kg、约6.0mg/kg至6.5mg/kg、约6.5mg/kg至7.0mg/kg、约7.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至8.0mg/kg、约8.0mg/kg至8.5mg/kg、约8.5mg/kg至9.0mg/kg、约9.0mg/kg至9.5mg/kg、约9.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5.0mg/kg或约5.0mg/kg至10mg/kg的组合量施用。
在一些实施方案中，AD04776以每剂施用约0.3mg/kg至5mg/kg的量施用，并且AD04872以每剂施用约0.6mg/kg至7mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04776以每剂施用约0.5mg至2.5mg的量施用。在一些实施方案中，AD04776以每剂施用约0.3mg至1.5mg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约0.6mg至5mg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约1mg至2.5mg的量施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD04776以每剂施用25mg至400mg的组合剂量施用。在一个实施方案中，AD04872和AD04776以25mg至400mg的组合剂量施用，并且AD04872与AD04776以1:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约20mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约25mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约50mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约100mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约200mg的量。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约20mg的量，或对于约100mg的组合剂量为约50mg的量，或对于约200mg的组合剂量为约100mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约20mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约50mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04872和AD04776中的每一者的剂量为约100mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，AD04872和AD04776以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，并且AD04776与AD04872以1:2的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04872的剂量为约16mg的量，并且AD04776的剂量为约8mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04776的剂量为约12mg的量，并且AD04872的剂量为约24mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04776的剂量为约13mg的量，AD04872的剂量为约27mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04872的剂量为约33mg的量，并且AD04776的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04776的剂量为约35mg的量，并且AD04872的剂量为约65mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04776的剂量为约67mg的量，并且AD04872的剂量为约133mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04776的剂量为约100mg的量，并且AD04872的剂量为约200mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04776的剂量为约135mg的量，并且AD04872的剂量为约270mg的量。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04776的剂量为约13mg的量，并且AD04872的剂量为约27mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04776的剂量为约35mg的量，并且AD04872的剂量为约65mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04776的剂量为约67mg的量，并且AD04872的剂量为约133mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，AD04872和AD04776以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，AD04776与AD04872以1:3的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04872的剂量为18mg的量，并且AD04776的剂量为约6mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04776的剂量为约9mg的量，并且AD04872的剂量为约27mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04776的剂量为约10mg的量，AD04872的剂量为约30mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04872的剂量为约36mg的量，并且AD04776的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04776的剂量为约25mg的量，并且AD04872的剂量为约75mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04776的剂量为约50mg的量，并且AD04872的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04776的剂量为约75mg的量，并且AD04872的剂量为约225mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04776的剂量为约100mg的量，并且AD04872的剂量为约300mg的量。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04776的剂量为约10mg的量，并且AD04872的剂量为约30mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04776的剂量为约25mg的量，并且AD04872的剂量为约75mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04776的剂量为约50mg的量，并且AD04872的剂量为约150mg的量，并且AD04872和AD04776以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1mg/kg(mpk)的AD04872和约1mg/kg的AD04776。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1.5mg/kg的AD04872和约1.5mg/kg的AD04776。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约2.0mg/kg的AD04872和约1.0mg/kg的AD04776。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约3.0mg/kg的AD04872和约1.0mg/kg的AD04776。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约3.2mg/kg的AD04872和约0.8mg/kg的AD04776。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约2.7mg/kg的AD04872和约1.3mg/kg的AD04776。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约4.0mg/kg的AD04872和约1.0mg/kg的AD04776。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约3.3mg/kg的AD04872和约1.7mg/kg的AD04776。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04872以及介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04776。在一些实施方案中，单独施用相应剂量的AD04872和AD04776(例如，单独注射)。在一些实施方案中，相应剂量的AD04872和AD04776一起施用(例如，在同一注射中)。在一些实施方案中，相应剂量的AD04872和AD04776在单个药物组合物中制备。
在一些实施方案中，本文公开了治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04872和有效量的AD04982。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为1:2。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04872和有效量的AD04982。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为1:2。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04872和有效量的AD04982。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为约5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04872与AD04982的比率为1:2。
在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约25mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约25mg至50mg、50mg至75mg、75mg至100mg、100mg至125mg、125mg至150mg、150mg至175mg、175mg至200mg、200mg至225mg、225mg至250mg、250mg至275mg、275mg至300mg、300mg至325mg、325mg至350mg、350mg至375mg、375mg至400mg、25mg至75mg、50mg至100mg、100mg至150mg、150mg至200mg、200mg至250mg、250mg至300mg、300mg至350mg、350mg至400mg、25mg至100mg、50mg至150mg、100mg至200mg、150mg至250mg、200mg至300mg、300mg至400mg、25mg至200mg或200mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约30mg至50mg、约90mg至110mg或约190mg至210mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约30mg至50mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约90mg至110mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约190mg至210mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872至AD04982以每剂施用约25mg、约50mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约225mg、约250mg、约275mg、约300mg、约325mg、约350mg、约375mg或约400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约50mg、约75mg、约100mg或约125mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约35mg、约50mg、约100mg、约200mg、约300mg或约400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约200mg的组合量施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约1周至18周的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约1周的间隔、约2周的间隔、约3周的间隔、约4周的间隔、约5周的间隔、约6周的间隔、约7周的间隔、约8周的间隔、约9周的间隔、约10周的间隔、约11周的间隔、约12周的间隔、约13周的间隔、约14周的间隔、约15周的间隔、约16周的间隔、约17周的间隔或约18周的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约1个月至6个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约1个月的间隔、约2个月的间隔、约3个月的间隔、约4个月的间隔、约5个月的间隔或约6个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约4周的间隔或1个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约7天、14天、21天或28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD04982施用约1个月至12个月的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD04982施用至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月或至少约12个月的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD04982施用约1周至18周的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD04982施用至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约11周、至少约12周、至少约13周、至少约14周、至少约15周、至少约16周、至少约17周或至少约18周的持续时间。在一些实施方案中，AD04872和AD04982施用约12周或3个月的持续时间。
在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约50mg至100mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约25mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约125mg至225mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约35mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约40mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约100mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约40mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约100mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约200mg的组合量，以约2:1的比率，并且以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约3mg至650mg的量施用，并且AD04982以每剂施用约2mg至325mg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约35mg至265mg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约50mg至75mg的量施用。在一些实施方案中，AD04982以每剂施用约20mg至125mg的量施用。在一些实施方案中，AD04982以每剂施用约25mg至50mg的量施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约1mg至10mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用约1mg/kg至1.5mg/kg、约1.5mg/kg至2.0mg/kg、约2.0mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至3.0mg/kg、约3.0mg/kg至3.5mg/kg、约3.5mg/kg至4.0mg/kg、约4.0mg/kg至4.5mg/kg、约4.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至5.5mg/kg、约5.5mg/kg至6.0mg/kg、约6.0mg/kg至6.5mg/kg、约6.5mg/kg至7.0mg/kg、约7.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至8.0mg/kg、约8.0mg/kg至8.5mg/kg、约8.5mg/kg至9.0mg/kg、约9.0mg/kg至9.5mg/kg、约9.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5.0mg/kg或约5.0mg/kg至10mg/kg的组合量施用。
在一些实施方案中，AD04982以每剂施用约0.3mg/kg至5mg/kg的量施用，并且AD04872以每剂施用约0.6mg/kg至7mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04982以每剂施用约0.5mg/kg至2.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04982以每剂施用约0.3mg/kg至1.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约0.6mg/kg至5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04872以每剂施用约1mg/kg至2.5mg/kg的量施用。
在一些实施方案中，AD04872和AD04982以每剂施用25mg至400mg的组合剂量施用。在一个实施方案中，AD04872和AD04982以25mg至400mg的组合剂量施用，并且AD04872与AD04982以1:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约20mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约25mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约50mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约100mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约200mg的量。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约20mg的量，或对于约100mg的组合剂量为约50mg的量，或对于约200mg的组合剂量为约100mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约20mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约50mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04872和AD04982中的每一者的剂量为约100mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，AD04872和AD04982以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，并且AD04982与AD04872以1:2的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04872的剂量为约16mg的量，并且AD04982的剂量为约8mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04982的剂量为约12mg的量，并且AD04872的剂量为约24mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04982的剂量为约13mg的量，AD04872的剂量为约27mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04872的剂量为约33mg的量，并且AD04982的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04982的剂量为约35mg的量，并且AD04872的剂量为约65mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04982的剂量为约67mg的量，并且AD04872的剂量为约133mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04982的剂量为约100mg的量，并且AD04872的剂量为约200mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04982的剂量为约135mg的量，并且AD04872的剂量为约270mg的量。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04982的剂量为约13mg的量，并且AD04872的剂量为约27mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04982的剂量为约35mg的量，并且AD04872的剂量为约65mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04982的剂量为约67mg的量，并且AD04872的剂量为约133mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，AD04872和AD04982以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，AD04982与AD04872以1:3的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04872的剂量为18mg的量，并且AD04982的剂量为约6mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04982的剂量为约9mg的量，并且AD04872的剂量为约27mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04982的剂量为约10mg的量，AD04872的剂量为约30mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04872的剂量为约36mg的量，并且AD04982的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04982的剂量为约25mg的量，并且AD04872的剂量为约75mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04982的剂量为约50mg的量，并且AD04872的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04982的剂量为约75mg的量，并且AD04872的剂量为约225mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04982的剂量为约100mg的量，并且AD04872的剂量为约300mg的量。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04982的剂量为约10mg的量，并且AD04872的剂量为约30mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04982的剂量为约25mg的量，并且AD04872的剂量为约75mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04982的剂量为约50mg的量，并且AD04872的剂量为约150mg的量，并且AD04872和AD04982以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1mg/kg(mpk)的AD04872和约1mg/kg的AD04982。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1.5mg/kg的AD04872和约1.5mg/kg的AD04982。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约2.0mg/kg的AD04872和约1.0mg/kg的AD04982。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约3.0mg/kg的AD04872和约1.0mg/kg的AD04982。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约3.2mg/kg的AD04872和约0.8mg/kg的AD04982。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约2.7mg/kg的AD04872和约1.3mg/kg的AD04982。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约4.0mg/kg的AD04872和约1.0mg/kg的AD04982。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约3.3mg/kg的AD04872和约1.7mg/kg的AD04982。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04872以及介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04982。在一些实施方案中，单独施用相应剂量的AD04872和AD04982(例如，单独注射)。在一些实施方案中，相应剂量的AD04872和AD04982一起施用(例如，在同一注射中)。在一些实施方案中，相应剂量的AD04872和AD04982在单个药物组合物中制备。
在一些实施方案中，本文公开了治疗HBV感染或预防由HBV感染引起的疾病或症状的方法，包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04580和有效量的AD04585。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约1:2。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1mg/kg(mpk)的AD04580和约1mg/kg的AD04585。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1.5mg/kg的AD04580和约1.5mg/kg的AD04585。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04580以及介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04585。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗或预防与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04580和有效量的AD04585。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约1:2。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1mg/kg(mpk)的AD04580和约1mg/kg的AD04585。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1.5mg/kg的AD04580和约1.5mg/kg的AD04585。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04580以及介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04585。
在一些实施方案中，本文公开了用于治疗与HBV引起的感染相关联的疾病的方法，该方法包括向对其有需要的受试者施用有效量的AD04580和有效量的AD04585。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约2:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约3:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约4:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约5:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约1:1。在一些实施方案中，施用给对其有需要的受试者的AD04580与AD04585的比率为约1:2。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1mg/kg(mpk)的AD04580和约1mg/kg的AD04585。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用约1.5mg/kg的AD04580和约1.5mg/kg的AD04585。在一些实施方案中，向对其有需要的受试者施用介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04580以及介于约0.05mg/kg和约5mg/kg之间的AD04585。
在一些实施方案中，AD04580和AD04585以约25mg至400mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约50mg、约75mg、约100mg或约125mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以约1周至18周的间隔施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以约1个月至6个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以约4周的间隔或1个月的间隔施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以约7天、14天、21天或28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约40mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约100mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)每剂施用约200mg的组合量施用。
在一些实施方案中，AD04580和AD04585施用约1个月至12个月的持续时间。在一些实施方案中，AD04580和AD04585施用约3个月的持续时间。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约25mg至400mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约100mg的组合量并且以约2:1的比率施用。
在一些实施方案中，AD04580以每剂施用约3mg至650mg的量施用，并且AD04585以每剂施用约2mg至325mg的量施用。在一些实施方案中，AD04580以每剂施用约35mg至265mg的量施用。在一些实施方案中，AD04580以每剂施用约50mg至75mg的量施用。在一些实施方案中，AD04585以每剂施用约20mg至125mg的量施用。在一些实施方案中，AD04585以每剂施用约25mg至50mg的量施用。
在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约1mg至10mg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用约1mg/kg至1.5mg/kg、约1.5mg/kg至2.0mg/kg、约2.0mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至3.0mg/kg、约3.0mg/kg至3.5mg/kg、约3.5mg/kg至4.0mg/kg、约4.0mg/kg至4.5mg/kg、约4.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至5.5mg/kg、约5.5mg/kg至6.0mg/kg、约6.0mg/kg至6.5mg/kg、约6.5mg/kg至7.0mg/kg、约7.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至8.0mg/kg、约8.0mg/kg至8.5mg/kg、约8.5mg/kg至9.0mg/kg、约9.0mg/kg至9.5mg/kg、约9.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5.0mg/kg或约5.0mg/kg至10mg/kg的组合量施用。
在一些实施方案中，AD04585以每剂施用约0.3mg/kg至5mg/kg的量施用，并且AD04580以每剂施用约0.6mg/kg至7mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04585以每剂施用约0.5mg/kg至2.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04585以每剂施用约0.3mg/kg至1.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04580以每剂施用约0.6mg/kg至5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，AD04580以每剂施用约1mg/kg至2.5mg/kg的量施用。
在一些实施方案中，AD04580和AD04585以每剂施用25mg至400mg的组合剂量施用。在一个实施方案中，AD04580和AD04585以25mg至400mg的组合剂量施用，并且AD04580与AD04585以1:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约20mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约25mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约50mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约100mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约200mg的量。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约20mg的量，或对于约100mg的组合剂量为约50mg的量，或对于约200mg的组合剂量为约100mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约20mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约50mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04580和AD04585中的每一者的剂量为约100mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，AD04580和AD04585以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，并且AD04585与AD04580以1:2的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04580的剂量为约16mg的量，并且AD04585的剂量为约8mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04585的剂量为约12mg的量，并且AD04580的剂量为约24mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04585的剂量为约13mg的量，AD04580的剂量为约27mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04580的剂量为约33mg的量，并且AD04585的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04585的剂量为约35mg的量，并且AD04580的剂量为约65mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04585的剂量为约67mg的量，并且AD04580的剂量为约133mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04585的剂量为约100mg的量，并且AD04580的剂量为约200mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04585的剂量为约135mg的量，并且AD04580的剂量为约270mg的量。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04585的剂量为约13mg的量，并且AD04580的剂量为约27mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04585的剂量为约35mg的量，并且AD04580的剂量为约65mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04585的剂量为约67mg的量，并且AD04580的剂量为约133mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在一个实施方案中，AD04580和AD04585以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，AD04585与AD04580以1:3的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，AD04580的剂量为18mg的量，并且AD04585的剂量为约6mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，AD04585的剂量为约9mg的量，并且AD04580的剂量为约27mg的量。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04585的剂量为约10mg的量，AD04580的剂量为约30mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，AD04580的剂量为约36mg的量，并且AD04585的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04585的剂量为约25mg的量，并且AD04580的剂量为约75mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04585的剂量为约50mg的量，并且AD04580的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，AD04585的剂量为约75mg的量，并且AD04580的剂量为约225mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，AD04585的剂量为约100mg的量，并且AD04580的剂量为约300mg的量。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以约7天、约14天、约21天或约28天的间隔施用。在一些实施方案中，AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约40mg的组合剂量，AD04585的剂量为约10mg的量，并且AD04580的剂量为约30mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，AD04585的剂量为约25mg的量，并且AD04580的剂量为约75mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，AD04585的剂量为约50mg的量，并且AD04580的剂量为约150mg的量，并且AD04580和AD04585以28天的间隔或约28天的间隔(即，Q4W)施用。
本文提供了一种用于抑制对其有需要的人类受试者的乙型肝炎病毒基因表达的方法，该方法包括向该人类受试者施用有效量的药物组合物，该药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，该第一RNAi剂包含：
(i)反义链，该反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:111、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，该有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQ IDNO:235、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:307、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，该第二RNAi剂包含：
(i)反义链，该反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，该有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQ IDNO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中第一RNAi剂和第二RNAi剂以每月约50mg至400mg的组合量施用。
本文还提供了一种用于治疗对其有需要的人类受试者的与乙型肝炎病毒引起的感染相关联的疾病、障碍或病症的方法，该方法包括向该人类受试者施用有效量的药物组合物，该药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，该第一RNAi剂包含：
(i)反义链，该反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，该有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQ IDNO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，该第二RNAi剂包含：
(i)反义链，该反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，该有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQ IDNO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中第一RNAi剂和第二RNAi剂以每月约50mg至400mg的量施用。
在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以约1:1、2:1、3:1、4:1或5:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以约2:1的比率施用。
在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，第一HBVRNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约50mg至100mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBVRNAi剂以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBVRNAi剂以每剂施用约125mg至225mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约150mg至250mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBVRNAi剂以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约35mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约40mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约100mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBVRNAi剂以每剂施用约200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBVRNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。
在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约3mg至650mg的量施用，并且第二RNAi剂以每剂施用约2mg至325mg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约35mg至265mg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约50mg至75mg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约20mg至125mg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约25mg至50mg的量施用。
在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至10mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，第一HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至1.5mg/kg、约1.5mg/kg至2.0mg/kg、约2.0mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至3.0mg/kg、约3.0mg/kg至3.5mg/kg、约3.5mg/kg至4.0mg/kg、约4.0mg/kg至4.5mg/kg、约4.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至5.5mg/kg、约5.5mg/kg至6.0mg/kg、约6.0mg/kg至6.5mg/kg、约6.5mg/kg至7.0mg/kg、约7.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至8.0mg/kg、约8.0mg/kg至8.5mg/kg、约8.5mg/kg至9.0mg/kg、约9.0mg/kg至9.5mg/kg、约9.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5.0mg/kg或约5.0mg/kg至10mg/kg的组合量施用。
在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约0.6mg/kg至7mg/kg的量施用，并且第二RNAi剂以每剂施用约0.3mg/kg至5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约0.5mg/kg至2.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约0.3mg/kg至1.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约0.6mg/kg至5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至2.5mg/kg的量施用。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂由连接到(NAG37)s的AD05070组成或包含该AD05070，该AD05070显示为钠盐，具有由下式表示的结构：
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂由连接到(NAG25)s的AD05070组成或包含该AD05070，该AD05070显示为钠盐，具有由下式表示的结构：
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂由连接到(NAG37)s的AD05070组成或包含该AD05070，该AD05070显示为游离酸，具有由下式表示的结构：
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂由连接到(NAG31)s的AD04580组成或包含该AD04580，该AD04580显示为钠盐，具有由下式表示的结构：
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂由连接到(NAG25)s的AD04585组成或包含该AD04585，该AD04585显示为钠盐，具有由下式表示的结构：
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂由连接到(NAG37)s的AD04872组成或包含该AD04872，该AD04872显示为钠盐，具有由下式表示的结构：
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂由连接到(NAG25)s的AD04872组成或包含该AD04872，该AD04872显示为钠盐，具有由下式表示的结构：
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂由连接到(NAG37)s的AD04872组成或包含该AD04872，该AD04872显示为游离酸，具有由下式表示的结构：
在一些实施方案中，所述HBV RNAi剂任选地与一种或多种另外的治疗剂(即，第二、第三等)组合。第二治疗剂可以是另一种HBV RNAi剂(例如，靶向HBV基因组内的不同序列的HBV RNAi剂)。另外的治疗剂也可以是小分子药物、抗体、抗体片段和/或疫苗。在有或没有一种或多种另外的治疗剂的情况下，HBV RNAi剂可以与一种或多种赋形剂组合以形成药物组合物。
在一些实施方案中，所述一种或多种HBV RNAi剂任选地与一种或多种另外的治疗剂组合，其中该另外的治疗剂是核苷抑制剂或核苷酸抑制剂。在一些实施方案中，所述一种或多种HBV RNAi剂任选地与一种或多种另外的治疗剂组合，其中该另外的治疗剂为恩替卡韦、替诺福韦、替诺福韦艾拉酚胺、替诺福韦酯、拉米夫定或另一抗病毒治疗剂。在一些实施方案中，核苷抑制剂是恩替卡韦或替诺福韦。在一些实施方案中，恩替卡韦以每天0.5mg至1mg的量施用。在一些实施方案中，替诺福韦以每天300mg的量施用一次。
在一些实施方案中，所述一种或多种HBV RNAi剂任选地与一种或多种另外的治疗剂组合，其中该另外的治疗剂为干扰素。在一些实施方案中，所述一种或多种HBV RNAi剂任选地与一种或多种另外的治疗剂组合，其中该另外的治疗剂为α干扰素。在一些实施方案中，所述一种或多种HBV RNAi剂任选地与一种或多种另外的HBV治疗剂组合，其中该另外的治疗剂为HBV疫苗。
在一些实施方案中，所述一种或多种HBV RNAi剂任选地与单一剂型(即，单次注射中包含的混合物)的一种或多种另外的治疗剂组合。在一些实施方案中，所述一种或多种HBV RNAi剂可与一种或多种任选的另外的治疗剂分开施用。在一些实施方案中，所述一种或多种HBV RNAi剂经由皮下注射施用给对其有需要的受试者，并且该一种或多种任选的另外的治疗剂通过口服施用，其一起提供与HBV感染相关联的疾病和病症的治疗方案。在一些实施方案中，所述一种或多种HBV RNAi剂通过皮下注射施用给对其有需要的受试者，并且该一种或多种任选的另外的治疗剂通过单独的皮下注射施用。
在一些实施方案中，本文公开了用于将HBV RNAi剂体内递送至肝细胞的组合物，该组合物包含缀合或连接至靶向基团的HBV RNAi剂。在一些实施方案中，靶向基团是脱唾液酸糖蛋白受体配体。在一些实施方案中，描述了用于将HBV RNAi剂体内递送至肝细胞的组合物，该组合物包含与N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体连接的HBV RNAi剂。
在一些实施方案中，将所述HBV RNAi剂中的一者或多者以药学上可接受的载体或稀释剂施用给哺乳动物。在一些实施方案中，哺乳动物是人。
一种或多种乙型肝炎病毒RNAi剂的使用提供了用于治疗和/或预防性治疗与HBV感染有关的疾病/障碍的方法。所述HBV RNAi剂介导RNA干扰以抑制乙型肝炎病毒复制和/或发病所必需的一种或多种基因的表达。具体地讲，例如，HBV RNAi剂可以抑制细胞、组织或哺乳动物中的病毒聚合酶、核心蛋白、表面抗原、e抗原和/或X蛋白。HBV RNAi剂可用于治疗HBV感染。HBV RNAi剂还可用于治疗或预防与HBV感染相关联的慢性肝脏疾病/障碍、炎症、纤维化病症和增殖性障碍，如癌症。在一些实施方案中，该方法还包括治疗受试者中的丁型肝炎病毒(HDV)。此类方法包括向感染HBV的人类或动物施用HBV RNAi剂。此外，描述了用于向肝脏细胞体内递送HBV RNAi剂的组合物。
在另一方面，本文描述了用于治疗和/或预防性治疗与HBV感染相关联的疾病/障碍或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用包含一种或多种HBV RNAi剂的药物组合物，该药物组合物可以多种方式施用，具体取决于是需要局部治疗还是全身治疗。施用可以是但不限于静脉内、动脉内、皮下、腹膜内、真皮下(例如，通过植入装置)和实质内施用。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物通过皮下注射施用。
所述HBV RNAi剂和/或组合物可用于预防性治疗HBV感染或由HBV感染引起的疾病或病症的方法中。此类方法包括将如本文所述的HBV RNAi剂施用给受试者，例如人或动物受试者。
如本文所用，术语“寡核苷酸”和“多核苷酸”是指连接核苷的聚合物，其每一者可以独立地被修饰或未被修饰。
如本文所用，“RNAi剂”或“RNAi触发剂”是指包含RNA或RNA样(例如，经化学修饰的RNA)寡核苷酸分子的组合物，该分子能够以序列特异性方式降解或抑制靶mRNA的信使RNA(mRNA)转录物的翻译。如本文所用，RNAi剂可通过RNA干扰机制(即通过与哺乳动物细胞的RNA干扰途径机制(RNA诱导的沉默复合物或RISC)相互作用诱导RNA干扰)或通过任何替代的一种或多种机制或一种或多种途径起作用。据信，虽然如本文所用的术语RNAi剂主要通过RNA干扰机制起作用，但本发明所公开的RNAi剂不受任何特定途径或作用机制的约束或限制。本文所公开的RNAi剂由有义链和反义链组成，并且包括但不限于：短干扰RNA(siRNA)、双链RNA(dsRNA)、微RNA(miRNA)、短发夹RNA(shRNA)和dicer底物。本文所述的RNAi剂的反义链与被靶向的mRNA至少部分互补。RNAi剂可由经修饰的核苷酸和/或一种或多种非磷酸二酯键组成。
如本文所用，当提及给定基因的表达时，术语“沉默”、“减少”、“抑制”、“下调”或“敲除”意指当细胞、细胞群、组织、器官或受试者用本文所述的低聚化合物(诸如RNAi剂)进行治疗时，与没有或尚未如此治疗的第二细胞、细胞群、组织、器官或受试者相比，基因的表达会减少，如通过由基因转录的RNA水平或基因转录的细胞、细胞群、组织、器官或受试者中由mRNA翻译的多肽、蛋白质或蛋白质亚基的水平测量的。
如本文所用，术语“序列”或“核苷酸序列”意指使用标准命名法用一系列字母描述的核碱基或核苷酸的演替或顺序。
如本文所用，“核苷酸碱基”或“核碱基”是杂环嘧啶或嘌呤化合物，其是所有核酸的标准组分，并且包括形成核苷酸腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)的碱。核碱基可进一步被修饰为包括但不限于通用碱基、疏水碱基、混杂碱基、尺寸扩大减基和含氟碱基。
如本文所用，并且除非另外指明，当用于描述第一核苷酸序列(例如，RNAi剂有义链或靶mRNA)与第二核苷酸序列(例如，RNAi剂反义链或单链反义寡核苷酸)的相关性时，术语“互补的”意指包括第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸与包含第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸杂交(在哺乳动物生理条件下(或体外类似条件下)形成碱基对氢键)以及在某些条件下形成双链体或双螺旋结构的能力。互补序列包括Watson Crick碱基对或非Watson Crick碱基对，并且包括至少达到满足上述杂交要求程度的天然或修饰的核苷酸或核苷酸模拟物。序列同一性或互补性与修饰无关。例如，对于确定同一性或互补性目的，a和Af与U(或T)互补并且与A相同。
如本文所用，“完全互补”或“全部互补”是指第一多核苷酸的连续序列中的所有(100％)碱基将与第二多核苷酸的连续序列中的相同数目的碱基杂交。连续序列可包含第一或第二核苷酸序列的全部或部分。
如本文所用，“部分互补”是指在核碱基序列的杂交对中，第一多核苷酸的连续序列中的至少70％但不是全部碱基将与第二多核苷酸的连续序列中的相同数目的碱基杂交。
如本文所用，“受试者”、“患者”或“个体”包括哺乳动物，诸如人类或其他动物，并且通常是人类。在一些实施方案中，施用治疗剂和组合物的受试者(例如患者)是哺乳动物，通常是灵长类，诸如人类。在一些实施方案中，灵长类是猴子或类人猿。受试者可以是男性或女性，并且可以是任何合适的年龄，包括婴儿、少年、青年、成人和老年受试者。在一些实施方案中，受试者是非灵长类哺乳动物，诸如啮齿动物、狗、猫、家畜(诸如牛或马)等。
如本文所用，“基本上互补”是指在核碱基序列的杂交对中，第一多核苷酸的连续序列中至少约85％但不是全部碱基将与第二多核苷酸的连续序列中的相同数目的碱基杂交。本文的术语“互补”、“完全互补”和“基本上互补”可用于双链RNAi剂的有义链和反义链之间、RNAi剂的反义链和靶mRNA的序列之间或单链反义寡核苷酸和靶mRNA序列之间的碱基匹配。
如本文所用，当应用于核酸序列时，术语“基本上相同”或“基本同一性”意指核酸序列包含与参考序列相比具有至少约85％或更高(优选地至少90％、至少95％或至少99％)序列同一性的序列。通过在比较窗口中比较两条最佳比对的序列来确定序列同一性百分比。该百分比通过如下方式计算：确定相同核碱基在两条序列中出现的位置数目以得到匹配位置的数目，用该匹配位置的数目除以比较窗口中的位置总数目，然后将结果乘以100以得到序列同一性百分比。本文所公开的发明涵盖与本文所公开(例如，表2、表3和表4中)的那些基本上相同的核苷酸序列。在一些实施方案中，本文所公开的序列与本文所公开(例如表1、表2、表3和表4中)的那些完全相同或至少约85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％相同。
如本文所用，术语“治疗(treat)”、“治疗(treatment)”等是指为缓解或减轻受试者中疾病或病症的一种或多种症状的数量、严重程度和/或频率而采取的方法或步骤。
如本文所用，当提及低聚化合物时，短语“引入至细胞”是指将低聚化合物功能性地递送至细胞。短语“功能性递送”是指以使低聚化合物具有预期生物活性(例如，基因表达的序列特异性抑制)的方式将低聚化合物递送至细胞。
除非另行指出，否则本文所用的符号的使用意指可将任何一个或多个基团连接到其上，这符合本文所述发明的范围。
如本文所用，术语“异构体”是指具有相同分子式但其原子的键合的性质或顺序或其原子在空间中的排列不同的化合物。它们的原子空间排列上不同的异构体称为“立体异构体”。彼此不为镜像的立体异构体称为“非立体异构体”，而为不重叠镜像的立体异构体称为“对映体”或有时称光学异构体。与四个不同取代基键合的碳原子称为“手性中心”。
如本文所用，除非特别指明结构具有特定构象，否则对于其中存在不对称中心并因此产生对映体、非对映体或其它立体异构构形的各个结构，本文公开的每个结构旨在代表所有此类可能的异构体，包括它们的光学纯形式和外消旋形式。例如，本文所公开的结构旨在涵盖非对映体的混合物以及单个立体异构体。
如本文权利要求中所用，短语“由…组成”排除权利要求书未指定的任何要素、步骤或成分。如本文权利要求中所用，短语“基本上由...组成”将权利要求的范围限制于指定的材料或步骤以及本质上不影响被要求保护的本发明的一种或多种基本及新颖特征的材料或步骤。
本领域的普通技术人员将易于理解和体会，根据化合物或组合物所放置的环境，本文所公开的化合物和组合物可具有质子化或去质子化状态的某些原子(例如，N、O或S原子)。因此，如本文所用，本文所公开的结构设想某些官能团(例如，OH、SH或NH)可被质子化或去质子化。本文的公开旨在涵盖所公开的化合物和组合物，无论它们基于环境(诸如pH)的质子化状态如何，如本领域的普通技术人员将易于理解的。
除非另有定义，否则本文所用的所有技术和科学术语均具有本领域的普通技术人员公知的相同含义。尽管类似于或等同于本文所述那些的方法和材料可用于本发明的操作或试验，但以下描述的是合适的方法和材料。本文提到的所有出版物、专利申请、专利及其它参考文献均全文以引用方式并入。若有矛盾，应以本说明书及其定义为准。另外，材料、方法和实施例仅为示例性的，而非旨在进行限制。
本发明的其他特征和优点在如下
具体实施方式
和权利要求书中将显而易见。
附图说明
参考以下阐述了本公开的例示性实施方案的详细描述以及附图，将更好地理解本公开的特征和优点。
图1示出了来自不同组群(实施例19的c2b、c3b、c4b、c5b、c8和c9)的CHB患者自第1天的平均对数HBsAg变化。
图2示出了来自不同组群(实施例19的c2b、c8和c9)的CHB患者的HBV DNA的个体变化。实线表示HBeAg阳性患者，并且虚线表示HBeAg阴性患者。
图3示出了来自不同组群(实施例19的c1b、c1c、c4b、c5b、c7、c9、c10和c11)的CHB患者的HBV DNA的个体变化。
图4示出了来自实施例19的组群10的CHB患者的对数HBV RNA的个体变化。
图5示出了来自实施例19的组群7的CHB患者的对数HBV RNA的个体变化。
图6示出了来自不同组群(实施例19的c2b、c3b、c4b、c5b、c8和c9)的CHB患者的对数HBV RNA的个体变化。实线表示HBeAg阳性患者，并且虚线表示HBeAg阴性患者。
图7示出了来自不同组群(实施例19的c2b、c4b、c5b、c8和c9)的CHB患者的HBeAg的个体变化。
图8示出了来自不同组群(实施例19的c1b、c3b和c10)的CHB患者的HBeAg的个体变化。
图9示出了来自不同组群(实施例19的c2b、c3b、c4b、c5b、c8和c9)的CHB患者的HBcrAg的个体变化。实线表示HBeAg阳性患者，并且虚线表示HBeAg阴性患者。
图10示出了来自实施例19的组群6的CHB患者的HBcrAg的个体变化。
图11示出了来自实施例19的组群7的CHB患者的HBcrAg的个体变化。
图12示出了来自实施例19的组群10的CHB患者的HBcrAg的个体变化。
图13示出了HBeAg阳性患者和HBeAg阴性患者的最低点对数HBsAg减少。
图14示出了来自不同组群(实施例19的c2b、c3b、c4b、c5b、c8和c9)的CHB患者自第1天的平均对数HBsAg变化。
图15示出了对于经由皮下注射以28天的间隔(实施例20的组群1b、1c、2b、3b、4b、5b、8和9)接受三个剂量HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)的CHB患者，抗原HBsAg自第1天的平均变化。
图16示出了对于经由皮下注射以28天的间隔(实施例20的组群1b、1c、2b、3b、4b、5b、8和9)接受三个剂量HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)的HBsAg阳性CHB患者，抗原HBsAg和HBeAg自第1天的平均变化。
图17分别示出了实施例21的组群1b、1c、2b、3b、4b和5b中CHB患者从第1天到第113天的平均HBsAg变化。在第1天、第29天和第57天，向患者施用三种皮下剂量的RNAi组分：25mg(组群1b)、50mg(组群1c)、100mg(组群2b)、200mg(组群3b)、300mg(组群4b)或400mg(组群5b)。所有患者每天都给予NA。
图18示出了实施例21的组群1b、1c、2b、3b、4b和5b中的所有患者在从第1天起的第113天的平均HBsAg和个体HBsAg变化。带箭头的圆点指示HBeAg阳性患者。无箭头的圆点指示HBeAg阴性患者。
图19A至图19D分别示出了对于实施例21的组群1b、1c、2b、3b、4b和5b中的CHB患者，HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBcrAg从第1天到第113天的个体变化。在第1天、第29天和第57天，向患者施用三种皮下剂量的RNAi组分：25mg(组群1b)、50mg(组群1c)、100mg(组群2b)、200mg(组群3b)、300mg(组群4b)或400mg(组群5b)。并且所有患者每天都给予NA。每条线代表一个个体CHB患者。
图20示出了对于经由皮下注射以28天的间隔(实施例20的组群1b、1c、2b、3b、4b、5b、8和9；直到第932天)接受三个剂量HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)的CHB患者，抗原HBsAg自第1天的平均变化。
图21示出了对于经由皮下注射以28天的间隔(实施例20的组群1b、1c、2b、3b、4b、5b、8和9；直到第392天)接受三个剂量HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)的HBsAg阳性CHB患者，抗原HBsAg和HBeAg自第1天的平均变化。
图22示出了最后一次RNAi剂量后约9个月，患者亚群中HBsAg的持续抑制(平均值1.74)；参见实施例20：8名CHB患者/组群(经历NA或未经历；HBeAg+ve或-ve)接受100mg、200mg、300mg(n＝16)或400mg的3次皮下JNJ-3989剂量(第1天、第27天、第57天)；患者在第1天开始/继续使用NA，并且在整个研究期间继续使用。
具体实施方式
本文描述了治疗和/或预防对其有需要的受试者的与由乙型肝炎病毒(HBV)引起的感染相关联的症状或疾病或抑制一种或多种乙型肝炎病毒基因表达的方法。具体地讲，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用抑制乙型肝炎病毒(HBV)表达的RNAi剂(本文称为HBV RNAi剂或HBV RNAi触发剂)。每种HBV RNAi剂包含有义链和反义链。该有义链和反义链的长度各自可为16至30个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链和反义链的长度各自可为17至26个核苷酸。该有义链和反义链可具有相同的长度或者它们可为不同的长度。在一些实施方案中，该有义链和反义链的长度各自独立地为17至26个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链和反义链的长度各自独立地为17至21个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链和反义链的长度各自为21至26个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链的长度为约19个核苷酸，而反义链的长度为约21个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链的长度为约21个核苷酸，而反义链的长度为约23个核苷酸。在一些实施方案中，该有义链和反义链的长度均为26个核苷酸。在一些实施方案中，RNAi剂有义链和反义链的长度各自独立地为17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个核苷酸。在一些实施方案中，双链RNAi剂具有约16、17、18、19、20、21、22、23或24个核苷酸的双链体长度。该有义链和反义链之间完全或基本互补的区域的长度通常为15至25(例如，15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25)个核苷酸，并且发生在反义链的5'端或其附近(例如，该不完全或基本上互补的区域可与反义链的5'端分开0、1、2、3或4个核苷酸)。
该有义链和反义链各自包含长度为16至23个核碱基的核心拉伸序列。反义链核心拉伸序列与HBV mRNA靶中存在的核苷酸序列(有时称为例如靶序列)100％(完全)互补或至少约85％(基本上)互补。有义链核心拉伸序列与反义链中的核心拉伸序列100％(完全)互补或至少约85％(基本上)互补，因此有义链核心拉伸序列与HBV mRNA靶中存在的核苷酸序列(靶序列)完全相同或至少约85％相同。有义链核心拉伸序列可与对应的反义核心序列长度相同或者其可以是不同的长度。在一些实施方案中，反义链核心拉伸序列的长度为16、17、18、19、20、21、22或23个核苷酸。在一些实施方案中，有义链核心拉伸序列的长度为16、17、18、19、20、21、22或23个核苷酸。
表3和表4中提供了用于形成HBV RNAi剂的有义链和反义链核苷酸序列的示例。表5中提供了包括表3和表4中的核苷酸序列的RNAi剂双链体的示例。
HBV RNAi剂有义链和反义链退火形成双链体。HBV RNAi剂的有义链和反义链可彼此部分地、基本上或完全互补。在互补双链体区域内，有义链核心拉伸序列与反义核心拉伸序列至少约85％互补或100％互补。在一些实施方案中，该有义链核心拉伸序列含有至少16、至少17、至少18、至少19、至少20或至少21个核苷酸的序列，该序列与反义链核心拉伸序列的对应16、17、18、19、20或21个核苷酸序列至少约85％或100％的互补(即，HBV RNAi剂的有义链和反义核心拉伸序列具有至少85％碱基配对或100％碱基配对的至少16、至少17、至少18、至少19、至少20或至少21个核苷酸的区域)。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂的反义链与表2或表3中的反义链序列中的任一者相差0、1、2或3个核苷酸。在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂的有义链与表2或表4中的有义链序列中的任一者相差0、1、2或3个核苷酸。
本文所述的HBV RNAi剂有义链和反义链的长度独立地为16至30个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度独立地为17至26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链和反义链的长度为19至26个核苷酸。在一些实施方案中，所述RNAi剂有义链和反义链的长度独立地为17、18、19、20、21、22、23、24、25或26个核苷酸。该有义链和反义链可具有相同的长度或者它们可为不同的长度。在一些实施方案中，该有义链和反义链的长度各自为26个核苷酸。在一些实施方案中，有义链的长度为23个核苷酸，反义链的长度为21个核苷酸。在一些实施方案中，有义链的长度为22个核苷酸，反义链的长度为21个核苷酸。在一些实施方案中，有义链的长度为21个核苷酸，反义链的长度为21个核苷酸。在一些实施方案中，有义链的长度为19个核苷酸，反义链的长度为21个核苷酸。
该有义链和/或反义链可任选且独立地在核心序列的3'端、5'端或同时3'端和5'端含有另外的1、2、3、4、5或6个核苷酸(延伸)。反义链另外的核苷酸(如果存在)可与HBVmRNA中的对应序列互补或不互补。有义链另外的核苷酸(如果存在)可与HBV mRNA中的对应序列相同或不同。反义链另外的核苷酸(如果存在)可与对应有义链的另外的核苷酸(如果存在)互补或不互补。
如本文所用，延伸在有义链核心拉伸序列和/或反义链核心拉伸序列的5'和/或3'端包含1个、2个、3个、4个、5个或6个核苷酸。有义链上的延伸核苷酸可与对应反义链中的核苷酸(核心拉伸序列核苷酸或延伸核苷酸)互补或不互补。相反地，反义链上的延伸核苷酸可与对应有义链中的核苷酸(核心拉伸序列核苷酸或延伸核苷酸)互补或不互补。在一些实施方案中，RNAi剂的有义链和反义链均包含3'和5'延伸。在一些实施方案中，一条链的3'延伸核苷酸中的一者或多者与另一链的5'延伸核苷酸中的一者或多者碱基配对。在其他实施方案中，一条链的3'延伸核苷酸中的一者或多者不与另一链的5'延伸核苷酸中的一者或多者碱基配对。在一些实施方案中，HBV RNAi剂具有反义链和有义链，该反义链具有3'延伸，该有义链具有5'延伸。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含长度为1、2、3、4、5或6个核苷酸的3'延伸的反义链。在其他实施方案中，HBV RNAi剂包含长度为1、2或3个核苷酸的3'延伸的反义链。在一些实施方案中，反义链延伸核苷酸中的一者或多者包含尿嘧啶或胸腺嘧啶核苷酸或与对应的HBV mRNA序列互补的核苷酸。在一些实施方案中，3'反义链延伸包括但不限于：AUA、UGCUU、CUG、UG、UGCC、CUGCC、CGU、CUU、UGCCUA、CUGCCU、UGCCU、UGAUU、GCCUAU、T、TT、U、UU(各自由5'至3'列出)，或由其组成。
在一些实施方案中，反义链的3'端可包括另外的脱碱基核苷(Ab)。在一些实施方案中，可将Ab或AbAb添加到反义链的3'端。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含长度为1、2、3、4或5个核苷酸的5'延伸的反义链。在其他实施方案中，HBV RNAi剂包含长度为1或2个核苷酸的5'延伸的反义链。在一些实施方案中，反义链延伸核苷酸中的一者或多者包含尿嘧啶或胸腺嘧啶核苷酸或与对应的HBV mRNA序列互补的核苷酸。在一些实施方案中，5'反义链延伸包括但不限于UA、TU、U、T、UU、TT、CUC(各自由5'至3'列出)，或由其组成。如果存在，反义链可具有上文所述的3'延伸中的任一者与所述5'反义链延伸中的任一者的组合。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含长度为1、2、3、4或5个核苷酸的3'延伸的有义链。在一些实施方案中，有义链延伸核苷酸中的一者或多者包含腺苷、尿嘧啶或胸腺嘧啶核苷酸、AT二核苷酸或与HBV mRNA序列中的核苷酸对应的核苷酸。在一些实施方案中，3'有义链延伸包括但不限于：T、UT、TT、UU、UUT、TTT或TTTT(各自由5'至3'列出)，或由其组成。
在一些实施方案中，有义链的3'端可包括另外的脱碱基核苷。在一些实施方案中，可将UUAb、UAb或Ab添加到有义链的3'端。在一些实施方案中，添加到有义链的3'端的一种或多种脱碱基核苷可被倒置(invAb)。在一些实施方案中，可在靶向配体与RNAi剂的有义链的核碱基序列之间插入一个或多个倒置的脱碱基核苷。在一些实施方案中，在RNAi剂的有义链的一个或多个末端处或附近包含一个或多个倒置的脱碱基核苷，可允许RNAi剂的增强的活性或其他所需特性。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含长度为1、2、3、4、5或6个核苷酸的5'延伸的有义链。在一些实施方案中，有义链延伸核苷酸中的一者或多者包含尿嘧啶或腺苷核苷酸或与HBV mRNA序列中的核苷酸对应的核苷酸。在一些实施方案中，有义链5'延伸可为但不限于：CA、AUAGGC、AUAGG、AUAG、AUA、A、AA、AC、GCA、GGCA、GGC、UAUCA、UAUC、UCA、UAU、U、UU(各自由5'至3'列出)。有义链可具有3'延伸和/或5'延伸。
在一些实施方案中，有义链的5'端可包括另外的脱碱基核苷(Ab)或核苷(AbAb)。在一些实施方案中，添加到有义链的5'端的一种或多种脱碱基核苷可被倒置(invAb)。在一些实施方案中，可在靶向配体与RNAi剂的有义链的核碱基序列之间插入一个或多个倒置的脱碱基核苷。在一些实施方案中，在RNAi剂的有义链的一个或多个末端处或附近包含一个或多个倒置的脱碱基核苷，可允许RNAi剂的增强的活性或其他所需特性。
表3和表4中提供了用于形成HBV RNAi剂的核苷酸序列的示例。在一些实施方案中，HBV RNAi剂反义链包括表3序列中的任一者的核苷酸序列。在一些实施方案中，HBVRNAi剂反义链包括表3序列中的任一者的1-17、2-15、2-17、1-18、2-18、1-19、2-19、1-20、2-20、1-21、2-21、1-22、2-22、1-23、2-23、1-24、2-24、1-25、2-25、1-26或2-26的核苷酸序列。在一些实施方案中，HBV RNAi剂有义链包括表4中序列中的任一者的核苷酸序列。在一些实施方案中，HBV RNAi剂检测链包括表4序列中的任一者的1-18、1-19、1-20、1-21、1-22、1-23、1-24、1-25、1-26、2-19、2-20、2-21、2-22、2-23、2-24、2-25、2-26、3-20、3-21、3-22、3-23、3-24、3-25、3-26、4-21、4-22、4-23、4-24、4-25、4-26、5-22、5-23、5-24、5-25、5-26、6-23、6-24、6-25、6-26、7-24、7-25、7-25、8-25、8-26的核苷酸序列。
在一些实施方案中，本文所述的RNAi剂的有义和反义链包含相同数目的核苷酸。在一些实施方案中，本文所述的RNAi剂的有义和反义链包含不同数目的核苷酸。在一些实施方案中，RNAi剂的有义链5'端和反义链3'端形成钝端。在一些实施方案中，RNAi剂的有义链3'端和反义链5'端形成钝端。在一些实施方案中，RNAi剂的两端均形成钝端。在一些实施方案中，RNAi剂的两端均不是钝端。如本文所用，钝端是指其中两条退火链的末端核苷酸为互补的(形成互补碱基对)的双链RNAi剂的端部。在一些实施方案中，RNAi剂的有义链5'端和反义链3'端形成散损端。在一些实施方案中，RNAi剂的有义链3'端和反义链5'端形成散损端。在一些实施方案中，RNAi剂的两端均形成散损端。在一些实施方案中，RNAi剂的两端均不是散损端。如本文所用，散损端是指其中两条退火链的末端核苷酸形成一对(即不形成悬伸部)但不互补(即形成非互补对)的双链RNAi剂的端部。如本文所用，悬伸部是双链RNAi剂的一条链的端部处的一个或多个未配对核苷酸的拉伸。未配对的核苷酸可位于有义链或反义链上，从而产生3'或5'悬伸部。在一些实施方案中，RNAi剂包含：钝端和散损端、钝端和5'悬伸端、钝端和3'悬伸端、散损端和5'悬伸端、散损端和3'悬伸端、两个5'悬伸端、两个3'悬伸端、5'悬伸端和3'悬伸端、两个散损端或两个钝端。
核苷酸碱基(或核碱基)是杂环嘧啶或嘌呤化合物，其是所有核酸的组分，并且包括腺嘌呤(A)、鸟嘌呤(G)、胞嘧啶(C)、胸腺嘧啶(T)和尿嘧啶(U)。如本文所用，术语“核苷酸”可包括经修饰的核苷酸(诸如核苷酸模拟物、脱碱基位点(Ab)或替代替换部分)。当用于各种多核苷酸或寡核苷酸构建体中时，经修饰的核苷酸可保留细胞中化合物的活性，同时增加这些化合物的血清稳定性，并且还可最小化在施用多核苷酸或寡核苷酸构建体时激活人体中干扰素活性的可能性。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂以盐、混合盐或游离酸的形式制备或提供。在一些实施方案中，HBV RNAi剂制备为钠盐。此类形式在本文所公开的发明的范围内。
经修饰的核苷酸
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含一种或多种经修饰的核苷酸。如本文所用，“经修饰的核苷酸”为除核糖核苷酸(2'-羟基核苷酸)之外的核苷酸。在一些实施方案中，至少50％(例如，至少60％、至少70％、至少80％、至少90％、至少95％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％)的核苷酸为经修饰的核苷酸。如本文所用，经修饰的核苷酸包括但不限于：脱氧核糖核苷酸、核苷酸模拟物、脱碱基核苷酸(本文表示为Ab)、2'-修饰核苷酸、3'至3’连接(倒置)核苷酸(本文表示为invdN、invN、invn、invAb)、含非天然碱基的核苷酸、桥接核苷酸、肽核酸(PNA)、2',3'-seco核苷酸模拟物(解锁的核碱基类似物，本文表示为NUNA或NUNA)、锁定核苷酸(本文表示为NLNA或NLNA)、3'-O-甲氧基(2'核苷间连接)核苷酸(本文表示为3'-OMen)、2'-F-阿拉伯糖核苷酸(本文表示为NfANA或NfANA)、5'-Me,2'-氟核苷酸(本文表示为5Me-Nf)、吗啉代核苷酸、乙烯基膦酸酯脱氧核糖核苷酸(本文表示为vpdN)、含乙烯基膦酸酯的核苷酸和含环丙基膦酸酯的核苷酸(cPrpN)。2'-修饰核苷酸(即在五元糖环的2'位具有除羟基以外的基团的核苷酸)包括但不限于：2'-O-甲基核苷酸(本文表示为核苷酸序列中的小写字母'n')、2'-脱氧-2'-氟核苷酸(本文表示为Nf，本文也表示为2'-氟核苷酸)、2'-脱氧核苷酸(本文表示为dN)、2'-甲氧基乙基(2'-O-2-甲氧基乙基)核苷酸(本文表示为NM或2'-MOE)、2'-氨基核苷酸和2'-烷基核苷酸。给定化合物中的所有位点均不需要均匀修饰。相反地，可在单个HBV RNAi剂中或甚至在其单个核苷酸中掺入一种以上的修饰。HBV RNAi剂有义链和反义链可通过本领域已知的方法合成和/或修饰。一个核苷酸上的修饰与另一个核苷酸上的修饰无关。
经修饰的核碱基包括合成和天然的核碱基，诸如5-取代嘧啶，6-氮杂嘧啶和N-2、N-6和O-6取代嘌呤(例如，2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶或5-丙炔基胞嘧啶)，5-甲基胞嘧啶(5-me-C)，5-羟甲基胞嘧啶，黄嘌呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-烷基(例如，6-甲基、6-乙基、6-异丙基或6-正丁基)衍生物，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-烷基(例如，2-甲基、2-乙基、2-异丙基或2-正丁基)和其他烷基衍生物，2-硫代尿嘧啶，2-硫代胸腺嘧啶，2-硫代胞嘧啶，5-卤代尿嘧啶，胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶，5-丙炔基胞嘧啶，6-偶氮尿嘧啶，6-偶氮胞嘧啶，6-偶氮胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫尿嘧啶，8-卤素、8-氨基、8-巯基、8-硫代烷基、8-羟基和其他8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤(例如，5-溴)、5-三氟甲基和其他5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤，8-氮鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤，7-脱氮鸟嘌呤，7-脱氮腺嘌呤，3-脱氮鸟嘌呤和3-脱氮腺嘌呤。
在一些实施方案中，RNAi剂的全部或基本上所有核苷酸为经修饰的核苷酸。如本文所用，其中存在的基本上所有核苷酸均为经修饰的核苷酸的RNAi剂是在有义链和反义链中具有的四个或更少(即0、1、2、3或4)个核苷酸均为核糖核苷酸的RNAi剂。如本文所用，其中存在的基本上所有核苷酸均为经修饰的核苷酸的有义链是在有义链中具有的两个或更少(即0、1或2)个核苷酸均为核糖核苷酸的有义链。如本文所用，其中存在的基本上所有核苷酸均为经修饰的核苷酸的反义链是在反义链中具有两个或更少(即0、1或2)个核苷酸均为核糖核苷酸的反义链。在一些实施方案中，RNAi剂的一个或多个核苷酸为核糖核苷酸。
经修饰的核苷间键
在一些实施方案中，HBV RNAi剂的一个或多个核苷酸通过非标准键或骨架(即，经修饰的核苷间键或经修饰的骨架)连接。在一些实施方案中，经修饰的核苷间键为包含非磷酸根的共价核苷间键。经修饰的核苷间键或骨架包括但不限于：5'-硫代磷酸酯基团(本文表示为小写“s”)、手性硫代磷酸酯、硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、烷基膦酸酯(例如，甲基膦酸酯或3'-亚烷基膦酸酯)、手性膦酸酯、次膦酸酯、磷酰胺(例如，3'-氨基磷酰胺、氨基烷基磷酰胺或硫代磷酰胺)、硫代烷基-膦酸酯、硫代烷基磷酸酯、吗啉代键、具有正常3'-5’键的硼烷磷酸酯、2'-5'键的硼烷磷酸类似物，或其中相邻的核苷酸单元为3'-5'至5'-3'或2'-5'至5'-2'键的具有反极性的硼烷磷酸酯。在一些实施方案中，经修饰的核苷间键或骨架不含磷原子。不含磷原子的经修饰的核苷间键包括但不限于：短链烷基或环烷基糖间键、混合杂原子和烷基或环烷基糖间键或一个或多个短链杂原子或杂环糖间键。在一些实施方案中，经修饰的核苷间骨架包括但不限于：硅氧烷骨架、硫化物骨架、亚砜骨架、砜骨架、甲酰乙酰基和硫代甲酰乙酰基骨架、亚甲基甲酰乙酰基和硫代甲酰乙酰基骨架、含烯烃骨架、氨基磺酸骨架、亚甲基亚氨基和亚甲基肼骨架、磺酸酯和磺酰胺骨架、酰胺骨架和其他具有混合的N、O、S和CH2组分的骨架。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂的有义链可含有1、2、3、4、5或6个硫代磷酸酯键，HBV RNAi剂的反义链可含有1、2、3、4、5或6个硫代磷酸酯键，该有义链和反义链均可独立地含有1、2、3、4、5或6个硫代磷酸酯键。在一些实施方案中，HBV RNAi剂的有义链可含有1、2、3或4个硫代磷酸酯键，HBV RNAi剂的反义链可含有1、2、3或4个硫代磷酸酯键，该有义链和反义链均可独立地含有1、2、3或4个硫代磷酸酯键。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂有义链含有至少两个硫代磷酸酯核苷间键。在一些实施方案中，该至少两个硫代磷酸酯核苷间键位于从有义链3'端开始1-3位的核苷酸之间。在一些实施方案中，该至少两个硫代磷酸酯核苷间键位于从有义链5'端开始1-3、2-4、3-5、4-6、4-5或6-8位的核苷酸之间。在一些实施方案中，HBV RNAi剂反义链含有四个硫代磷酸酯核苷间键。在一些实施方案中，该四个硫代磷酸酯核苷间键位于从有义链5'端开始1-3位的核苷酸之间和从5'端开始19-21、20-22、21-23、22-24、23-25或24-26位的核苷酸之间。在一些实施方案中，HBV RNAi剂在有义链中含有至少两个硫代磷酸酯核苷间键，在反义链中含有三个或四个硫代磷酸酯核苷间键。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂含有一个或多个经修饰的核苷酸和一个或多个经修饰的核苷间键。在一些实施方案中，2'-修饰核苷与经修饰的核苷间键混合。
HBV RNAi剂
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂靶向下表1中所示的HBV基因组位置处或附近的HBV基因。在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂的反义链包括与表1中所公开的目标HBV 19-mer序列完全、基本上或至少部分互补的核心拉伸序列。
表1.用于HBV RNAi剂的示例性19-mer HBV cDNA靶序列(取自乙型肝炎病毒(ADW2 亚型)，A基因型，完整基因组GenBank AM282986.1(SEQ ID NO:1))。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包括反义链，其中反义链的19位(5’→3’)能够与表1中所公开的19-mer靶序列的1位形成碱基对。在一些实施方案中，HBV RNAi剂包括反义链，其中反义链的1位(5’→3’)能够与表1中所公开的19-mer靶序列的19位形成碱基对。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包括反义链，其中反义链的2位(5’→3’)能够与表1中所公开的19-mer靶序列的18位形成碱基对。在一些实施方案中，HBV RNAi剂包括反义链，其中反义链的2位至18位(5’→3’)能够与表1中所公开的位于19-mer靶序列的18位至2位的相应互补碱基中的每一者形成碱基对。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包括下表2中所示的核心19-mer核苷酸序列。
表2.HBV RNAi剂反义链和有义链核心拉伸序列(N＝任何核苷酸)。
包含表2中的核苷酸序列或由其组成的HBV RNAi剂有义链和反义链可以是经修饰的核苷酸或未经修饰的核苷酸。在一些实施方案中，具有包含表2中的核苷酸序列或由其组成的有义和反义链序列的HBV RNAi剂是全部经修饰或基本上全部经修饰的核苷酸。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂的反义链与表2中的反义链序列中的任一者相差0、1、2或3个核苷酸。在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂的有义链与表2中的有义链序列中的任一者相差0、1、2或3个核苷酸。
表3中提供了经修饰的HBV RNAi剂反义链序列，以及其潜在的未经修饰的序列。表4中提供了经修饰的HBV RNAi剂有义链序列，以及其潜在的未经修饰的序列。在形成HBVRNAi剂时，表3和表4中列出的每条未经修饰的序列中的每个核苷酸可以是经修饰的核苷酸。
如本文所用(包括在表3和表4中)，以下符号用于表示经修饰的核苷酸、靶向基团和连接基团。除非序列另有指明，否则如本领域普通技术人员将易于理解的，当存在于寡核苷酸中时，这些单体通过5'-3'-磷酸二酯键相互连接：
A＝腺苷-3'-磷酸酯；
C＝胞苷-3'-磷酸酯；
G＝鸟苷-3'-磷酸酯；
U＝尿苷-3'-磷酸酯
n＝任何2'-OMe修饰的核苷酸
a＝2'-O-甲基腺苷-3'-磷酸酯
as＝2'-O-甲基腺苷-3'-硫代磷酸酯
c＝2'-O-甲基胞苷-3'-磷酸酯
cs＝2'-O-甲基胞苷-3'-硫代磷酸酯
g＝2'-O-甲基鸟苷-3'-磷酸酯
gs＝2'-O-甲基鸟苷-3'-磷酸酯
t＝2'-O-甲基-5-甲基尿苷-3'-磷酸酯
ts＝2'-O-甲基-5-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯
u＝2'-O-甲基尿苷-3'-磷酸酯
us＝2'-O-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯
Nf＝任何2'-氟修饰的核苷酸
Af＝2'-氟腺苷-3'-磷酸酯
Afs＝2'-氟腺苷-3'-硫代磷酸酯
Cf＝2'-氟胞苷-3'-磷酸酯
Cfs＝2'-氟胞苷-3'-硫代磷酸酯
Gf＝2'-氟鸟苷-3'-磷酸酯
Gfs＝2'-氟鸟苷-3'-硫代磷酸酯
Tf＝2'-氟-5'-甲基尿苷-3'-磷酸酯
Tfs＝2'-氟-5'-甲基尿苷-3'-硫代磷酸酯
Uf＝2'-氟尿苷-3'-磷酸酯
Ufs＝2'-氟尿苷-3'-硫代磷酸酯
dN＝任何2'-脱氧核糖核苷酸
dT＝2'-脱氧胸苷-3'-磷酸酯
NUNA＝2',3'-仲核苷酸模拟物(解锁的核碱基类似物)
NLNA＝锁定核苷酸
NfANA＝2'-F-阿拉伯糖核苷酸
NM＝2'-甲氧基乙基核苷酸
AM＝2'-甲氧基乙基腺苷-3'-硫代磷酸酯
AMs＝2'-甲氧基乙基腺苷-3'-硫代磷酸酯
TM＝2'-甲氧基乙基胸苷-3'-磷酸酯
TMs＝2'-甲氧基乙基胸苷-3'-硫代磷酸酯
R＝核糖醇
(invdN)＝任何倒置的脱氧核糖核苷酸(3'-3'连接的核苷酸)
(invAb)＝倒置的(3'-3'连接的)脱碱基脱氧核糖核苷酸，参见表6
(invAb)s＝倒置的(3'-3'连接的)脱碱基脱氧核糖核苷酸-5'-硫代磷酸酯，参见表6
(invn)＝任何倒置的2'-OMe核苷酸(3'-3'连接的核苷酸)
s＝硫代磷酸酯键
vpdN＝乙烯基膦酸酯脱氧核糖核苷酸
(5Me-Nf)＝5'-Me,2'-氟核苷酸
cPrp＝环丙基膦酸酯，参见表6
epTcPr＝参见表6
epTM＝参见表6
本领域的普通技术人员将容易理解，在给定寡核苷酸序列的3'端的末端核苷酸将通常在给定单体的相应3'位置处具有羟基(-OH)基团，而不是体外的磷酸部分。因此，例如，如上文在AD05070的结构表示中所示，AM06606-AS的反义链的末端3'端上的“g”修饰核苷酸具有位于其3'位的羟基。除非本文另外明确指明，否则当描述本文所公开的HBV RNAi剂和HBV RNAi剂的组合物时，使用本领域普通技术人员的此类理解。
靶向基团和连接基团包括以下项，其化学结构提供于下表6中：(PAZ)、(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)、(NAG39)s。每个有义链和/或反义链可具有上文列出的任何靶向基团或连接基团以及缀合至序列的5'和/或3'端的其他靶向或连接基团。
本文所述的HBV RNAi剂通过使反义链与有义链退火而形成。含有表4中列出的序列的有义链可与含有表3中列出的序列的任何反义链杂交，条件是这两条序列具有在邻接的16、17、18、19、20或21个核苷酸序列上至少约85％互补的区域。
在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂的反义链与表3中的反义链序列中的任一者相差0、1、2或3个核苷酸。在一些实施方案中，本文所公开的HBV RNAi剂的有义链与表4中的有义链序列中的任一者相差0、1、2或3个核苷酸。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂反义链包含表3中的序列中的任一者的核苷酸序列。在一些实施方案中，HBV RNAi剂反义链包含表3中序列中的任一者的(从5'端→3'端)1-17、2-17、1-18、2-18、1-19、2-19、1-20、2-20、1-21、2-21、1-22、2-22、1-23、2-23、1-24、2-24、1-25、2-25、1-26或2-26的核苷酸序列。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂有义链包含表4中序列中的任一者的核苷酸序列。在一些实施方案中，HBV RNAi剂有义链包含表4中序列中的任一者的(从5'端→3'端)1-17、2-17、3-17、4-17、1-18、2-18、3-18、4-18、1-19、2-19、3-19、4-19、1-20、2-20、3-20、4-20、1-21、2-21、3-21、4-21、1-22、2-22、3-22、4-22、1-23、2-23、3-23、4-23、1-24、2-24、3-24、4-24、1-25、2-25、3-25、4-25、1-26、2-26、3-26或4-26的核苷酸序列。
对于本文所公开的HBV RNAi剂，反义链的1位核苷酸(从5'端→3'端)可与HBV基因完全互补，或者可与HBV基因不互补。在一些实施方案中，反义链的1位核苷酸(从5'端→3'端)是U、A或dT。在一些实施方案中，反义链的1位核苷酸(从5'端→3'端)与有义链形成A:U或U:A碱基对。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂反义链包含表3中反义链序列中的任一者的(从5'端→3'端)2-18或2-19的核苷酸序列。在一些实施方案中，HBV RNAi剂有义链包含表4中有义链序列中的任一者的(从5'端→3'端)1-17或1-18的核苷酸序列。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包括：(i)反义链，该反义链包含表3中反义链序列中的任一者的(从5'端→3'端)2-18或2-19的核苷酸序列，和(ii)有义链，该有义链包含表4中有义链序列中的任一者的(从5'端→3'端)1-17或1-18的核苷酸序列。
含有表4中列出的序列的有义链可与含有表3中列出的序列的任何反义链杂交，条件是这两个序列具有在连续的16、17、18、19、20或21个核苷酸序列上至少约85％互补的区域。代表性的序列配对由表5中所示的双链体ID号来举例说明。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含本文所示的双链体ID号中的任一者。在一些实施方案中，HBV RNAi剂由本文所示的双链体ID号中的任一者组成。在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含本文所示的双链体ID号中的任一者的有义链和/或反义链核苷酸序列。在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含本文所示的双链体ID号中的任一者的有义链和反义链核苷酸序列以及靶向基团和/或连接基团，其中该靶向基团和/或连接基团共价连接(即缀合)至有义链或反义链。在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含本文所示的双链体ID号中的任一者的有义链和反义链经修饰的核苷酸序列。在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含本文所示的双链体ID号中的任一者的有义链和反义链经修饰的核苷酸序列以及靶向基团和/或连接基团，其中该靶向基团和/或连接基团共价连接至有义链或反义链。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含具有表5的反义链/有义链双链体中的任一者的核苷酸序列的反义链和有义链，并且还包含脱唾液酸糖蛋白受体配体靶向基团。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含包含具有表5的双链体中的任一者的反义链和/或有义链核苷酸序列中的任一者的反义链和有义链，并且还包含选自由以下项构成的组的靶向基团：(PAZ)、(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含具有表5的双链体中的任一者的反义链和/或有义链核苷酸序列中的任一者的反义链和有义链。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含具有表5的双链体中的任一者的反义链和/或有义链核苷酸序列中的任一者的反义链和有义链，并且还包含脱唾液酸糖蛋白受体配体靶向基团。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂包含表5的双链体中的任一者。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂由表5的双链体中的任一者组成。
表5.HBV RNAi剂双链体的示例。
在一些实施方案中，HBV RNAi剂以盐、混合盐或游离酸的形式制备或提供。本文所述的RNAi剂在递送至表达HBV基因的细胞后，抑制或敲低一种或多种HBV基因的体内表达。
靶向基团、连接基团和递送载体
在一些实施方案中，HBV RNAi剂缀合至一个或多个非核苷酸基团，包括但不限于靶向基团、连接基团、递送聚合物或递送载体。非核苷酸基团可增强RNAi剂的靶向、递送或附接。表6中提供了靶向基团和连接基团的示例。非核苷酸基团可与有义链和/或反义链的3'端和/或5'端共价连接。在一些实施方案中，HBV RNAi剂含有与有义链的3'端和/或5'端连接的非核苷酸基团。在一些实施方案中，非核苷酸基团与HBV RNAi剂有义链的5'端连接。非核苷酸基团可经由接头/连接基团直接或间接与RNAi剂连接。在一些实施方案中，非核苷酸基团经由不稳定、可裂解或可逆的键或接头与RNAi剂连接。
在一些实施方案中，非核苷酸基团增强与其附接的RNAi剂或缀合物的药代动力学或生物分布特性，以改善缀合物的细胞或组织特异性分布和细胞特异性摄入。在一些实施方案中，非核苷酸基团增强RNAi剂的内吞作用。
靶向基团或靶向部分增强与其附接的缀合物的药代动力学或生物分布特性，以改善缀合物的细胞特异性分布和细胞特异性摄入。靶向基团可以是一价的、二价的、三价的、四价的或具有更高的价态。代表性靶向基团包括但不限于：对细胞表面分子具有亲和力的化合物、细胞受体配体、半抗原、抗体、单克隆抗体、抗体片段和对细胞表面分子具有亲和力的抗体模拟物。在一些实施方案中，使用接头(诸如PEG接头)或一个、两个或三个脱碱基基团和/或核糖醇(脱碱基核糖)基团将靶向基团连接至RNAi剂。在一些实施方案中，靶向基团包含半乳糖衍生物簇。
本文所述的HBV RNAi剂可被合成为在5'端具有反应性基团，诸如胺基团。反应性基团可以用于随后使用本领域典型的方法连接靶向部分。
在一些实施方案中，靶向基团包含脱唾液酸糖蛋白受体配体。在一些实施方案中，脱唾液酸糖蛋白受体配体包括一种或多种半乳糖衍生物或由其组成。如本文所用，术语“半乳糖衍生物”包括半乳糖和对脱唾液酸糖蛋白受体的亲和力等于或大于半乳糖的亲和力的乳糖衍生物。半乳糖衍生物包括但不限于：半乳糖、半乳糖胺、N-甲酰半乳糖胺、N-乙酰基-半乳糖胺、N-丙酰基-半乳糖胺、N-正丁酰基-半乳糖胺和N-异丁酰基半乳糖胺(参见例如：Iobst,S.T.和Drickamer,K.J.B.C.1996年，第271卷，第6686页)。可用于寡核苷酸和其他分子在体内靶向肝脏的半乳糖衍生物和半乳糖衍生物簇是本领域已知的(参见，例如，Baenziger和Fiete，1980,Cell,22,611-620；Connolly et al.,1982,J.Biol.Chem.,257,939-945)。半乳糖衍生物已被用于通过其与肝细胞表面上表达的脱唾液酸糖蛋白受体(ASGPr)的结合而在体内将分子靶向肝细胞。ASGPr配体与ASGPr(s)的结合有利于细胞特异性靶向肝细胞以及内吞分子进入肝细胞。ASGPr配体可以是单体(例如，具有单个半乳糖衍生物)或多聚体(例如，具有多个半乳糖衍生物)。可使用本领域已知的方法将半乳糖衍生物或半乳糖衍生物簇连接至RNAi多核苷酸的3'端或5'端。靶向基团(诸如半乳糖衍生物簇)的制备描述于例如美国专利申请序列号15/452,324和15/452,423中，其两者的内容全文并入本文。
如本文所用，半乳糖衍生物簇包含具有二至四个末端半乳糖衍生物的分子。末端半乳糖衍生物通过其C-1碳与分子附接。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇为半乳糖衍生物三聚体(也称为三触角半乳糖衍生物或三价半乳糖衍生物)。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含N-乙酰基-半乳糖胺。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含三个N-乙酰基-半乳糖胺。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇为半乳糖衍生物四聚体(也称为四触角半乳糖衍生物或四价半乳糖衍生物)。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇包含四个N-乙酰基-半乳糖胺。
如本文所用，半乳糖衍生物三聚体含有三个半乳糖衍生物，每个半乳糖衍生物连接至中心分支点。如本文所用，半乳糖衍生物四聚物包含四个半乳糖衍生物，每个半乳糖衍生物连接至中心分支点。半乳糖衍生物可通过糖的C-1碳连接至中心分支点。在一些实施方案中，半乳糖衍生物经由接头或隔离物连接至分支点。在一些实施方案中，接头或间隔物是柔性亲水间隔物，诸如PEG基团(参见，例如，美国专利号5,885,968；Biessen等人，J.Med.Chem.1995，第39卷，第1538-1546页)。在一些实施方案中，PEG间隔物为PEG3间隔物。分支点可以是允许连接三个半乳糖衍生物并且还允许分支点附接至RNAi剂的任何小分子。分支点基团的示例为二赖氨酸或二谷氨酸。分支点与RNAi剂的附接可通过接头或间隔物进行。在一些实施方案中，接头或间隔物包含柔性亲水间隔物，诸如但不限于PEG间隔物。在一些实施方案中，接头包含刚性接头，诸如环状基团。在一些实施方案中，半乳糖衍生物包含N-乙酰基-半乳糖胺或由其组成。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇由半乳糖衍生物四聚体组成，其可以是例如N-乙酰基-半乳糖胺四聚体。
在一些实施方案中，描述了用于在体内将HBV RNAi剂递送至肝细胞的药物组合物。此类药物组合物可包含例如缀合至半乳糖衍生物簇的HBV RNAi剂。在一些实施方案中，半乳糖衍生物簇由半乳糖衍生物三聚体组成，其可以是例如N-乙酰基-半乳糖胺三聚体或半乳糖衍生物四聚体，其可以是例如N-乙酰基-半乳糖胺四聚体。
靶向基团包括但不限于(PAZ)、(NAG13)、(NAG13)s、(NAG18)、(NAG18)s、(NAG24)、(NAG24)s、(NAG25)、(NAG25)s、(NAG26)、(NAG26)s、(NAG27)、(NAG27)s、(NAG28)、(NAG28)s、(NAG29)、(NAG29)s、(NAG30)、(NAG30)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG32)、(NAG32)s、(NAG33)、(NAG33)s、(NAG34)、(NAG34)s、(NAG35)、(NAG35)s、(NAG36)、(NAG36)s、(NAG37)、(NAG37)s、(NAG38)、(NAG38)s、(NAG39)和(NAG39)s。包括半乳糖簇靶向配体的其他靶向基团在本领域中是已知的。
在一些实施方案中，连接基团缀合至RNAi剂。连接基团有利于剂与靶向基团或递送聚合物或递送载体的共价连接。连接基团可连接至RNAi剂有义链或反义链的3'端或5'端。在一些实施方案中，连接基团连接至RNAi剂有义链。在一些实施方案中，连接基团缀合至RNAi剂有义链的3'端或5'端。在一些实施方案中，连接基团缀合至RNAi剂有义链的5'端。连接基团的示例包括但不限于：反应性基团(诸如伯胺和炔烃)、烷基、脱碱基核苷、核糖醇(脱碱基核糖)和/或PEG基团。
接头或连接基团是两个原子之间的连接，所述连接经由一个或多个共价键将一个化学基团(诸如RNAi剂)或感兴趣的链段连接至另一化学基团(诸如靶向基团或递送聚合物)或感兴趣的链段。不稳定的连接含有不稳定的键。连接可任选地包括增加两个接合原子之间的距离的间隔物。间隔物可进一步增加连接的柔韧性和/或长度。间隔物可包括但不限于烷基、烯基、炔基、芳基、芳烷基、芳烯基和芳炔基；其中的每一者可含有一个或多个杂原子、杂环、氨基酸、核苷酸和糖类。间隔物基团在本领域中是众所周知的，并且前述列表并不旨在限制说明书的范围。
表3和表4中列出的HBV RNAi剂核苷酸序列中的任一者，无论是修饰的还是未修饰的，均可含有3'或5'靶向基团和/或连接基团。表3和表4中列出的含有3'或5'靶向基团和/或连接基团的HBV RNAi剂序列中的任一者可另选地不含有3'或5'靶向基团和/或连接基团，或者可含有不同的3'或5'靶向基团和/或连接基团，包括但不限于表3中所示的那些。表5中列出的HBV RNAi剂双链体中的任一者，无论是经修饰的还是未经修饰的，还可包含靶向基团和/或连接基团，包括但不限于表3中所示的那些，并且该靶向基团或连接基团可附接到HBV RNAi剂双链体的有义链或反义链的3'端或5'端。
表6中提供了靶向基团和连接基团的示例。表4提供了具有连接至5'端或3'端的靶向基团或连接基团的HBV RNAi剂有义链的若干实施方案。
表6.表示各种经修饰的核苷酸、靶向基团和连接基团的结构。
在表6中的上述结构的每一者中，NAG包含N-乙酰基-半乳糖胺或另一ASGPr配体，如本领域普通技术人员将理解的根据上述结构和本文提供的描述进行附接。例如，在一些实施方案中，表6中提供的结构中的NAG由以下结构表示：
每个(NAGx)可经由磷酸酯基团(如(NAG25)、(NAG30)和(NAG31))或硫代磷酸酯基团(如(NAG25)s、(NAG29)s、(NAG30)s、(NAG31)s或(NAG37)s)或另一连接基团连接至HBVRNAi剂。
可使用本领域已知的其它连接基团。
递送载体
在另一方面，本文所述的方法还包括递送载体。在一些实施方案中，递送载体可用于将RNAi剂递送至细胞或组织。递送载体是改善RNAi剂向细胞或组织的递送的化合物。递送载体可包括但不限于：聚合物(诸如两亲性聚合物)、膜活性聚合物、肽、蜂毒肽、蜂毒样肽(MLP)、脂质、可逆修饰的聚合物或肽或可逆修饰的膜活性多胺，或由其组成。
在一些实施方案中，RNAi剂可与脂质、纳米粒子、聚合物、脂质体、胶束、DPC或本领域可用的其它递送体系组合。RNAi剂还可化学缀合至靶向基团、脂质(包括但不限于胆固醇和胆固醇衍生物)、纳米粒子、聚合物、脂质体、胶束、DPC(参见例如WO 2000/053722、WO2008/0022309、WO 2011/104169和WO 2012/083185、WO 2013/032829、WO 2013/158141，其每一者以引用方式并入本文)或本领域可用的其他递送体系。
药物组合物和制剂
在另一方面，本文所述的方法包括一种或多种HBV RNAi剂，其中该一种或多种HBV剂被制备为药物组合物或制剂。在一些实施方案中，药物组合物包含至少一种HBV RNAi剂。这些药物组合物特别适用于抑制靶细胞、细胞群、组织或生物体中靶mRNA的表达。该药物组合物可用于治疗患有疾病或障碍的受试者，所述疾病或障碍将受益于靶mRNA水平的减少或靶基因表达的抑制。该药物组合物可用于治疗具有出现疾病或障碍的风险的受试者，所述疾病或障碍将受益于靶mRNA水平的减少或靶基因表达的抑制。在一个实施方案中，该方法包括将与本文所述的靶向配体连接的HBV RNAi剂施用给待治疗的受试者。在一些实施方案中，将一种或多种药学上可接受的赋形剂(包括媒介物、载体、稀释剂和/或递送聚合物)添加到包含HBV RNAi剂的药物组合物中，从而形成适于向人体内递送的药物制剂。
包含HBV RNAi剂的药物组合物和本文所公开的方法可降低细胞、细胞群、细胞群、组织或受试者中的靶mRNA水平，包括：向受试者施用治疗有效量的本文所述的HBV RNAi剂，从而抑制受试者中靶mRNA的表达。
在一些实施方案中，所述包含HBV RNAi剂的药物组合物用于治疗或管理与HBV感染相关联的临床表现。在一些实施方案中，将治疗或预防有效量的一种或多种药物组合物施用给需要此类治疗、预防或管理的受试者。在一些实施方案中，所公开的HBV RNAi剂中的任一者的施用可用于降低受试者疾病症状的数量、严重程度和/或频率。
所述包含HBV RNAi剂的药物组合物可用于治疗患有疾病或障碍的受试者中的至少一种症状，该疾病或障碍将受益于HBV mRNA表达的减少或抑制。在一些实施方案中，向受试者施用治疗有效量的一种或多种包括HBV RNAi剂的药物组合物，从而治疗该症状。在其他实施方案中，向受试者施用预防有效量的一种或多种HBV RNAi剂，从而预防该至少一种症状。
施用途径是HBV RNAi剂与身体接触的路径。一般来讲，用于治疗哺乳动物的药物和核酸的施用方法是本领域熟知的，并且可应用于本文所述组合物的施用。本文所公开的HBV RNAi剂可在适合特定途径的制剂中经由任何合适的途径施用。本文所述的药物组合物可通过注射施用，例如静脉内、肌内、皮内、皮下、关节内或腹膜内施用。在一些实施方案中，本文描述了经由皮下注射的药物组合物。
可使用本领域已知的寡核苷酸递送技术将包含本文所述的HBV RNAi剂的药物组合物递送至细胞、细胞群、肿瘤、组织或受试者。一般来讲，本领域公认的用于递送核酸分子(体外或体内)的任何合适方法可适于与本文所述的组合物一起使用。例如，递送可通过局部施用(例如，直接注射、植入或局部施用)、全身施用或皮下、静脉内、腹膜内或肠胃外途径，包括颅内(例如，脑室内、实质内和鞘内)、肌内、透皮、气道(气溶胶)、鼻腔、口腔、直肠或局部施用。在某些实施方案中，组合物通过皮下或静脉内输注或注射施用。
因此，在一些实施方案中，本文所述的药物组合物可包含一种或多种药学上可接受的赋形剂。在一些实施方案中，本文所述的药物组合物可配制用于施用给受试者。
如本文所用，药物组合物或药物包括药理学上有效量的所述治疗化合物中的至少一者和一种或多种药学上可接受的赋形剂。药学上可接受的一种或多种赋形剂是有意包含在药物递送体系中的除活性药物成分(API、治疗产品，例如HBV RNAi剂)以外的物质。在预期剂量下赋形剂不或不旨在对治疗效果产生影响。赋形剂可用于a)在制造期间有助于处理药物递送体系，b)保护、支持或增强API的稳定性、生物利用率或患者可接受性，c)有助于产品鉴定，以及/或者d)增强API在储存或使用期间递送的总体安全性、有效性的任何其他属性。药学上可接受的赋形剂可以是或可以不是惰性物质。
赋形剂包括但不限于：吸收增强剂、防粘剂、消泡剂、抗氧化剂、粘合剂、缓冲剂、载体、包衣剂、着色剂、递送增强剂、递送聚合物、葡聚糖、右旋糖、稀释剂、崩解剂、乳化剂、增量剂、填充剂、风味剂、助流剂、湿润剂、润滑剂、油、聚合物、防腐剂、盐水、盐、溶剂、糖、悬浮剂、缓释基质、甜味剂、增稠剂、张度剂、媒介物、防水剂和润湿剂。
适于注射用途的药物组合物包括无菌水性溶液(在此是水溶性的)或分散体以及用于即时制备无菌注射液或分散体的无菌粉末。对于静脉内施用，合适的载体包括生理盐水、抑菌水、Cremophor ELTM(BASF，Parsippany,NJ)或磷酸盐缓冲盐水。其在制造和储存条件下应当是稳定的并且应当能防止微生物例如细菌和真菌的污染作用。载体可以是含有例如水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇和液体聚乙二醇)的溶剂或分散介质，及其适宜的混合物。例如通过利用涂层例如卵磷脂，在分散体情况下维持所需颗粒尺寸，以及利用表面活性剂，可以保持适宜的流动性。在许多情况下，将优选在组合物中包含等渗剂，例如糖、多元醇(诸如甘露糖醇、山梨醇)和氯化钠。注射用组合物的延长吸收可通过在所述组合物中包含延缓吸收的试剂例如单硬脂酸铝和明胶来达到。
根据需要，可以通过将活性化合物以所需量掺入具有上文所列成分中的一种或组合(按需要)的合适溶剂中来制备无菌注射溶液，然后过滤消毒。一般来讲，通过将活性化合物掺入含有碱性分散介质和上文所列那些中的所需其他成分的无菌载体中来制备分散体。就用于制备无菌注射溶液的无菌粉末而言，制备方法包括获得粉末的真空干燥和冷冻干燥，该粉末包含活性成分和任何另外的期望成分，它们来自前述的这些成分的无菌过滤溶液。
适于关节内施用的制剂可以是药物的无菌水性制剂的形式，其可以是微晶形式，例如以水性微晶悬浮液的形式。脂质体制剂或可生物降解的聚合物体系也可用于提供用于关节内和眼科施用的药物。
活性化合物可用保护该化合物不被身体迅速消除的载体制备，诸如控释制剂，包括植入体和微胶囊化递送体系。可使用可生物降解、可生物相容的聚合物，例如乙烯-乙酸乙烯酯、聚酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。此类制剂的制备方法对于本领域的技术人员将是显而易见的。脂质体悬浮液也可用作药学上可接受的载体。这些可根据本领域的技术人员已知的方法制备，例如，如美国专利4,522,811中所述。
HBV RNAi剂可以剂量单位形式配制在组合物中，以易于施用和剂量的一致性。剂量单位形式是指适合作为用于待治疗的受试者的单元剂量的物理上不连续单位；每个单位含有与所需可药用载体结合的预定数量的活性化合物，所述预定数量计算为产生所需治疗效应。本公开的剂量单位形式的规格由以下指示并直接取决于活性化合物的独特特征和待实现的治疗效果，以及用于个体治疗的此类活性化合物的调配领域中固有的局限性。
药物组合物可含有药物组合物中常见的其它附加组分。此类附加组分包括但不限于：抗瘙痒药、收敛剂、局部麻醉剂或抗炎剂(例如，抗组胺剂、苯海拉明等)。还设想了表达或包含本文所定义的RNAi剂的细胞、组织或分离的器官可用作“药物组合物”。如本文所用，“药理学有效量”、“治疗有效量”或简单地“有效量”是指产生药理、治疗或预防效果的RNAi剂的量。
一般来讲，活性化合物的有效量范围将为约0.1mg/kg体重/天至约100mg/kg体重/天，例如约1.0mg/kg体重/天至约50mg/kg体重/天。在一些实施方案中，活性化合物的有效量范围将为约0.25体重/剂量至约5mg/kg体重/剂量。在一些实施方案中，活性化合物的有效量范围将为每1周至18周或1个月至6个月25mg至400mg。在一些实施方案中，活性化合物的有效量范围将为每4周或每一个月50mg至125mg。在一些实施方案中，活性化合物的有效量范围将为每4周或每一个月40mg至200mg。在一些实施方案中，活性化合物的有效量将为每4周或每月40mg。在一些实施方案中，活性化合物的有效量将为每4周或每月100mg。在一些实施方案中，活性化合物的有效量将为每4周或每月200mg。在一些实施方案中，活性成分的有效量范围将为约0.5体重/剂量至约3mg/kg体重/剂量。在一些实施方案中，活性成分的有效量范围将为约25mg/剂量至400mg/剂量。在一些实施方案中，活性成分的有效量范围将为约50mg/剂量至125mg/剂量。在一些实施方案中，活性成分的有效量将为约35mg/剂量、50mg/剂量、100mg/剂量、200mg/剂量、300mg/剂量或400mg/剂量。在一些实施方案中，活性成分的有效量将为约40mg/剂量、100mg/剂量或200mg/剂量。施用量也可能取决于诸如患者的总体健康状况、所递送的化合物的相对生物功效、药物制剂、制剂中赋形剂的存在和类型以及施用途径等变量。另外，应当理解，施用的初始剂量可增大到超过上述上限以快速达到期望的血液水平或组织水平，或者初始剂量可小于最佳剂量。
本文所述的该一种或多种(例如，至少两种)HBV RNAi剂可配制成一种单一组合物或单独的个体组合物。在一些实施方案中，单独的个体组合物中的HBV RNAi剂可与相同或不同的赋形剂和载体一起配制。在一些实施方案中，单独的个体组合物剂中的HBV RNAi剂可通过相同或不同的施用途径施用。在一些实施方案中，HBV RNAi剂通过皮下施用。
为了治疗疾病或形成用于治疗疾病的药物或组合物，可将本文所述的包含HBVRNAi剂的药物组合物与赋形剂或与第二治疗剂或治疗组合，所述治疗剂或治疗包括但不限于：第二或其他RNAi剂、小分子药物、抗体、抗体片段和/或疫苗。
当所述HBV RNAi剂被添加到药学上可接受的赋形剂或助剂中时，可将其包装到剂盒、容器、包装或分配器中。本文所述的药物组合物可包装在预填充的注射器或小瓶中。
治疗方法和抑制表达
本文描述了用于治疗患有将受益于施用化合物的疾病或障碍的受试者(例如，人类或哺乳动物)的方法，该方法包括向受试者施用一种或多种本文所述的HBV RNAi剂。在一些实施方案中，受试者(例如，人类)患有将受益于HBV mRNA表达的减少或抑制的疾病或障碍。向受试者施用治疗有效量的任何一种或多种RNAi剂。受治者可为人类、患者或人类患者。受试者可为成人、青少年、儿童或婴儿。本文还描述了用于治疗对其有需要的受试者的方法，该方法包括施用本文所述的药物组合物，其中该药物组合物包含HBV RNAi剂。此类方法包括将本文所述的药物组合物施用给人或动物。
在一些实施方案中，与HBV感染相关联的症状和疾病包括但不限于慢性肝病/障碍、炎症、纤维化病症、增殖性障碍(包括癌症，诸如肝细胞癌)、丁型肝炎病毒(HDV)感染和急性HBV感染。在一些实施方案中，这些症状和疾病与慢性HBV感染和/或HDV感染相关联。在一些实施方案中，受试者已测试HBV感染至少6个月至12个月。在一些实施方案中，受试者被诊断为HBeAg阳性或HBeAg阴性慢性HBV感染。在一些实施方案中，受试者被诊断为HBeAg阳性或HBeAg阴性慢性HBV感染至少6个月。在一些实施方案中，与HBV感染相关联的症状或疾病是慢性肝脏疾病或障碍、肝脏炎症、肝脏纤维化病症、增殖性肝细胞障碍、肝细胞癌、丁型肝炎病毒感染、急性HBV感染、慢性乙型肝炎或慢性HBV感染。在一些实施方案中，与HBV感染相关联的症状或疾病是慢性HBV感染或慢性乙型肝炎。
在一些实施方案中，受试者感染了HBV。在一些实施方案中，所述方法用于治疗具有HBV感染的受试者的至少一种症状。向受试者施用治疗有效量的所述RNAi剂中的任何一者或多者。
在一些实施方案中，受试者同时具有HBV感染和HDV感染。在一些实施方案中，本文所述的方法用于治疗感染HBV和HDV两者的受试者。在一些实施方案中，所述方法用于治疗具有HBV或HDV感染的受试者的至少一种症状。向受试者施用治疗有效量的所述RNAi剂中的任何一者或多者。
在一些实施方案中，本文所述的方法用于治疗或管理感染HBV的受试者的临床表现。向受试者施用治疗有效量的本文所述HBV RNAi剂中的一者或多者或含HBV RNAi剂的组合物。在一些实施方案中，该方法包括向待治疗的受试者施用包含本文所述的HBV RNAi剂的组合物。
在一些实施方案中，该方法包括施用一种或多种本文所述的HBV RNAi剂。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约5mg至1000mg的量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约5mg至25mg、约25mg至50mg、约50mg至75mg、约75mg至100mg、约100mg至125mg、约125mg至150mg、约150mg至175mg、约175mg至200mg、约200mg至225mg、约225mg至250mg、约250mg至275mg、约275mg至300mg、约300mg至325mg、约325mg至350mg、约350mg至375mg、约375mg至400mg、约400mg至425mg、约425mg至450mg、约450mg至475mg、约475mg至500mg、约500mg至550mg、约550mg至600mg、约600mg至650mg、约650mg至700mg、约700mg至750mg、约750mg至800mg、约800mg至850mg、约850mg至900mg、约900mg至950mg、约950mg至1000mg、约5mg至50mg、约50mg至100mg、约100mg至200mg、约200mg至300mg、约300mg至400mg、约400mg至500mg、约500mg至750mg、约750mg至1000mg、25mg至100mg、50mg至150mg、100mg至200mg、150mg至250mg、200mg至300mg、300mg至400mg、25mg至200mg或200mg至400mg的量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg或约1000mg的量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg、约50mg、约75mg、约100mg或约125mg的量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约35mg、约50mg、约100mg、约200mg、约300mg或约400mg的量施用。在一些实施方案中，该一种或多种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的量施用。
在一些实施方案中，该方法包括施用至少两种HBV RNAi剂的组合，其中每种HBVRNAi剂被设计成靶向不同的HBV转录物(例如，包括两种HBV RNAi剂的组合物，其中第一HBVRNAi剂包括与位于HBV基因的S ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链，而第二HBVRNAi剂包括与位于HBV基因的X ORF中的核苷酸序列至少部分互补的反义链)。
在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约5mg至1000mg的量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约5mg至25mg、约25mg至50mg、约50mg至75mg、约75mg至100mg、约100mg至125mg、约125mg至150mg、约150mg至175mg、约175mg至200mg、约200mg至225mg、约225mg至250mg、约250mg至275mg、约275mg至300mg、约300mg至325mg、约325mg至350mg、约350mg至375mg、约375mg至400mg、约400mg至425mg、约425mg至450mg、约450mg至475mg、约475mg至500mg、约500mg至550mg、约550mg至600mg、约600mg至650mg、约650mg至700mg、约700mg至750mg、约750mg至800mg、约800mg至850mg、约850mg至900mg、约900mg至950mg、约950mg至1000mg、约5mg至50mg、约50mg至100mg、约100mg至200mg、约200mg至300mg、约300mg至400mg、约400mg至500mg、约500mg至750mg、约750mg至1000mg、25mg至100mg、50mg至150mg、100mg至200mg、150mg至250mg、200mg至300mg、300mg至400mg、25mg至200mg或200mg至400mg的量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg、约50mg、约75mg、约100mg、约125mg、约150mg、约175mg、约200mg、约250mg、约300mg、约350mg、约400mg、约450mg、约500mg、约600mg、约700mg、约800mg、约900mg或约1000mg的量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg、约50mg、约75mg、约100mg或约125mg的量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约35mg、约50mg、约100mg、约200mg、约300mg或约400mg的量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg、约100mg或约200mg的量施用。
在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至10mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至1.5mg/kg、约1.5mg/kg至2.0mg/kg、约2.0mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至3.0mg/kg、约3.0mg/kg至3.5mg/kg、约3.5mg/kg至4.0mg/kg、约4.0mg/kg至4.5mg/kg、约4.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至5.5mg/kg、约5.5mg/kg至6.0mg/kg、约6.0mg/kg至6.5mg/kg、约6.5mg/kg至7.0mg/kg、约7.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至8.0mg/kg、约8.0mg/kg至8.5mg/kg、约8.5mg/kg至9.0mg/kg、约9.0mg/kg至9.5mg/kg、约9.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5.0mg/kg或约5.0mg/kg至10mg/kg的组合量施用。
在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂同时施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂按顺序施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂作为单一组合物施用。在一些实施方案中，该至少两种HBV RNAi剂作为两种或更多种个体组合物施用。
在一些实施方案中，本文描述了用于治疗或预防受试者的HBV相关联疾病或症状或者抑制一种或多种HBV基因表达的方法，该方法包括施用包括两种HBV RNAi剂的组合的组合物，其中一种HBV RNAi剂靶向HBV RNA的S ORF(即，具有靶向S转录物(S、前S1和前S2)、前基因组RNA(核心和聚合酶)和HBV基因组的前核心转录物(HBeAg)的反义链)，另一HBVRNAi剂靶向HBV RNA的X ORF(即，具有靶向HBV基因组的X转录物、S转录物(S、前S1和前S2)、前基因组RNA(核心和聚合酶)和HBV基因组的前核心转录物(HBeAg)的反义链)。在一些实施方案中，本文所述的组合物包含至少一种HBV RNAi剂和第二HBV RNAi剂，该HBV RNAi剂含有靶向HBV基因的S ORF的序列，该第二HBV RNAi剂含有靶向HBV基因的X ORF的序列。
在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以约1:1、2:1、3:1、4:1或5:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以约2:1的比率施用。
在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约5mg至1000mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约5mg至125mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至150mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约50mg至200mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg至250mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBVRNAi剂以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBVRNAi剂以每剂施用约400mg至500mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约500mg至750mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBVRNAi剂以每剂施用约750mg至1000mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至125mg的组合量并且以约2:1、约3:1、约1:1、约4:1、约5:1或约1:2的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约5mg至1000mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约25mg至75mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约50mg至125mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约75mg至150mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg至200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约200mg至300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约300mg至400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约400mg至500mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约500mg至750mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBVRNAi剂以每剂施用约750mg至1000mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约35mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约40mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约100mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约200mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约300mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约400mg的组合量并且以约2:1的比率施用。在另一方面，本文所述的方法包括以1周至18周的间隔或1个月至6个月的间隔施用一种或多种HBVRNAi剂(例如，两种或更多种)。在一些实施方案中，HBV RNAi剂以约1周至18周的间隔施用。在一些实施方案中，HBV RNAi剂以约1周的间隔、约2周的间隔、约3周的间隔、约4周的间隔、约5周的间隔、约6周的间隔、约7周的间隔、约8周的间隔、约9周的间隔、约10周的间隔、约11周的间隔、约12周的间隔、约13周的间隔、约14周的间隔、约15周的间隔、约16周的间隔、约17周的间隔或约18周的间隔施用。在一些实施方案中，HBV RNAi剂以约1个月至6个月的间隔施用。在一些实施方案中，HBV RNAi剂以约1个月的间隔、约2个月的间隔、约3个月的间隔、约4个月的间隔、约5个月的间隔或约6个月的间隔施用。在一些实施方案中，HBV RNAi剂以约4周的间隔或1个月的间隔施用。在一些实施方案中，HBV RNAi剂以约7天、14天、21天或28天的间隔施用。在一些实施方案中，HBV RNAi剂以约28天的间隔(即，Q4W)施用。
在另一方面，本文所述的方法包括施用一种或多种HBV RNAi剂(例如，两种或更多种)持续约1个月至12个月或1周至18周的持续时间。在一些实施方案中，RNAi剂施用约1个月至12个月的持续时间。在一些实施方案中，HBV RNAi剂施用至少约1个月、至少约2个月、至少约3个月、至少约4个月、至少约5个月、至少约6个月、至少约7个月、至少约8个月、至少约9个月、至少约10个月、至少约11个月或至少约12个月的持续时间。在一些实施方案中，HBV RNAi剂施用约1周至18周的持续时间。在一些实施方案中，HBV RNAi剂施用至少约1周、至少约2周、至少约3周、至少约4周、至少约5周、至少约6周、至少约7周、至少约8周、至少约9周、至少约10周、至少约11周、至少约12周、至少约13周、至少约14周、至少约15周、至少约16周、至少约17周或至少约18周的持续时间。在一些实施方案中，HBV RNAi剂施用约12周至3个月的持续时间。
在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约3mg至650mg的量施用，并且第二RNAi剂以每剂施用约2mg至325mg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约35mg至265mg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约50mg至75mg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约20mg至125mg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约25mg至50mg的量施用。
在一些实施方案中，两种RNAi剂以每剂施用25mg至400mg的组合剂量施用。在一个实施方案中，两种RNAi剂以25mg至400mg的组合剂量施用，并且第一RNAi剂与第二RNAi剂以1:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约25mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约50mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约100mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约150mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，第一RNAi剂和第二RNAi剂中的每一者的剂量为约200mg的量。
在一个实施方案中，两种RNAi剂以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，并且第一RNAi剂与第二RNAi剂以2:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约16mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约8mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约24mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约33mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约17mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约65mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约35mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约133mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约67mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约200mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约100mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约270mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约135mg的量。
在一个实施方案中，两种RNAi剂以每剂25mg至400mg的组合剂量施用，第一RNAi剂与第二RNAi剂以3:1的比率施用。在一个实施方案中，对于约25mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约18mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约6mg的量。在一个实施方案中，对于约35mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约27mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约9mg的量。在一个实施方案中，对于约50mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约36mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约12mg的量。在一个实施方案中，对于约100mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约75mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约25mg的量。在一个实施方案中，对于约200mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约150mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约50mg的量。在一个实施方案中，对于约300mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约225mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约75mg的量。在一个实施方案中，对于约400mg的组合剂量，第一RNAi剂的剂量为约300mg的量，并且第二RNAi剂的剂量为约100mg的量。
在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至10mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至5mg/kg的组合量施用。在一些实施方案中，两种HBV RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至1.5mg/kg、约1.5mg/kg至2.0mg/kg、约2.0mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至3.0mg/kg、约3.0mg/kg至3.5mg/kg、约3.5mg/kg至4.0mg/kg、约4.0mg/kg至4.5mg/kg、约4.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至5.5mg/kg、约5.5mg/kg至6.0mg/kg、约6.0mg/kg至6.5mg/kg、约6.5mg/kg至7.0mg/kg、约7.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至8.0mg/kg、约8.0mg/kg至8.5mg/kg、约8.5mg/kg至9.0mg/kg、约9.0mg/kg至9.5mg/kg、约9.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至2.5mg/kg、约2.5mg/kg至5.0mg/kg、约5.0mg/kg至7.5mg/kg、约7.5mg/kg至10mg/kg、约1mg/kg至5.0mg/kg或约5.0mg/kg至10mg/kg的组合量施用。
在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约0.6mg/kg至7mg/kg的量施用，并且第二RNAi剂以每剂施用约0.3mg/kg至5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约0.5mg/kg至2.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第二RNAi剂以每剂施用约0.3mg/kg至1.5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约0.6mg/kg至5mg/kg的量施用。在一些实施方案中，第一RNAi剂以每剂施用约1mg/kg至2.5mg/kg的量施用。
在一些实施方案中，施用所述HBV RNAi剂的受试者，相对于受试者在施用HBVRNAi剂之前或未接受HBV RNAi剂的受试者，其HBV基因的基因表达水平和/或mRNA水平减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或大于99％。受试者的基因表达水平和/或mRNA水平可以在受试者的细胞、细胞群和/或组织中减少。在一些实施方案中，已经施用所述HBV RNAi剂的受试者，相对于受试者在施用HBV RNAi剂之前或在未接收HBV RNAi剂的受试者，其HBV基因的表达蛋白水平减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或大于99％。受试者的蛋白质水平可在受试者的细胞、细胞群、组织、血液和/或其他流体中减少。例如，在一些实施方案中，已经施用所述HBV RNAi剂的受试者，相对于受试者在施用HBV RNAi剂之前或在未接收HBV RNAi剂的受试者，其乙型肝炎表面抗原(HBsAg)的量或水平减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或大于99％。在一些实施方案中，已经施用所述HBV RNAi剂的受试者，相对于受试者在施用HBV RNAi剂之前或在未接收HBV RNAi剂的受试者，其乙型肝炎e抗原(HBeAg)的量或水平减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或大于99％。在一些实施方案中，已经施用所述HBV RNAi剂的受试者，相对于受试者在施用HBV RNAi剂之前或在未接收HBV RNAi剂的受试者，其血清HBVDNA的量或水平减少至少约5％、10％、15％、20％、25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或大于99％。可通过本领域已知的方法评估血清HBV DNA、HBV基因表达、HBV mRNA或HBV蛋白的量或水平存在的减少。HBV mRNA的量或水平、所表达的蛋白的量或水平和/或血清HBV DNA的量或水平的减少或降低在本文中统称为HBV的减少或降低或者HBV表达的抑制或减少。
细胞和组织以及非人类生物体
设想了包括本文所述的HBV RNAi剂中的至少一者的细胞、组织和非人类生物体。该细胞、组织或非人类生物体通过将RNAi剂递送至细胞、组织或非人生物体来制备。
现在用以下非限制性实施例说明上文提供的实施方案和项目。
实施例
实施例1.HBV RNAi剂的合成。
根据以下方法合成表5中所示的HBV RNAi剂双链体：
A.合成。根据在寡核苷酸合成中使用的固相亚磷酰胺技术合成HBV RNAi剂的有义链和反义链。根据比例，使用(Bioautomation)、(Bioautomation)或OP Pilot 100(GE Healthcare)。在由可控孔玻璃(CPG，或可购自Prime Synthesis,Aston,PA,USA)制得的固体载体上进行合成。所有的RNA和2'-修饰的亚磷酰胺购自Thermo Fisher Scientific(Milwaukee,WI,USA)。具体地讲，使用以下2'-O-甲基亚磷酰胺：(5'-O-二甲氧基三苯甲基-N6-(苯甲酰基)-2'-O-甲基-腺苷-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺、5'-O-二甲氧基三苯甲基-N4-(乙酰基)-2'-O-甲基-胞苷-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基-氨基)亚磷酰胺、(5'-O-二甲氧基三苯甲基-N2-(异丁酰基)-2'-O-甲基-鸟苷-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺和5'-O-二甲氧基三苯甲基-2'-O-甲基-尿苷-3'-O-(2-氰乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺。2'-脱氧-2'-氟-亚磷酰胺带有与2'-O-甲基亚酰胺相同的保护基。脱碱基(3'-O-二甲氧基三苯甲基-2'-脱氧核糖-5'-O-(2-氰基乙基-N,N-二异丙基氨基)亚磷酰胺购自ChemGenes(Wilmington,MA,USA)。将含有亚磷酰胺的靶向配体溶解于无水二氯甲烷或无水乙腈(50mM)中，同时将所有其它亚酰胺溶解于无水乙腈(50mM)中，并加入分子筛使用5-苄硫基-1H-四唑(BTT，250mM，溶于乙腈)或5-乙硫基-1H-四唑(ETT，250mM，溶于乙腈)作为活化剂溶液。耦接时间为12分钟(RNA)、15分钟(靶向配体)、90秒(2'OMe)和60秒(2'F)。为了引入硫代磷酸酯键，采用溶于无水乙腈的100mM的3-苯基1,2,4-二噻唑啉-5-酮(POS，可购自PolyOrg,Inc.,Leominster,MA,USA)。
B.载体键合寡聚体的裂解和去保护。在固相合成完成后，将干燥的固体载体用体积1:1的40重量％的甲胺水溶液和28％的氢氧化铵溶液(Aldrich)在30℃下处理1.5小时。蒸发掉溶液，并将固体残余物在水中重构(见下文)。
C.纯化。使用TSKgel SuperQ-5PW 13μm柱和Shimadzu LC-8体系，通过阴离子交换HPLC纯化粗制低聚物。缓冲液A为pH 9.0的20mM Tris、5mM EDTA并且含有20％的乙腈，缓冲液B除了加入1.5M氯化钠以外其他与缓冲液A相同。记录260nm处的UV迹线。合并合适的级分，然后使用填充有Sephadex G-25凝胶的GE Healthcare XK 26/40柱，用已过滤的DI水或pH 6.7的100mM碳酸氢铵和20％乙腈的运行缓冲液在尺寸排阻HPLC上运行。
D.退火。通过在1×磷酸盐缓冲盐水(Corning,Cellgro)中结合等摩尔RNA溶液来混合互补链(有义链和反义链)，以形成RNAi剂。将一些RNAi剂冻干并储存在-15℃至-25℃下。通过UV-Vis光谱仪测量在1×磷酸盐缓冲盐水中的溶液吸光度来确定双链体浓度。然后将260nm处的溶液吸光度乘以转换因子和稀释因子以确定双链体浓度。除非另行指出，否则所有转换因子均为0.037mg/(mL·cm)。对于一些实验，由以实验方法确定的消光系数计算转换因子。
实施例2.pHBV模型小鼠。
通过水动力学尾部静脉注射，将六至八周龄的雌性NOD.CB17-Prkdscid/NcrCrl(NOD-SCID)小鼠体内瞬时转染MC-HBV1.3，(Yang PL等人，“Hydrodynamic injectionofviral DNA:a mouse model of acute hepatitis B virus infection,”PNAS USA2002，第99卷，第13825-13830页)，施用30天至45天，然后施用HBV RNAi剂和对照。MC-HBV1.3是质粒衍生的微环，其含有与质粒pHBV1.3和HBV1.3.32转基因小鼠相同的末端冗余人乙型肝炎病毒序列HBV1.3(GenBank登录号V01460)(Guidotti LG等人，“High-levelhepatitis B virus replication in transgenic mice,”J Virol1995，第69卷，第6158-6169页)。将总体积为动物体重的10％的溶于林格氏溶液的5μg或10μg的MC-HBV1.3经由尾部静脉注射到小鼠中，以产生慢性HBV感染的pHBV模型。如前所述，该溶液通过27号针头在5-7秒内注射(Zhang G等人，“High levels of foreign gene expression inhepatocytes after tail vein injection of naked plasmid DNA.”Human GeneTherapy 1999，第10卷，第1735-1737页)。在给药前(给药前第1天、第-1天或第-2天)，通过ELISA测量血清中乙型肝炎表面抗原(HBsAg)HBsAg表达水平，并根据平均HBsAg表达水平对小鼠进行分组。
分析：可在施用HBV RNAi剂之前和之后的各种时间，测量血清HBsAg、血清HBeAg、血清HBV DNA或肝HBV RNA。将HBV表达水平归一化至施用前和注射磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)的对照小鼠的表达水平。
i)血清收集：用2-3％异氟烷麻醉小鼠，并从下颌下区域收集血液样本至血清分离管(Sarstedt AG&Co.,Nümbrecht,Germany)。使血液在环境温度下凝结20分钟。将管以8,000×g离心3分钟以分离血清并储存在4℃。
ii)血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平：收集血清并在含有5％脱脂奶粉的PBS中稀释10至8000倍。用已转染10μg表达HBsAg的质粒pRc/CMV-HBs(Aldevron,Fargo,ND)的ICR小鼠(Harlan Sprague Dawley)的血清制备稀释于脱脂奶溶液中的二级HBsAg标准品。按照制造商的描述，用GS HBsAg EIA 3.0剂盒(Bio-Rad Laboratories,Inc.,Redmond,WA)测定HBsAg水平。使用同样稀释于含脱脂奶的PBS中的ayw亚型重组HBsAg蛋白作为主要标准物(Aldevron)。
将每只动物的HBsAg表达归一化至注射PBS的小鼠的对照组，以说明MC-HBV1.3表达的非治疗相关的下降。首先，将每只动物在一个时间点的HBsAg水平除以该动物在处理前的表达水平，以确定表达“归一化至处理前”的比率。然后通过将单只动物的“归一化至处理前”比率除以正常PBS对照组中所有小鼠的平均“归一化至处理前”比率，从而将特定时间点的表达归一化至对照组。
iii)血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平：使用在5％脱脂奶粉中稀释4至20倍的血清，按照制造商(DiaSorin)的描述通过HBeAg酶联免疫吸附测定法(ELISA)进行HBeAg分析。在测定的线性范围内测定抗原的量，并针对HBeAg蛋白标准品(Fitzgerald IndustriesInternational，目录号30-AH18，Acton，.MA)进行定量。
将每只动物的HBeAg表达归一化至注射PBS的小鼠的对照组，以便说明MC-HBV1.3表达的非治疗相关的下降。为了评估血清中的HBeAg，从合并的组或亚组血清样本中分析HBeAg。首先，将每个合并的组或亚组的HBeAg水平除以同一组或亚组中的治疗前表达水平，以确定表达“归一化至处理前”的比率。然后通过将一个组或亚组的“归一化至处理前”比率除以正常PBS对照组的所有样本的平均“归一化至处理前”比率，从而将特定时间点的表达归一化至对照组。
iv)血清HBV DNA水平：将来自组或亚组中的小鼠的等体积血清合并至终体积100μL。使用QIAamp MinElute Virus Spin Kit(Qiagen,Valencia,CA)按照制造商的说明从血清样本中分离DNA。向每个样本中加入无菌0.9％盐水至最终体积为200μL。将血清样本加入到含有缓冲液和蛋白酶的管中。添加载体RNA以帮助分离少量DNA。加入1ng pHCR/UbC-SEAP质粒DNA(Wooddell CI等人，"Long-term RNA interference from optimized siRNAexpression constructs in adult mice."Biochem Biophys Res Commun(2005)334,117-127)作为回收对照。在56℃下温育15分钟后，用乙醇从裂解物中沉淀核酸，并将整个溶液施加到柱上。洗涤后，将样本洗脱至50μL体积的缓冲液AVE中。
通过qPCR测定从pHBV小鼠模型血清中分离的DNA中HBV基因组的拷贝数。使用编码HBV基因组的S基因内的短片段(GenBank登录号V01460的353-777碱基)的质粒pSEAP-HBV353-777产生六对数标准曲线。省略了基于pHCR/UbC-SEAP检测的DNA回收率比平均值低2个标准差的样本。采用基于TaqMan化学的引物和具有fluor/ZEN/IBFQ的探针。
在7500Fast或StepOne Plus实时PCR系统(Life Technologies)上进行qPCR测定。为了评估血清中的HBV DNA，通过单重或双重纯化步骤从合并组的血清样本中分离DNA。通过执行一式三份的qPCR反应来确定HBV DNA和回收对照质粒的定量。每个反应包括用于定量HBV和pHCR/UbC-SEAP的探针。
实施例3.HBV RNAi剂用于pHBV模型小鼠。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。第1天，对每只小鼠进行单次皮下注射，施用200μl的含有用磷酸盐缓冲盐水(“PBS”)配制的2mg/kg(mpk)的HBV RNAi剂，或者施用200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水作为对照。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。所测试的HBV RNAi剂包括具有下表7中所示双链体数的那些。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在第8天、第15天、第22天和第29天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表所示：
表7.在施用来自实施例3的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化至 处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
组
第8天
第15天
第22天
第29天
PBS
1.000±0.185
1.000±0.288
1.000±0.540
1.000±0.326
AD04178
0.164±0.043
0.206±0.044
0.293±0.050
0.348±0.099
AD04579
0.083±0.028
0.099±0.022
0.112±0.022
0.138±0.056
AD04580
0.048±0.007
0.073±0.012
0.085±0.012
0.126±0.014
AD04570
0.241±0.076
0.294±0.071
0.276±0.068
0.474±0.092
AD04572
0.190±0.040
0.279±0.011
0.323±0.049
0.441±0.046
AD04573
0.333±0.143
0.505±0.106
0.361±0.060
0.444±0.068
AD04574
0.291±0.032
0.650±0.056
0.388±0.048
0.485±0.070
AD04575
0.397±0.189
0.514±0.234
0.574±0.204
0.689±0.207
AD04419
0.262±0.038
0.174±0.042
0.258±0.064
0.311±0.089
AD04578
0.210±0.056
0.235±0.033
0.298±0.035
0.336±0.049
RNAi剂AD04178、AD04579、AD04580、AD04570、AD04572、AD04573、AD04574、AD04575、AD04419和AD04578各自被设计成具有与以上表1和表2中所示的HBV基因组的1781位至1789位的X开放阅读框至少部分互补的反义链序列。在所有测量时间点，与PBS对照相比，HBV RNAi剂中的每一者均显示HBsAg的显著减少。例如，当归一化至处理前和PBS对照时，AD04580在第8天显示出大于95％的s抗原水平减少(0.048±0.007HBsAg水平)。
另外，根据上文实施例2中所述的规程，对于PBS、AD04579和AD04580组，测定在第8、15、22、29、36、43和50天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。合并各组的血清，然后以重复的分离方式从血清中分离DNA。数据显示在下表中：
表8.在施用来自实施例3的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均血清HBV DNA水平归 一化至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
表8中的数据表明，与PBS组相比，所检测的两种RNAi剂均提供了HBV DNA水平的显著减少，其中AD04580在最低点实现了略大于1个对数的敲除(例如，第15天时平均血清DNA水平为0.0869±0.0117)。
实施例4.HBV RNAi剂用于pHBV模型小鼠。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。第1天，给每只小鼠单次皮下注射200μl的含有用磷酸盐缓冲盐水配制的2mg/kg(mpk)的HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水作为对照。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。所施用的HBV RNAi剂包括下表9中列出的那些。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在第8天、第15天、第22天和第29天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表所示：
表9.在施用来自实施例4的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化至 处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
RNAi剂AD04010、AD04581、AD04591、AD04434、AD04583、AD04584、AD04585、AD04586、AD04588和AD04438被设计成具有与表1和表2中所示的HBV基因组的257-275位的S开放阅读框至少部分互补的反义链序列。在所有测量时间点，与PBS对照相比，正上方表9中所示的HBV RNAi剂各自显示出HBsAg的显著减少。例如，AD04585组在第8天表现出HBsAg减少约90％，第15天减少95％，第22天减少97％，第29天减少95％。
另外，根据上文实施例2中所述的规程，对于PBS、AD04585组，测定在第8、15、22、29、36、43和50天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。合并各组的血清，然后以重复的分离方式从血清中分离DNA。数据显示在下表中：
表10.在施用来自实施例4的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均血清HBV DNA水平 归一化至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
表10中的数据表明，与PBS组相比，HBV RNAi剂AD04585提供了HBV DNA水平的减少。
实施例5.pHVV模型小鼠中HBV RNAi剂的剂量响应和组合。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成各种组，包括下表11中列出的那些，并且根据表11中示出的给药方案给小鼠皮下注射200μl：
表11.实施例5的pHBV小鼠的剂量分组。
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表11所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在第8天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天、第50天和第57天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表所示：
表12.在施用来自实施例5的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化 至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
在所有测量时间点，与PBS对照相比，HBV RNAi剂AD04580和AD04585各自分别显示HBsAg减少。此外，在所有测量时间点，与PBS对照相比，如上述实施例中所述靶向HBV基因组的不同区域的AD04585和AD04580的组合治疗也显示HBsAg减少。
另外，根据上文实施例2中所述的规程，对于表11中的各组，测定在第8、15、22、29和36天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。合并各组的血清，然后以重复的反应从血清中分离DNA。数据显示在下表中：
表13.在施用来自实施例5的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均血清HBV DNA水平 归一化至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
表13中的数据表明，与PBS组相比，单独和组合检测的RNAi剂提供了HBV DNA水平的减少。重新给药或增加剂量产生附加的HBV DNA减少。
实施例6.HBV RNAi剂用于pHBV小鼠：剂量响应和组合研究。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成如下表14中所示的各种组，并且根据表14中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表14.实施例6的pHBV小鼠的剂量分组。
组
RNAi剂和剂量
给药方案
A
PBS(不含RNAi剂)
第1天单次注射
B
4.0mg/kgAD04981
第1天单次注射
C
1.0mg/kgAD04981
第1天单次注射
D
2.0mg/kgAD04981
第1天单次注射
E
1.0mg/kgAD04963
第1天单次注射
F
2.0mg/kgAD04963
第1天单次注射
G
3.0mg/kgAD04872
第1天单次注射
H
3.0mg/kgAD04872+1.0mg/kgAD04981
第1天单次注射
I
3.0mg/kgAD04872+1.0mg/kgAD04963
第1天单次注射
J
3.0mg/kgAD04872+2.0mg/kgAD04981
第1天单次注射
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表14所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在施用前第-1天收集血清，然后在第8天、第15天、第22天、第29天和第36天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清HBsAg水平。实验数据如下表15所示，其中平均HBsAg反映HBsAg的归一化平均值：
表15.在施用来自实施例6的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化 至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
在所有测量时间点，与PBS对照相比，所测试的HBV RNAi剂显示HBsAg减少。此外，在所有测量时间点，与PBS对照相比，AD04872(其包括与HBV基因组261-279位的S ORF至少部分互补的反义链序列，如表1和表2所示)和AD04981或AD04963(两者均包括与HBV基因组1781-1799位的X ORF至少部分互补的反义链序列，如表1和表2所示)的组合治疗，如实施例6中的H、I和J组所示，表明两种RNAi剂的组合治疗(一种靶向S ORF，另一种靶向HBV基因组的X ORF)同样显示HBsAg减少。
此外，还评估了血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平。首先合并来自各个相应组的小鼠的样本，并以单重方式测定所得血清样本。实验数据如下表所示：
表16.在施用来自实施例6的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBeAg水平归一化 至处理前和PBS对照。
组
第8天
第15天
第22天
第29天
第36天
A
1.000
1.000
1.000
0.183
1.000
B
0.138
0.180
0.274
0.005
0.089
C
0.316
0.376
0.588
0.055
0.436
D
0.167
0.250
0.262
0.036
0.190
E
0.301
0.327
0.447
0.023
0.436
F
0.167
0.172
0.305
0.015
0.167
G
0.275
0.135
0.158
0.002
0.010
H
0.080
0.053
0.094
0.005
0.020
I
0.165
0.124
0.185
0.003
0.032
J
0.120
0.057
0.101
0.002
0.021
如表16所示，相对于单独施用AD04872，D04872(其靶向HBV基因组的S ORF)与AD04981或AD04963(两者均靶向HBV基因组的X ORF)的组合显示出HBeAg水平进一步减少。
实施例7.HBV RNAi剂用于pHBV小鼠：附加剂量响应和组合研究。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成如下表17中所示的各种组，并且根据表17中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表17.实施例7的pHBV小鼠的剂量分组。
组
RNAi剂和剂量
给药方案
A
PBS(不含RNAi剂)
第1天单次注射
B
4.0mg/kgAD04776
第1天单次注射
C
1.0mg/kgAD04982
第1天单次注射
D
2.0mg/kgAD04982
第1天单次注射
E
1.0mg/kgAD04776
第1天单次注射
F
2.0mg/kgAD04776
第1天单次注射
G
3.0mg/kgAD04872
第1天单次注射
H
3.0mg/kgAD04872+1.0mg/kgAD04982
第1天单次注射
I
3.0mg/kgAD04872+2.0mg/kgAD04982
第1天单次注射
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表17所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。在第-1天和第8天对每组中的四(4)只小鼠进行测试(n＝4)，然后对每组一只小鼠实施安乐死以进行组织学评估。在第22天和第29天对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在施用前第-1天收集血清，然后在第8天、第15天、第22天和第29天收集血清，并且根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表18所示：
表18.在施用来自实施例7的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化 至处理前(第-1天)和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
组
第8天
第15天
第22天
第29天
A
1.000±0.347
1.000±0.278
1.000±0.194
1.000±0.318
B
0.117±0.069
0.085±0.039
0.148±0.045
0.198±0.049
C
0.519±0.058
0.375±0.012
0.422±0.046
0.525±0.037
D
0.342±0.062
0.255±0.046
0.272±0.122
0.314±0.068
E
0.279±0.057
0.245±0.032
0.374±0.121
0.304±0.035
F
0.224±0.018
0.161±0.009
0.310±0.016
0.482±0.053
G
0.029±0.010
0.005±0.001
0.004±0.001
0.006±0.001
H
0.016±0.005
0.004±0.001
0.010±0.006
0.015±0.008
I
0.026±0.012
0.008±0.001
0.010±0.002
0.015±0.005
在所有测量时间点，与PBS对照相比，所测试的HBV RNAi剂显示HBsAg减少。
此外，还评估了血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平。首先合并来自各个相应组的小鼠的样本，并以单重方式测定所得血清样本。实验数据如下表所示：
表19.在施用来自实施例7的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBeAg水平归一化 至处理前和PBS对照。
表19-1.在施用来自实施例7的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBeAg倍数敲除 归一化至处理前和PBS对照。
表19-1反映了与对照相比的HBeAg倍数敲除率，其计算为对照(PBS)组的归一化HBeAg水平/对应的一种或多种RNAi剂组的归一化HBeAg水平(即，1.000/HBeAg水平)。表19-1中的数据表明，相对于单独施用单个RNAi剂，AD04872(如上所述，其包括与HBV基因组261-279位的S ORF至少部分互补的反义链序列)与AD04982(其包括与HBV基因组的1781-1799位的X ORF至少部分互补的反义链序列)显示出HBeAg水平的进一步减少(参见，例如，表19和19-1的H和I组)。此外，来自该实施例的数据还表明，AD04872与AD04982的组合导致HBeAg的倍数降低大于单独施用的AD04872和AD04982中HBeAg的倍数降低总和。例如，I组(施用3.0mg/kg AD04872+2.0mg/kg AD04982)导致第15天HBeAg的倍数减少为17.0，这大于G组(3.0mg/kg AD04872)的4.6的倍数降低加上D组(2.0mg/kg AD04982)的3.2的倍数降低总和。
此外，根据上文实施例2中所述的规程，对于表17中的各组，测定在第-1、8、15、22、29和36天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。在每个时间点从每只动物中分离血清HBVDNA。数据显示在下表中：
表20.在施用来自实施例7的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均血清HBV DNA水平 归一化至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
表20中的数据表明，与PBS组相比，单独和组合检测的RNAi剂提供了HBV DNA水平的减少，并且还显示，AD04872(靶向S ORF)和AD04982(其靶向X ORF)使血清HBV DNA减少至与单独等量的AD04872类似的程度。
实施例8.HBV RNAi剂用于pHBV小鼠：进一步的剂量响应和组合研究。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成如下表21中所示的各种组，并且根据表21中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表21.实施例8的pHBV小鼠的剂量分组。
此外，根据以下计划，对小鼠按计划实施安乐死：
·第11天：对组2A、3A、4A、5A、6A、7A和8A中的2只小鼠实施安乐死，对9组中的一只小鼠实施安乐死。
·第14天：对组2A、3A、4A、5A、6A、7A和8A中的2只小鼠实施安乐死。
·第21天：对组2B、3B、4B、5B、6B、7B和8B中的2只小鼠实施安乐死。
·第28天：对组1、2B、3B、4B、5B、6B、7B和8B中的2只小鼠实施安乐死，对组10和12中的所有小鼠(4只)实施安乐死。
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表21所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。如上表14中所示，除了对组10、11、12和13中的三只小鼠(n＝3)进行测试之外，对每组中的四(4)只小鼠(n＝4)进行测试。
在施用前第-1天以及第8、14、21和28天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表所示：
表22.在施用来自实施例8的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化 至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
在所有测量时间点，与PBS对照相比，单独和组合测试的HBV RNAi剂均显示HBsAg显著减少。
实施例9.RNAi剂递送。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。第1天，向每只小鼠进行单次皮下注射，施用200μl的含有用磷酸盐缓冲盐水配制的10mg/kg(mpk)的HBV RNAi剂，或者施用200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水作为对照。所测试的HBV RNAi剂包括具有下表23中所示双链体数的那些，其各自包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在给药前收集血清，然后在第8天、第15天、第22天和第29天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表所示：
表23.在施用来自实施例9的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化 至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
上表23中所示的HBV RNAi剂中的每一者均包括与HBV基因组的1781-1799位的XORF至少部分互补的反义链序列。RNAi剂中的每一者显示出与PBS对照相比的显著敲除。
实施例10.HBV RNAi剂用于pHBV小鼠：进一步的组合研究。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成如下表24中所示的各种组，并且根据表24中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表24.实施例10的pHBV小鼠的剂量分组。
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表24所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在施用前收集血清，然后在第-1天、第8天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天、第50天、第57天和第64天收集血清。根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下所示：
表25.在施用来自实施例10的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化 至处理前和PBS对照(A组用作对照)(标准差反映为(+/-))。
HBV RNAi剂AD04585和AD04771被设计成具有与HBV基因组的257-275位的S开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和表2中所示。HBV RNAi剂AD04580和AD04776被设计成具有与HBV基因组1781-1799位的X开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和2所示。在所有测量时间点，与PBS对照相比，单独和组合测试的HBV RNAi剂显示HBsAg减少。每个后续剂量进一步减少了HBsAg减少的最低点。
另外，根据上文实施例2中所述的规程，对于表24中的C组(3.0mg/kg AD04585)、E组(3.0mg/kg AD04580)和G组(1.5mg/kg AD04585+1.5mg/kg AD04580)，测定在第-1天、第8天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天和第50天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。在这些时间点中的每一者处，对每只动物进行血清HBV DNA分离。数据显示在下表中：
表26.在施用来自实施例10的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均血清HBV DNA水平 归一化至处理前和PBS对照(PBS组A和B两者)(标准差反映为(+/-))。
表26中的数据表明，与PBS组相比，单独和组合检测的HBV RNAi剂提供了HBV DNA水平的减少。
实施例11.HBV RNAi剂用于pHBV小鼠：组合研究。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成如下表27中所示的各种组，并且根据表27中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表27.实施例11的pHBV小鼠的剂量分组。
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表24所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在施用前第-1天收集血清，然后在第8天、第15天、第22天、第29天和第36天收集血清(除L组(AD04882)和M组(AD04885)外)，并且根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表所示：
表28.在施用来自实施例11的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg归一化至处 理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
RNAi剂AD04962被设计成具有与HBV基因组的257位至275位的S开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和表2中所示。RNAi剂AD04872被设计成具有与HBV基因组的261位至279位的S开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和表2中所示。RNAi剂AD04963被设计成具有与HBV基因组的1781位至1799位的X开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和表2中所示。RNAi剂AD04882和AD04885被设计成具有与HBV基因组的1780位至1798位的X开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和表2中所示。在所有测量时间点，与PBS对照相比，正上方表9中所示的单独和组合的HBV RNAi剂显示出HBsAg的减少。再给药产生额外的HBsAg减少。
另外，还评估了除L和M组之外的所有组的血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平。首先合并来自每个相应组的小鼠的样本，并且以单重方式测定所得血清样本。实验数据如下表所示：
表29.在施用来自实施例11的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBeAg水平归一化 至处理前和PBS对照。
组
第8天
第22天
第29天
第36天
A
1.000
1.000
1.000
1.000
B
0.425
0.291
0.371
0.365
C
0.152
0.170
0.328
0.356
D
0.266
0.249
0.456
0.440
E
0.278
0.295
0.589
0.561
F
0.306
0.291
0.718
0.522
G
0.183
0.138
0.291
0.249
H
0.091
0.131
0.315
0.238
I
0.183
0.052
0.069
0.036
J
0.089
0.114
0.190
0.236
K
0.458
0.172
0.322
0.207
此外，根据上文实施例2中所述的规程，对于表27中的各组，测定在第8、15、22和29天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。在每个时间点从每只动物中分离血清HBV DNA。数据显示在下表中：
表30.在施用来自实施例7的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均血清HBV DNA水平 归一化至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
表30中的数据表明，与PBS组相比，单独和组合检测的RNAi剂提供了HBV DNA水平的减少。再给药产生HBV DNA的额外减少。
实施例12.HBV RNAi剂用于pHBV小鼠。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成如下表31中所示的各种组，并且根据表31中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表31.实施例12的pHBV小鼠的剂量分组。
组
RNAi剂和剂量
给药方案
A
PBS(不含RNAi剂)
第1天单次注射
B
2.0mg/kgAD04871
第1天单次注射
C
2.0mg/kgAD04872
第1天单次注射
D
2.0mg/kgAD04874
第1天单次注射
E
2.0mg/kgAD04875
第1天单次注射
F
2.0mg/kgAD04876
第1天单次注射
G
2.0mg/kgAD04881
第1天单次注射
H
2.0mg/kgAD04883
第1天单次注射
I
2.0mg/kgAD04884
第1天单次注射
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表24所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在施用之前，然后在8天、第15天和第22天收集血清。在第29天、第36天、第43天和第50天也对组A(PBS)、组B(2.0mg/kg AD04871)、组C(2.0mg/kg AD04872)、组D(2.0mg/kgAD04874)、组E(2.0mg/kg AD04875)和组F(2.0mg/kg AD04876)采集血清。根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表所示：
表32.在施用来自实施例12的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg归一化至处 理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
HBV RNAi剂AD04871、AD04872、AD04874、AD04875和AD04876各自被设计成具有与HBV基因组的261位至279位的S开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和表2中所示。与PBS对照相比，这些HBV RNAi剂中的每一者应显著减少HBsAg。例如，在从第15天到第43天测量的各个时间点，与对照相比，单次2mg/kg剂量的AD04871(B组)、AD04872(C组)和AD04874(D组)以及AD04876(F组)各自的HBsAg表现出HBsAg减少了90％以上。HBV RNAi剂AD04881、AD04883、AD04884各自被设计成具有与HBV基因组的1780位至1798位的X开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和表2中所示。
实施例13.X区敲除模型小鼠中HBV RNAi剂的剂量响应和组合。
作为评估两种RNAi剂组合的效果的替代方法，所述一种RNAi剂包括与位于HBVmRNA的S ORF中的区域至少部分互补的反义链序列，第二RNAi剂包括与位于HBV mRNA的XORF中的区域至少部分互补的反义链序列，产生包括HBV基因组的质粒，其中敲除了靶向1780和1781位的HBV RNAi剂的结合位点，如表1和表2中所示(下文称为X区敲除小鼠)。该模型通过在这些RNAi剂的结合位点内的pHBV1.3质粒中突变十(10)个碱基而产生的。HBVmRNA的其余部分(包括S区)仍保持功能性。因此，在该HBV小鼠模型中，包含具有靶向本文所公开的HBV基因组的1780位和1781位的反义链的HBV RNAi剂预期对沉默表达无效。
将小鼠分成各种组，包括下表33中列出的那些，并且根据下表中给出的给药方案给小鼠皮下注射200μl：
表33.实施例13的X区敲除小鼠的剂量分组。
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表33所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在第5天、第8天、第15天、第22天和第29天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。在第36和43天还收集第1至5组的血清。实验数据如下表34所示：
表34.在施用来自实施例13的HBV RNAi剂后，将X区敲除小鼠的平均HBsAg归一化 至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
可以预知，组6(其为3.0mg/kg HBV RNAi剂AD04963的单次剂量并且包括与HBV基因组1781-1799位的X开放阅读框至少部分互补的反义链)不能提供HBsAg的敲除。另外，与PBS对照相比，第2组至第5组中的每一组提供HBsAg的显著敲除，其中第3组和第5组均在最低点(第22天)显示出大于2个对数的HBsAg减少。
实施例14.X区敲除模型小鼠中HBV RNAi剂的剂量响应和组合。
使用上文实施例13中所述的X区敲除小鼠模型。将小鼠分成各种组，包括下表31中列出的那些，并且根据表35中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表35.实施例14的X区敲除小鼠的剂量分组。
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表35所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对表35中所示的每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在第1天(给药前)、第8天、第15天、第22天和第29天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表所示：
表36.在实施例14的X区敲除小鼠中，将平均HBsAg水平归一化至处理前和PBS对 照。
组
第8天
第15天
第22天
第29天
1
1.000±0.120
1.000±0.255
1.000±0.224
1.000±0.143
2
0.104±0.104
0.009±0.009
0.005±0.004
0.005±0.003
3
0.076±0.041
0.010±0.009
0.006±0.005
0.005±0.005
4
0.036±0.008
0.002±0.001
0.001±0.001
0.002±0.001
5
0.019±0.017
0.003±0.002
0.003±0.001
0.004±0.000
表36示出与PBS对照相比，单独施用HBV RNAi剂AD04872以及AD04872(其包括与HBV基因组的261位至279位的S开放阅读框至少部分互补的反义链)和AD05070(其包括与HBV基因组的1781位至1799位的X开放阅读框至少部分互补的反义链)的组合在测量的每个时间点都提供了HBsAg的显著敲除。在该X区敲除模型中，加入2mg/kg至0.7mg/kg的具有突变靶位点的HBV RNAi剂AD05070并未减弱2mg/kg HBV RNAi剂AD04872的活性。
另外，根据上文实施例2中所述的规程，测定在第8、15和22天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。合并各组的血清，然后以单重方式从血清中分离DNA。数据显示在下表中：
表37.在施用来自实施例14的HBV RNAi剂后，将X区敲除小鼠的平均血清HBV DNA 水平归一化至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
组
第8天
第15天
第22天
1
1.000±0.007
1.000±0.011
1.000±0.066
2
0.225±0.019
0.022±0.001
0.036±0.001
3
0.151±0.002
0.029±0.001
0.042±0.003
4
0.140±0.006
0.016±0.000
0.018±0.000
5
0.069±0.002
0.018±0.003
0.043±0.002
在该X区敲除模型中，加入2mg/kg至0.7mg/kg的具有突变靶位点的HBV RNAi剂AD05070并未减弱2mg/kg HBV RNAi剂AD04872的活性。
实施例15.HBV RNAi剂用于pHBV小鼠。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成各种组，包括下表38中列出的那些，并且根据表38中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表38.实施例15的pHBV小鼠的剂量分组。
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表38所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在给药之前第-1天收集血清，然后在第8天、第15天、第22天、第29天、第36天、第43天和第50天收集血清。根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表39所示，其中平均HBsAg反映HBsAg的归一化平均值：
表39.在施用来自实施例15的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg归一化至处 理前和PBS对照。
RNAi剂AD04776、AD05069、AD05070、AD05071、AD05073和AD05074各自被设计成具有与HBV基因组的1781位至1799位的X开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和表2中所示。RNAi剂AD05075、AD05076、AD05077和AD05078各自被设计成具有与HBV基因组的1780位至1798位的X开放阅读框至少部分互补的反义链序列，如表1和表2中所示。
表39显示，在测量的每个时间点，单独施用HBV RNAi剂AD04776、AD05069、AD05070、AD05071、AD05073和AD05074或其与AD04872(其包括与HBV基因组的261-279位的S开放阅读框至少部分互补的反义链)的组合，提供了与PBS对照相比的HBsAg显著减少。
实施例16.HBV RNAi剂用于pHBV小鼠：剂量响应和组合研究。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成如下表40中所示的各种组，并且根据表40中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表40.实施例16的pHBV小鼠的剂量分组。
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表40所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的六(6)只小鼠(n＝6)进行测试。
在给药前收集血清，然后在第8天、第15天、第22天和第29天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表41所示：
表41.在施用来自实施例16的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化 至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
组
第8天
第15天
第22天
第29天
1
1.000±0.117
1.000±0.213
1.000±0.169
1.000±0.130
2
0.050±0.018
0.015±0.007
0.011±0.005
0.009±0.006
3
0.051±0.037
0.014±0.011
0.010±0.006
0.002±0.001
4
0.029±0.018
0.010±0.006
0.011±0.006
0.010±0.005
5
0.022±0.003
0.007±0.001
0.009±0.003
0.001±0.001
6
0.027±0.012
0.007±0.004
0.008±0.005
0.011±0.005
7
0.028±0.012
0.010±0.005
0.009±0.005
0.001±0.000
8
0.033±0.016
0.016±0.008
0.020±0.009
0.021±0.011
9
0.034±0.025
0.015±0.011
0.018±0.013
0.003±0.002
10
0.038±0.021
0.015±0.005
0.019±0.004
0.003±0.001
11
0.446±0.143
0.376±0.120
0.474±0.149
0.338±0.123
12
0.307±0.111
0.257±0.122
0.236±0.057
0.138±0.031
在所有测量时间点，与PBS对照相比，单独和组合测试的HBV RNAi剂均显示HBsAg减少。在第22天再给药的所有组中HBsAg表达进一步减少。
此外，还评估了血清乙型肝炎e抗原(HBeAg)水平。对于第8天的测量结果，合并各组中所有六只小鼠的血清样本，并且以单重方式测定所得样本。对于第-1天、第15天、第22天和第29天的测量结果，将来自各组的六只小鼠在各组内配对，并合并其对应的血清样本，每组形成三个亚组。然后测定每组三个亚组中每一组的血清样本。实验数据如下表42所示：
表42.在施用来自实施例16的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBeAg水平归一化 至处理前和PBS对照(第15天、第22天和第29天的标准差反映为(+/-))。
在所有测量时间点，与盐水对照相比，单独和组合测试的HBV RNAi剂显示出HBeAg减少。在第22天再给药的所有组中HBeAg表达进一步减少。
此外，根据上文实施例2中所述的规程，对于表40中的各组，测定在第-1、8、15和22天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。合并每对小鼠的血清，然后进行单次分离从每个血清库中分离DNA。数据显示在下表中：
表43.在施用来自实施例16的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均血清HBV DNA水平 归一化至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
组
第8天
第15天
第22天
1
1.000±0.122
1.000±0.299
1.000±0.241
2
0.312±0.016
0.126±0.008
0.087±0.018
3
0.264±0.065
0.081±0.023
0.073±0.028
4
0.321±0.254
0.120±0.066
0.134±0.101
5
0.319±0.081
0.108±0.038
0.098±0.051
6
0.260±0.095
0.068±0.010
0.076±0.031
7
0.170±0.028
0.082±0.013
0.062±0.018
8
0.188±0.020
0.192±0.160
0.307±0.309
9
0.242±0.003
0.100±0.042
0.075±0.028
10
0.322±0.028
0.159±0.025
0.086±0.016
11
1.124±0.142
0.742±0.127
0.807±0.192
12
1.004±0.144
0.541±0.340
0.569±0.060
除了在第8天没有血清HBV DNA减少的组11和12，在所有测量时间点，与血清对照相比，单独和组合测试的HBV RNAi剂均显示出血清HBV DNA减少。
实施例17.HBV RNAi剂用于pHBV小鼠。
使用上文实施例2中描述的pHBV小鼠模型。将小鼠分成如下表44中所示的各种组，并且根据表44中所示的给药方案给每只小鼠施用单次200μl皮下注射：
表44.实施例17的pHBV小鼠的剂量分组。
组
RNAi剂和剂量
给药方案
1
PBS(不含RNAi剂)
第1天单次注射
2
5mg/kgAD04585+1mg/kgAD04963
第1天单次注射
3
5mg/kgAD04872+1mg/kgAD04963
第1天单次注射
4
5mg/kgAD04585+1mg/kgAD04963
第1天和第8天单次注射
5
5mg/kgAD04872+1mg/kgAD04963
第1天和第8天单次注射
6
2.5mg/kgAD04585+0.5mg/kgAD04963
第1天单次注射
7
2.0mg/kgAD04585+1.0mg/kgAD04963
第1天单次注射
8
2.5mg/kgAD04872+0.5mg/kgAD04963
第1天单次注射
9
2.0mg/kgAD04872+1.0mg/kgAD04963
第1天单次注射
10
5mg/kgAD04872+1mg/kgAD04981
第1天单次注射
11
2.5mg/kgAD04872+0.5mg/kgAD04981
第1天和第8天单次注射
12
2.5mg/kgAD04872+0.5mg/kgAD04981
第1天单次注射
13
2mg/kgAD04872+1mg/kgAD04981
第1天单次注射
14
2.5mg/kgAD04585+0.5mg/kgAD04981
第1天单次注射
15
2mg/kgAD04585+1mg/kgAD04981
第1天单次注射
16
0.5mg/kgAD04981
第1天单次注射
向每只小鼠皮下施用200μl，其含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的一种或多种HBV RNAi剂，或200μl不含HBV RNAi剂的磷酸盐缓冲盐水，如表44所示。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。对每组中的三(3)只小鼠(n＝3)进行测试。
在给药前收集血清，然后在第8天、第14天、第21天和第29天以及第36天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表45所示：
表45.在施用来自实施例17的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均HBsAg水平归一化 至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
在所有测量时间点，与盐水对照相比，所测试的HBV RNAi剂组合显示出HBsAg减少。含有AD04872的组合显示出比用AD04585取代AD04872的等同组合更大的减少。
另外，根据上文实施例2中所述的规程，测定在第8、14、21和29天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。在每个时间点从每只动物中分离血清HBV DNA。数据显示在下表46中：
表46.在施用来自实施例17的HBV RNAi剂后，将pHBV小鼠的平均血清HBV DNA水平 归一化至处理前和PBS对照(标准差反映为(+/-))。
组
第8天
第14天
第21天
第29天
1
1.000±0.280
1.000±0.269
1.000±0.418
1.000±0.383
2
0.136±0.068
0.192±0.071
0.173±0.032
0.292±0.039
3
0.097±0.034
0.068±0.016
0.076±0.034
0.131±0.061
4
0.061±0.039
0.002±0.001
0.003±0.001
0.019±0.013
5
0.068±0.025
0.003±0.002
0.0009±0.0003
0.0009±0.0003
6
0.354±0.299
0.345±0.187
0.522±0.234
0.509±0.106
7
0.103±0.064
0.291±0.025
0.203±0.043
0.203±0.015
8
0.336±0.142
0.185±0.071
0.183±0.065
0.162±0.064
9
0.198±0.055
0.093±0.023
0.118±0.054
0.143±0.032
10
0.122±0.071
0.024±0.026
0.023±0.020
0.014±0.017
11
0.160±0.069
0.016±0.023
0.003±0.001
0.005±0.004
12
0.158±0.039
0.120±0.044
0.100±0.049
0.091±0.034
13
0.190±0.038
0.169±0.025
0.066±0.015
0.081±0.015
14
0.434±0.136
0.318±0.104
0.144±0.094
0.240±0.029
15
0.358±0.185
0.287±0.108
0.279±0.080
0.303±0.038
16
0.713±0.085
0.674±0.140
0.496±0.128
0.590±0.093
在所有测量时间点，与盐水对照相比，所测试的HBV RNAi剂组合显示出血清HBVDNA减少。含有AD04872的组合显示出比用AD04585取代AD04872的等同组合更大的减少。这些更大的减少在第22天和第29天被观察到。
实施例18.HBV感染的人源化小鼠模型中的HBV RNAi剂。
对于本研究，将雄性(C57BL/6背景(Yecuris)上的基因型Fah-/-/Rag2-/-/Il2rg-/-三重敲除小鼠)移植到在1-2个月大的人肝细胞上。通过定期NTBC处理使人肝细胞再填充肝脏约6个月，以阻止小鼠肝细胞的生长。在9个月大时，给小鼠静脉内接种4x108个基因组/kg HBV基因型C，然后感染人肝细胞。2-3个月后，血清HBV DNA水平达到平台期，指示人肝细胞被最大程度地感染(小鼠肝细胞不能被HBV感染)。在小鼠一岁时开始用HBVRNAi药物处理，因此接近其寿命终点。
在第-10天和第-3天采集处理前血清样本。从第1天开始，每天用管饲法向每只小鼠施用溶于水的0.01mg/kg恩替卡韦以抑制HBV复制。恩替卡韦的每日剂量持续到小鼠被安乐死的那天。预期施用恩替卡韦可减少慢性感染人类患者的血清HBV DNA，但不会减少HBsAg。
将小鼠分成各种组，包括下表47中列出的那些：
表47.实施例18的HBV感染的FRG人源化模型小鼠的剂量分组。
根据正上方表47中列出的时间表，在第1天和第29天(如果在第29天仍存活)，每天给每只小鼠每按每20g体重皮下施用100μl含有该量的用磷酸盐缓冲盐水配制的HBV RNAi剂，或施用不含HBV RNAi剂的等体积的磷酸盐缓冲盐水。每种HBV RNAi剂包括缀合至有义链的5'-末端的N-乙酰基-半乳糖胺靶向配体，如表4和表5中所示。注射是在皮肤和肌肉之间(即皮下注射)进行到颈部和肩部区域的松弛皮肤。
在第8天、第15天、第22天、第29天、第36天和第40天收集血清，并根据上文实施例2中所述的规程测定血清乙型肝炎表面抗原(HBsAg)水平。实验数据如下表所示：
表48.对于来自实施例18的每只感染HBV的人源化FRG模型小鼠，将平均HBsAg水平 归一化至处理前(第-3天)。
组
第8天
第15天
第22天
第29天
第36天
第40天
A-1
0.830
0.828
0.932
0.858
1.107
A-2
1.303
1.328
B-1
0.548
0.314
0.272
0.207
0.138
B-2
0.592
0.337
0.243
0.215
0.160
0.175
C-1
0.643
0.460
0.415
0.251
0.164
C-2
0.353
0.228
0.182
0.172
0.224
0.216
C-3
0.814
0.674
另外，根据上文实施例2中所述的规程，测定在第-10、-3、8、15、22、29、36和40天收集的血清样本中的血清HBV DNA水平。数据显示在下表4中：
表49.在施用来自实施例14的HBV RNAi剂后，将每只感染HBV的FRG人源化小鼠的 血清HBV DNA水平归一化至处理前第-10天和第-3天的平均值。
可以预知，施用恩替卡韦在不存在和存在HBV RNAi剂的情况下均可减少病毒复制。
实施例19.HBV RNAi剂的临床研究
对健康志愿者(NHV)进行1/2a期、随机、双盲、单剂量递增研究，并且对患有慢性HBV感染(CHB)的患者进行开放标签、多剂量递增研究。该研究被设计成评估HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)在健康患者和慢性感染乙型肝炎病毒(CHB)的患者中的安全性、耐受性和药代动力学效应。研究对象群体包括健康成年男性和女性(18岁至55岁)以及已诊断为HBeAg阳性或HBeAg阴性慢性(>6个月)HBV感染的成年男性和女性(18岁至65岁)。
NHV受试者分为五个组群，每个群组6名受试者(组群1至组群5)。NHV组群(4名接受活性物质，2名接受安慰剂)经由皮下注射以盲法方式接受单剂量35mg、100mg、200mg、300mg或400mg的量的AD04872和AD05070的组合或生理盐水。CHB组群1、1c和2b至5b是HBeAg阳性或阴性的、未经历核苷抑制剂(NUC)或在基线处经历NUC，并且经由皮下注射接受三个月剂量25mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg的量的AD04872和AD05070的组合。组群6招募了4名CHB患者，每两周接受三次100mg剂量的AD04872和AD05070的组合。组群7招募了4名CHB患者，接受三周100mg剂量的AD04872和AD05070的组合。CHB组群8和9(4名接受活性物质)是HBeAg阳性的，分别未经历治疗或经历NUC，其经由皮下注射接受三个月剂量300mg的量的AD04872和AD05070的组合。组群10和组群11各自招募了4名CHB患者以分别接受3周200mg和300mg剂量的AD04872和AD05070的组合。经历NUC的CHB患者在整个研究期间继续他们的每日NUC，并且未经历NUC的CHB患者在第1天开始每日NUC。对于CHB，定期测量病毒DNA、病毒RNA和抗原HBsAg、HBeAg和HBcrAg。研究参数汇总于表50中。
表50
图1和图14示出了CHB患者(组群2b、3b、4b、5b、8和9)抗原HBsAg自第1天的平均对数变化。下表51示出了具有收集的多于6周的HBsAg数据的CHB患者的最低点HBsAg响应。在每月剂量的所有HBV患者中观察到强HBsAg响应，并且在HBeAg阳性和HBeAg阴性患者中以及在未经历NUC和经历NUC的患者中也观察到类似的响应。HBsAg减少的范围为-1.3至-3.8Log10。图2至图12示出了CHB患者中HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBcrAg的个体变化(组群1b、1c、2b、3b、4b、5b、6、7、8、9、10和11)。所有这些病理学参数(HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBcrAg)均示出对HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)的响应。图13示出了CHB患者的最低点Log HBsAg降低数据。对于患者HBeAg阳性和HBeAg阴性患者均观察到类似的响应。
表51.CHB患者的最低点HBsAg响应
最低点HBsAg响应
CHB患者的百分比
>1对数(90％)降低
100％
>1.5对数(97％)降低
83％
>2对数(99％)降低
38％
>3对数(99.9％)降低
3％
表52和表53分别示出了来自健康患者和CHB患者的研究的安全性和耐受性结果。皮下施用的HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)似乎在单次或多次每月剂量高达400mg下耐受性良好。用大约12％的皮下注射观察到轻度注射部位反应。
表52.健康患者的安全性和耐受性
表53.CHB患者的安全性和耐受性
实施例20.HBV RNAi剂的临床研究
对健康志愿者(NHV)进行1/2a期、随机、双盲、多剂量递增研究，并且对患有慢性HBV感染(CHB)的患者进行开放标签、多剂量递增研究。该研究被设计成评估HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)在健康患者和慢性感染乙型肝炎病毒(CHB)的患者中的安全性、耐受性和药代动力学效应。研究对象群体包括健康成年男性和女性(18岁至55岁)以及已诊断为HBeAg阳性或HBeAg阴性慢性(>6个月)HBV感染的成年男性和女性(18岁至65岁)。
NHV受试者分为五个组群，每个群组6名受试者(组群1至组群5)。NHV组群(4名接受活性物质，2名接受安慰剂)经由皮下注射以盲法方式接受单剂量35mg、100mg、200mg、300mg或400mg的量的AD04872和AD05070的组合或生理盐水。CHB组群1、1c和2b至5b是HBeAg阳性或阴性的、未经历核苷抑制剂(NUC)或在基线处经历NUC，并且经由皮下注射以28天的间隔接受三个剂量35mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg的量的AD04872和AD05070的组合。组群6招募了4名CHB患者，每两周接受三次100mg剂量的AD04872和AD05070的组合。组群7招募了4名CHB患者，接受三周100mg剂量的AD04872和AD05070的组合。CHB组群8和9(4名接受活性物质)是HBeAg阳性的，分别未经历治疗或经历NUC，其经由皮下注射以28天的间隔接受三个剂量300mg的量的AD04872和AD05070的组合。组群10和组群11各自招募了4名CHB患者以分别接受3周200mg和300mg剂量的AD04872和AD05070的组合。经历NUC的CHB患者在整个研究期间继续他们的每日NUC，并且未经历NUC的CHB患者在第1天开始每日NUC。对于CHB，定期测量病毒DNA、病毒RNA和抗原HBsAg、HBeAg和HBcrAg。研究参数汇总于表54中。
表54
图15示出了对于经由皮下注射以28天的间隔(组群1b、1c、2b、3b、4b、5b、8和9)接受三个剂量的HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)的CHB患者，抗原HBsAg自第1天的平均变化。平均HBsAg下降在HBeAg阳性中比在HBeAg阴性参与者中更显著。一般来讲，HBsAg下降在所有剂量中随时间推移持续至少直到第168天。图16示出了对于经由皮下注射以28天的间隔(组群1b、1c、2b、3b、4b、5b、8和9)接受三个剂量HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)的HBsAg阳性CHB患者，抗原HBsAg和HBeAg自第1天的平均变化。RNAi剂显示出对HBeAg和HBsAg两者的靶向活性，其中HBsAg降低更为显著。
图20示出了对于经由皮下注射以28天的间隔(组群1b、1c、2b、3b、4b、5b、8和9)接受三个剂量的HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)的CHB患者，抗原HBsAg自第1天的平均变化。平均HBsAg下降在HBeAg阳性中比在HBeAg阴性参与者中更显著。一般来讲，HBsAg下降在所有剂量中随时间推移持续至少直到第392天。图21示出了对于经由皮下注射以28天的间隔(组群1b、1c、2b、3b、4b、5b、8和9)接受三个剂量HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)的HBsAg阳性CHB患者，抗原HBsAg和HBeAg自第1天的平均变化。RNAi剂显示出对HBeAg和HBsAg两者的靶向活性，其中HBsAg降低更为显著，并且具有持续的平均HBeAg和HBsAg响应。
对于所有参数，持续抑制被定义为≥从第1天起1.0log10降低或在第336天定量的值＜下限。在接受100mg、200mg、300mg(n＝16)或400mg的3次皮下JNJ-3989剂量(第1天、第27天、第57天)的8个CHB患者/组群(经历NA或未经历；HBeAg+ve或-ve)中评估安全性和病毒参数(HBsAg、HBeAg、HBV DNA、HBV RNA、HBcrAg)。患者在第1天开始/继续使用NA，并且在整个研究期间继续使用。对于在第1天具有可量化参数并且在第336天具有可用数据的患者，在15/26名患者中观察到HBV RNA的持续抑制，在9/14名患者中观察到HBeAg的持续抑制，并且在10/24名患者中观察到HBcrAg的持续抑制。JNJ-3989(100mg至400mg)与NA一起在CHB患者中耐受性良好。在98％的患者中实现了最低点HBsAg的≥1.0log10降低。在最后一次RNAi剂量后约9个月，患者亚群具有HBsAg的持续抑制(平均值1.74)；参见图22。还观察到对其他病毒参数的持续抑制。
实施例21.HBV RNAi剂的临床研究
对健康志愿者(NHV)进行1/2a期、随机、双盲、多剂量递增研究，并且对患有慢性HBV感染(CHB)的患者进行开放标签、多剂量递增研究。该研究被设计成评估HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)在NHV和慢性感染乙型肝炎病毒(CHB)的患者中的安全性、耐受性和药代动力学效应。研究对象群体包括健康成年男性和女性(18岁至55岁)以及已诊断为HBeAg阳性或HBeAg阴性慢性(HBsAg阳性>6个月)HBV感染的成年男性和女性(18岁至65岁)。
NHV受试者分为五个组群，每个群组6名受试者(组群1至组群5)。NHV组群(4名接受活性物质，2名接受安慰剂)经由皮下注射以盲法方式接受单剂量35mg、100mg、200mg、300mg或400mg的量的AD04872和AD05070的组合或生理盐水。CHB组群1b、1c和2b至5b是HBeAg阳性或阴性的、未经历核苷抑制剂(NUC)或在基线处经历NUC，并且经由皮下注射以28天的间隔接受三个剂量25mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg的量的AD04872和AD05070的组合。组群6招募了4名CHB患者，每两周接受三次100mg剂量的AD04872和AD05070的组合。组群7招募了4名CHB患者，接受三周100mg剂量的AD04872和AD05070的组合。CHB组群8和9(4名接受活性物质)是HBeAg阳性的，分别未经历NUC治疗或经历NUC，其经由皮下注射以28天的间隔接受三个剂量300mg的量的AD04872和AD05070的组合。组群10和组群11各自招募了4名CHB患者以分别接受3周200mg和300mg剂量的AD04872和AD05070的组合。经历NUC的CHB患者在整个研究期间继续他们的每日NUC，并且未经历NUC的CHB患者在第1天开始每日NUC。对于CHB组群，定期测量病毒DNA、病毒RNA和抗原HBsAg、HBeAg和HBcrAg。
HBV RNAi剂(AD04872和AD05070)被设计成沉默来自附加体cccDNA和宿主整合的HBV DNA的HBV RNA转录物。HBV RNAi剂在接受三种HBV RNAi剂剂量(100mg至400mg，每4周一次(Q4w)与NA一起)的所有患者中使血清HBsAg水平降低≥1log10，不考虑基线HBeAg状态或先前NA治疗，如实施例19所示。考虑到缺乏对100mg至400mg Q4w HBV RNAi剂的剂量响应，在该实施例中，组群2b至5b从四名患者扩增至八名患者，并且增加了两个较低剂量组群1b和1c(分别为25mg和50mg Q4w)。如下所述，示出了组群2b至5b以及1b和1c的直到第113天(即，HBV RNAi剂给药后两个月)的功效数据和安全性数据。
在组群1b、1c和2b至5b中，在第1天、第27天和第57天招募HBeAg阳性或阴性、经历NA或未经历的CHB患者并接受25mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg Q4w的三种皮下HBVRNAi剂剂量。所有患者在第1天开始(未经历NA)或继续(经历NA)每天NA(TDF或ETV)治疗，并且在HBV RNAi剂给药结束后继续。在筛选时和在第1天、第8天、第15天、第29天、第43天、第57天、第85天和第113天进行研究访视，然后大约每2个月一次延长的随访，持续12个月。评估血清病毒参数，即，HBV DNA(定量下限[LLOQ]：20IU/mL)、HBV RNA(LLOQ：1.65log10U/mL4)、HBsAg(LLOQ：0.05IU/mL)、HBeAg(LLOQ：0.01PEIU/mL；值低于0.11PEIU/mL被报告为未检测到)和HBcrAg(LLOQ：1KU/mL)。安全性评估包括临床实验室评估和从筛选到第113天(如此处所报道的)以及到延长的随访期进行评估的不良事件(AE)。研究参数汇总于表55中。
表55
组群1b、1c、2b、3b、4b和5b的基线特征和人口统计信息在表56中示出。大多数患者是经历NA的(40/48，83％)。所有患者均接受他们计划的HBV RNAi剂剂量，而无需治疗中断。
表56
AA：非裔美国人；BMI：身体质量指数；HBeAg：乙型肝炎e抗原；HBsAg：乙型肝炎表面抗原；NA：核苷类似物；SEM：平均值的标准误差。
组群1b、1c、2b、3b、4b和5b中CHB患者从第1天到第113天的平均HBsAg变化在图17中示出。在第1天、第29天和第57天，向患者施用三种皮下剂量的HBV RNAi剂：25mg(组群1b)、50mg(组群1c)、100mg(组群2b)、200mg(组群3b)、300mg(组群4b)或400mg(组群5b)。并且所有患者每天都给予NA。HBV RNAi剂在评估的所有剂量下均降低了HBsAg水平。在第113天(三个剂量后的典型平均最低点，最后一个剂量后56天)，自第1天，HBV RNAi剂25mg剂量下平均HBsAg(SEM)log10降低1.00(0.18)，50mg剂量下1.18(0.08)，100mg剂量下1.54(0.18)，200mg剂量下1.71(0.15)，300mg剂量下1.48(0.11)，并且400mg剂量下1.75(0.16)。
组群1b、1c、2b、3b、4b和5b中的所有患者在从第1天起的第113天的平均HBsAg和个体HBsAg变化在图18中示出。从最低点第1天起HBsAg实现了≥1.0log10降低的第113天数据的患者比例为4/8(25mg)、6/8(50mg)、7/8(100mg)、8/8(200mg)、8/8(300mg)和8/8(400mg)。对于HBeAg阳性和HBeAg阴性患者均观察到类似的响应。HBeAg阳性患者(n＝11)表现出HBsAg降低-1.52log10IU/mL(平均最低点)。HBeAg阴性患者(n＝37)表现出HBsAg降低-1.62log10IU/mL(平均最低点)。接受200mg的一名患者在第113天检测不到HBsAg，并且在HBsAg血清清除之前的第15天实现1.6log10降低。对于HBsAg>100IU/mL(第1天)和有第113天数据的患者，在用HBV RNAi剂治疗下，2/7(25mg)、3/8(50mg)、5/7(100mg)、5/6(200mg)、6/8(300mg)和5/7(400mg)实现了HBsAg<100IU/mL。
在第1天、第29天和第57天，接受25mg(组群1b)、50mg(组群1c)、100mg(组群2b)、200mg(组群3b)、300mg(组群4b)或400mg(组群5b)的个体参与者(组群1b、1c、2b、3b、4b和5b)的HBV DNA、HBV RNA、HBeAg和HBcrAg变化在图19A至图19D中示出。所有患者每天都给予NA。对于在第1天具有可测量参数的患者，HBV DNA和HBV RNA水平大幅下降，并且用HBVRNAi剂治疗时HBeAg和HBcrAg的降低不太显著。除了HB之外，对于HBV RNA、HBeAg和HBcrAg，在一定比例的患者中观察到持续抑制。对于在第1天具有可量化参数并且在第336天具有可用数据的患者，在15/26名患者中观察到HBV RNA的持续抑制，在9/14名患者中观察到HBeAg的持续抑制，并且在10/24名患者中观察到HBcrAg的持续抑制。
在组群1b、1c、2b、3b、4b和5b中的参与者在治疗的第113天之前(包括治疗的第113天)可能或很可能发生的药物相关不良事件(AE)事件在下表57中示出。到第113天，组群1b至5b的安全性数据表明，25mg至400mg的HBV RNAi剂与NA一起的三个月剂量在CHB患者中通常耐受性良好。报道了三个非药物相关的严重不良事件(单个患者焦虑伴抑郁和月经过多，每个都需要住院治疗)。最常见报道的AE至少可能是药物相关的，由注射部位处的各种AE(例如，变色、红斑、擦伤、皮疹)组成，这些AE都是轻度的并且在五名患者中有所报道。没有血小板减少症的报道并且有一例可能的药物相关的1期急性肾损伤伴随肌酸酐增加的报道(从给药前第1天的1.10mg/dL到第8天的1.55mg/dL的峰值，并且在第15天返回到1.06mg/dL)，这是治疗期的，但可能是由于肌酸补充引起的，并且不导致治疗中断或调整。报告了轻度的、可能相关的异常肝脏功能测试(峰值丙氨酸转氨酶[ALT]136U/L)的单个AE，表示到第113天(研究结束)组群1b至5b中治疗期ALT升高最高。不存在ALT的同时升高>正常上限的3倍以及总胆红素>正常上限的2倍的情况。
表57
a基于相似性汇聚的MedDRA优选术语
在CHB患者中，HBV RNAi剂与NA一起对HBsAg、HBV DNA和HBV RNA具有强活性。HBeAg和HBcrAg的降低通常不太显著。HBsAg的降低在HBeAg阳性和HBeAg阴性患者中是类似的。用100mg至400mgHBV RNAi剂的扩增组群证实先前发现HBsAg下降与这些剂量类似；97％(31/32)的这些患者实现了HBsAg的≥1.0log10(90％)降低。25mg和50mg HBV RNAi剂剂量在降低HBsAg方面具有活性，并且似乎不如较高剂量有效。HBV RNAi剂的HBsAg响应符合其沉默来自cccDNA和宿主整合病毒DNA(其在某些CHB群体中是HBsAg的主要来源)的HBV RNA的能力。HBV RNAi剂(和NA)治疗在高达400mg Q4w的三个剂量下耐受性良好。总的来说，HBVRNAi剂表现出RNAi疗法所需的抗HBV特性。
其他实施方案
以下实施方案是示例性的，并且不应被认为是对如本文所述的本发明的限制。
实施方案1一种用于抑制对其有需要的人类受试者的乙型肝炎病毒基因表达的方法，所述方法包括向所述人类受试者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，所述第一RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:111、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQID NO:235、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:307、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，所述第二RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQID NO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约50mg至400mg的组合量施用。
实施方案2一种用于治疗或预防对其有需要的人类受试者的与乙型肝炎病毒引起的感染相关联的症状或疾病的方法，所述方法包括向所述人类受试者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，所述第一RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，所述第二RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQID NO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约50mg至400mg的组合量施用。
实施方案3根据实施方案1或实施方案2所述的方法，其中所述第一RNAi剂和/或所述第二RNAi剂还包含缀合至所述有义链或所述反义链的5'端的靶向配体。
实施方案4根据实施方案3所述的方法，其中所述靶向配体包含N-乙酰基-半乳糖胺。
实施方案5根据实施方案4所述的方法，其中所述靶向配体是(NAG25)、(NAG25)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG37)或(NAG37)s。
实施方案6根据实施方案3至5中任一项所述的方法，其中所述靶向配体缀合至所述RNAi剂的所述有义链。
实施方案7根据实施方案3至5中任一项所述的方法，其中所述靶向配体缀合至所述RNAi剂的所述反义链。
实施方案8.根据实施方案1至7中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂以约20mg至275mg的量施用。
实施方案9.根据实施方案1至8中任一项所述的方法，其中所述第二RNAi剂以约10mg至150mg的量施用。
实施方案10.根据实施方案1至9中任一项所述的方法，其中所述药物组合物包含RNAi剂，所述RNAi剂包含AD04511(SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:229)、AD04872(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:252)、AD04873(SEQ ID NO:127和SEQ ID NO:252)、AD04874(SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:253)、AD05070(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:262)、AD05148(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:271)、AD05164(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:273)、AD05165(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:274)或任何前述的混合物的双链体结构。
实施方案11.根据实施方案10所述的方法，其中所述药物组合物包含含有所述AD04872(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:252)的双链体结构的RNAi剂和含有所述AD05070(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:262)的双链体结构的RNAi剂。
实施方案12.根据实施方案11所述的方法，其中所述AD04872的双链体结构缀合至(NAG37)并且所述AD05070的双链体结构缀合至(NAG37)。
实施方案13.根据实施方案12所述的方法，其中所述(NAG37)缀合至所述AD04872的双链体和所述AD05070的双链体的相应有义链的5'端。
实施方案14.根据实施方案11至13中任一项所述的方法，其中所述AD04872的双链体与所述AD05070的双链体的比率介于约1:2至约5:1之间。
实施方案15.根据实施方案14所述的方法，其中所述AD04872的双链体与所述AD05070的双链体的比率是约2:1。
实施方案16.根据实施方案1至15中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
实施方案17.根据实施方案1至16中任一项所述的方法，其中所述组合物通过皮下施用。
实施方案18.根据实施方案1至17中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约25mg、35mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg的组合量施用。
实施方案19.根据实施方案1至18中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以7天、14天、21天或28天的间隔施用。
实施方案20.根据实施方案1至19中任一项所述的方法，其中所述组合物施用于所述受试者至多6个月。
实施方案21.根据实施方案1至20中任一项所述的方法，还包括向所述受试者施用第二活性剂。
实施方案22.根据实施方案21所述的方法，其中所述第二活性剂是核苷类似物。
实施方案23.根据实施方案22所述的方法，其中所述核苷类似物是恩替卡韦或替诺福韦。
实施方案24.根据实施方案1至23中任一项所述的方法，其中在施用所述组合物后，所述人类受试者的HBsAg、HBeAg或血清HBV DNA的水平降低至少40％。
实施方案25.根据实施方案2至24中任一项所述的方法，其中与所述HBV感染相关联的所述症状或所述疾病是慢性肝脏疾病或障碍、肝脏炎症、纤维化病症、增殖性障碍、肝细胞癌、丁型肝炎病毒感染、急性HBV感染或慢性HBV感染。
实施方案26.根据实施方案2至25中任一项所述的方法，其中与所述HBV感染相关联的所述症状或所述疾病是慢性HBV感染。
实施方案27.一种用于抑制对其有需要的人类受试者的乙型肝炎病毒基因表达的方法，所述方法包括向所述人类受试者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，所述第一RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:111、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQID NO:235、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:307、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，所述第二RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQID NO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约25mg至400mg的组合量施用。
实施方案28.一种用于治疗或预防对其有需要的人类受试者的与乙型肝炎病毒引起的感染相关联的症状或疾病的方法，所述方法包括向所述人类受试者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，所述第一RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，所述第二RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQID NO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约25mg至400mg的组合量施用。
实施方案29.根据实施方案27或实施方案28所述的方法，其中所述第一RNAi剂和/或所述第二RNAi剂还包含缀合至所述有义链或所述反义链的靶向配体。
实施方案30.根据实施方案29所述的方法，其中所述靶向配体包含N-乙酰基-半乳糖胺。
实施方案31.根据实施方案30所述的方法，其中所述靶向配体是(NAG25)、(NAG25)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG37)或(NAG37)s。
实施方案32.根据实施方案29至31中任一项所述的方法，其中所述靶向配体缀合至所述RNAi剂的所述有义链。
实施方案33.根据实施方案29至31中任一项所述的方法，其中所述靶向配体缀合至所述RNAi剂的所述反义链。
实施方案34.根据实施方案27至33中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂以约20mg至275mg的量施用。
实施方案35.根据实施方案28至34中任一项所述的方法，其中所述第二RNAi剂以约10mg至150mg的量施用。
实施方案36.根据实施方案27至35中任一项所述的方法，其中所述药物组合物包含RNAi剂，所述RNAi剂包含AD04511(SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:229)、AD04872(SEQ IDNO:126和SEQ ID NO:252)、AD04873(SEQ ID NO:127和SEQ ID NO:252)、AD04874(SEQ IDNO:128和SEQ ID NO:253)、AD05070(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:262)、AD05148(SEQ IDNO:140和SEQ ID NO:271)、AD05164(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:273)、AD05165(SEQ IDNO:140和SEQ ID NO:274)或任何前述的混合物的双链体结构。
实施方案37.根据实施方案36所述的方法，其中所述药物组合物包含含有所述AD04872(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:252)的双链体结构的RNAi剂和含有所述AD05070(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:262)的双链体结构的RNAi剂。
实施方案38.根据实施方案37所述的方法，其中所述AD04872的双链体结构缀合至(NAG37)并且所述AD05070的双链体结构缀合至(NAG37)。
实施方案39.根据实施方案38所述的方法，其中所述(NAG37)缀合至所述AD04872的双链体和所述AD05070的双链体的相应有义链的5'端。
实施方案40.根据实施方案37至39中任一项所述的方法，其中所述AD04872的双链体与所述AD05070的双链体的比率介于约1:2至约5:1之间。
实施方案41.根据实施方案40所述的方法，其中所述AD04872的双链体与所述AD05070的双链体的比率是约2:1。
实施方案42.根据实施方案27至41中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
实施方案43.根据实施方案27至42中任一项所述的方法，其中所述组合物通过皮下施用。
实施方案44.根据实施方案27至43中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约25mg、35mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg中任一者的组合量施用。
实施方案45.根据实施方案27至43中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。
实施方案46.根据实施方案45所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约40mg的组合量施用。
实施方案47.根据实施方案45所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约100mg的组合量施用。
实施方案48.根据实施方案45所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约200mg的组合量施用。
实施方案49.根据实施方案27至48中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以7天、14天、21天或28天的间隔施用。
实施方案50.根据实施方案27至48中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以28天的间隔施用。
实施方案51.根据实施方案50所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约40mg、约100mg或约200mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案52.根据实施方案51所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约40mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案53.根据实施方案51所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约100mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案54.根据实施方案51所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每月约200mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案55.根据实施方案27至54中任一项所述的方法，其中所述组合物施用于所述受试者至多6个月。
实施方案56.根据实施方案27至55中任一项所述的方法，还包括向所述受试者施用第二活性剂。
实施方案57.根据实施方案56所述的方法，其中所述第二活性剂是核苷类似物。
实施方案58.根据实施方案57所述的方法，其中所述核苷类似物是恩替卡韦或替诺福韦。
实施方案59.根据实施方案27至58中任一项所述的方法，其中在施用所述组合物后，所述人类受试者的HBsAg、HBeAg或血清HBV DNA的水平降低至少40％。
实施方案60.根据实施方案28至59中任一项所述的方法，其中与所述HBV感染相关联的所述症状或所述疾病是慢性肝脏疾病或障碍、肝脏炎症、肝脏纤维化病症、增殖性肝细胞障碍、肝细胞癌、丁型肝炎病毒感染、急性HBV感染、慢性乙型肝炎或慢性HBV感染。
实施方案61.根据实施方案28至60中任一项所述的方法，其中与所述HBV感染相关联的所述症状或所述疾病是慢性HBV感染或慢性乙型肝炎。
实施方案62.一种用于抑制对其有需要的人类受试者的乙型肝炎病毒基因表达的方法，所述方法包括向所述人类受试者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，所述第一RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:111、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQID NO:235、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:307、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，所述第二RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQID NO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约25mg至400mg的组合量施用。
实施方案63.一种用于治疗或预防对其有需要的人类受试者的与乙型肝炎病毒引起的感染相关联的症状或疾病的方法，所述方法包括向所述人类受试者施用有效量的药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，所述第一RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，所述第二RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQID NO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约25mg至400mg的组合量施用。
实施方案64.根据实施方案62或实施方案63所述的方法，其中所述第一RNAi剂和/或所述第二RNAi剂还包含缀合至所述有义链或所述反义链的5'端的靶向配体。
实施方案65.根据实施方案64所述的方法，其中所述靶向配体包含N-乙酰基-半乳糖胺。
实施方案66.根据实施方案65所述的方法，其中所述靶向配体是(NAG25)、(NAG25)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG37)或(NAG37)s。
实施方案67.根据实施方案64至66中任一项所述的方法，其中所述靶向配体缀合至所述RNAi剂的所述有义链。
实施方案68.根据实施方案64至66中任一项所述的方法，其中所述靶向配体缀合至所述RNAi剂的所述反义链。
实施方案69.根据实施方案62至68中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂以约20mg至275mg的量施用。
实施方案70.根据实施方案62至69中任一项所述的方法，其中所述第二RNAi剂以约10mg至150mg的量施用。
实施方案71.根据实施方案62至70中任一项所述的方法，其中所述药物组合物包含RNAi剂，所述RNAi剂包含AD04511(SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:229)、AD04872(SEQ IDNO:126和SEQ ID NO:252)、AD04873(SEQ ID NO:127和SEQ ID NO:252)、AD04874(SEQ IDNO:128和SEQ ID NO:253)、AD05070(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:262)、AD05148(SEQ IDNO:140和SEQ ID NO:271)、AD05164(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:273)、AD05165(SEQ IDNO:140和SEQ ID NO:274)或任何前述的混合物的双链体结构。
实施方案72.根据实施方案71所述的方法，其中所述药物组合物包含含有所述AD04872(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:252)的双链体结构的RNAi剂和含有所述AD05070(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:262)的双链体结构的RNAi剂。
实施方案73.根据实施方案72所述的方法，其中所述AD04872的双链体结构缀合至(NAG37)并且所述AD05070的双链体结构缀合至(NAG37)。
实施方案74.根据实施方案73所述的方法，其中所述(NAG37)缀合至所述AD04872的双链体和所述AD05070的双链体的相应有义链的5'端。
实施方案75.根据实施方案72至74中任一项所述的方法，其中所述AD04872的双链体与所述AD05070的双链体的比率介于约1:2至约5:1之间。
实施方案76.根据实施方案75所述的方法，其中所述AD04872的双链体与所述AD05070的双链体的比率是约2:1。
实施方案77.根据实施方案62至76中任一项所述的方法，其中所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
实施方案78.根据实施方案62至77中任一项所述的方法，其中所述组合物通过皮下施用。
实施方案79.根据实施方案62至78中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约25mg、35mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg中任一者的组合量施用。
实施方案80.根据实施方案62至78中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。
实施方案81.根据实施方案80所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约40mg的组合量施用。
实施方案82.根据实施方案80所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约100mg的组合量施用。
实施方案83.根据实施方案80所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约200mg的组合量施用。
实施方案84.根据实施方案62至83中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以7天、14天、21天或28天的间隔施用。
实施方案85.根据实施方案62至84中任一项所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以28天的间隔施用。
实施方案86.根据实施方案85所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约40mg、约100mg或约200mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案87.根据实施方案86所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约40mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案88.根据实施方案86所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约100mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案89.根据实施方案86所述的方法，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约200mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案90.根据实施方案62至89中任一项所述的方法，其中所述组合物施用于所述受试者至多6个月。
实施方案91.根据实施方案62至90中任一项所述的方法，还包括向所述受试者施用第二活性剂。
实施方案92.根据实施方案91所述的方法，其中所述第二活性剂是核苷类似物。
实施方案93.根据实施方案92所述的方法，其中所述核苷类似物是恩替卡韦或替诺福韦。
实施方案94.根据实施方案62至93中任一项所述的方法，其中在施用所述组合物后，所述人类受试者的HBsAg、HBeAg或血清HBV DNA的水平降低至少40％。
实施方案95.根据实施方案63至94中任一项所述的方法，其中与所述HBV感染相关联的所述症状或所述疾病是慢性肝脏疾病或障碍、肝脏炎症、肝脏纤维化病症、增殖性肝细胞障碍、肝细胞癌、丁型肝炎病毒感染、急性HBV感染、慢性乙型肝炎或慢性HBV感染。
实施方案96.根据实施方案63至95中任一项所述的方法，其中与所述HBV感染相关联的所述症状或所述疾病是慢性HBV感染或慢性乙型肝炎。
实施方案97.一种药物组合物，所述药物组合物用于在抑制人类受试者的乙型肝炎病毒基因表达中使用，其中所述使用包括向所述人类受试者施用有效量的所述药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，所述第一RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:111、SEQ ID NO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:175、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQID NO:235、SEQ ID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:307、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，所述第二RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQID NO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约25mg至400mg的组合量施用。
实施方案98.一种药物组合物，所述药物组合物用于在治疗或预防人类受试者的与乙型肝炎病毒引起的感染相关联的症状或疾病中使用，其中所述使用包括向所述人类受试者施用有效量的所述药物组合物，所述药物组合物包含：
(a)第一RNAi剂，所述第一RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:100、SEQ IDNO:126、SEQ ID NO:127、SEQ ID NO:128、SEQ ID NO:171、SEQ ID NO:179和SEQ ID NO:180，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:229、SEQID NO:252、SEQ ID NO:253、SEQ ID NO:273、SEQ ID NO:302和SEQ ID NO:319，和
(b)第二RNAi剂，所述第二RNAi剂包含：
(i)反义链，所述反义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:140、SEQ IDNO:107、SEQ ID NO:136、SEQ ID NO:137、SEQ ID NO:188、SEQ ID NO:154和SEQ ID NO:162，和
(ii)有义链，所述有义链包含以下任何一种的核苷酸序列：SEQ ID NO:262、SEQID NO:271、SEQ ID NO:216、SEQ ID NO:248、SEQ ID NO:274、SEQ ID NO:328、SEQ ID NO:292和SEQ ID NO:294；
并且其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约25mg至400mg的组合量施用。
实施方案99.根据实施方案97或实施方案98所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和/或所述第二RNAi剂还包含缀合至所述有义链或所述反义链的5'端的靶向配体。
实施方案100.根据实施方案99所述的药物组合物，其中所述靶向配体包含N-乙酰基-半乳糖胺。
实施方案101.根据实施方案100所述的药物组合物，其中所述靶向配体是(NAG25)、(NAG25)s、(NAG31)、(NAG31)s、(NAG37)或(NAG37)s。
实施方案102.根据实施方案99至101中任一项所述的药物组合物，其中所述靶向配体缀合至所述RNAi剂的所述有义链。
实施方案103.根据实施方案99至101中任一项所述的药物组合物，其中所述靶向配体缀合至所述RNAi剂的所述反义链。
实施方案104.根据实施方案97至103中任一项所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂以约20mg至275mg的量施用。
实施方案105.根据实施方案97至104中任一项所述的药物组合物，其中所述第二RNAi剂以约10mg至150mg的量施用。
实施方案106.根据实施方案97至105中任一项所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含RNAi剂，所述RNAi剂包含AD04511(SEQ ID NO:100和SEQ ID NO:229)、AD04872(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:252)、AD04873(SEQ ID NO:127和SEQ ID NO:252)、AD04874(SEQ ID NO:128和SEQ ID NO:253)、AD05070(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:262)、AD05148(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:271)、AD05164(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:273)、AD05165(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:274)或任何前述的混合物的双链体结构。
实施方案107.根据实施方案106所述的药物组合物，其中所述药物组合物包含含有所述AD04872(SEQ ID NO:126和SEQ ID NO:252)的双链体结构的RNAi剂和含有所述AD05070(SEQ ID NO:140和SEQ ID NO:262)的双链体结构的RNAi剂。
实施方案108.根据实施方案107所述的药物组合物，其中所述AD04872的双链体结构缀合至(NAG37)并且所述AD05070的双链体结构缀合至(NAG37)。
实施方案109.根据实施方案108所述的药物组合物，其中所述(NAG37)缀合至所述AD04872的双链体和所述AD05070的双链体的相应有义链的5'端。
实施方案110.根据实施方案107至109中任一项所述的药物组合物，其中所述AD04872的双链体与所述AD05070的双链体的比率介于约1:2至约5:1之间。
实施方案111.根据实施方案110所述的药物组合物，其中所述AD04872的双链体与所述AD05070的双链体的比率是约2:1。
实施方案112.根据实施方案97至111中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物还包含药学上可接受的赋形剂。
实施方案113.根据实施方案97至112中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物通过皮下施用。
实施方案114.根据实施方案97至113中任一项所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约25mg、35mg、50mg、100mg、200mg、300mg或400mg中任一者的组合量施用。
实施方案115.根据实施方案97至114中任一项所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约40mg、约100mg或约200mg的组合量施用。
实施方案116.根据实施方案115所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约40mg的组合量施用。
实施方案117.根据实施方案115所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约100mg的组合量施用。
实施方案118.根据实施方案115所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约200mg的组合量施用。
实施方案119.根据实施方案97至118中任一项所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以7天、14天、21天或28天的间隔施用。
实施方案120.根据实施方案97至118中任一项所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以28天的间隔施用。
实施方案121.根据实施方案120所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约40mg、约100mg或约200mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案122.根据实施方案121所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约40mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案123.根据实施方案121所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约100mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案124.根据实施方案121所述的药物组合物，其中所述第一RNAi剂和所述第二RNAi剂以每28天约200mg的组合量并且以28天的间隔施用。
实施方案125.根据实施方案97至124中任一项所述的药物组合物，其中所述组合物施用于所述受试者至多6个月。
实施方案126.根据实施方案97至125中任一项所述的药物组合物，还包括向所述受试者施用第二活性剂。
实施方案127.根据实施方案126所述的药物组合物，其中所述第二活性剂是核苷类似物。
实施方案128.根据实施方案127所述的药物组合物，其中所述核苷类似物是恩替卡韦或替诺福韦。
实施方案129.根据实施方案97至128中任一项所述的药物组合物，其中在施用所述组合物后，所述人类受试者的HBsAg、HBeAg或血清HBV DNA的水平降低至少40％。
实施方案130.根据实施方案98至129中任一项所述的药物组合物，其中与所述HBV感染相关联的所述症状或所述疾病是慢性肝脏疾病或障碍、肝脏炎症、肝脏纤维化病症、增殖性肝细胞障碍、肝细胞癌、丁型肝炎病毒感染、急性HBV感染、慢性乙型肝炎或慢性HBV感染。
实施方案131.根据实施方案98至130中任一项所述的药物组合物，其中与所述HBV感染相关联的所述症状或所述疾病是慢性HBV感染或慢性乙型肝炎。
应当理解，虽然已结合本发明的具体实施方式描述了本发明，但是前述描述旨在说明而非限制由随附权利要求书所限定的本发明的范围。其他方面、优点和修改均在以下权利要求书的范围内。