一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法
阅读说明：本技术 一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法 (Preparation method of azithromycin sustained-release eye drops ) 是由 不公告发明人 于 2020-05-07 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法,通过葡萄糖醛酸改性磷脂乙醇胺获得磷脂乙醇胺衍生物,将磷脂乙醇胺衍生物作为乳化剂制备得到阿奇霉素滴眼液,具有减缓阿奇霉素释放速度的效果；磷脂乙醇胺衍生物的制备条件为：将葡萄糖醛酸和磷脂乙醇胺加入环己烷溶剂中,加入催化剂氯化亚锡,温度120-160℃,回流时间1-6h,反应完成后采用硅胶柱层析法利用1：1-4的氯仿和甲醇的混合溶液洗脱分离得到磷脂乙醇胺衍生物。本发明得到的阿奇霉素滴眼液具有减缓了阿奇霉素的释放速度的效果,以及提高了阿奇霉素在乳化液中的包封率的效果。(The invention discloses a preparation method of azithromycin sustained-release eye drops, which is characterized in that phospholipid ethanolamine derivatives are obtained by modifying phospholipid ethanolamine with glucuronic acid, and the azithromycin eye drops are prepared by taking the phospholipid ethanolamine derivatives as an emulsifier, and have the effect of slowing down the release speed of azithromycin; the preparation conditions of the phospholipid ethanolamine derivative are as follows: adding glucuronic acid and phosphatide ethanolamine into a cyclohexane solvent, adding a catalyst stannous chloride, heating at 120 ℃ and 160 ℃, refluxing for 1-6h, and performing a reaction by a silica gel column chromatography method by using a reaction condition that 1: 1-4 mixed solution of chloroform and methanol is eluted and separated to obtain the phosphatide ethanolamine derivative. The azithromycin eye drops obtained by the invention have the effects of slowing down the release speed of azithromycin and improving the encapsulation rate of azithromycin in emulsion.)
技术领域
本发明属于药物制剂领域，具体涉及一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法。
背景技术
阿奇霉素是半合成的15元大环内酯类抗生素，其作用主要是干扰敏感微生物的蛋白质合成而达到抑菌效果。阿奇霉素比红霉素更具有抗菌谱广的特点，对各种葡萄球菌、链球菌、杆菌、支原体、衣原体均敏感，对多种致病菌所致的结膜感染均有效，已经被世界卫生组织列入到防治沙眼性结膜炎等眼部感染性疾病的重点药物。阿奇霉素对酸稳定，耐受性好，已成为目前治疗感染的一线药物。眼用药物溶液滴入眼睛内主要是通过角膜和结膜两条途径吸收，大部分药物首先经角膜渗透进入房水，然后分布于周边组织，少量药物通过结膜和巩膜途径进入眼色素膜和玻璃体，而不首先进入房水，所以角膜屏障是药物透过到达眼内的首要限制通道。
磷脂乙醇胺作为磷脂大家庭的一员，是细胞膜磷脂双分子层结构中的重要组成，对维持生物膜的生理活性和机体的正常代谢至关重要，广泛分布于动物、植物以及微生物中。磷脂乙醇胺具有乳化效果，可以用作乳化剂；还可以用来作药物载体，制备脂质体负载药物实现药物缓释。但由于磷脂乙醇胺特殊的分子结构，虽然其具有很多特殊功能，但在应用中也存在许多限制，例如，磷脂乙醇胺中羟基基团少，亲水性能差，表面活性能力弱。
滴眼剂滴入眼表后药物随泪液分泌进行传递，虽具有药物分布均匀的优点，由于眼睑的眨动和结膜囊泪液的分泌及从鼻泪管迅速排除，存在滞留时间短，生物利用度低等问题，在人体内药物与角膜的接触时间大约仅有1-2min，眼部生物利用度一般少于10％，有时为了达到治疗目的，需频繁、高浓度给药，导致患者用药顺从性降低，增加全身不良反应。市场需要一种相容性好、药物技术时间长的新型滴眼剂。
发明内容
1.本发明提供了一种磷脂乙醇胺衍生物，包括利用葡萄糖醛酸与磷脂乙醇胺进行反应得到磷
脂乙醇胺衍生物，其结构式如下：
本发明提供了一种磷脂乙醇胺衍生物的制备方法，包括：将葡萄糖醛酸和磷脂乙醇胺加入溶剂中，加入催化剂，温度120-160℃，回流时间1-6h，反应完成后采用硅胶柱层析法利用洗脱液分离得到磷脂乙醇胺衍生物；溶剂为环己烷，催化剂为氯化亚锡，洗脱液为体积比为1：1-4的氯仿和甲醇的混合溶液。优选地，葡萄糖醛酸的添加量为溶剂的2-10wt％，更为优选地，葡萄糖醛酸的添加量可以为3-8wt％，例如，3.5、4、4.5、5、5.5、6、7、7.5wt％；磷脂乙醇胺的添加量为溶剂的2-6wt％，更为优选地，磷脂乙醇胺的添加量可以为3-5wt％，例如，3.3、3.5、4、4.5、4.8wt％。优选地，葡萄糖醛酸与磷脂乙醇胺的添加比例为质量比1：0.1-1。
本发明提供一种磷脂乙醇胺衍生物在药物缓释中的用途以及在乳化溶液中的用途。
本发明提供了一种乳化液，包含一种磷脂乙醇胺衍生物。优选地，乳化液中磷脂乙醇胺衍生物的成分为1-5wt％；更为优选地，磷脂乙醇胺衍生物的成分可以为1.5-4.5wt％，例如，2、2.5、3、3.5、4wt％。
本发明提供了一种乳化液在滴眼液制备中的用途。
本发明的目的在于提供一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法，通过葡萄糖醛酸改性磷脂乙醇胺获得磷脂乙醇胺衍生物，将磷脂乙醇胺衍生物作为乳化剂制备得到阿奇霉素滴眼液，具有阿奇霉素缓释的效果。
一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法，包括：
将磷脂乙醇胺衍生物加入大豆油中混合均匀形成油相；将阿奇霉素、L-半胱氨酸、甘露醇和山梨酸加入水中，调节pH至6.0-7.0，30-50℃不断地搅拌5-30min形成水相；将油相缓慢地滴加进水相中，同时30-50℃不断地搅拌10-60min后，定容，分装，得阿奇霉素微乳滴眼液。优选地，阿奇霉素的添加量为0.1-2wt％。优选地，磷脂乙醇胺衍生物的添加量为大豆油的1-6wt％。磷脂乙醇胺衍生物作乳化剂，将磷脂乙醇胺衍生物加入大豆油中混合均匀形成油相，在加入水相时，不断搅拌形成乳液，磷脂乙醇胺衍生物中有两条脂肪酸链，降低了乳液界面张力，提高乳液界面膜的柔顺性和牢固性，经过改性后磷脂乙醇胺衍生物中的脂肪酸链、羧基、羟基、羰基等基团在范德化力及包埋作用下，减缓了阿奇霉素的释放速度。
优选地，L-半胱氨酸的添加量为0.04-0.4wt％；更为优选地，L-半胱氨酸的添加量可以为0.05-0.3wt％，例如，0.06、0.08、0.1、0.15、0.2、0.25wt％。滴眼液由油相为主要载体组成，极易氧化，加入L-半胱氨酸作抗氧剂，保证滴眼液的稳定性。
优选地，选择甘露醇调节渗透压在260-320mOsmol/Kg。人体眼睛有渗透压，低渗时使细胞膨胀产生刺激，高渗时对细胞产生脱水而干燥，选择甘露醇作为等渗调节剂，调节渗透压在260-320mOsmol/Kg。
优选地，山梨酸的添加量为0.0005-0.005wt％；更为优选地，山梨酸的添加量可以为0.0008-0.0045wt％，例如，0.001、0.0015、0.002、0.0025、0.003、0.0035、0.004、0.0045wt％。滴眼液会多次开启使用，容易在使用和保存过程中被微生物污染，采用山梨酸用来预防使用过程中微生物的二次污染，并且酸性可以增加阿奇霉素在水溶液中的溶解度，有利于乳液滴眼液的制备。
本发明一实施方式中，在阿奇霉素缓释滴眼液的制备过程中，添加有α-胡萝卜素和橙皮苷，α-胡萝卜素和橙皮苷在溶液中溶于油相，与大豆油和磷脂乙醇胺衍生物形成复合结构，并在界面上形成紧密堆积的络合物膜，使得乳化液的粘度增大，从而抑制了阿奇霉素的运动，提高了阿奇霉素的包封率。
优选地，α-胡萝卜素的添加量为0.1-5wt％；更为优选地，α-胡萝卜素的添加量为0.2-4wt％，例如，0.5、0.8、1、1.5、2、2.5、3、3.5％。
优选地，橙皮苷的添加量为0.1-2wt％；更为优选地，橙皮苷的添加量可以为0.2-1.8wt％，例如，0.3、0.5、0.8、1、1.3、1.5wt％。
本发明由于采用了磷脂乙醇胺衍生物作乳化剂，α-胡萝卜素和橙皮苷作为阿奇霉素滴眼液的添加剂，因而具有如下有益效果：减缓了阿奇霉素滴眼液中阿奇霉素的释放速度，提高了阿奇霉素在乳化液中的包封率。因此，本发明是一种具有药物缓释效果的阿奇霉素滴眼液。
附图说明
图1为本发明的磷脂乙醇胺和磷脂乙醇胺衍生物的红外光谱图；
图2为本发明的阿奇霉素滴眼乳液扫描电镜图；
图3为本发明的阿奇霉素滴眼液药物释放速度图；
图4为本发明的阿奇霉素滴眼液包封率对比图。
具体实施方式
以下结合具体实施方式和附图对本发明的技术方案作进一步详细描述：
实施例1：
一种磷脂乙醇胺衍生物的制备方法，
将葡萄糖醛酸和磷脂乙醇胺加入溶剂中，加入催化剂，温度140℃，回流时间3h，反应完成后采用硅胶柱层析法利用洗脱液分离磷脂乙醇胺衍生物，最后用丙酮提纯；溶剂为环己烷；葡萄糖醛酸的添加量为溶剂的6wt％，磷脂乙醇胺的添加量为溶剂的4wt％；催化剂为氯化亚锡，添加量为环己烷的0.3wt％；洗脱液为体积比为1：2的氯仿和甲醇的混合溶液。
实施例2：
一种乳化液的制备方法，
将磷脂乙醇胺衍生物加入大豆油中混合均匀形成油相；取蒸馏水作水相；将油相缓慢地滴加进水相中，同时40℃不断地搅拌30min后得到乳化液。磷脂乙醇胺衍生物的用量为油相的4wt％，油相与水相的比例为体积比1：1。
实施例3：
一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法，
将磷脂乙醇胺衍生物加入大豆油中混合均匀形成油相；将阿奇霉素、L-半胱氨酸、甘露醇和山梨酸加入水中，用氢氧化钠调节pH至6.5，40℃不断地搅拌20min形成水相；将油相缓慢地滴加进水相中，同时40℃不断地搅拌30min后，定容，分装，得阿奇霉素微乳滴眼液。磷脂乙醇胺衍生物的用量为油相的4wt％，油相与水相的比例为体积比1：1，阿奇霉素的添加量为1.2wt％，L-半胱氨酸的添加量为0.15wt％，甘露醇调节渗透压在260-320mOsmol/Kg，山梨酸的添加量为0.0025wt％。
实施例4：
一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法，
将磷脂乙醇胺衍生物、α-胡萝卜素和橙皮苷加入大豆油中混合均匀形成油相；将阿奇霉素、L-半胱氨酸、甘露醇和山梨酸加入水中，用氢氧化钠调节pH至6.5，40℃不断地搅拌20min形成水相；将油相缓慢地滴加进水相中，同时40℃不断地搅拌30min后，定容，分装，得阿奇霉素微乳滴眼液。磷脂乙醇胺衍生物的用量为油相的4wt％，油相与水相的比例为体积比1：1，阿奇霉素的添加量为1.2wt％，L-半胱氨酸的添加量为0.15wt％，甘露醇调节渗透压在260-320mOsmol/Kg，山梨酸的添加量为0.0025wt％，α-胡萝卜素的添加量为3wt％，橙皮苷的添加量为1wt％。
实施例5：
一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法，
将磷脂乙醇胺衍生物加入大豆油中混合均匀形成油相；将阿奇霉素、L-半胱氨酸、甘露醇和山梨酸加入水中，用氢氧化钠调节pH至6.5，40℃不断地搅拌20min形成水相；将油相缓慢地滴加进水相中，同时40℃不断地搅拌30min后，定容，分装，得阿奇霉素微乳滴眼液。磷脂乙醇胺衍生物的用量为油相的3wt％，油相与水相的比例为体积比1：1，阿奇霉素的添加量为1.2wt％，L-半胱氨酸的添加量为0.15wt％，甘露醇调节渗透压在260-320mOsmol/Kg，山梨酸的添加量为0.0025wt％。
实施例6：
一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法，
将磷脂乙醇胺衍生物、α-胡萝卜素和橙皮苷加入大豆油中混合均匀形成油相；将阿奇霉素、L-半胱氨酸、甘露醇和山梨酸加入水中，用氢氧化钠调节pH至6.5，40℃不断地搅拌20min形成水相；将油相缓慢地滴加进水相中，同时40℃不断地搅拌30min后，定容，分装，得阿奇霉素微乳滴眼液。磷脂乙醇胺衍生物的用量为油相的3wt％，油相与水相的比例为体积比1：1，阿奇霉素的添加量为1.2wt％，L-半胱氨酸的添加量为0.15wt％，甘露醇调节渗透压在260-320mOsmol/Kg，山梨酸的添加量为0.0025wt％，α-胡萝卜素的添加量为2wt％，橙皮苷的添加量为1wt％。
实施例7：
一种阿奇霉素缓释滴眼液的制备方法，
将磷脂乙醇胺衍生物、α-胡萝卜素和橙皮苷加入大豆油中混合均匀形成油相；将阿奇霉素、L-半胱氨酸、甘露醇和山梨酸加入水中，用氢氧化钠调节pH至6.5，40℃不断地搅拌20min形成水相；将油相缓慢地滴加进水相中，同时40℃不断地搅拌30min后，定容，分装，得阿奇霉素微乳滴眼液。磷脂乙醇胺衍生物的用量为油相的4wt％，油相与水相的比例为体积比1：1，阿奇霉素的添加量为1.2wt％，L-半胱氨酸的添加量为0.15wt％，甘露醇调节渗透压在260-320mOsmol/Kg，山梨酸的添加量为0.0025wt％，α-胡萝卜素的添加量为3wt％，橙皮苷的添加量为2wt％。
对比例1：
本对比例与实施例3相比，不同之处仅在于，将磷脂乙醇胺衍生物替换为Span80。
对比例2：
本对比例与实施例3相比，不同之处仅在于，将磷脂乙醇胺衍生物替换为磷酯乙醇胺。
对比例3：
本对比例与实施例4相比，不同之处仅在于，油相中未添加橙皮苷。
对比例4：
本对比例与实施例4相比，不同之处仅在于，油相中未添加α-胡萝卜素。
试验例1：
1.红外检测磷脂乙醇胺
红外光谱分析条件：直接将磷脂乙醇胺放在ATR附件的晶体反射面上，使用FTIR光谱仪进行扫描，扫描频率为4cm-1，扫描次数为32次。
2.红外检测磷脂乙醇胺衍生物
红外光谱分析条件：直接将磷脂乙醇胺衍生物放在ATR附件的晶体反射面上，使用FTIR光谱仪进行扫描，扫描频率为4cm-1，扫描次数为32次。
如图1所示，磷脂乙醇胺的红外光谱中，3424cm-1处为胺基的特征吸收峰；2978、2864cm-1处为甲基、亚甲基的吸收峰，1642cm-1为碳氧双键的吸收峰；1438和1364cm-1为甲基、亚甲基碳氢弯曲振动吸收峰；1248cm-1为磷氧双键的吸收峰；1198cm-1为碳氧伸缩振动吸收峰；1018cm-1为磷氧碳的吸收峰。通过将磷脂乙醇胺衍生物的红外光谱与磷脂乙醇胺的红外光谱进行对比，磷脂乙醇胺衍生物中3483cm-1处为羟基的吸收峰，说明磷脂乙醇胺与葡萄糖醛酸经过反应后羟基数目增加。
试验例2：
1.外观形态
取适量阿奇霉素滴眼液样品，用蒸馏水稀释10倍后，取几微升样品滴在喷碳铜网表面，使液体尽量铺满整个铜网，滴加5微升左右20g/L的磷钨酸溶液(pH为6.5)染色，使其尽量铺开，1min后吸走多余液，空气中晾干后电镜观察粒子形态与大小。
如图2所示：在透射显微镜下看呈球形状，乳液大小均匀。
2.体外释放速度测定
量取不同实施例与对比例得到的阿奇霉素滴眼液2ml加入透析袋内，置于转篮中，按中国药典2015年版溶出度测定要求放至溶出杯中，往杯中倒入预热至37℃的人工泪液500mL为释放介质，调节转速50r/min，温度37℃。分别于0.5、1、2、4、6、8、10h取样2mL(同时补充人工泪液2mL)，离心后采用HPLC法进行分析，以外标法测定各时间点药物的累积释放量。
2.1人工泪液
取氯化钠6.78g，碳酸氢钠2.18g，氯化钾1.38g，二水氯化钙0.084g至烧杯中，加1000mL水溶解，混匀，过滤，即得人工泪液。
2.2标准曲线
精密移取阿奇霉素对照贮备液0.1、0.3、0.6、0.8、1.0、1.2mL，分别置10mL量瓶中，加人工泪液稀释至刻度，制成4、12、24、32、40、48μg/mL的系列对照溶液。精密吸取100μL系列对照溶液注入液相色谱仪，记录峰面积。以对照品浓度(Y)为纵坐标、峰面积A为横坐标，绘制标准曲线，所得回归方程为Y＝8961.2164X-5943.2675，线性范围4-48μg/mL，相关系数R2＝0.9996。
如图3所示，对比例1采用的Span80作乳化剂得到的阿奇霉素滴眼液有最高的药物释放速度；对比例2与对比例1相比，对比例2采用磷脂乙醇胺作乳化剂得到的阿奇霉素滴眼液的药物释放速度接近对比例1的阿奇霉素滴眼液的药物释放速度，说明磷脂乙醇胺作乳化剂对阿奇霉素的缓释作用有限；实施例3与对比例2相比，实施例3采用实施例1得到的磷脂乙醇胺衍生物作乳化剂得到的阿奇霉素滴眼液具有好的缓释效果，提高了滴眼液中阿奇霉素的缓释效果；实施例5和实施例3相比，实施例5减少了磷脂乙醇胺衍生物的使用量，对阿奇霉素缓释效果的影响不大；实施例4、实施例6和实施例7与实施例3相比，实施例4、实施例6和实施例7得到的滴眼液中阿奇霉素的释放速度与实施例3没有明显差异，说明实施例4、实施例6和实施例7中添加的α-胡萝卜素和橙皮苷对阿奇霉素的缓释速度没有影响。
3.包封率测试
配置浓度1.0％的阿奇霉素枸橼酸溶液，与等体积1.0％的不同实施例及对比例得到的阿奇霉素滴眼液混合，把阿奇霉素溶液分别注入Sephadex-G50凝胶柱中，以去离子水为洗脱液，流速约lml/min，每1ml收集一管，待带有明显乳光的胶体分散系流出后，收集洗脱液，接至洗脱液澄清，将接出的各管洗脱液用乙腈稀释至10ml，目的是将微乳进行破乳，使其包裹的药物释放并溶解在介质中从而进行HPLC测定药物含量，将各管中阿奇霉素的量相加计算包封率。
包封率计算公式如下：
包封率(％)＝微乳中所包裹的药物总量/加入药物总量×100％
如图4所示，对比例1中采用Span80作乳化剂得到的阿奇霉素滴眼液的药物包封率最小；对比例1与对比例2相比，对比例2中采用磷脂乙醇胺作乳化剂得到的滴眼液中阿奇霉素的包封率有提高；对比例2与实施例3相比，实施例3采用磷脂乙醇胺衍生物作乳化剂得到的滴眼液中阿奇霉素的包封率进一步提高，达到了84.8％；本发明进一步发现，在乳液时加入α-胡萝卜素和橙皮苷，还可以提高包封率，并且在同时加入效果更佳，如对比例3中加入α-胡萝卜素和对比例4中加入橙皮苷，相对于实施例3的包封率有轻微的增加，在两者同时加入时，如实施例4、实施例6和实施例7，包封率至少达到了93.6％。
上述实施例中的常规技术为本领域技术人员所知晓的现有技术，故在此不再详细赘述。以上实施方式仅用于说明本发明，而并非对本发明的限制，本领域的普通技术人员，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，还可以做出各种变化和变型。因此，所有等同的技术方案也属于本发明的范畴，本发明的专利保护范围应由权利要求限定。