阅读说明：本技术 一种顺式-阿魏酸戊酯化合物及其制备方法和应用 (Cis-ferulic acid amyl ester compound and preparation method and application thereof ) 是由 张华� 张君生 曹欣欣 徐德峰 于 2020-07-31 设计创作，主要内容包括：本发明属于食品和天然药物化学领域,提供了一种顺式-阿魏酸戊酯化合物,其结构式如图1所示。上述阿魏酸戊酯化合物从食用菌杏鲍菇(<I>Pleurotus eryngii</I>)中通过溶剂提取、萃取、柱层析和高效液相色谱等方法分离得到。药理实验表明该化合物能够显著淬灭DPPH自由基的活性；可用于制备保健食品,以及预防和/或治疗因自由基产生导致的炎症、癌症相关疾病的组合物、药物。(The invention belongs to the field of food and natural pharmaceutical chemistry, and provides a cis-ferulic acid amyl ester compound, the structural formula of which is shown in figure 1. The above ferulic acid amyl ester compound is prepared from edible mushroom Pleurotus eryngii (Pleurotus eryngii) Pleurotus eryngii ) Middle-pass dissolvingExtracting with solvent, extracting, performing column chromatography, and separating with high performance liquid chromatography. Pharmacological experiments show that the compound can obviously quench the activity of DPPH free radicals; can be used for preparing health food, and composition and medicine for preventing and/or treating inflammation and cancer related diseases caused by free radical generation.)

一种顺式-阿魏酸戊酯化合物及其制备方法和应用

技术领域

本发明属于食品和天然药物化学领域，涉及一种顺式-阿魏酸戊酯化合物的制备方法及其作为自由基清除剂/抗氧化剂的应用。

背景技术

自由基，化学上也称为“游离基”，是指化合物的分子在光热等外界条件下，共价键发生均裂而形成的具有不成对电子的原子或基团。一般情况下，生命是离不开自由基活动的。人体里也有自由基，受控的自由基对人体是有益的，它们既可以帮助传递维持生命活力的能量，也可以被用来杀灭细菌和寄生虫，还能参与排除毒素；但当人体中的自由基超过一定的量，便会失去控制，给我们的生命带来伤害。生命体内的自由基是与生俱来的，生命延续至今，说明生命本身具有平衡自由基或清除多余自由基的能力。然而，随着人类文明的飞速发展不断破坏着生态环境，制造着更多的自由基，已经超过了生命所能正常保持平衡的标准，使得人类健康面临着前所未有的严峻挑战。随着对自由基研究的逐步深入，我们越来越清楚地认识到，清除多余自由基的措施有益于某些疾病的预防和治疗，而自由基清除剂的研究对人体健康的意义便显得非常重大。因此，开发和利用高效无毒的天然抗氧化剂----自由基清除剂，已成为当今食品和医药研发领域的重要研究方向；尤其是从可食用资源中寻找开发新的自由基清除剂，具有更大的研究价值和广阔的开发前景。

发明内容

为了进一步挖掘杏鲍菇的经济和药用价值，本发明提供一种从杏鲍菇中提取的顺式-阿魏酸戊酯化合物，其对DPPH自由基具有显著的清除活性。

本发明的另一目的是提供一种上述顺式-阿魏酸戊酯化合物的制备方法。

本发明的再一目的是提供一种上述顺式-阿魏酸戊酯化合物作为DPPH自由剂清除剂/抗氧化剂的应用。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案。

一种顺式-阿魏酸戊酯化合物，其结构式如图1所示。

上述一种顺式-阿魏酸戊酯化合物的制备方法，包括以下步骤：

杏鲍菇干燥子实体，粉碎后用乙醇浸提，浸提液减压浓缩至无醇味，得到粗浸膏；

将步骤所得粗浸膏悬浮于蒸馏水中，用乙酸乙酯萃取，合并乙酸乙酯萃取液，减 压浓缩，得乙酸乙酯萃取物；

将步骤中所得乙酸乙酯萃取物过D101大孔树脂柱层析，依次用30%、50%、70%、95% 比例的乙醇-水洗脱，得四个组分Fr A1~A4；

将步骤

中所得组分Fr A3过正相硅胶柱层析，用99:1至4:1的石油醚-乙酸乙酯梯 度洗脱，得八个组分Fr B1~B8；

将步骤中所得组分Fr B5过RP-18反相硅胶柱层析，用70%至100%甲醇-水梯度洗 脱，得五个组分Fr C1~C5；

将步骤

中所得组分Fr C3过Agilent SB-C₁₈柱高效液相色谱，用80%的乙腈-水溶 液等度洗脱，检测波长为254 nm，收集保留时间为18.2 min的组分，即得上述图1所示的顺 式-阿魏酸戊酯化合物。

步骤

中所述杏鲍菇与乙醇的料液比为1:2~1:4（w/v）。

步骤

中所述杏鲍菇干燥子实体粉碎至粒度直径小于3 mm。

步骤中所述浸提次数为3~4次，每次时间为7~10天。

步骤中所述浓缩为原体积的1/50~1/70。

步骤

中所述粗浸膏与水的体积比为1:1~1:2。

步骤

中所述乙酸乙酯与水的体积比为1:1~1:1.5。

步骤

中所述乙酸乙酯萃取次数为3~4次。

步骤中，流速3.0 mL/min。

一种上述的顺式-阿魏酸戊酯化合物在作为自由剂清除剂和抗氧剂方面的应用。

附图说明

图1是化合物的结构式；

图2是化合物的氢谱（600 MHz）和碳谱（151 MHz）（CD3OD）数据；

图3是化合物的高分辨质谱；

图4是化合物的氢谱；

图5是化合物的碳谱；

图6是化合物的二维COSY谱；

图7是化合物的二维HSQC谱；

图8是化合物的二维HMBC谱。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明，但本发明不受下述实施例的限制。

实施例1 一种顺式-阿魏酸戊酯化合物的制备。

杏鲍菇干燥子实体，粉碎至粒度直径小于3 mm，用95%的乙醇浸泡提取3次，每次7天。将乙醇提取液合并，减压浓缩得到粗浸膏。粗浸膏悬浮于1.5 L的水中，然后用乙酸乙酯萃取三次，每次1.0 L。合并乙酸乙酯萃取相，减压浓缩得到乙酸乙酯萃取物。

将该萃取物进行D101大孔树脂柱层析，用乙醇-水（v/v，30%、50%、70%和95%）洗脱，依次得到4个组分Fr A1~A4。组分Fr A3经正相硅胶柱层析，用99:1至4:1的石油醚-乙酸乙酯梯度洗脱，根据薄层层析分析洗脱液成分，收集得到八个组分Fr B1~B8。组分Fr B5经RP-18反相硅胶柱层析，用70%至100%甲醇-水梯度洗脱，得五个组分Fr C1~C5。Fr C3过AgilentSB-C₁₈柱高效液相色谱，用80%的乙腈-水溶液等度洗脱，检测波长为254 nm，收集保留时间为18.2 min的组分，除去溶剂即得上述图1所示的顺式-阿魏酸戊酯化合物纯品。

实施例2 顺式-阿魏酸戊酯化合物的结构鉴定。

化合物的结构鉴定：通过分析高分辨质谱（图3）得到准分子离子峰m/z 265.1432（[M ＋ H]^＋, 理论值265.1434），结合碳谱（图5）数据确定了其分子式为C15H20O4。氢谱数据（图4）中除了显示顺式-阿魏酰基的信号[δ_H 7.76 (d, J = 1.9 Hz), 7.10 (dd, J =8.1, 1.9 Hz), 6.90 (d, J = 8.1 Hz); 6.79, 5.82 (both d, J = 12.8 Hz); 5.83(s, OH); 3.93 (s, 3H)]外，还观察到戊氧基的信号[δ_H 4.12 (t, J = 6.8 Hz, 2H),1.65 (m, 2H), 1.33 (m, 4H) and 0.90 (t, J = 6.8 Hz, 3H)]；进一步分析碳谱，确认了上述基团的存在。两个基团通过酯键连接起来是根据戊氧基H2-1＇到阿魏酰基C-9的HMBC关键信号确定。以上结构鉴定得到了二维核磁数据的最终确认（图6-8）。

化合物的氢谱（600 MHz）和碳谱（151 MHz）（CD3OD）数据见图2。

实施例3 化合物自由基清除/抗氧化活性的测试。

采用DPPH法测定化合物的自由基清除/抗氧化活性：在96孔板中加入100 μL，200μM的DPPH乙醇溶液和100 μL待测样品的乙醇溶液，25 °C孵育30 min，于517 nm 处测定反应溶液的吸光度A_S，以100 μL，200 μM的DPPH乙醇溶液和100 μL乙醇溶液的混合液作为阴性对照A_C，DPPH 自由基清除率（%）= [(A_C- A_S)/ A_C]×100%。采用抗坏血酸（维生素C）作为阳性对照。

实验结果显示，图1所示顺式-阿魏酸戊酯化合物具有清除氧自由基的活性，IC₅₀为25.0 ± 0.7 μM，与阳性对照的活性相当（IC₅₀ 25.4 ± 2.9 μM）。