阅读说明：本技术 Pyy类似物 (PYY analogs ) 是由 S·R·布鲁姆 于 2018-12-04 设计创作，主要内容包括：通过用Ala23、Glu23、Lys23、Gln23或AIB23取代Ser23而不同于天然人PYY的PYY类似物。另外的任选特征包含在另外位置的取代、天然人PYY的Tyr1残基的丧失和C端的酰胺化。适合于用作用于治疗和预防病症,特别是糖尿病和肥胖症的药物。(PYY analogues that differ from native human PYY by substitution of Ser23 with Ala23, Glu23, Lys23, Gln23 or AIB 23. Further optional features include substitution at further positions, loss of Tyr1 residue of native human PYY and amidation of the C-terminus. Suitable for use as a medicament for the treatment and prevention of disorders, in particular diabetes and obesity.)

PYY类似物

技术领域

本申请涉及肽YY(PYY)类似物，所述肽YY类似物可单独或与其它试剂组合(特别是与GLP-1类似物组合)用于治疗如糖尿病和肥胖症等病症。

背景技术

根据国家健康与营养检查调查(the National Health and NutritionExamination Survey)(NHANES，2011年到2012年)，美国有超过三分之二的成人超重或肥胖。在美国，20岁或以上的人中，78％的男性和74％的女性超重或肥胖。另外，在美国，很大比例的儿童超重或肥胖。

肥胖症的原因是复杂且多因素的。越来越多的证据表明，肥胖症不是自我控制的简单问题，而是涉及食欲调节和能量代谢的复杂病症。另外，肥胖症与多种病状相关，所述多种病状与群体的发病率和死亡率增加相关联。尽管尚未明确地确定肥胖的病因学，但人们认为遗传、代谢、生物化学、文化和心理社会因素起着作用。通常，肥胖已经被描述为其中身体脂肪过多而使个体具有健康风险的病状。

存在强有力的证据表明肥胖与发病率和死亡率增加相关。疾病风险(如心血管疾病风险和2型糖尿病疾病风险)会随身体质量指数(BMI)的增加而独立地增加。实际上，此风险已经被量化为对于BMI大于24.9的每个点，女性心脏疾病风险增加百分之五，并且男性心脏疾病风险增加百分之七(参见Kenchaiah等人,《新英格兰医学杂志(N.Engl.J.Med.)》347:305,2002；Massie,《新英格兰医学杂志》347:358,2002)。另外，存在大量证据表明肥胖者的重量减轻降低了重要的疾病风险因素。即使是小的重量减轻(如超重和肥胖成人的初始体重的10％)也已经与风险因素(如高血压、高血脂和高血糖)减少相关。

尽管饮食和运动提供了用于减少重量增加的简单方法，但超重和肥胖个体通常无法充分控制这些因素以有效地减肥。可以使用药物疗法；美国食品和药物管理局(the Foodand Drug Administration)已经批准了几种可以用作全面减肥计划的一部分的减肥药物。然而，这些药物中的许多药物具有严重的不良副作用。当微创方法已经失败，并且患者处于肥胖相关的发病率或死亡率的高风险中时，在仔细选择的临床上严重肥胖的患者中，减肥手术是一项选择。然而，这些治疗是高风险的，并且仅适合于有限数量的患者。希望减肥的不仅是肥胖的受试者。体重在建议范围内的人(例如，在建议范围的上部分)可能希望减轻其重量以使其更接近理想重量。因此，仍然需要可以用于在超重和肥胖的受试者中实现重量减轻的试剂。

PYY是由肠道的L细胞产生的36个氨基酸的肽，其中发现其在大肠和直肠中浓度最高。两种内源性形式PYY和PYY 3-36被释放到循环中。通过用二肽基肽酶IV(DPP-IV)切割PYY的Tyr-Pro氨基端残基来进一步产生PYY 3-36。PYY 3-36与受体的Y家族的Y2受体结合(De Silva和Bloom,《肠肝杂志(Gut Liver)》,2012,6,p10-20)。研究已经显示，向啮齿动物和人外周施用PYY 3-36会导致显著的食物摄入量抑制，从而导致PYY类似物可以用于治疗如肥胖症等病状的前景(参见例如，Batterham等人,《自然(Nature)》,2002,418,p650-654；Batterham等人,《新英格兰医学杂志》,2003,349,p941-948)。

在存在证据表明PYY能够恢复2型糖尿病中受损的胰岛素和胰高血糖素分泌后，PYY还与改变受试者的代谢有关并且被提议用于治疗2型糖尿病。肥胖与糖尿病之间的关系复杂，因为超重会增加患糖尿病的风险并且患糖尿病会增加超重的可能性。这两种病状之间的关系是其中PYY发挥越来越公认的作用的关系。

WO2011/092473和WO2012/101413(帝国创新有限公司(Imperial InnovationsLimited))公开了某些PYY类似物。然而，仍然需要具有适合性质的另外的化合物，使得其作为有效的治疗剂治疗或预防能量代谢病症(如肥胖症和/或糖尿病)。

发明内容

第一方面，本发明提供了一种PYY类似物，所述PYY类似物在以下方面不同于天然人PYY序列(Tyr1 Pro2 Ile3 Lys4 Pro5 Glu6 Ala7 Pro8 Gly9 Glu10 Asp11 Ala12Ser13 Pro14 Glu15 Glu16 Leu17 Asn18 Arg19 Tyr20 Tyr21 Ala22 Ser23 Leu24 Arg25His26 Tyr27 Leu28 Asn29 Leu30 Val31 Thr32 Arg33 Gln34 Arg35 Tyr36；SEQ ID NO:1)：

-Ser23被Ala23、Glu23、Lys23、Gln23或AIB23(优选地Ala23)取代

并且所述PYY类似物可以在以下另外的方面中的一个或多个方面进一步不同于所述天然人PYY序列：

-Tyr1缺失，

-残基2到9、13到16、20、21、24、25或26中的一个或多个残基经受保守取代，

-Glu10被Ala10、Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-Ala12被AIB12取代

-Leu17被Ile17或AIB17取代

-Asn18被Leu18、AIB18或Ala18取代

-Arg19被His19或Lys19取代

-Ala22被Val22或Ile22取代

-Tyr27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

并且其中C端残基任选地终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)；

或化合物的衍生物；或所述化合物或所述衍生物的盐。

本发明基于以下发现：还可以向受试者施用其中具体氨基酸残基缺失和/或被取代的PYY类似物以引起食物摄入量减少、卡路里摄入量减少、食欲减少和能量代谢改变。在许多情况下，与天然PYY相比，本发明的PYY类似物显示出改善的效力和/或更长的作用持续时间和/或更少的副作用。

本发明的PYY类似物也特别适合于与GLP-1受体的激动剂用于组合疗法。这是因为PYY和GLP-1类似物具有广泛相容的和类似的化学成分，所述化学成分使其适合于组合调配，因此其可以方便地以单次注射的形式施用。另外，PYY类似物和GLP-1类似物通过不同且分开的机制抑制食欲，并且因此与单独用任一种试剂治疗相比，接受组合疗法的患者不易于‘逃逸’期望的药物作用。最后，不同的作用机制允许对食欲抑止产生累加或协同效应，从而使疗法更具效力。

另一方面，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括根据本发明的PYY类似物和药学上可接受的载剂以及任选地另外的治疗剂。

另一方面，本发明提供了一种用作药物的根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物。所述PYY类似物或药物组合物发现用于预防或治疗受试者的如糖尿病和/或肥胖症等能量代谢病症、用于预防胰岛功能丧失和/或用于恢复胰岛功能。

另一方面，本发明提供了一种用于制备用于预防或治疗受试者的如糖尿病和/或肥胖症等能量代谢病症、用于预防胰岛功能丧失和/或用于恢复胰岛功能的药物的根据本发明的PYY类似物的使用。

另一方面，本发明提供了一种治疗或预防受试者的疾病或病症或其它非期望生理状态的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物。所述PYY类似物或药物组合物发现在用于预防或治疗受试者的如糖尿病和/或肥胖症等能量代谢病症、预防胰岛功能丧失和/或恢复胰岛功能、降低食欲、降低食物摄入量和/或降低卡路里摄入量的方法中的使用。

另一方面，本发明还提供了一种出于美容的目的而引起受试者重量减轻或防止重量增加的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的组合物。

附图说明

图1是列出了与本发明的具体优选实施例有关的一些PYY类似物的氨基酸序列的表。人PYY的天然存在的序列包含在内用于参考。标题为“REF”的第一列给出了在所附序列表中使用的SEQ ID NO:。天然人PYY为REF＝1。

图2示出了实例所描述的体外受体效力实验的结果。

图3示出了证明了如实例所描述的化合物Y242的功效的体内实验(n＝5到8)的结果。

图4示出了证明了如实例所描述的化合物Y1419的功效的体内实验(n＝7到8)的结果。

图5示出了证明了本发明的其它化合物的功效的体内实验的结果。

图6示出了实例所描述的体外受体效力实验的结果。

序列表

使用氨基酸的标准字母缩写示出了本申请中列出的氨基酸序列。本文给出的具体序列与本发明的具体优选实施例有关。本申请包括机器可读序列表，其中为PYY类似物分配与图1给出的实例编号相同的SEQ ID NO标识符。

定义

为了促进对本公开的各个实施例的回顾，提供了对具体术语的以下解释：

动物：活的多细胞脊椎动物生物体，包含例如哺乳动物和鸟类的类别。术语哺乳动物包含人类和非人类哺乳动物。类似地，术语“受试者”包含人类和牲畜受试者。

食欲：对食物天生的期望或渴望。在一个实施例中，通过用于评估对食物的期望的调查来测量食欲。食欲增加通常会导致进食行为增加。

食欲抑制剂：减少对食物的期望的化合物。可商购的食欲抑制剂包含但不限于安非拉酮(二乙胺苯丙酮)、苯丁胺、马吲哚、苯丙醇胺、右芬氟拉明和氟西汀。

身体质量指数(BMI)：一种用于测量身体质量的数学公式，有时也称为凯特莱指数(Quetelet's Index)。通过用重量(以kg为单位)除以身高²(以米²为单位)来计算BMI。目前公认的“正常”男性和女性的标准是BMI为20-24.9kg/m²。在一个实施例中，大于25kg/m²的BMI可以用于鉴别肥胖的受试者。I级肥胖对应的BMI为25-29.9kg/m²。II级肥胖对应的BMI为30-40kg/m²；并且III级肥胖对应的BMI大于40kg/m²(Jequier,《美国临床营养学杂志(Am.J Clin.Nutr.)》45:1035-47,1987)。基于身高、体格、骨骼结构和性别，理想的体重会因物种和个体而变化。

保守取代：在多肽中用另一个生物学上类似的残基替换氨基酸残基。术语“保守变异”还包含使用经取代的氨基酸(即一个或多个原子被另一个原子或基团替换的氨基酸)代替亲本氨基酸，条件是多肽保留其活性或者条件是针对经取代的多肽产生的抗体也与未经取代的多肽发生免疫反应。典型但非限制性的保守取代是脂肪族氨基酸Ala、Val、Leu和Ile间的彼此替换；含羟基残基Ser与Thr的互换；酸性残基Asp与Glu的互换；含酰胺残基Asn与Gln之间的互换；碱性残基Lys与Arg的互换；芳香族残基Phe与Tyr的互换；以及小-型氨基酸Ala、Ser、Thr、Met与Gly的互换。另外的保守取代包含用具有类似空间或立体构型的另一个氨基酸替换氨基酸，例如Asn互换为Asp或Gln互换为Glu。

保守氨基酸取代的非限制性实例

非保守取代：氨基酸残基在多肽中被生物学上非类似的另一个残基替换。例如，用具有基本上不同的电荷、基本上不同的疏水性或基本上不同的空间或立体构型的另一个残基替换氨基酸残基。

糖尿病：因为胰岛素内源性缺乏和/或胰岛素敏感性缺陷，所以细胞无法跨其细胞膜转运内源性葡萄糖。糖尿病是由于胰岛素分泌不足或靶组织胰岛素抗性而使碳水化合物、蛋白质和脂肪代谢受损的慢性综合症。其以两种主要形式发生：胰岛素依赖型糖尿病(IDDM，I型)和非胰岛素依赖型糖尿病(NIDDM，II型)，所述两种主要形式的病因学、病理学、遗传学、发病年龄和治疗方法不同。

糖尿病的两种主要形式均以不能递送一定量的胰岛素为特点并且具有用于控制葡萄糖稳态所需的精确定时。I型糖尿病或胰岛素依赖型糖尿病(IDDM)是由β细胞破坏引起的，从而导致内源性胰岛素水平不足。II型糖尿病或非胰岛素依赖型糖尿病是由于人体对胰岛素敏感性的缺陷以及胰岛素生产的相对缺乏引起的。

食物摄入量：由个体消耗的食物量。食物摄入量可以通过体积或重量来测量。例如，食物摄入量可以是由个体消耗的总食物量。或者，食物摄入量可以是个体的蛋白质、脂肪、碳水化合物、胆固醇、维生素、矿物质或任何其它食物组分的量。“蛋白质摄入量”是指由个体消耗的蛋白质的量。类似地，“脂肪摄入量”、“碳水化合物摄入量”、“胆固醇摄入量”、“维生素摄入量”和“矿物质摄入量”是指由个体消耗的蛋白质、脂肪、碳水化合物、胆固醇、维生素或矿物质的量。

正常的日常饮食：给定物种的个体的平均食物摄入量。正常的日常饮食可以以卡路里摄入量、蛋白质摄入量、碳水化合物摄入量和/或脂肪摄入量的形式表示。人类的正常的日常饮食通常包括以下：约2,000、约2,400或约2,800到显著更多的卡路里。另外，人类的正常的日常饮食通常包含约12g到约45g的蛋白质、约120g到约610g的碳水化合物和约11g到约90g的脂肪。低卡路里饮食将不超过人类个体的正常卡路里摄入量的约85％，并且优选地不超过约70％。

在动物中，卡路里和营养需求取决于动物的物种和大小而变化。例如，在猫中，每磅的总卡路里摄入量以及蛋白质、碳水化合物和脂肪的百分比分布随猫的年龄和生殖状态而变化。然而，用于猫的通用指南是40卡/磅/天(18.2卡/千克/天)。约30％到约40％应当为蛋白质，约7％到约10％应当来自碳水化合物，并且约50％到约62.5％应当衍生自脂肪摄入量。本领域技术人员可以容易地鉴别任何物种的个体的正常的日常饮食。

肥胖症：其中身体脂肪过多而可能使人处于健康风险的病状(参见Barlow和Dietz,《儿科杂志(Pediatrics)》102:E29,1998；美国国立卫生研究院(NationalInstitutes of Health),美国国家心脏、肺和血液学研究所(National Heart,Lung,andBlood Institute)(NHLBI),《肥胖研究(Obes.Res.)》6(增刊2):51S-209S,1998)。身体脂肪过多是能量摄入量与能量消耗量不平衡的结果。例如，身体质量指数(BMI)可以用于评估肥胖。在一种常用的惯例中，BMI为25.0kg/m²到29.9kg/m²是超重，而BMI为30kg/m²或更高是肥胖。

在另一个惯例中，腰围用于评估肥胖。在此惯例中，在男性中，腰围为102cm或以上被认为是肥胖，而在女性中，腰围为89cm或以上被认为是肥胖。强有力的证据表明，肥胖会影响个体的发病率和死亡率。例如，肥胖个体患心脏病；非胰岛素依赖型(2型)糖尿病；高血压；中风；癌症(例如，子宫内膜癌、乳腺癌、***癌和结肠癌)；血脂异常；胆囊疾病；睡眠呼吸中止症；生育能力降低和骨关节炎等其它疾病的风险增加(参见Lyznicki等人,《美国家庭医生(Am.Fam.Phys.)》63:2185,2001)。

超重：体重超过其理想体重的个体。超重的个体可以是肥胖的，但不一定是肥胖的。例如，超重的个体是期望减少其重量的任何个体。在一个惯例中，超重的个体是BMI为25.0kg/m²到29.9kg/m²的个体。

聚乙二醇化的和聚乙二醇化：使聚(亚烷基二醇)，优选地活化的聚(亚烷基二醇)反应以形成共价键的过程。可以使用促进剂，例如氨基酸(例如赖氨酸)。尽管“聚乙二醇化”通常使用聚(乙二醇)或其衍生物，如甲氧基聚(乙二醇)进行，但所述术语在本文中不限于使用甲氧基聚(乙二醇)，还包含使用任何其它有用的聚(亚烷基二醇)，例如聚(丙二醇)。

pI：pI是等电点的缩写。有时使用的可替代缩写是IEP。其是特定分子不携带净电荷时的pH值。在pH低于其pI时，蛋白质或肽携带净正电荷。在pH高于其pI时，蛋白质或肽携带净负电荷。可以使用称为等电聚焦的技术来根据其等电点分离蛋白质和肽，所述等电聚焦是利用聚丙烯酰胺凝胶内含有的pH梯度的电泳方法。

肽YY(PYY)：如本文所使用的术语PYY是指肽YY多肽，是一种通过排列在小肠下部(回肠)和结肠的细胞分泌到血液中的激素。表1中示出了各个物种的天然存在的野生型PYY序列。

表1：各个物种的PYY序列

外周施用：中枢神经系统以外的施用。外周施用不包含对大脑的直接施用。外周施用包含但不限于血管内、肌肉内、皮下、吸入、口服、直肠、经皮或鼻内施用。

多肽：其中单体是通过酰胺键连接在一起的氨基酸残基的聚合物。当氨基酸是α-氨基酸时，可以使用L-光学异构体或D-光学异构体，L-异构体是优选的。本文所使用的术语“多肽”或“蛋白质”涵盖任何氨基酸序列并且包含如糖蛋白等经修饰的序列。术语“多肽”具体地涵盖天然存在的蛋白质以及重组地或合成地产生的蛋白质。术语“多肽片段”是指多肽的一部分，例如在结合受体上显示出至少一个有用序列的片段。术语“多肽的功能片段”是指保留多肽活性的多肽的所有片段。生物功能肽也可以包含融合蛋白，其中感兴趣肽已经与另一种不会减少其期望活性的肽融合。

皮下施用：皮下施用是将物质施用到被发现位于皮肤的真皮与下层组织之间的皮下脂肪层。皮下施用可以通过使用例如装配在注射器或“笔”型注射装置上的皮下注射针进行注射。可以使用例如微针等其它施用方法。用皮下注射针注射通常涉及代表接受者的一定程度的疼痛。可以通过使用局部麻醉剂或镇痛剂来掩盖这种疼痛。然而，用于降低所感知的注射疼痛的常用方法是仅在注射之前和注射期间立即分散受试者的注意力。可以通过使用相对较小规格的皮下注射针、通过注射相对较小体积的物质并且通过避免可能导致受试者在注射部位经历“刺痛”感觉的过度酸性或碱性组合物使疼痛最小化。通常认为pH在pH4与pH10之间的组合物是相当舒适的。

治疗有效量：足以防止病症进展或引起病症消退的剂量，或者能够缓解病症的体征或症状的剂量，或者能够实现期望结果的剂量。在几个实施例中，本发明的化合物的治疗有效量是足以抑制或阻止重量增加的量、或者足以减少食欲的量、或者足以降低卡路里摄入量或食物摄入量或增加能量消耗量的量。

具体实施方式

根据本发明的第一方面，提供了一种PYY类似物，所述PYY类似物在以下方面不同于天然人PYY序列(Tyr1 Pro2 Ile3 Lys4 Pro5 Glu6 Ala7 Pro8 Gly9 Glu10 Asp11Ala12 Ser13 Pro14 Glu15 Glu16 Leu17 Asn18 Arg19 Tyr20 Tyr21 Ala22 Ser23 Leu24Arg25 His26 Tyr27 Leu28 Asn29 Leu30 Val31 Thr32 Arg33 Gln34 Arg35 Tyr36；SEQID NO:1)：

-Ser23被Ala23、Glu23、Lys23、Gln23或AIB23(优选地Ala23)取代

并且所述PYY类似物可以在以下另外的方面中的一个或多个方面进一步不同于所述天然人PYY序列：

-Tyr1缺失，

-残基2到9、13到16、20、21、24、25或26中的一个或多个残基(优选地，残基11、18、19、23、27和30或至少残基11、18、19、23、27和30或至少4或5个选自11、18、19、23、27和30的残基)经受保守取代，

-Glu10被Ala10、Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-Ala12被AIB12取代

-Leu17被Ile17或AIB17取代

-Asn18被AIB18、Ala18或Leu18(优选地Leu18)取代

-Arg19被His19或Lys19(优选地His19)取代

-Ala22被Val22或Ile22取代

-Tyr27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

并且其中C端残基任选地终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)；

或化合物的衍生物；或所述化合物或所述衍生物的盐。

示出了以上式(I)的氨基酸序列，其中N端在左上方并且C端在右下方。除非另有指示，否则式(I)的序列中的氨基酸残基是L-氨基酸。

在一个优选的实施例中，Tyr1缺失。去除Tyr1增加了针对Y2受体的PYY类似物相对于Y1受体的选择性，Y2受体的激动作用是抑制进食的原因。

在一个优选的实施例中，残基2到9是未经取代的。

在另一个优选的实施例中，残基2到9是未经取代的并且Tyr1缺失。

在另一个实施例中，Tyr1缺失，残基2到9是未经取代的并且Glu10被Lys10取代。

在另一个实施例中，Tyr1缺失，残基2到9是未经取代的并且Glu10被Gln10取代。

在另一个特别优选的实施例中，Tyr1缺失并且残基2到10是未经取代的。

根据一个实施例

-Tyr1缺失

-残基2到9、13到16、20、21、24、25、26、28、29、32、33、34和35是未经取代的。

根据一个特别优选的实施例：

-Tyr1缺失

-残基2到10；12到17；20到22；24到26、28、29以及31到36是未经取代的。任选地，残基14也可以是未经取代的。

根据一个实施例：

-Glu10被Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-残基12是未经取代的

-Leu17是未经取代的

-Asn18被AIB18、Ala18或Leu18取代

-Arg19被His19取代

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Glu23、Ala23、AIB 23或Gln23取代

-Tyr 27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代。

根据一个实施例：

-Tyr1缺失

-Glu10被Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-残基12是未经取代的

-Leu17是未经取代的

-Asn18被AIB18、Ala18或Leu18取代

-Arg19被His19取代

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Glu23、Ala23、AIB 23或Gln23取代

-Tyr 27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代。

根据一个实施例：

-Tyr1缺失

-Glu10被Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-残基2到9、12到17、20、21、24、25、26、28、29、32、33、34和35是未经取代的

-Asn18被AIB18、Ala18或Leu18取代

-Arg19被His19取代

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Glu23、Ala23、AIB 23或Gln23取代

-Tyr 27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代。

根据一个实施例：

-Tyr1缺失

-Glu10被Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-残基2到9、12到17、20、21、24、25、26、28、29、32、33、34和35是未经取代的

-Asn18被AIB18、Ala18或Leu18取代

-Arg19被His19取代

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Glu23、Ala23、AIB 23或Gln23取代

-Tyr 27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

-C端残基终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)。

根据一个实施例：

-Glu10是未经取代的

-Asp11被Gly11取代

-残基12是未经取代的

-Leu17是未经取代的

-Asn18是未经取代的

-Arg19是His19

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Ala23取代

-Tyr27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

-C端残基终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)。

根据一个实施例：

-Tyr1缺失

-Glu10是未经取代的

-Asp11被Gly11取代

-残基12是未经取代的

-Leu17是未经取代的

-Asn18是未经取代的

-Arg19是His19

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Ala23取代

-Tyr27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

-C端残基终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)；任选地，残基2到9、12到17、20、21、24、25、26、28、29、32、33、34和35中的所有残基是未经取代的。

在一些实施例中，Asp11被Gly11取代。

在一些实施例中，Asn18被AIB18、Ala18或Leu18取代，优选地被Leu18取代。

根据一个实施例：

-Glu10被Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-残基12是未经取代的

-Leu17是未经取代的

-Asn18被Leu18取代

-Arg19被His19取代

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Glu23、Ala23、AIB 23或Gln23取代

-Tyr 27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代。

根据一个实施例：

-Tyr1缺失

-Glu10被Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-残基12是未经取代的

-Leu17是未经取代的

-Asn18被Leu18取代

-Arg19被His19取代

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Glu23、Ala23、AIB 23或Gln23取代

-Tyr 27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代。

根据一个实施例：

-Tyr1缺失

-Glu10被Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-残基2到9、12到17、20、21、24、25、26、28、29、32、33、34和35是未经取代的

-Asn18被Leu18取代

-Arg19被His19取代

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Glu23、Ala23、AIB 23或Gln23取代

-Tyr 27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代。

根据一个实施例：

-Tyr1缺失

-Glu10被Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-残基2到9、12到17、20、21、24、25、26、28、29、32、33、34和35是未经取代的

-Asn18被Leu18取代

-Arg19被His19取代

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Glu23、Ala23、AIB 23或Gln23取代

-Tyr 27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

-C端残基终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)。

根据一个实施例：

-Glu10是未经取代的

-Asp11被Gly11取代

-残基12是未经取代的

-Leu17是未经取代的

-Asn18被Leu18取代

-Arg19是His19

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Ala23取代

-Tyr27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

-C端残基终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)。

根据一个实施例：

-Tyr1缺失

-Glu10是未经取代的

-Asp11被Gly11取代

-残基12是未经取代的

-Leu17是未经取代的

-Asn18被Leu18取代

-Arg19是His19

-Ala22是未经取代的

-Ser23被Ala23取代

-Tyr27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

-C端残基终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)

-任选地，残基2到9、12到17、20、21、24、25、26、28、29、32、33、34和35中的所有残基是未经取代的。

根据一个实施例：

-Tyr1缺失

-残基2到10、12到17、20、21、22、24、25、26、28、29、31、32、33、34、35和36是未经取代的

-Asp11被Gly11取代

-Asn18被Leu18取代

-Arg19被His19取代

-Ser23被Ala23取代

-Tyr 27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

-C端残基终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)。

根据一个优选实施例，以下10个标准中的至少9个标准适用：

1–Tyr 1缺失

2–残基2到10、12到17、20、21、22、24、25、26、28、29、31、32、33、34、35和36是未经取代的

3–Asp11被Gly11取代

4–Asn18被Leu18取代

5–Arg19被His19取代

6–Ser23被Ala23取代

7–Tyr27被Phe27取代

8–Leu30被His30取代

9–Val31是未经取代的

10–C端残基终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)。

本发明设想了以上实施例，其中至少标准1和2和至少7个其它标准适用；或者其中标准1、2和10和至少6个其它标准适用；或者其中所有标准1到10适用。

根据一些实施例，Leu30被His30取代。

根据一些实施例，Val31是未经取代的。

根据某些实施例，保留在位置2、5、8和14处的天然存在的Pro残基。已经发现这些残基形成对于稳定分子的三级结构很重要的氢键。因此，根据某些优选实施例，提供了一种PYY类似物，所述PYY类似物在以下方面不同于天然人PYY序列：

-Ser23被Ala23、Glu23、Lys23、Gln23或AIB23(优选地Ala23)取代

这种化合物可以在以下方面中的一个或多个方面进一步不同于所述天然人PYY序列：

-Tyr缺失

-一个或多个残基3、4、6、7、9、13、15、16、20、21、24、25或26经受保守取代，

-Glu10被Ala10、Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-Ala12被AIB12取代

-Leu17被Ile17或AIB17取代

-Asn18被AIB18、Ala18或Leu18(优选地Leu18)取代

-Arg19被His19或Lys19(优选地His19)取代

-Ala22被Val22或Ile22取代

-Tyr27被Phe27取代

-Leu30被His30取代

-Val31被Leu31取代

并且其中C端残基任选地终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)；

或化合物的衍生物；或所述化合物或所述衍生物的盐。

根据所有实施例，优选的是C端残基终止于伯酰胺基(-C(O)NH₂)代替羧酸基(-CO₂H)。酰胺基缺失导致Y2受体的激动作用显著减少。

根据所有实施例，Ser23被可替代氨基酸残基取代。尽管先前已经公开了位置23处的取代是对天然序列的耐受性改变，但先前含有位置23取代的PYY类似物(例如申请者先前的专利申请中所公开的Y242)并未显示出如本文所呈现的比较研究中示出的与本发明的肽相同的优点。

根据一些实施例，Ser23被Glu23、Ala23、AIB23或Gln23取代。

优选的具体序列包含本文公开的序列以及特别是被识别为Y1319、Y1371、Y1372、Y1419、Y1421、Y1518、Y1528、Y1558、Y1568、Y1572、Y1579、Y1553或Y1581(并且特别地Y1419)的序列。本发明涵盖作为优选序列的对应于Y1319、Y1371、Y1372、Y1419、Y1421、Y1518、Y1528、Y1558、Y1568、Y1572、Y1579、Y1553或Y1581(并且特别地Y1419)的序列，对所述序列进行1或2次取代(例如已经进行保守取代)并且保留其所基于的序列的活性(例如本文所公开的测定之一中的至少20％、50％或70％的活性)。

根据本发明的另外一个方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括根据本发明的PYY类似物和药学上可接受的载剂以及任选地另外的治疗剂。

第二治疗剂可以是抗肥胖剂、食欲抑制剂或抗糖尿病剂。优选地，治疗剂是GLP-1类似物或胰高血糖素类似物或其任一个的衍生物。

根据以下进一步讨论的某些实施例，所述组合物包括Zn²⁺离子。

根据本发明的另一方面，提供了一种用作药物的根据本发明的PYY类似物或根据本发明的药物组合物。

根据某些实施例，所述药物用于预防或治疗如糖尿病和/或肥胖症等能量代谢病症或用于预防胰岛功能丧失或用于恢复胰岛功能。

根据某些实施例，所述药物用于预防受试者的糖尿病或肥胖症。

根据本发明的另外一个方面，提供了一种治疗或预防受试者的疾病或病症或其它非期望生理状态的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗可接受/有效量的根据本发明的PYY类似物或根据本发明的药物组合物。

根据本发明的另外一个方面，提供了一种预防或治疗受试者的如糖尿病和/或肥胖症等能量代谢病症、预防胰岛功能丧失和/或恢复胰岛功能、降低食欲、降低食物摄入量和/或降低卡路里摄入量的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本发明的PYY类似物或根据本发明的根据权利要求所述的药物组合物。

根据本发明的另外一个方面，提供了一种预防或治疗受试者的糖尿病和/或肥胖症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本发明的PYY类似物或根据本发明的药物组合物。

关于本发明的所有方面，所述受试者可以超重、肥胖和/或患有糖尿病。可替代地，所述受试者可以具有健康重量。

根据本发明的所述PYY类似物或药物组合物经肠胃外施用。因此，其可以以适合于这种施用的格式提供。例如，其可以在注射装置中提供。

优选地，所述PYY类似物或药物组合物经皮下施用并且可以以适合于这种施用的格式提供。

根据本发明的另外一个方面，提供了一种出于美容的目的而引起受试者重量减轻或防止重量增加的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据本发明的PYY类似物。在这类情况下，受试者可以肥胖、超重或根据一些优选实施例具有健康重量。

本发明的肽激素类似物可以通过本领域熟知的重组方法产生，或者可替代地，所述肽激素类似物可以通过本领域也熟知的合成方法产生。

与人PYY相比，根据本发明的PYY类似物优选地对降低食物摄入量具有更持续的作用或对降低食物摄入量具有更强的作用。优选地，其具有至少与天然人PYY一样强但更持久的降低食物摄入量的作用。抑止食欲的持续时间增加对于避免被称为“逃逸”的作用特别重要。持续时间短的食欲抑制剂可以降低食欲或一餐花费的时间并且在这一餐中受试者通常会吃较少的食物。然而，如果食欲抑制剂随后被代谢或以其它方式从受试者的循环中去除，则在下一餐时，受试者就可以恢复其“正常”食欲。鉴于受试者在先前的吃饭时间已经吃了一小餐，因此实际上受试者在第二餐时可能会食欲增加。如果受试者对其食欲感到满足，则两餐的食物摄入总量可能不低于在没有食欲抑制剂的情况下的食物摄入量。也就是说，受试者可能已经“逃逸”了食欲抑制剂的作用。可以通过使用另外剂量的食欲抑制剂或者通过使用作用持续时间更长的食欲抑制剂来降低“逃逸”。如果受试者食欲降低的时间更长，则其可以弥补下一餐中的一餐不足的程度就会降低，并且这是因为特定单餐的总容量存在实际限制。

优选地，本发明的PYY类似物对Y2受体具有选择性。也就是说，与如Y1、Y3、Y4、Y5和Y6等其它受体相比，所述PYY类似物以更高的亲和力与Y2结合。基于结合亲和力、药理学和序列识别那些受体。大多数(即便不是全部)受体是G蛋白偶联受体。通常认为Y1受体是突触后的并且在外周介导神经肽Y的许多已知作用。最初，此受体被描述为对神经肽Y的C端片段(如13-36片段)具有较弱的亲和力，但以相等亲和力与全长神经肽Y和肽YY相互作用(参见PCT公开WO 93/09227)。

药理学地，Y2受体与Y1的区别在于显示出对神经肽Y的C端片段的亲和力。尽管神经肽Y和肽YY的3-36片段提供了改善的亲和力和选择性，但Y2受体最常通过神经肽Y(13-36)的亲和力来区分。(参见Dumont等人,《神经科学学会摘要(Society for NeuroscienceAbstracts)》,19:726,1993)。通过Y1和Y2受体的信号传输与腺苷酸环化酶的抑制作用偶联。还发现与Y2受体的结合通过选择性抑制N型钙通道来降低突触中钙的细胞内水平。另外，Y2受体与Y1受体一样显示出与第二信使的差异偶联(参见美国专利第6,355,478号)。在包含海马体、黑质侧部、丘脑、下丘脑和脑干在内的各个脑区均发现Y2受体。已经对人、鼠类、猴和大鼠Y2受体进行了克隆(例如，参见美国专利第6,420,352号和美国专利第6,355,478号)。优选地，本发明的PYY类似物与Y2结合的亲和力比与Y1、Y3、Y4、Y5和/或Y6结合的亲和力大至少两倍、至少五倍或至少十倍。

根据本发明的PYY类似物优选地在溶液中(即，在如例如在组织液或血浆中发现的如在pH 7.4下的接近生理条件的溶液中)具有低净离子电荷或不具有净离子电荷，例如优选地，本发明的PYY类似物在pH 7.4下具有+1、0或-1的净离子电荷。例如，具有两个酸性基团和两个碱性基团的PYY类似物的净离子电荷将为0。在水中pKa小于6.4的酸性基团被认为在pH 7.4下贡献了-1的离子电荷。pKa大于8.4的碱性基团被认为在pH 7.4下贡献了+1的离子电荷。假设低净离子电荷(并且特别是在体内条件下不存在净离子电荷)限制了PYY类似物的体内溶解度，并且这导致在皮下施用高浓度肽后吸收更慢并且因此延长了在循环中的存在。

根据本发明的PYY类似物与天然PYY一样在位置26处含有组氨酸。根据本发明的PYY类似物优选地还在位置19和/或30处含有His。根据本发明的一个优选方面，根据本发明的PYY类似物进一步含有对应于天然PYY分子中被组氨酸取代的位置19和30处的氨基酸中的至少一种氨基酸。更优选地，在PYY类似物的位置30处的氨基酸是组氨酸。在一个特别优选的实施例中，本发明的PYY类似物在位置19、26和30处含有3个组氨酸残基。

通过进一步的解释，组氨酸是在pH 7.4下(即在循环中的生理条件下或皮下施用后皮下地)不带电荷的独特氨基酸。然而，由于组氨酸的NH侧链的pI为约6.0，因此在pH 5(或更低)下完全带有电荷。根据某些优选实施例，根据本发明的PYY类似物在生理pH(pH7.4)下总电荷低或无总电荷，并且优选地被调配成pH为约pH 5(例如pH 4.5到pH 6.0——pH低于大约pH 4或5对于可注射的组合物可能是不期望的，因为其可能会增加注射部位处的疼痛感)的组合物的一部分以显示出组氨酸电离作用以及优选地在这种较低的pH下的总净变。带电荷残基数量增加增加了可注射组合物在小瓶中的溶解度并且因此允许给予小体积注射相对浓缩的肽溶液。然而，在皮下注射后，类似物暴露于生理pH下，在所述生理pH下电离的残基数量以及特别是电离的组氨酸残基数量下降并且因此溶解度减小。这引起肽皮下沉淀。

His残基的存在增强了此影响。

根据某些优选实施例，根据本发明的PYY类似物具有以下优选特征的组合：

1)在pH 7.4下无净离子电荷或净离子电荷低(例如+1、0或-1)并且总体上可能具有相对少的带电荷基团和亲水基团以减少固有溶解度的肽序列。

2)存在许多在pH 5下产生净正电荷和良好的溶解度以供在施用前储存并且允许低粘度的施用溶液(在pH 5下)的组氨酸。

3)适合于低体积和高浓度的皮下施用、在pH 7.4下超过溶解度常数但在pH 5下不超过溶解度常数。

除组氨酸是引起此差异pH依赖性溶解度作用的特别有利的氨基酸残基外，如果与锌离子一起调配，则含有组氨酸残基的肽的差异溶解度会大大增强。这是因为锌离子将与水溶液中不带电荷的组氨酸残基结合。人们认为锌离子能够同时与多达4个不带电荷的组氨酸结合。这允许锌与几个单独的肽分子中的组氨酸残基配位并且因此使肽分子与其它类似的肽分子弱交联，从而导致溶解度下降。然而，锌离子不与带电荷的组氨酸结合。因此，在含有锌离子的组合物中，含有组氨酸的肽将在pH 7.4下但不会在pH 5.0下通过弱离子键交联。因此，与锌离子结合的His残基的存在增强了皮下注射后的肽沉淀，但不会影响施用前在小瓶或注射器中的溶解度。这意指总pI大约为7的肽将在大约中性pH下无带电荷的残基并且在包含锌离子的调配物中包括组氨酸残基的肽有利地可溶于小瓶或注射器中，但在施用后皮下沉淀。因此，在包含锌离子的调配物中具有组氨酸的pH 7中性肽有利地可溶于小瓶和注射器中，但在施用后皮下沉淀。此外，锌增强沉淀是逐渐可逆的，因为随着锌离子被逐渐冲洗出注射部位，注射后锌离子的浓度将下降。因此，观察到皮下吸收的延迟，其中药代动力学更好，而生物利用率没有损失。给定的含组氨酸的中性肽的吸收速率可以通过加入的锌的量来控制。

引入至少一个另外的组氨酸残基优选地导致本发明的PYY类似物具有至少一次出现的两个组氨酸残基，所述两个组氨酸残基通过1到3个介入氨基酸残基(一对组氨酸残基)彼此分离。对于在水溶液中与成对的两个组氨酸残基缔合的单个锌离子而言，这种间隔似乎是最佳的。在本发明的一个有利实施例中，在位置26和30处的氨基酸残基各自为组氨酸残基。

优选地，根据本发明的类似物的总pI在6.5与8.5之间。这意指在生理pH(例如pH7.4)下，类似物总电荷低或不显著(例如，如以上所提及的，优选地本发明的PYY类似物在pH7.4下具有+1、0或-1的净离子电荷)。分子的总pI可以使用本领域技术人员熟知的技术计算，或者可替代地，可以通过使用等电聚焦来以实验方式确定。

为了充分利用此效应，发明者已经发现以下特征的组合是特别优选的。

1)在pH 7.4下净离子电荷低或无净离子电荷(例如+1、0或-1)的肽序列。

2)存在三种在pH 5下产生净正电荷和良好的溶解度以供在施用前储存的组氨酸。

3)在pH 5下具有允许在低体积的水性介质中皮下施用治疗剂量的PYY类似物的高溶解度，并且在pH 7.4下具有低溶解度。

4)存在在pH 7.4下产生不带电荷的组氨酸残基与邻近分子的交联但在施用前pH或大约pH 5下不与带电荷的组氨酸交联的锌离子。

发现在位置19和30处具有His残基的类似物可以是特别有利的并且因此是优选的。发明者已经发现，尽管序列的最后六个氨基酸被认为对化合物的活性很重要，但His30可以在不丧失活性的情况下取代天然Leu30。

因此，根据某些优选实施例，提供了一种PYY类似物，所述PYY类似物在以下方面不同于天然PYY序列：

-Ser23被Ala23、Glu23、Lys23、Gln23或AIB23(优选地Ala23)取代

-Arg19被His19取代

-Leu30被His30取代

这种化合物可以在以下方面中的一个或多个方面进一步不同于所述天然人PYY序列：

-Tyr缺失

-残基2、4、6、7、9、13、15、16、20、21、24、25或26中的一个或多个残基经受保守取代

-Glu10被Ala10、Lys10或Gln10取代

-Asp11被Gly11取代

-Ala12被AIB12取代

-Leu17被Ile17或AIB17取代

-Asn18被AIB18、Ala18或Leu18(优选地Leu18)取代

-Ala22被Val22或Ile22取代

-Tyr27被Phe27取代

-Val31被Leu31取代

并且其中C端残基任选地终止于伯酰胺(-C(O)NH₂)基代替羧酸基(-CO₂H)；或化合物的衍生物；或所述化合物或所述衍生物的盐。

优选地，残基2、4、6、7、9、13、15、16、20、21、24、25和26是未经取代的。

衍生物

本发明的PYY类似物可以是通过熟知的方法修饰的衍生物，所述熟知的方法包括酰胺化、糖基化、氨甲酰化、例如乙酰化等酰化、硫酸化、磷酸化、环化、脂质化、聚乙二醇化以及与另一种肽或蛋白质融合以形成融合蛋白。本发明的PYY类似物可以在分子内的随机位置处或分子内的预先确定的位置处被修饰并且可以包含一个、两个、三个或更多个连接的化学部分。

本发明的PYY类似物可以是融合蛋白，其中所述类似物使用本领域已知的重组方法与另一种蛋白或多肽(融合配偶体)融合。可替代地，这种融合蛋白可以通过任何已知合成方法合成。任何适合的肽或蛋白质均可以用作融合配偶体(例如，血清白蛋白、碳酸酐酶、谷胱甘肽-S-转移酶或硫氧还蛋白等)。优选的融合配偶体在体内将不会具有不良的生物活性。这种融合蛋白可以通过将融合配偶体的羧基端连接到PYY类似物的氨基端制备或反之亦然。任选地，可裂解连接子可以用于将PYY类似物连接到融合配偶体。所得可裂解融合蛋白可以在体内裂解，使得释放出本发明的化合物的活性形式。这种可裂解连接子的实例包含但不限于连接子D-D-D-D-D-Y、G-P-R、A-G-G和H-P-F-H-L，所述连接子可以分别被肠激酶、凝血酶、泛素裂解酶和肾素裂解。参见例如，美国专利第6,410,707号，所述美国专利的内容通过引用并入本文。根据本发明的所有方面的某些实施例，PYY类似物不是融合蛋白。

本发明的PYY类似物可以是生理功能衍生物。术语“生理功能衍生物”在本文中用于表示本发明的PYY类似物的化学衍生物，所述化学衍生物具有与本发明对应的未修饰的PYY类似物相同的生理功能。例如，生理功能衍生物可以在体内转化为本发明的PYY类似物。根据本发明，生理功能衍生物的实例包含酯、酰胺和氨基甲酸酯；优选地酯和酰胺。

本发明的化合物的药学上可接受的酯和酰胺可以包括连接在适当位点处(例如在酸基处)的C_1-20烷基-、C_2-20烯基-、C_5-10芳基-、C_5-10ar-C_1-20烷基-或氨基酸-酯或-酰胺。适合部分的实例是具有4到26个碳原子，优选地5到19个碳原子的疏水性取代基。适合的脂质基包含但不限于以下：月桂酰基(C₁₂H₂₃)、棕榈基(C₁₅H₃₁)、油烯基(C₁₅H₂₉)、硬脂基(C₁₇H₃₅)、胆酸酯；以及脱氧胆酸盐。

美国专利第5,936,092号；美国专利第6,093,692号；以及美国专利第6,225,445号中公开了用于用脂肪酸衍生物使含巯基化合物脂质化的方法。包括通过二硫键连接到脂肪酸的本发明的化合物的本发明的化合物的脂肪酸衍生物可以用于将本发明的化合物递送到神经元细胞和组织。相对于对应的未脂质化化合物的吸收速率，脂质化显著增加了化合物的吸收以及延长了化合物的血液和组织滞留。此外，脂质化衍生物中的二硫键在细胞中相对不稳定并且因此促进了分子从脂肪酸部分的细胞内释放。适合的含脂质部分是具有4到26个碳原子，优选地5到19个碳原子的疏水性取代基。适合的脂质基包含但不限于以下：棕榈基(C₁₅H₃₁)、油烯基(C₁₅H₂₉)、硬脂基(C₁₇H₃₅)、胆酸酯；以及脱氧胆酸盐。

环化方法包含通过形成二硫桥而环化以及使用环化树脂而头尾环化。由于其构象限制，环化肽可以具有增强的稳定性，包含对酶促降解的增加的抗性。当未环化的肽包含N端半胱氨酸基时，环化可以是特别有利的。适合的环化肽包含单体和二聚体头尾环化结构。环化肽可以包含一个或多个另外的残基，特别是出于形成二硫键的目的而并入的另外的半胱氨酸或出于基于树脂的环化的目的而并入的侧链。

本发明的PYY类似物可以是PYY类似物的聚乙二醇化结构。本发明的聚乙二醇化化合物可以提供另外的优点，如增加多肽的溶解度、稳定性和循环时间或减少免疫原性(参见美国专利第4,179,337号)。

用于使本发明的化合物衍生化的化学部分也可以选自水溶性聚合物，如聚乙二醇、乙二醇/丙二醇共聚物、羧甲基纤维素、葡聚糖、聚乙烯醇等。用于使本发明的化合物衍生化的聚合物部分可以是任何分子量，并且可以是支化的或非支化的。为了易于操作和制备，用于使本发明的化合物衍生化的聚乙二醇的优选分子量为约l kDa到约100kDa，术语“约”指示在聚乙二醇的制备中，一些分子的分子量比规定分子量大，一些比规定分子量小。可以使用其它分子量的聚合物，这取决于期望的治疗方案，例如期望的持续释放的持续时间、对生物活性的影响(如果有的话)、操作的容易度、抗原性的程度或缺乏以及聚乙二醇对治疗性蛋白质或类似物的其它已知影响。例如，聚乙二醇的平均分子量可以为约200、500、1000、1500、2000、2500、3000、3500、4000、4500、5000、5500、6000、6500、7000、7500、8000、8500、9000、9500、10,000、10,500、11,000、11,500、12,000、12,500、13,000、13,500、14,000、14,500、15,000、15,500、16,000、16,500、17,000、17,500、18,000、18,500、19,000、19,500、20,000、25,000、30,000、35,000、40,000、50,000、55,000、60,000、65,000、70,000、75,000、80,000、85,000、90,000、95,000或100,000kDa。

在一个实施例中，本发明的PYY类似物不是衍生物。

适合于在药物中使用的本发明的PYY类似物的盐是其中的抗衡离子是药学上可接受的盐。然而，具有非药学上可接受的抗衡离子的盐在本发明的范围内，例如，用作制备本发明的PYY类似物及其药学上可接受的盐和/或其衍生物的中间体。

根据本发明的适合的盐包含由有机或无机酸或碱形成的盐。药学上可接受的酸加成盐包含由以下形成的酸加成盐：盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、柠檬酸、酒石酸、乙酸、磷酸、乳酸、丙酮酸、乙酸、三氟乙酸、琥珀酸、高氯酸、富马酸、马来酸、乙醇酸、乳酸、水杨酸、草酰乙酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、甲酸、苯甲酸、丙二酸、萘-2-磺酸、苯磺酸和羟乙基磺酸。

由碱形成的药学上可接受的盐包含铵盐；碱金属盐，例如钾盐和钠盐；碱土金属盐，例如钙盐和镁盐；以及由有机碱形成的盐，例如二环己胺和N-甲基-D-葡萄糖胺。

有机化学领域的技术人员将理解，许多有机化合物可以与溶剂形成络合物，在所述溶剂中其发生反应或从中沉淀或结晶。这些络合物被称为“溶剂化物”。例如，与水的络合物被称为“水合物”。当药物物质在晶格中以化学计量或非化学计量的量并入溶剂(如，水)时，便会存在溶剂化物(如，水合物)。由于可以在药物制备过程的任何阶段或者在储存药物物质或剂型时遇到水合物，因此对药物物质进行常规筛选以确定水合物的存在。在以下文献中描述了溶剂化物：S.Byrn等人,《药学研究(Pharmaceutical research)》12(7),1995,954-954和《水不溶性药物调配物(Water-Insoluble Drug Formulation)》,第2版,R.Liu,CRC出版社,第553页，所述文献通过引用并入本文。因此，本领域的技术人员将理解，本发明的PYY类似物以及其衍生物和/或盐可以因此以溶剂化物的形式存在。适合于在医药中使用的本发明的PYY类似物的溶剂化物是其中的相关溶剂是药学上可接受的溶剂化物。例如，水合物是药学上可接受的溶剂化物的实例。

条件：

本发明还提供了一种用作药物的根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物。所述PYY类似物和药物组合物发现用于治疗和/或预防如糖尿病和肥胖症等病状。所述PYY类似物和包括所述PYY类似物的药物组合物也发现用于降低受试者的食欲、降低受试者的食物摄入量和/或降低受试者的卡路里摄入量。

本发明还提供了用于制备用于预防或治疗糖尿病和/或肥胖症的药物的根据本发明的PYY类似物的使用。本发明还提供了用于制备用于降低受试者的食欲、降低受试者的食物摄入量和/或降低受试者的卡路里摄入量的药物的根据本发明的PYY类似物的使用。

本发明还提供了一种治疗或预防受试者的疾病或病症或其它非期望生理状态的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物。

本发明还提供了一种预防或治疗受试者的糖尿病和/或肥胖症、降低食欲、降低食物摄入量和/或降低卡路里摄入量的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物。

在一个实施例中，所述PYY类似物或药物组合物经肠胃外施用。在一个实施例中，所述PYY类似物或药物组合物经皮下施用。在一个实施例中，所述PYY类似物或药物组合物经静脉内、肌肉内、鼻内、经皮或舌下施用。

被施用根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物的受试者可能超重，例如所述受试者可能肥胖。可替代地或另外地，所述受试者可能患有糖尿病，例如具有胰岛素抗性或葡萄糖耐受不良或两者。所述受试者可能患有糖尿病，例如，所述受试者可能患有II型糖尿病。所述受试者可能超重，例如，肥胖并且患有糖尿病，例如，II型糖尿病。可替代地，所述受试者可能患有I型糖尿病。

本发明的PYY类似物被认为保护朗格汉斯细胞(特别是β细胞)的胰岛，当受到毒素(例如链脲佐菌素)、病原体或自身免疫应答的攻击时，允许其保留其正常的生理功能，例如对适当的刺激作出应答而分泌胰岛素的能力。在暴露于毒素、病原体或自身免疫应答后而引起生理功能恶化后，本发明的PYY类似物也被认为有效恢复或拯救胰岛功能，并且特别是β细胞功能。功能恢复可以是恶化前显示出的功能的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％或100％。因此，本发明还提供了一种用于预防胰岛功能(例如β细胞功能)丧失和/或恢复胰岛功能(例如β细胞功能)的本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物。本发明进一步提供了一种用于制备用于预防胰岛功能(例如β细胞功能)丧失和/或用于恢复胰岛功能(例如β细胞功能)的药物的本发明的PYY类似物的使用。本发明进一步提供了一种预防受试者的胰岛功能(例如β细胞功能)丧失和/或恢复胰岛功能(例如β细胞功能)的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物。

本发明的PYY类似物的胰岛保护性质使其可用于与具有副作用胰岛毒性的另外的治疗剂组合施用。这种治疗剂的实例是链脲佐菌素。因此，本发明还提供了一种与具有作为副作用的胰岛毒性的另外的治疗剂组合的根据本发明的PYY类似物。本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括根据本发明的PYY类似物和具有作为副作用的胰岛毒性的另外的治疗剂以及药学上可接受的载剂。

另外地或可替代地，受试者可能患有或可能有风险患有其中以肥胖或超重为风险因素的病症。这种病症包含但不限于心血管疾病，例如高血压、动脉粥样硬化、充血性心力衰竭和血脂异常；中风；胆囊疾病；骨关节炎；睡眠呼吸中止症；生殖病症，例如***；癌症，例如乳腺癌、***癌、结肠癌、子宫内膜癌、肾癌和食道癌；静脉曲张；黑棘皮症；湿疹；运动不耐受性；胰岛素抗性；高血压高胆固醇血症；胆石症；骨关节炎；矫形损伤；胰岛素抗性，例如，2型糖尿病和X综合征；和血栓栓塞性疾病(参见Kopelman,《自然》404:635-43；Rissanen等人,《英国医学杂志(British Med.J.)》301,835,1990)。

其它与肥胖相关的病症包含抑郁、焦虑、惊恐发作、偏头痛、PMS、慢性疼痛状态、纤维肌痛、失眠、冲动、强迫症和肌阵挛。此外，肥胖是全身麻醉并发症发生率增加的公认风险因素。(参见例如,Kopelman,《自然》404:635-43,2000)。通常，肥胖会降低寿命并且携带严重的如以上列出的共病风险。

与肥胖相关联的其它疾病或病症是出生缺陷、与神经管缺陷、腕管综合征(CTS)的发病率增加相关的母亲肥胖症；慢性静脉功能不全(CVI)；日间嗜睡；深静脉血栓形成(DVT)；终末期肾脏疾病(ESRD)；痛风；热中症；免疫应答受损；呼吸功能受损；***症；肝疾病；下背疼痛；产科和妇科并发症；胰腺炎；以及腹部疝气；黑棘皮症；内分泌异常；慢性缺氧和高碳酸血症；皮肤病学影响；象皮病；胃食管反流；脚跟骨刺和发炎；下肢水肿；***肥大，其引起如胸罩勒痛、皮肤损伤、宫颈疼痛、***下面皮肤褶皱中的长期异味和感染等大量问题；大的前腹壁肿块，例如具有频繁脂膜炎的腹部脂膜炎，其妨碍行走、引起频繁感染、异味、穿衣困难、下背疼痛；肌肉骨骼疾病；假脑瘤症(或良性颅内高压症)和滑动性食管裂孔疝。

本发明进一步提供了一种用于增加受试者的能量消耗的方法。所述方法包含例如向所述受试者外周施用治疗有效量的本发明的PYY类似物，从而改变能量消耗。能量在所有生理过程中被燃烧。通过调节这些过程的效率或者改变正在发生的过程的数量和性质，身体可以直接改变能量消耗的速率。例如，在消化期间，身体通过使食物通过肠道并且消化食物来消耗能量，并且在细胞内，可以改变细胞代谢的效率以产生或多或少的热量。

一个方面，本发明的方法涉及操纵弓形线路，所述弓形电路协同地改变食物摄入并且相反地改变能量消耗。能量消耗是细胞代谢、蛋白质合成、代谢速率和卡路里利用率的结果。因此，在本发明的此方面，施用根据本发明的PYY类似物导致能量消耗增加以及卡路里利用率减少。

本发明还提供了一种用于改善受试者的脂质分析的方法，所述方法包括向所述受试者施用根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物。本发明还提供了一种用于缓解可以通过降低营养利用率来缓解的病状或病症的方法，所述方法包括向受试者施用根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的药物组合物。

可以通过本领域的技术人员已知的任何方法来测量食欲。例如，食欲减少可以通过心理评估来评估。例如，施用本发明的化合物导致所感知的饥饿、饱腹和/或饱胀的改变。饥饿可以通过本领域的技术人员已知的任何方法来评估。例如，饥饿使用心理测定来评估，如通过使用问卷(如但不限于视觉模拟评分(VAS)问卷)来评估饥饿感和感官知觉。在一个具体的非限制性实例中，饥饿通过回答与以下相关的问题来评估：对食物、饮料的期望、预期的食物消耗、恶心以及与气味或味道有关的感知。

本发明的PYY类似物可以用于重量控制和治疗(例如减少或预防)肥胖，特别是以下中的任何一个或多个：防止和降低重量增加；诱导和促进重量减轻；以及如通过身体质量指数所测量的降低肥胖。本发明的PYY类似物可以用于控制食欲、饱腹和饥饿中的任何一个或多个，特别是以下中的任何一个或多个：降低、抑制和压制食欲；诱导、增加、增强和促进饱腹和饱腹感；以及降低、抑制和压制饥饿和饥饿感。本发明的PYY类似物可以用于维持期望体重、期望身体质量指数、期望外观和良好健康中的任何一个或多个。因此，本发明还提供了一种出于美容的目的而引起受试者重量减轻或防止重量增加的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的根据本发明的PYY类似物或包括所述PYY类似物的组合物。

受试者可以是期望重量减轻的受试者，例如期望改变其外貌的女性和男性受试者。受试者可以期望减少饥饿感，例如受试者可以是参与需要高度集中注意力的冗长任务的人，例如现役士兵、空中交通管制员或长途路线上的卡车司机等。

本发明还可以用于治疗、预防、改善或缓解由相对高的营养利用率引起、复杂化或加重的病状或病症。术语“可以通过降低热量(或营养)利用率来缓解的病状或病症”在本文中用于表示由相对高的营养利用率引起、复杂化或加重的受试者的任何病状或病症或者可以通过降低营养利用率(例如通过减少食物摄入量)来缓解的任何病状或病症。胰岛素抗性、葡萄糖耐受不良或患有任何形式的糖尿病(例如，1型、2型或妊娠期糖尿病)的受试者也可以受益于根据本发明的方法。

本发明涉及例如能量代谢病症等代谢病症的治疗。这类病症包含与卡路里摄入量增加相关的病状或病症，包含但不限于胰岛素抗性、葡萄糖耐受不良、肥胖症、糖尿病(包含2型糖尿病)、进食障碍、胰岛素抗性综合征和阿尔茨海默病。

根据本发明，PYY类似物优选地用于治疗人类。然而，虽然本发明的化合物将通常用于治疗人类受试者，但所述化合物也可以用于治疗以下动物的类似或相同病症：其它脊椎动物(例如其它灵长类动物)；农场动物(例如猪、牛和家禽)；运动动物(例如马)；伴侣动物(例如狗和猫)。

组合物

虽然单独施用活性成分是可能的，但活性成分存在于药物调配物或组合物中是优选的。因此，本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包括根据本发明的PYY类似物和药学上可接受的载剂以及任选地其它的治疗成分。本发明的药物组合物可以采取如以下所描述的药物调配物的形式。

根据本发明的药物调配物包含适合于以下施用的药物调配物：口服；肠胃外(包含皮下、皮内、肌肉内、静脉内和关节内)；吸入(包含可以通过各种类型的计量剂量加压气雾器、雾化器或吹入器产生的精细颗粒粉尘或薄雾)；直肠和局部(包含真皮、经皮、经粘膜、经颊、舌下和眼内)，尽管最适合的途径可以取决于例如接受者的病状和病症。

调配物可以方便地以单位剂型呈现并且可以通过制药业领域中熟知的任何方法来制备。所有方法包含使活性成分与构成一种或多种辅助成分的载剂缔合的步骤。通常，通过使活性成分与液体载剂或精细分散的固体载剂或两者均匀且紧密地缔合并且然后在必要时使产品成型为期望的调配物来制备调配物。

适合于口服施用的本发明的调配物可以以离散单位呈现，如各自含有预先确定量的活性成分的胶囊、小袋或片剂；呈粉剂或颗粒剂；呈水性液体或非水性液体中的溶液或悬浮液；或呈水包油型液体乳剂或一种油包水型液体乳剂。活性成分还可以以大丸剂、药糖剂或糊剂呈现。各种药学上可接受的载剂及其调配物描述于标准调配物论述中，例如，E.W.Martin的《雷明登氏药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》。还参见Wang,Y.J.和Hanson,M.A.,《肠胃外科学与技术杂志(Journal of Parenteral Scienceand Technology)》,技术报告编号10,增刊.42:2S,1988。

片剂可以通过任选地与一种或多种辅助成分压制或模制来制备。可以通过在适合的机器中压制任选地混合粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑、表面活性剂或分散剂的呈自由流动形式的活性成分(如粉末或颗粒)来制备。模制片剂可以通过在适合的机器中模制用惰性液体稀释剂润湿的粉状化合物的混合物来制备。片剂可以任选地进行包衣或刻痕并且可以调配成使活性成分在其中缓慢释放或控制释放。本发明的化合物可以例如以适合于立即释放或延长释放的形式施用。立即释放或延长释放可以通过使用包括本发明化合物的适合的药物组合物来实现，或者，特别是在延长释放的情况下，通过使用如皮下植入器或渗透泵等装置来实现。本发明化合物也可以经脂质体施用。

优选地，根据本发明的组合物适合于例如通过注射来皮下施用。根据某些实施例，组合物可以含有例如铜、铁、铝、锌、镍或钴离子等金属离子。这类离子的存在可以限制溶解度并且因此延迟从皮下施用部位吸收进入循环系统。在一个特别优选的实施例中，组合物含有锌离子。锌离子可以以任何适合的浓度存在，例如以10:1到1:10、8:1到1:8、5:1到1:5、4:1到1:4、3:1到1:3、2:1到1:2或1:1的与肽分子的摩尔比存在。在一个实施例中，药物组合物的pH小于5并且所述药物组合物包括锌离子。

用于口服施用的示例性组合物包含悬浮液，所述悬浮液可以含有例如用于赋予容积的微晶纤维素、作为悬浮剂的海藻酸或海藻酸钠、作为增粘剂的甲基纤维素和如本领域已知的甜味剂或增味剂；以及立即释放片剂，所述立即释放片剂可以含有例如微晶纤维素、磷酸二钙、淀粉、硬脂酸镁和/或乳糖和/或如本领域已知的其它赋形剂、粘合剂、填充剂、崩解剂、稀释剂和润滑剂。本发明的PYY类似物或其变体、衍生物、盐或溶剂化物也可以通过舌下和/或经颊施用来通过口腔递送。模制片剂、压制片剂或冷冻干燥片剂是可以使用的示例性形式。示例性组合物包含用如甘露醇、乳糖、蔗糖和/或环糊精等快速溶解的稀释剂调配本发明一种或多种化合物的组合物。这类调配物中还可以包含如纤维素(avicel)或聚乙二醇(PEG)等高分子量赋形剂。这类调配物还可以包含帮助粘膜粘附的赋形剂，如羟丙基纤维素(HPC)、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羧甲基纤维素钠(SCMC)、马来酸酐共聚物(例如，甘特兹(Gantrez))以及控制释放的试剂，如聚丙烯共聚物(例如卡波普934)。为了易于制造和使用，还可以加入润滑剂、助流剂、调味剂、着色剂和稳定剂。

用于肠胃外施用的调配物包含水性和非水性无菌注射溶液，所述溶液可以含有抗氧化剂、缓冲剂、抑菌剂和提供与预期接受者的血液等渗的调配物的溶质；以及水性和非水性无菌悬浮液，所述悬浮液可以包含悬浮剂和增稠剂。所述调配物可以存在于单位剂量或多剂量容器中，例如密封的安瓿瓶和小瓶，并且可以储存在仅需要紧接着在使用之前加入无菌液体载剂(例如盐水或注射用水)的冷冻干燥(冻干)条件下。可以由前述种类的无菌粉末、颗粒和片剂制备临时注射溶液和悬浮液。用于肠胃外施用的示例性组合物包含可注射溶液或悬浮液，所述可注射溶液或悬浮液可以含有例如适合的无毒、肠胃外可接受的稀释剂或溶剂(如甘露醇、1,3-丁二醇、水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液)；或其它适合的分散剂或湿润剂和悬浮剂(包含合成的甘油单酯或甘油二酯)以及脂肪酸(包含油酸或克列莫佛(Cremaphor))。水性载剂可以是例如pH为约3.0到约8.0、优选地pH为约3.5到约7.4(例如3.5到6.0、例如3.5到约5.0)的等渗缓冲剂溶液。有用的缓冲剂包含柠檬酸钠-柠檬酸和磷酸钠-磷酸以及乙酸钠/乙酸缓冲剂。组合物优选地不包含氧化剂和其它的已知对PYY和相关分子有害的化合物。可以包含的赋形剂是例如其它蛋白质，如人血清白蛋白或血浆制剂。如果需要的话，则药物组合物还可以含有少量无毒的辅助物质，如湿润剂或乳化剂、防腐剂和pH缓冲剂等，例如，乙酸钠或脱水山梨糖醇单月桂酸酯。

在一个实施例中，药物组合物存在于对人进行皮下施用的注射器或其它施用装置中。

用于鼻用气雾剂或吸入施用的示例性组合物包含盐水中的溶液，所述溶液可以含有例如苄醇或其它适合的防腐剂、用于增强生物利用率的吸收促进剂和/或如本领域已知的其它增溶剂或分散剂。方便地，在用于鼻用气雾剂或吸入施用的组合物中，在使用适合的推进剂(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合的气体)的情况下，本发明的化合物可以从加压包或雾化器中以气雾喷雾剂呈现的形式递送。在加压气雾剂的情况下，剂量单位可以通过提供用于递送计量量的阀门来确定。用于吸入器或吹入器的胶囊和药筒(例如，明胶)可以被调配成包含化合物与适合的粉末基质(例如乳糖或淀粉)的粉末混合物。在一个具体的非限制性实例中，本发明的化合物作为气雾剂通过气雾剂适配器(也称为致动器)从计量剂量阀门施用。任选地，还包含稳定剂和/或包含用于深肺递送的多孔颗粒(例如，参见美国专利第6,447,743号)。

用于直肠施用的调配物可以与如可可脂、合成甘油酯或聚乙二醇一起作为保留灌肠或栓剂呈现。这种载剂在常温下通常是固体，但在直肠腔中液化和/或溶解以释放药物。

用于在口腔中(例如经颊或舌下)局部施用的调配物包含包括调味基质(如蔗糖和***胶或黄蓍胶)中的活性成分的锭剂以及包括基质(如明胶和甘油或蔗糖和***胶)中的活性成分的软锭剂。用于局部施用的示例性组合物包含局部载剂，如液体石腊和聚乙烯的软膏基质(Plastibase)(用聚乙烯胶凝的矿物油)。

优选的单位剂量调配物是含有PYY类似物的如前所述的有效剂量或其适当部分的调配物。

应当理解，关于正在讨论的调配物类型，除以上特别提及的成分外，本发明的调配物可以包含本领域中的常规的其它试剂，例如，适合于口服施用的调配物可以包含调味剂。

本发明的PYY类似物也适合于作为持续-释放系统施用。本发明的持续-释放系统的适合的实例包含适合的聚合材料，例如呈成型制品(例如，薄膜或微胶囊)形式的半-透性聚合物基质；适合的疏水材料，例如在可接受的油中的乳剂；或离子交换树脂；以及本发明的化合物的微溶衍生物，例如，微溶盐。持续-释放系统可以以以下施用：口服；直肠；肠胃外；脑池内；***内；腹膜内；局部(例如作为粉末、软膏、凝胶、滴剂或经皮贴剂)；经颊；或作为口腔或鼻用喷雾剂。

用于施用的制剂可以进行适合地调配以给予本发明的化合物的控制释放。例如，药物组合物可以呈颗粒形式，所述颗粒包括生物可降解聚合物中的一种或多种聚合物、多糖胶凝和/或生物粘附聚合物、两亲性聚合物、能够修饰式(I)的化合物颗粒的界面性质的试剂。这些组合物显示出允许活性物质的控制释放的某些生物相容性特征。参见美国专利第5,700,486号。

本发明的PYY类似物可以通过泵递送(参见Langer,见上文；Sefton,《CRC生物医药工程评论(CRC Crit.Ref.Biomed.Eng.)》14:201,1987；Buchwald等人,《外科学(Surgery)》88:507,1980；Saudek等人,《新英格兰医学杂志》321:574,1989)或通过连续皮下注射，例如，使用微型泵。也可以采用静脉内溶液袋。选择适当剂量的关键因素是所获得的结果，如通过总体重或脂肪量与肌肉量之比减少或者通过如从业者认为适当的用于测量控制或预防肥胖或预防肥胖相关病状的其它标准所测量的。其它控制释放系统在Langer的评论(《科学(Science)》249:1527-1533,1990)中进行讨论。本公开的另一方面，本发明的化合物通过植入式泵递送，例如以下美国专利所描述的：美国专利第6,436,091号；美国专利第5,939,380号；美国专利第5,993,414号。

植入式药物输注装置用于向患者提供药物或任何其它治疗剂的恒定且长期的剂量或输注。本质上，可以将这种装置分类为主动或被动。可以将本发明的化合物调配成储库制剂。这类长效储库调配物可以通过植入(例如皮下或肌肉内)或通过肌肉内注射施用。因此，例如，化合物可以用以下进行调配：适合的聚合或疏水性材料(例如作为可接受的油中的乳剂)；或离子交换树脂；或作为微溶衍生物，例如，作为微溶盐。

治疗有效量的本发明的PYY类似物可以以单个脉冲剂量、以大剂量或以随时间推移的脉冲剂量施用。因此，在脉冲剂量中，提供了本发明的PYY类似物的大剂量施用，随后是其中未向受试者施用本发明的化合物的时间段，随后是第二次大剂量施用。在具体的非限制性实例中，本发明的化合物的脉冲剂量在一天的过程、一周的过程或一个月的过程期间施用。

本发明还提供了一种用于与另外的治疗剂同时地、依次地或分开地施用的根据本发明的PYY类似物。本发明还提供了一种包括根据本发明的PYY类似物和另外的治疗剂的药物组合物。另外的治疗剂的实例包含另外的食欲抑制剂、食物摄入量降低剂、血糖降低剂或血脂改变剂。另外的食欲抑制剂的具体的非限制性实例包含安非拉酮(二乙胺苯丙酮)、苯丁胺、马吲哚和苯丙醇胺、芬氟拉明、右芬氟拉明和氟西汀。如以上所提及的，本发明的PYY类似物可以与另外的食欲抑制剂同时地施用或者可以依次地或分开地施用。在一个实施例中，本发明的化合物被调配并且以单个剂量与食欲抑制剂一起施用。

每当期望例如抑制食欲、减少食物摄入量或减少卡路里摄入量等作用时，或者每当期望所述效果的稍微早的时间前(如但不限于期望所述效果的时间前约10分钟、约15分钟、约30分钟、约60分钟、约90分钟或约120分钟)时，可以施用本发明的PYY类似物。

本发明的PYY类似物的治疗有效量将取决于所利用的分子、所治疗的受试者、患病的严重程度和类型以及施用的方式和途径。例如，本发明的PYY类似物的治疗有效量可以在约0.01毫克每千克(kg)体重到约1g每kg体重变化，例如约0.1μg到约20mg每kg体重，例如约1μg到约5mg每kg体重或者约5μg到约1mg每kg体重。

在本发明的一个实施例中，本发明的PYY类似物可以以5到1000nmol每kg体重，例如以10到750nmol每kg体重，例如以20到500nmol每kg体重，特别是以30到240nmol每kg体重施用于受试者。对于75kg受试者，这类剂量对应于以下剂量：375nmol到75μmol，例如750nmol到56.25μmol，例如1.5到37.5μmol，特别是2.25到18μmol。

在一个替代性实施例中，本发明的PYY类似物可以以0.5到135皮摩尔(pmol)每千克体重，例如5到100皮摩尔(pmol)每千克体重，例如10到90皮摩尔(pmol)每千克体重，例如约72pmol每kg体重施用于受试者。在一个具体的非限制性实例中，本发明的PYY类似物以约1nmol或更多、2nmol或更多、或5nmol或更多的剂量施用。在此实例中，本发明的PYY类似物的剂量通常不超过100nmol，例如，所述剂量为90nmols或更少、80nmols或更少、70nmols或更少、60nmols或更少、50nmols或更少、40nmols或更少、30nmols或更少、20nmols或更少、10nmols。例如，剂量范围可以包括任何指定的剂量下限与任何指定的剂量上限的任何组合。因此，本发明的化合物的非限制性剂量范围的实例在1到100nmols、2到90mols、5到80nmols的范围内。

在一个具体的非限制性实例中，以皮下注射的方式施用约1到约50nmol，例如约2到约20nmol，例如约10nmol的本发明的PYY类似物。本领域的技术人员基于所利用的具体PYY类似物的效力、PYY类似物的递送途径以及受试者的年龄、体重、性别和生理条件很容易确定准确的剂量。

本发明的PYY类似物的适合的剂量还包含导致卡路里摄入量降低、食物摄入量降低或食欲降低或者等效于卡路里摄入量降低、食物摄入量降低或食欲降低的能量消耗量增加或者由PYY正常餐后水平引起的能量消耗量增加的剂量。剂量的实例包含但不限于当PYY的血清水平为约40pM到约60pM、或约40pM到约45pM或约43pM时产生的经证明的作用的剂量。

以上所讨论的剂量可以例如一天一次、一天两次、一天三次或一天四次地给予。可替代地，所述剂量可以每2、3或4天一次地给予。在含有锌的缓慢释放的调配物中，所述剂量每3、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或21天一次给予是可能的。根据某些实施例，所述剂量可以在每一餐前不久施用一次。

本发明的具体序列

根据本发明的某些具体实施例，PYY类似物具有图1所示的具体序列之一给出的氨基酸序列。

通过以下非限制性实例说明本发明。

实例

材料与方法：

肽合成

通过标准自动化芴甲氧羰基(Fmoc)固相肽合成(SPPS)方法制备肽。在三环酰胺连接树脂上进行肽合成。使用Fmoc策略连接氨基酸。每个氨基酸均从C端到N端依次地加入。肽偶联由试剂TBTU介导。在存在清除剂的情况下，用三氟乙酸实现从树脂中切割肽。如先前所描述的获得天然PYY 3-36NH₂(WO03/026591)；使用三环酰胺树脂和Fmoc化学的从头合成也是可能的。

肽通过反相HPLC纯化。对所有经纯化的肽进行全面质量控制并且通过在两个缓冲剂系统中的HPLC示出肽纯度大于95％。酸水解后的氨基酸分析证实了氨基酸成分。MALDI-MS示出了预期的分子离子。

结合研究

通过渗透裂解和差速离心来分离过表达人Y2受体(NPYR200000，密苏里州cDNA资源科技中心(Missouri S&T cDNA resource center))的HEK 293细胞的膜制剂，如Morgan等人(《神经内分泌学杂志(Neuroendocrinol)》1996.8283-290)所描述的。如由Druce等人(2009《内分泌学(Endocrinology)》150(4)712-22)所描述的完成了受体结合分析，除了所用缓冲剂为0.02M HEPES pH7.4、5mM CaCl₂、1mM MgCl₂、1％牛血清白蛋白、0.1mM抑二肽素A、0.2mM PMSF、10μM磷酰***、作为放射性标记的¹²⁵I-PYY_1-36以及所用人Y2受体以外。

体外受体效力研究

将

hY2 CHO-K1细胞(每孔10,000个细胞(96孔板))重悬浮于含有0.2mM IBMX和0.02mM佛司可林(刺激cAMP产生)的培养基中并且在一定浓度范围内测试肽，持续30分钟。通过裂解细胞使反应停止并且60分钟后使用Cisbio cAMP dynamic 2试剂盒定量cAMP。所测试的肽是“Y1419”，其落入本发明的范围并且具有序列Pro-Ile-Lys-Pro-Glu-Ala-Pro-Gly-Glu-Gly-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Leu-His-Tyr-Tyr-Ala-Ala-Leu-Arg-His-Phe-Leu-Asn-His-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂(SEQ ID No:23)并且比较肽“Y242”具有序列

Pro-Ile-His-Pro-His-Ala-Pro-Gly-Glu-Asp-Ala-Ser-Pro-Glu-Glu-Leu-Asn-His-Tyr-Tyr-Ala-Ala-Leu-Arg-His-Tyr-Leu-Asn-His-Val-Thr-Arg-Gln-Arg-Tyr-NH₂(SEQ ID NO:44)。

动物

雄性威斯塔大鼠(英国马盖特的查尔斯河有限公司(Charles River Ltd,Margate,UK))被用于动物实验

大鼠喂养研究

大鼠被单独圈养在IVC笼子中。动物被随机分为治疗组，其中通过体重进行分层。所有肽溶液在施用前立即新鲜制备。用于所有研究的媒剂为5％v/v水和95％NaCl(0.9％w/v)。肽和媒剂以25或50nM/Kg体重的剂量通过皮下注射施用。动物在6天内每24小时注射一次并且研究继续进行另外24小时，从第一次注射到研究结束总共7天。在研究期期间，动物可以自由获取食物和水。研究结束时对动物进行称重并且记录总减轻重量(如果有的话)。

结果

图1a公开了本发明在其所有方面的范围涵盖的许多具体序列。这些序列中的每一个序列均是本发明的具体实施例。分配给每个序列的数字对应于本文其它地方提及的“Y”数字(即以“1419”开始的行被理解为公开了类似物数字“Y1419”的序列)。图1a还在第一行公开了天然存在的人PYY序列以供参考。

下表提供了在hY2 CHO-K1细胞中过表达的人神经肽Y受体Y2处的图1的示例肽的受体效力数据。将一万个细胞每孔(96孔板)重悬浮于含有0.2mM IBMX和0.02mM佛司可林(刺激cAMP产生)的培养基中并且在一定浓度范围内测试肽，持续30分钟。通过裂解细胞使反应停止并且60分钟后使用Cisbio cAMP dynamic 2试剂盒定量cAMP。提供的值是示例化合物EC₅₀与PYY_2-36 EC₅₀的比率(例如对于“与PYY_2-36±SEM的平均比率”栏，值0.5将指示抑制50％最大cAMP释放所需的示例化合物的浓度是所需的PYY_2-36的浓度的一半，并且为2的值将指示抑制50％最大cAMP释放所需的示例化合物的浓度是PYY_2-36的浓度的2倍。可以看出，本发明的示例肽比前一代优选化合物(Y242出于比较的目的包含于表中)更具效力。

肽	与PYY<sub>2-36</sub>±SEM的平均比率
		Y242	10.0±0.69
Y1276	0.6±0.06
		Y1319	0.6±0.09
Y1371	0.9±0.06
		Y1372	1.1±0.16
Y1377	1.0±0.07
		Y1379	0.9±0.09
Y1419	0.8±0.16
		Y1421	0.9±0.09
Y1431	0.9±0.07
		Y1447	1.4±0.31
Y1448	1.7±0.46
		Y1450	1.1±0.20
Y1477	0.9±0.06
		Y1489	1.0±0.06
Y1490	0.9±0.28
		Y1518	1.7±0.13
Y1528	0.5±0.08
		Y1553	0.8±0.25
Y1558	0.6±0.05

图2示出了化合物Y242和化合物Y1419抑制佛司可林产生的不同能力。可以看出，1419是比前一代优选化合物更具效力的抑制剂。

图3和图4示出了对已经接受单次皮下注射的对照盐水或盐水中的肽的禁食过夜的雄性威斯塔大鼠中的Y242(图3)和Y1419(图4)的活性进行比较的大鼠喂养实验的结果。在接下来的6天内监测其食物摄入量和体重并且示出的值为平均值+/-SEM。可以看出，尽管比较化合物Y242在前48小时产生了有希望的食物摄入量降低和体重降低，但这种降低不能持续更长的时间段(表明比较化合物尽管有效，但需要在一天或两天后重新给药)。化合物Y1419的表现好得多并且单个初始剂量在施用后160小时仍具有活力，表明化合物有希望用作每周或不那么频繁地施用的药物。

图5示出了喂养实验的结果，其中禁食(24小时)的雄性威斯塔大鼠(查尔斯河)接受了单次皮下注射的盐水或本发明的示例肽(100nmol/kg)。测量从给药到给药后48小时的总食物摄入量以及从禁食前到给药后48小时的体重变化。

图6示出了本发明的各种所指示的化合物抑制佛司可林产生的能力。PYY2-36的数据也包含在内作为比较。