阅读说明：本技术 冷蒿水提物其制备方法和应用 (Artemisia frigida water extract and preparation method and application thereof ) 是由 李秀梅 杨培龙 石冬冬 闻治国 王亚冬 杨娟 于 2020-07-01 设计创作，主要内容包括：本发明涉及农业生物技术领域,具体涉及冷蒿水提物及其制备方法和应用。本发明用超声提取法,以蒸馏水作为提取溶剂,获得具有很好的抗炎作用冷蒿水提物。(The invention relates to the technical field of agricultural biology, in particular to a artemisia selengensis water extract and a preparation method and application thereof. The invention uses ultrasonic extraction method and uses distilled water as extraction solvent to obtain the artemisia selengensis water extract with good anti-inflammatory effect.)

冷蒿水提物其制备方法和应用

技术领域

本发明涉及农业生物技术领域，具体涉及冷蒿水提物及其制备方法和应用。

背景技术

炎症，是机体对感染或组织损伤所产生的一种防御措施，可发生在人体的各种组织和器官中，例如常见的肝炎，胃炎，肺炎等。其中细菌的感染或病毒的感染、烧伤和割伤、强酸和强碱腐蚀以及人体的免疫系统失调，都可以引起机体的炎症，将这些因子称为炎症因子。

冷蒿(ArtemisiafrigidaWilld)为菊科(Compositae)蒿属(Artemisia)的一种多年生草本植物。冷蒿的总黄酮提取物具有明显的抗炎效果。但冷蒿抗炎作用的有效活性成分及其作用机制尚不清楚。

发明内容

本发明的目的是提供冷蒿水提物。

本发明的再一目的是提供冷蒿水提物的制备方法。

本发明的再一目的是提供上述冷蒿水提物的应用。

根据本发明的冷蒿水提物中的抗炎馏分，通过以下步骤制备而得，

将冷蒿粉碎，超声水提，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min，获得的水提物蒸发浓缩备用。

根据本发明的本发明的冷蒿水提物，其中，水与冷嵩粉的比例为40:1mL/g。

根据本发明的冷蒿水提物的制备方法包括以下步骤：

将冷蒿粉碎，超声水提，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min，获得的水提物蒸发浓缩备用。

本发明还提供了上述冷蒿水提物用于制备抑制炎症药剂的应用。

本发明用超声提取法，以蒸馏水作为提取溶剂，获得冷蒿水提物，确定了冷蒿水提取物具有很好的抗炎作用。

附图说明

图1显示中草药水提物对细胞存活率的影响；

图2显示中草药水提物对细胞存活率的影响；

图3显示中草药水提物对细胞存活率的影响；

图4显示中草药水提物对细胞存活率的影响；

图5显示ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清中一氧化氮的含量；

图6显示ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清中白细胞介素-6的含量；

图7显示ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清中白细胞介素-1β的含量；

图8显示ELISA试剂盒检测RAW264.7细胞上清中TNF-α的含量。

具体实施方式

实施例1制备冷嵩水提物

(1)使用微型植物粉碎机将冷蒿粉碎，过60目的分析筛，于密封袋中保存，备用。

(2)在超声提取机中加入800mL蒸馏水，称取冷蒿20g放入超声提取机中搅拌均匀进行超声提取，超声条件：超声功率500W，温度50℃，时间30min。

(3)超声提取后，取出溶液，将上层提取液倒入离心管中，5000rpm离心20min，将离心后的上清收集或转移至旋转蒸发瓶中，用旋转蒸发仪旋转浓缩至5mL左右，用移液枪将液体转移至合适的容器中，用保鲜膜包上，并在上端扎几个孔，放入-80℃冰箱，待冻成固体后，将其放入冻干机中，冻干成粉末，将保鲜膜取下来，盖上离心管的盖子，作为待测样品，做好标记，放入-80℃冰箱备用。

以同样的方法制备黄花蒿粗粉、白头翁、龙蒿、白鲜果皮、多叶棘豆、广布野豌豆、防风、斜茎黄耆种皮、斜茎黄耆叶、灵芝菌棒、东北珍珠梅、苍术茎叶、苍术根须、苍耳、波叶大黄、山韭、茜草、地梢瓜瓜皮的水提取物。

称取水提物10mg置于1.5mLEP管中，在无菌的环境中配置成浓度为10mg/mL的母液，用移液枪吹打混匀或者上下颠倒，使其溶解，用无菌的0.45μm滤膜过滤至新的无菌离心管中，放入﹣80℃冰箱，保存备用。

实施例2水提物对细胞存活率的影响

由图1～图4结果可知，不同中药水提物对细胞的损伤不同，中草药的水提物作用于RAW264.7细胞后，其中白头翁水提物、龙蒿水提物、白鲜果皮水提物、多叶棘豆水提物、防风水提物、斜茎黄耆种皮水提物、斜茎黄耆叶水提物、灵芝菌棒水提物、苍术茎叶水提物、苍术根须水提物、波叶大黄水提物、山韭水提物和地梢瓜瓜皮水提物对细胞会产生不同程度的损伤。黄花蒿水提物、冷蒿水提物、广布野豌豆水提物、东北珍珠梅水提物、苍耳水提物和茜草水提物对细胞无损伤。

实施例3中草药提取物的抗炎作用

选择无细胞毒性的中草药提取物研究其抗炎作用。以LPS诱导的RAW264.7细胞为模型，设置对照组、LPS组(LPS+培养基)、LPS+加药组。将各提取物以100μg/mL的浓度处理RAW264.7细胞，2小时后，除对照组外，均加入终浓度为1000μg/mL的LPS共培养24小时，收集细胞上清，检测抗炎因子的含量。利用ELISA试剂盒检测各水提物对细胞上清中NO、IL-6、IL-1β和TNF-α含量的影响。

1、中草药水提物对NO含量的影响

由图5所示，各中药水提物抑制NO的能力显著不同，各水提物作用于RAW264.7细胞后，广布野豌豆水提物处理组的NO的含量显著高于LPS模型组；黄花蒿水提物、冷蒿水提物、东北珍珠梅水提物和茜草水提物处理组的NO的含量显著低于LPS模型组，说明黄花蒿水提物、冷蒿水提物、东北珍珠梅水提物和茜草水提物均可以抑制细胞上清液中NO的释放与表达，尤其是冷蒿水提物抑制NO产生的效果更好。抑制NO的能力为冷蒿水提物>黄花蒿水提物＝东北珍珠梅水提物＝茜草水提物。

2、中草药水提物对IL-6含量的影响

各水提物作用于RAW264.7细胞后，检测细胞上清液中IL-6的含量，结果如图6所示，黄花蒿水提物、冷蒿水提物、广布野豌豆水提物、东北珍珠梅水提物、苍耳水提物和茜草水提物处理组的IL-6的含量均低于LPS模型组，这说明各水提物均可以抑制IL-6的释放。抑制IL-6表达的能力为广布野豌豆水提物>茜草水提物>黄花蒿水提物>冷蒿水提物>东北珍珠梅水提物>苍耳水提物。

3、中草药水提物对1L-1β含量的影响

由图7所示，黄花蒿水提物和东北珍珠梅水提物处理组的1L-1β的含量高于LPS模型组；冷蒿水提物、广布野豌豆水提物、苍耳水提物和茜草水提物处理组的1L-1β显著低于LPS模型组，这表明冷蒿水提物、广布野豌豆水提物、苍耳水提物和茜草水提物均可以抑制1L-1β的释放与表达。抑制1L-1β的能力为：冷蒿水提物＝广布野豌豆水提＝茜草水提物>苍耳水提物。

4、中草药水提物对TNF-α含量的影响

由图8所示，黄花蒿水提物处理组的TNF-α的含量高于LPS模型组；冷蒿水提物、东北珍珠梅水提物、苍耳水提物和茜草水提物处理组的TNF-α的含量均有所下降，这说明冷蒿水提物、东北珍珠梅水提物、苍耳水提物和茜草水提物均可以抑制TNF-α的表达与释放。抑制TNF-α的能力为茜草水提物>苍耳水提物＝东北珍珠梅>冷蒿水提物。