鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的用途及提取方法
阅读说明：本技术 鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的用途及提取方法 (Application and extraction method of caulis Spatholobi and similar medicinal materials of caulis Spatholobi and Leguminosae ) 是由 杨彩艳 王金花 周柳芳 元辉雄 黎飚 潘兴寿 韦宝敏 邓百路 史沛钊 顾建忠 蔡 于 2020-12-31 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的应用,鸡血藤和/或鸡血藤豆科类似药材在制备治疗肌肉减少症或治疗动脉粥样硬化的药物中的用途。可单独采用一种或多种鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材提取物或将其一种或多种上述提取物与其它药材配伍,实现多成分、多靶点、协同作用增强降血脂、改善血液流变学、促进肌细胞增殖等防治少肌症的同时兼顾防治心脑血管疾病、月经病、骨质疏松症、咳嗽症等药效。(The invention discloses application of caulis spatholobi and similar medicinal materials of caulis spatholobi leguminosae, and application of caulis spatholobi and/or similar medicinal materials of caulis spatholobi leguminosae in preparing a medicament for treating sarcopenia or atherosclerosis. One or more caulis Spatholobi and similar extract of caulis Spatholobi and Leguminosae family medicinal materials can be independently adopted or one or more of the above extracts can be compatible with other medicinal materials, so that the effects of preventing and treating sarcopenia, cardiovascular and cerebrovascular diseases, menstrual diseases, osteoporosis, cough and the like are realized while the effects of multiple components, multiple target spots and synergistic action are realized, the blood fat is enhanced, the hemorheology is improved, the muscle cell proliferation is promoted and the like are prevented and treated.)
技术领域
本发明涉及中药应用技术领域，特别涉及一种鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的用途及提取方法。
背景技术
中药鸡血藤为密花豆属(Spatholobus)三叶鸡血藤(密花豆，suberectus)的根茎，味苦、甘，性微温，归肝、肾经，具有活血补血、调经止痛、舒筋活络等功效，主治腰膝酸痛、麻木瘫痪、月经不调等病症。鸡血藤豆科类似药材有密花豆属(Spatholobus)红血藤(sinensis)，崖豆藤属(Millettia)海南崖豆藤(毛瓣鸡血藤，pachyloba)、印度崖豆(印度鸡血藤，pulchra)、昆明鸡血藤(网络崖豆藤，reticulata)原变种、香花崖豆藤(山鸡血藤，dielsiana)、喙果崖豆藤(血皮藤、老虎豆，tsui)和亮叶崖豆藤的三个变种(亮叶崖豆藤：nitida，丰城鸡血藤：hirsutissima和峨眉崖豆藤，黧豆属(Mucuma)大果油麻藤(黑血藤、血藤、长荚油麻藤、老鸦花藤，castanea或macrocarpa)及白花油麻藤(大兰布藤、火血藤，birdwoodiana)。目前野生鸡血藤已经濒临灭绝，现在普遍使用种植鸡血藤或鸡血藤豆科类似药材作为替代品；鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材在妇科疾病如月经不调、痛经、闭经等月经病、心脑血管疾病和贫血病中应用比较广泛，但没有用于少肌症的报道。
肌肉减少症(Sarcopenia)，临床上也将其称为“骨骼肌衰老”或“少肌症”是指因持续骨骼肌量流失、强度和功能下降而引起的综合症，是与增龄相关的骨骼肌容积和功能下降，是一种老年综合征；骨骼肌是人体运动系统的动力，肌肉的衰老和萎缩是人体衰老的重要标志，非常容易引起骨折以及关节损伤等问题；患有肌肉减少症的老年人站立困难、步履缓慢、容易跌倒骨折，肌肉减少症还会影响器官功能，可能会引发心脏和肺部衰竭，甚至死亡。
少肌症与活动能力下降、跌倒、失能及病死率等不良预后密切相关，最常见的诱因为老化、肿瘤、营养不良，其中以老化最为重要。现阶段少肌症的治疗主要以功能锻炼、营养干预和激素等，但效果欠佳且不良反应大。
公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。
发明内容
本发明的目的在于提供一种鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的用途，鸡血藤和/或鸡血藤豆科类似药材作为制备治疗肌肉减少症的药物的用途。鸡血藤和/或鸡血藤豆科类似药材作为制备治疗动脉粥样硬化药物的用途。
本发明的另一个目的在于提供一种鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的提取方法。
为实现上述目的，本发明提供了一种鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的应用，鸡血藤和/或鸡血藤豆科类似药材在制备治疗肌肉减少症药物中的用途；或鸡血藤和/或鸡血藤豆科类似药材在制备治疗动脉粥样硬化药物中的用途。
即用于治疗肌肉减少症的药物中含有鸡血藤和/或鸡血藤豆科类似药材。用于治疗动脉粥样硬化的药物中含有鸡血藤和/或鸡血藤豆科类似药材。
优选地，上述技术方案中，所述鸡血藤为鸡血藤提取物，所述鸡血藤豆科类似药材为鸡血藤豆科类似药材的提取物。
优选地，上述技术方案中，所述鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材包括：鸡血藤(为三叶鸡血藤)、红血藤、海南崖豆藤、印度崖豆、昆明鸡血藤、香花崖豆藤、喙果崖豆藤、亮叶崖豆藤、丰城鸡血藤、峨眉崖豆藤、大果油麻藤、白花油麻藤。
优选地，上述技术方案中，所述鸡血藤和/或鸡血藤豆科类似药材采用全株植物或其中任一部位的鲜品或干品。
优选地，上述技术方案中，鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的提取物，采用常规方法制备而得。
优选地，上述技术方案中，鸡血藤及鸡血藤科类似药材的提取物，提取方法包括以下步骤：
(1)制备提取液
将原料依次与不同浓度的乙醇溶液在20-60℃条件下浸渍2-72h过滤，滤液静置沉淀取上清液，将不同浓度的上清液合并混合；滤渣和沉淀物再用沸水提取多次，每次5-30min后过滤，滤液静置沉淀取上清液，将多次沸水提取的上清液合并；将乙醇提取的上清液和沸水提取的上清液合并得到提取液；
(2)干燥
将步骤(1)制得的澄清液进行浓缩、干燥得到提取物干品。
优选地，上述技术方案中，步骤(1)将原料依次与质量浓度为90％、50％和10％的乙醇溶液浸渍3次，即原料先在质量浓度为90％的乙醇溶液中浸渍，取出原料再在质量浓度为50％的乙醇溶液中浸渍，取出原料再在质量浓度为10％的乙醇溶液中浸渍。原料和乙醇溶液浸渍的比例是，1kg原料加1-3L乙醇溶液，在浸渍过程中每隔0.5-3h搅拌一次，搅拌时间为5-30min。
优选地，上述技术方案中，步骤(1)制得澄清液后，在澄清液中加入脱色剂进行除杂脱色，所述脱色剂包括活性炭和活性白土，混合的质量比为1:5-15。
优选地，上述技术方案中，步骤(2)中浓缩干燥为，将步骤(2)澄清液置于减压浓缩装置中50-55℃中减压浓缩，浓缩液放入减压干燥箱中于30-55℃条件下减压干燥40-60h，真空度为-0.1至-0.05MPa，得到提取物干品。
优选地，上述技术方案中，步骤(2)中真空度为-0.06至-0.05MPa，保持温度在50-55℃，浓缩10-50倍。
鸡血藤及豆科类似药材的药效及行为归经：
鸡血藤(密花豆，三叶鸡血藤)味苦、微甘，性温，归肝、肾经，具有活血养血、调经止痛、舒筋活络等功效；主治手足麻木、肢体瘫痪、风湿痹痛、月经不调、痛经、闭经等。
红血藤味甘、性温，具有活血补血功效；主治贫血、闭经、月经不调、筋骨疼痛。
昆明鸡血藤(网络崖豆藤)味苦、涩、味甘，性温，具有补血止血、活血通经络；主治血虚体弱、老伤筋骨、月经不调、闭经、产后腹痛、恶露不尽、各种出血、风湿痹痛、跌打损伤。
亮叶崖豆藤味苦，性温，具有活血补血、舒经活络的功效；主治贫血、产后虚弱、头晕目眩、月经不调、风湿痹痛、四肢麻木。
丰城鸡血藤味苦、味甘，性温，具有活血补血、舒筋活络的功效；主治血虚体弱、月经不调、风湿痹痛、小儿麻痹症、跌打损伤。
大果油麻藤(黑血藤)味苦、涩，性凉，具有活血补血、清肺润燥、通经活络的功效；主治贫血、月经不调、肺热燥咳、咳血、腰膝酸痛、风湿痹痛、手足麻木、瘫痪。
白花油麻藤(火血藤)味苦、甘，性平，具有活血补血和通经活络的功效，主治贫血、白细胞减少症、月经不调、麻木瘫痪和腰腿酸痛。
现代药理学研究表明鸡血藤具有扩血管、抗血小板聚集、延长凝血时间、促进磷代谢药效。红血藤能延长兔血清血凝时间，抑制兔血小板聚集和红细胞凝聚。丰城鸡血藤能抑制兔血小板聚集和红细胞凝聚，对甲醛性“关节炎”有明显的抑制作用，大鼠腹腔注射其酊剂具有镇静催眠作用。网络崖豆藤具有抑制血小板聚集的药效。火血藤能抑制前列腺素的生物合成和血小板聚集。
与现有技术相比，本发明具有如下有益效果：
(1)本发明的药物，以鸡血藤和/或鸡血藤豆科类似药材为活性成分，加入药剂学中可接受的辅料等其他成分，可用于制备治疗肌肉减少症的药物或制备治疗动脉粥样硬化的药物。
(2)鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材均具有活血养血、痛经活络等防治心肌减少、月经病、心脑血管疾病、贫血病和骨质疏松证的药效；而且在鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材中鸡血藤降血脂作用最强，而黑血藤和昆明鸡血藤活血药效比鸡血藤强；另外黑血藤还有滋阴润肺的功效。因此根据中医药学中同类药材相须为用及不同药材君臣佐使的配伍思想，可以根据患者其它诸如心脑血管疾病、贫血病、月经病、骨质疏松和咳嗽等不同的临床兼证，可单独采用一种或多种鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材提取物或将其一种或多种上述提取物与其它药材配伍，实现多成分、多靶点、协同作用增强降血脂、改善血液流变学、促进肌细胞增殖等防治少肌症的同时兼顾防治心脑血管疾病、月经病、骨质疏松症、咳嗽症等药效。
(3)鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材都易种植，因此各药材均是中医药学中常用易得的药物且成本低廉、加工简单。根据患者病情及需要可加工成丸剂、颗粒剂及汤剂，易于服用。同时，针对少肌症常兼有心脑血管疾病、月经病、贫血病和骨质疏松症等一种或多种症状可实现兼顾防治；所用药材属于天然药物且各药材均无毒，性温或微温或平或凉，同类药材相须为用后即可实现体热、体寒者均可长期服用，避免长期服用化学合成药物带来的副作用和耐药性，符合少肌症防治用药特点。
附图说明
图1是使用不同药材对家兔主动脉弓影响的病理切片图；
图2是使用不同药材对家兔比目鱼肌影响的病理切片图。
图3是使用不同药材对家兔比目鱼肌病理切片横截面积图。
图1-3中A为正常组、B为高脂组、C为黑血藤组、D为鸡血藤组。
具体实施方式
下面结合附图，对本发明的具体实施方式进行详细描述，但应当理解本发明的保护范围并不受具体实施方式的限制。
除非另有其它明确表示，否则在整个说明书和权利要求书中，术语“包括”或其变换如“包含”或“包括有”等等将被理解为包括所陈述的元件或组成部分，而并未排除其它元件或其它组成部分。
制备鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的提取物，提取方法包括以下步骤：
(1)制备提取液
以鸡血藤为原料，将鸡血藤切成薄片、晒干或风干，取5kg依次使用90％、50％和10％的乙醇于20-60℃浸渍3次，每次2-72小时过滤，原料和乙醇溶液浸渍的比例是，每千克原料加1-3L乙醇溶液，在浸渍过程中每隔0.5-3h搅拌一次，搅拌时间为5-30min，滤液静置沉淀取上清液，合并；滤渣和沉淀物再用沸水提取2次，每次5-30min，过滤，滤液静置沉淀取上清液，将多次沸水提取的上清液合并；将乙醇提取的上清液和沸水提取的上清液合并得提取液。
(2)除杂、脱色
在步骤(1)澄清液中加入质量比活性炭：活性白土＝1﹕5-15的混合脱色剂2000g除杂脱色，脱色后溶液呈极淡黄色。
(3)干燥
将步骤(2)处理后的澄清液置于减压浓缩装置中于50-55℃中减压浓缩，浓缩液放入减压干燥箱中于30-55℃条件下减压干燥约48h，真空度为-0.08至-0.1MPa，浓缩10-50倍，得到鸡血藤提取物干品。
重复上述提取操作，对鸡血藤豆科类似药材，如红血藤、海南崖豆藤、印度崖豆、昆明鸡血藤、香花崖豆藤、喙果崖豆藤、亮叶崖豆藤、丰城鸡血藤、和峨眉崖豆藤、大果油麻藤和白花油麻藤等进行提取，获得鸡血藤豆科类似药材提取物。
实施例1
制备鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的提取物，提取方法包括以下步骤：
(1)制备提取液
以鸡血藤为原料，将鸡血藤切成薄片、晒干或风干，取5kg依次使用90％、50％和10％的乙醇于30℃浸渍3次，每次72小时过滤，原料和乙醇溶液浸渍的比例是，每千克原料加1L乙醇溶液，在浸渍过程中每隔1h搅拌一次，搅拌时间为15min，滤液静置沉淀取上清液，合并；滤渣和沉淀物再用沸水提取2次，每次30min，沉淀取上清液，将多次沸水提取的上清液合并；将乙醇提取的上清液和沸水提取的上清液合并得提取液。
(2)除杂、脱色
在步骤(1)澄清液中加入质量比活性炭：活性白土＝1﹕10的混合脱色剂2000g除杂脱色，脱色后溶液呈极淡黄色。
(3)干燥
将步骤(2)处理后的澄清液置于减压浓缩装置中于50-55℃中减压浓缩，浓缩液放入减压干燥箱中于45℃条件下减压干燥约48h，真空度为-0.08MPa，浓缩30倍，得到鸡血藤提取物干品。
重复上述提取操作，对鸡血藤豆科类似药材，如红血藤、海南崖豆藤、印度崖豆、昆明鸡血藤、香花崖豆藤、喙果崖豆藤、亮叶崖豆藤、丰城鸡血藤、和峨眉崖豆藤、大果油麻藤和白花油麻藤等进行提取，获得鸡血藤豆科类似药材提取物。
实施例2
制备鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材的提取物，提取方法包括以下步骤：
(1)制备提取液
以鸡血藤为原料，将鸡血藤切成薄片、晒干或风干，取5kg依次使用90％、50％和10％的乙醇于50℃浸渍3次，每次36小时后过滤，原料和乙醇溶液浸渍的比例是，每千克原料加1.5L乙醇溶液，在浸渍过程中每隔0.5h搅拌一次，搅拌时间为10min，滤液静置沉淀取上清液，合并；滤渣再用沸水提取2次，每次10min，沉淀取上清液，将多次沸水提取的上清液合并；将乙醇提取的上清液和沸水提取的上清液合并得提取液。
(2)除杂、脱色
在步骤(1)澄清液中加入质量比活性炭：活性白土＝1﹕5的混合脱色剂2000g除杂脱色，脱色后溶液呈极淡黄色。
(3)干燥
将步骤(2)处理后的澄清液置于减压浓缩装置中于50-55℃中减压浓缩，浓缩液放入减压干燥箱中于30℃条件下减压干燥约48h，真空度为-0.1MPa，浓缩10倍，得到鸡血藤提取物干品。
重复上述提取操作，对鸡血藤豆科类似药材，如红血藤、海南崖豆藤、印度崖豆、昆明鸡血藤、香花崖豆藤、喙果崖豆藤、亮叶崖豆藤、丰城鸡血藤、和峨眉崖豆藤、大果油麻藤和白花油麻藤等进行提取，获得鸡血藤豆科类似药材提取物。
实施例3
制备鸡血藤和鸡血藤豆科类似药材的提取物，提取方法包括以下步骤：
(1)制备提取液
以鸡血藤为原料，将鸡血藤切成薄片、晒干或风干，取1kg依次使用90％、50％和10％的乙醇于60℃浸渍3次，每次12小时后过滤，原料和乙醇溶液浸渍的比例是，每千克原料加3L乙醇溶液，在浸渍过程中每隔3h搅拌一次，搅拌时间为30min，沉淀取上清液，合并；滤渣和沉淀物再用沸水提取2次，每次90min，沉淀取上清液，将多次沸水提取的上清液合并；将乙醇提取的上清液和沸水提取的上清液合并得提取液。
(2)除杂、脱色
在步骤(1)澄清液中加入质量比活性炭：活性白土＝1﹕15的混合脱色剂2000g除杂脱色，脱色后溶液呈极淡黄色。
(3)干燥
将步骤(2)处理后的澄清液置于减压浓缩装置中于50-55℃中减压浓缩，浓缩液放入减压干燥箱中于55℃条件下减压干燥约48h，真空度为-0.08MPa，浓缩20倍，得到鸡血藤提取物干品。
重复上述提取操作，对鸡血藤豆科类似药材，如红血藤、海南崖豆藤、印度崖豆、昆明鸡血藤、香花崖豆藤、喙果崖豆藤、亮叶崖豆藤、丰城鸡血藤、和峨眉崖豆藤、大果油麻藤和白花油麻藤等进行提取，获得鸡血藤豆科类似药材提取物。
实施例4
本实施例与实施例1的不同在于，在步骤(4)干燥为，在58℃条件下减压干燥约48h，真空度为-0.55MPa，保持温度在55℃，浓缩13倍。
实施例5
对鸡血藤及鸡血藤豆科类似药材提取物的体内药效学实验
①试验动物：清洁型新西兰家兔58只，雌雄各半，体重(2.25±0.25)kg。实验分正常组、鸡血藤组、黑血藤组、昆明鸡血藤组和模型组，每组8只，单笼饲养。
②高脂饲料制备：家兔高脂饲料配方为1.0％胆固醇、8％猪油、4％蛋黄粉、87.0％基础饲料。
③试验方法：分别将各药材不同梯度提取液混合并减压浓缩的各药材提取物浓缩液，空白组喂食正常饲料、实验组喂食髙脂饲料并口服给药、模型组喂食髙脂饲料，每天每只喂食120g；实验组均按10.4g药材提取物/天/只给药，连续饲养60天。分别于实验60d耳缘静脉取血分析血脂五项、血液流变学、SOD等血液指标；药效实验结束耳缘静脉取血后再在乌拉坦麻醉下解剖动物，迅速取出心脏、主动脉和比目鱼肌；将主动脉从心脏与主动脉连接的位置及髂动脉分支处剪断，离体后纵向剪开主动脉并剥离动脉外膜获得主动脉弓，主动脉弓和比目鱼肌标本予10％中性福尔马林溶液固定，待苏丹IV染色及病理检查。
④试验结果：
见表1-2和图1-3。表1为鸡血藤、黑血藤和昆明鸡血藤部分对动脉粥样硬化家兔SOD及脂质代谢的影响。表2为鸡血藤、黑血藤和昆明鸡血藤对动脉粥样硬化家兔血液流变学的影响。
如图1所示，图1中A为正常组、B为模型组、C为鸡血藤组、D为黑血藤组。由主动脉弓病理切片结果显示正常组家兔主动脉管腔光滑完整、无粥样病损、无脂质斑块形成，模型组家兔主动脉内膜粗糙不平、有大量黄白色条纹状脂纹及斑块、向内膜表面显著隆起；鸡血藤组无脂质斑块但官腔不如正常组家兔光滑完整，黑血藤组有少量脂质斑块、内膜表面亦凸起但病变程度均较模型组清(见图1)。
如图2和图3所示，图2和图3中A为正常组、B为模型组、C为黑血组、D为鸡血藤组。图3中，纵坐标为肌肉横截面积的占比(％)。比目鱼肌病理切片结果显示模型组比目鱼肌肌肉内部裂纹和正常组相比裂纹增多、肌肉面积和正常组相比也明显减少，鸡血藤组和黑血藤组裂纹比正常组和模型组都减少、肌肉面积面积都增大，其中黑血藤变化比鸡血藤明显；由此可见高脂饮食会影响比目鱼肌的生理运动功能、导致肌少症疾病的发生和加速病情的发展，而本发明的鸡血藤提取物则可以减缓或预防肌少症的发生，其中黑血藤防治肌少症的药效要优于鸡血藤。
表1鸡血藤、黑血藤和昆明鸡血藤对动脉粥样硬化家兔SOD的影响及脂质代谢的影响
注：与模型组相比,★p<0.05，☆p<0.01；与正常组相比，▲p<0.05，△p<0.01，mmol/l，x±s，n＝8，“―”未测
由表1可知鸡血藤组、昆明鸡血藤组和黑血藤组TG、TC和LDL-C实验结束时虽高于正常组但都明显低于模型组，鸡血藤组最低；由此可见鸡血藤、昆明鸡血藤和黑血藤均对血脂升高有预防药效但鸡血藤药效最好；由表1可知SOD(超氧化物歧化酶)含量各组间差异不大且不具有统计意义，推测三种药材抗氧化活性较弱或不具有抗氧化活性。
表2鸡血藤、黑血藤和昆明鸡血藤对动脉粥样硬化家兔血液流变学的影响
注：与模型组相比,★p<0.05，☆p<0.01；与正常组相比，▲p<0.05，△p<0.01
表2中鸡血藤组、昆明鸡血藤组和黑血藤组大部分指标都介于实验组和模型组之间，其它两组与模型组相差比鸡血藤组明显但两组之间差别不大，血液流变学中大部分差异都具有统计意义；由此可见黑血藤和昆明鸡血藤改善血液流变学药效优于鸡血藤，两组药效差别不大。
实施例6
对鸡血藤药材提取物的体外药效学实验
(1)细胞培养
将C2C12小鼠成肌细胞接种于培养液(含10％胎牛血清)中，放置37℃、5％CO2培养箱中培养。
(2)体外促进C2C12小鼠成肌细胞增殖实验测试
收集对数期细胞，调整细胞悬液浓度为1×105个/mL，接种于96孔培养板，每孔100uL。将培养板放在培养箱中(37℃，5％CO2)预培养24h后加药。实验设定给药组(含细胞液、培养液、及药物，药物浓度设置2mg/ml、1.5mg/ml、1mg/ml和0.5mg/ml)和空白组(含细胞液和培养液)，每孔加入10uL药物置于37℃、饱和湿度、5％CO2的条件下培养24h。24h后向每孔中加入10uLCCK-8溶液，继续培养4h，用酶标仪测定在450nm处的吸光度。
(3)实验结果
表3鸡血藤对C2C12小鼠成肌细胞增殖影响
由表3可知，鸡血藤提取物浓度达到1.0mg/ml时就可以较好的促进C2C12小鼠成肌细胞增殖，在本实验的四个浓度中，浓度为2.0mg/ml时药效最好，但药效与浓度关系曲线转折是的浓度是1.0mg/ml。
前述对本发明的具体示例性实施方案的描述是为了说明和例证的目的。这些描述并非想将本发明限定为所公开的精确形式，并且很显然，根据上述教导，可以进行很多改变和变化。对示例性实施例进行选择和描述的目的在于解释本发明的特定原理及其实际应用，从而使得本领域的技术人员能够实现并利用本发明的各种不同的示例性实施方案以及各种不同的选择和改变。本发明的范围意在由权利要求书及其等同形式所限定。