牛大力提取物及其制备方法和在降血脂、减肥药品中的应用
阅读说明：本技术 牛大力提取物及其制备方法和在降血脂、减肥药品中的应用 (Millettia speciosa champ extract, preparation method thereof and application thereof in medicines for reducing blood fat and losing weight ) 是由 刘蕊 张景照 唐旭东 于 2020-07-14 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种牛大力提取物及其制备方法和在降血脂、减肥药品中的应用,属于医药保健品技术领域。本发明提供了一种牛大力提取物的制备方法,所述牛大力提取物包括牛大力水提物、牛大力醇提物、牛大力多糖、或牛大力多糖滤液。研究结果显示本发明所述牛大力水提物、牛大力醇提物、牛大力多糖、牛大力多糖滤液均能抑制3T3-L1前体脂肪细胞增殖,且能抑制3T3-L1前体脂肪细胞转化为脂肪细胞,能减少油红O染色脂滴,对脂滴形成具有抑制作用,具有抗肥胖的效果；另外志愿者8周内体重均呈下降趋势,相应的BMI指数也呈现下降趋势,趋向正常范围,证明本发明所述牛大力提取物可应用于制备降血脂和/或减肥药品中。(The invention provides a beautiful millettia root extract, a preparation method thereof and application thereof in medicines for reducing blood fat and losing weight, belonging to the technical field of medical and health care products. The invention provides a preparation method of a beautiful millettia root extract, and the beautiful millettia root extract comprises a beautiful millettia root water extract, a beautiful millettia root alcohol extract, beautiful millettia root polysaccharide or beautiful millettia root polysaccharide filtrate. Research results show that the radix millettiae speciosae aqueous extract, the radix millettiae speciosae alcohol extract, the radix millettiae speciosae polysaccharide and the radix millettiae speciosae polysaccharide filtrate can inhibit the proliferation of 3T3-L1 precursor fat cells, can inhibit the conversion of 3T3-L1 precursor fat cells into fat cells, can reduce oil red O staining fat drops, has an inhibiting effect on the formation of the fat drops, and has an anti-obesity effect; in addition, the weight average of the body weight in 8 weeks of the volunteers is in a descending trend, the corresponding BMI index is in a descending trend and is in a normal range, and the results prove that the beautiful millettia root extract can be applied to preparation of medicines for reducing blood fat and/or losing weight.)
技术领域
本发明属于医药保健品技术领域，尤其涉及一种牛大力提取物及其制备方法和在降血脂、减肥药品中的应用。
背景技术
肥胖和血脂异常是引起心脑血管疾病的重要危险因素。随着人们生活水平的提高，肥胖和超重人口快速上升，肥胖成为导致人类死亡的重大因素之一，全球每年至少有280万成年人因肥胖相关疾病死亡。高血脂是肥胖最典型的并发症之一，全球每年有1200～1600万人死于高血脂症引发的心血管疾病。因此，降脂减肥药物的研发在科学和民生层面均具有重大意义，开发潜力极大。目前，市场上的减肥药如***虽然有一定效果，但是具有引起肝功能异常等副作用。
牛大力是豆科崖豆藤属美丽崖豆藤的根，别名猪脚笠、金钟根、山莲藕、倒吊金钟、大力薯。产自我国南方地区如福建、湖南、广东、广西、海南、云南、贵州。《生草药性备要》记载牛大力壮筋骨，解热毒，理内伤，治跌打，浸酒滋肾。《全国中草药汇编》记载牛大力性味甘，平，补虚润肺，强筋活络，用于腰肌劳损，风湿性关节炎，肺结核，慢性支气管炎，慢性肝炎，遗精，白带。《中国植物志》中记载牛大力“含淀粉甚丰富，可酿酒，又可入药，有通径活络，补虚润肺和健脾的功能”。牛大力含有蛋白质、多糖、黄酮类、萜类、生物碱等成分，具有增强免疫力、祛痰、镇咳、抗炎和抗疲劳等功效。我国南方地区如广东、广西和海南等地区常用牛大力煲汤、制作药膳、药酒等，具有补腰肾、强筋骨的显著功效。牛大力的保健和食用价值非常高，牛大力还是壮腰健肾丸，强力健身胶囊，和乌芪舒筋通络片等中成药的原料药。然而，牛大力药材的应用还未得到全面的开发，药典并未收录牛大力药材。
发明内容
有鉴于此，本发明的目的在于提供一种牛大力提取物及其制备方法和在降血脂、减肥药品中的应用。
为了实现上述发明目的，本发明提供了以下技术方案：
本发明提供了一种牛大力提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将牛大力与溶剂按质量体积比为1g：9～11ml的比例混合，浸泡；
(2)提取1～2h，收集提取液，过滤得含有牛大力提取物的药液。
优选的，当步骤(1)所述溶剂为水时，所述浸泡的时间为1～3h，步骤(2)所述提取为煮沸提取。
优选的，当步骤(1)所述溶剂为体积分数70％～80％的乙醇水溶液时，所述浸泡的时间为10～14h，步骤(2)所述提取为90～110℃加热回流提取。
优选的，当步骤(1)所述溶剂为水或为体积分数70％～80％的乙醇水溶液时，步骤(2)获得所述含有牛大力提取物的药液后，还包括将所述含有牛大力提取物的药液浓缩、干燥。
优选的，所述浓缩为旋转蒸发浓缩，所述旋转蒸发浓缩的冷凝温度为-2～3℃，加热温度为35～60℃。
优选的，所述干燥为真空干燥，所述真空干燥的真空度为0.1Mpa，100℃干燥2h，再80℃干燥3h。
优选的，当步骤(1)所述溶剂为水时，步骤(2)获得含有牛大力提取物的药液后，还包括将所述药液与无水乙醇混合至无水乙醇在混合液中的体积分数为80％～90％时，静置46～50h，过滤得滤液和沉淀。
进一步的，将所述沉淀真空干燥，获得的牛大力提取物为牛大力多糖；将所述滤液浓缩、干燥，获得的牛大力提取物为牛大力多糖滤液。
本发明还提供了一种根据上述制备方法制备所得的牛大力提取物。
本发明还提供了一种上述牛大力提取物在制备降血脂和/或减肥药品中的应用。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
本发明首次发现牛大力提取物，包括牛大力水提物、牛大力多糖、牛大力多糖滤液和牛大力醇提物，能够抑制前体脂肪细胞增殖，抑制脂肪细胞分化，抑制脂滴形成，能够降血脂，减肥，可应用到降血脂和/或减肥药品中，提供了牛大力可降血脂、减肥的科学依据，解决了牛大力在降脂减肥领域的空白，拓展了牛大力的应用范围。
附图说明
图1为牛大力提取物制备流程图；
图2为牛大力水提物抑制3T3-L1细胞增殖图；
图3为牛大力多糖抑制3T3-L1细胞增殖图；
图4为牛大力多糖滤液抑制3T3-L1细胞增殖图；
图5为牛大力醇提物抑制3T3-L1细胞增殖图；
图6为不同浓度牛大力多糖抑制脂滴形成图，其中A为空白对照，B为0.1mg/mL牛大力水提物，C为0.1mg/mL牛大力多糖，D为1mg/mL牛大力多糖滤液，E为1mg/mL牛大力醇提物；
图7为12例志愿者8周体重变化图；
图8为12例志愿者8周BMI指数变化趋势图。
具体实施方式
本发明提供了一种牛大力提取物的制备方法，包括如下步骤：
(1)将牛大力与溶剂按质量体积比为1g：9～11ml的比例混合，浸泡；
(2)提取1～2h，收集提取液，过滤得含有牛大力提取物的药液。
本发明对于牛大力的来源没有特殊限定，采用常规市售产品即可，本发明优选的采用牛大力饮片；在本发明中，优选的将牛大力粉碎后与溶剂混合，所述粉碎的粒径优选为2mm，粉碎后优选的过10目筛；所述粉碎优选的采用粉碎机干法粉碎。
在本发明中，当步骤(1)所述溶剂优选为水时，将牛大力与水按质量体积比为1g：9～11ml的比例混合，浸泡；提取1～2h，收集提取液，过滤得含有牛大力水提物的药液；浓缩、干燥，获得牛大力水提物。
本发明对于水没有特殊限定，采用本领域常规用水即可；本发明对于牛大力与水的混合方式没有特殊限定，采用本领域常规混合方式即可；本发明中，牛大力与水的质量体积比优选为1g：10ml。在本发明中，所述浸泡的时间优选的为1～3h，更优选的为2h，所述浸泡的温度优选的为17～23℃，更优选的为20℃；本发明中，所述提取的次数优选的为1～3次，更优选的为2次，每次提取的方式优选的为230～270℃加热煮沸后，100～130℃提取，更优选的为250℃加热煮沸后，115℃提取，每次提取的时间优选为1.5h。在本发明中，将数次提取获得的提取液合并后过滤；所述过滤的方式优选的为双层200目绢布过滤；本发明中，所述浓缩优选的为旋转蒸发浓缩，所述旋转蒸发浓缩的冷凝温度优选为-2～3℃，加热温度优选为35～60℃，所述旋转蒸发浓缩所得的浓缩物和原始溶液的体积比优选为1：10～20；本发明中，所述干燥优选的为真空干燥，所述真空干燥的条件优选为真空度0.1Mpa，100℃干燥2h，再80℃干燥3h。
在本发明中，当步骤(1)所述溶剂优选为水时，还包括将所述含有牛大力水提物的药液与无水乙醇混合至无水乙醇在混合液中的体积分数为80％～90％时，静置46～50h，过滤得滤液和沉淀；将所述沉淀真空干燥，获得的牛大力提取物为牛大力多糖；将所述滤液浓缩、干燥，获得的牛大力提取物为牛大力多糖滤液。
本发明对于含牛大力水提物的药液与无水乙醇的混合方式没有特殊限定，采用本领域常规混合方式即可；本发明对于无水乙醇没有特殊限定，采用本领域常规用无水乙醇即可；在本发明中，所述无水乙醇在混合液中的体积分数优选为85％；本发明中，所述静置的时间优选为48h，所述静置的温度优选为17～23℃，更优选的为20℃；本发明中，所述浓缩优选的为旋转蒸发浓缩，所述旋转蒸发浓缩的冷凝温度优选为-2～3℃，加热温度优选为35～60℃，所述旋转蒸发浓缩所得的浓缩物和原始溶液的体积比优选为1：15～17，更优选为1：16；本发明中，所述干燥优选的为真空干燥，所述真空干燥的条件优选为真空度0.1Mpa，100℃干燥2h，再80℃干燥3h。
在本发明中，当步骤(1)所述溶剂优选为体积分数70％～80％的乙醇水溶液时，将牛大力与体积分数70％～80％的乙醇水溶液按质量体积比为1g：9～11ml的比例混合，浸泡；提取1～2h，收集提取液，过滤得含有牛大力醇提物的药液；浓缩、干燥，获得牛大力醇提物。
在本发明中，所述溶剂更优选为体积分数75％的乙醇水溶液；本发明对于所述混合的方式没有特殊限定，采用本领域常规混合方式即可；本发明中，牛大力与乙醇水溶液的质量体积比优选为1g：10ml；本发明中，所述浸泡的时间优选的为10～14h，更优选的为12h，所述浸泡的温度优选的为17～23℃，更优选的为20℃；本发明中，所述提取的方式优选的为加热回流提取，所述加热回流提取的温度优选为90～110℃，更优选为100℃，所述提取的时间优选为1.5h；在本发明中，过滤的方式优选的为用双层200目绢布过滤；本发明中，所述浓缩优选的为旋转蒸发浓缩，所述旋转蒸发浓缩的冷凝温度优选为-2～3℃，加热温度优选为35～60℃，所述旋转蒸发浓缩所得的浓缩物和原始溶液的体积比优选为1：15～17，更优选为1：16；本发明中，所述干燥优选的为真空干燥，所述真空干燥的条件优选为真空度0.1Mpa，100℃干燥2h，再80℃干燥3h。
本发明还提供了根据上述制备方法制备所得的牛大力提取物，所述牛大力提取物优选为牛大力水提物、牛大力醇提物、牛大力多糖或牛大力多糖滤液。
本发明还提供了上述牛大力提取物在制备降血脂和/或减肥药品中的应用。在本发明中，所述的降血脂和/或减肥药品优选的包括所述牛大力提取物以及药学上可接受的载体。在本发明中，所述药品中牛大力提取物所占的质量百分含量优选为10％-25％。
下面结合实施例对本发明提供的技术方案进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。
实施例1
牛大力水提物的制备
(1)取160g牛大力粉碎，装入3L圆底烧瓶中，加入1600ml的水，20℃浸泡2h。
(2)将圆底烧瓶置于加热套中，250℃加热煮沸后，调整为115℃提取1.5h，收集提取液；再加入1600ml的水，250℃加热煮沸后，调整为115℃加热提取1.5h，收集提取液；合并两次提取液，用双层200目绢布过滤，得到含有牛大力水提物的药液。
(3)将含有牛大力水提物的药液倒入旋转蒸发仪中，冷井为-2℃，水浴锅为50℃，旋蒸浓缩至100ml，收集浓缩液，将浓缩液进行真空干燥：真空度0.1Mpa，100℃干燥2h，再80℃干燥3h，得到干燥的牛大力水提物。
实施例2
牛大力多糖和牛大力多糖滤液的制备
(1)取160g牛大力粉碎，装入3L圆底烧瓶中，加入1600ml的水，20℃浸泡2h。
(2)将圆底烧瓶置于加热套中，250℃加热煮沸后，调整为115℃提取1.5h，收集提取液；再加入1600ml的水，250℃加热煮沸后，调整为115℃加热提取1.5h，收集提取液；合并两次提取液，用双层200目绢布过滤，得到含有牛大力水提物的药液；在含有牛大力水提物的药液中加入无水乙醇，直至无水乙醇在混合液中的体积分数为85％，20℃浸泡48h，用双层200目绢布过滤，得到滤液和沉淀。
(3)将沉淀进行真空度0.1Mpa，100℃干燥2h，再80℃干燥3h的真空干燥，得到干燥的牛大力多糖；
将滤液倒入旋转蒸发仪中，冷井为-2℃，水浴锅为50℃，旋蒸浓缩至100ml，收集浓缩液，将浓缩液进行真空度0.1Mpa，100℃干燥2h，再80℃干燥3h的真空干燥，得到干燥的牛大力多糖滤液。
实施例3
牛大力醇提物的制备
(1)取80g牛大力粉碎，装入1000ml圆底烧瓶中，加入800ml的75％乙醇溶液，20℃浸泡12h。
(2)将1000ml圆底烧瓶置于加热套中，100℃加热并回流提取1.5h，收集提取液，用双层200目绢布过滤，得到含有牛大力醇提物的药液。
(3)将含有牛大力醇提物的药液倒入旋转蒸发仪中，冷井为-3℃，水浴锅为50℃，旋蒸浓缩至50ml，收集浓缩液，将浓缩液真空干燥：真空度0.1Mpa，100℃干燥2h，再80℃干燥3h，得到干燥的牛大力醇提物。
实施例4
按照如下公式分别计算实施例1-3所述制备方法制备所得的牛大力提取物的提取率，结果如表1所示。
提取率＝干燥物重量/牛大力原料重量
表1牛大力样品提取结果
实施例5
牛大力样品对前体脂肪细胞增殖的影响
用完全培养基(DMEM培养基中添加10％体积比胎牛血清、共1％体积比的青霉素和链霉素)在37℃、5％CO2饱和湿度培养箱内培养3T3-L1前体脂肪细胞，根据细胞生长状态，每2-3d换液1次。
取对数生长期3T3-L1前体脂肪细胞，胰酶消化后，培养基重悬成单个细胞，稀释细胞浓度至5×104个/ml，接种至RTCA专用细胞增殖检测培养板，每孔加100μL细胞悬液，细胞贴壁后，加入含不同浓度的牛大力提取物(其中牛大力水提物的浓度分别为0.25mg/ml、0.5mg/ml，牛大力多糖的浓度分别为0.25mg/ml、0.5mg/ml，牛大力多糖滤液的浓度分别为0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml，牛大力醇提物的浓度分别为0.25mg/ml、0.5mg/ml、1mg/ml)的培养基，设空白对照组(培养基不含有牛大力提取物)，采用RTCA软件实时动态监测，仪器软件观测3T3-L1前体脂肪细胞增殖曲线。
由图2、3、4、5可知，与空白对照组相比，不同浓度的牛大力水提物、牛大力多糖、牛大力多糖滤液、牛大力醇提物均能抑制3T3-L1前体脂肪细胞的增殖，且抑制能力随着牛大力提取物浓度的增加而增强。
实施例6
抑制前体脂肪细胞诱导分化为脂肪细胞
将实施例5所述处于对数生长期的3T3-L1细胞以1×105个/ml的密度接种于96孔板中，每孔100μl。48h后用含0.5mmol/L IBMX、1μmol/L***、10mg/L胰岛素、不同浓度牛大力提取物(0.1mg/ml牛大力水提物、0.1mg/ml牛大力多糖、1mg/ml牛大力多糖滤液、1mg/ml牛大力醇提物)的培养基诱导分化48h，然后用含10mg/L胰岛素的培养基培养48h，最后用完全培养基(DMEM培养基中添加10％体积比胎牛血清、共1％体积比的青霉素和链霉素)继续培养，每2d换液1次，培养第4天细胞分化为成熟脂肪细胞后用油红O进行染色。倒置显微镜下观察脂滴形成情况并拍照。
由图6可知，与空白对照组相比，牛大力水提物、牛大力多糖、牛大力多糖滤液、牛大力醇提物均能抑制3T3-L1前体脂肪细胞转化为脂肪细胞，能减少油红O染色脂滴，可见对脂滴形成具有抑制作用，具有抗肥胖的效果。
实施例7
临床资料：选取年龄在20-60岁之间志愿者12人，此前未服用过同类保健品或药品。
治疗方法：选取本发明实施例2制备所得的牛大力多糖，开水冲服，饭后服用，2.5g/次，一天两次，4周1个疗程。
观察指标：体重。
试验期间，各志愿者均按照各自以往的饮食、作息、运动等生活习惯生活，试验初，分别对志愿者称重，记录；此后每周同一时间用同一台称称量体重，记录，共记录八周，将结果进行统计分析。
由图7、8可知，体验者8周内体重均呈现下降趋势，相应的BMI指数也呈现下降趋势，大部分体验者逐渐趋向正常范围，12#志愿者由于初始体重和初始BMI指数过高，8周后未能降到正常水平，但是整个8周内其体重逐渐降低，BMI在逐渐减小。
另外，各志愿者在服用本发明所述牛大力多糖期间，未出现身体不适、过敏等症状。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。