阅读说明：本技术 肉桂酸酯衍生物及其作为酪氨酸酶抑制剂和凝胶剂的应用 (Cinnamate derivatives and their use as tyrosinase inhibitors and gels ) 是由 邓翀 姜祎 唐凯 张化为 黄文丽 宋小妹 王薇 颜永刚 于 2020-04-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一类肉桂酸酯衍生物及其作为酪氨酸酶抑制剂和凝胶剂的应用,该衍生物的结构通式是：<Image he="169" wi="700" file="DDA0002473485050000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>式中,X、Y各自独立的代表O、S、NH中任意一种；R<Sup>1</Sup>、R<Sup>2</Sup>各自独立的代表H、OH、甲氧基、烯丙基、乙酰基中任意一种；R<Sup>3</Sup>、R<Sup>4</Sup>各自独立的代表H、OH、甲氧基、叔丁基二甲基硅氧基、乙酯基中任意一种,且R<Sup>3</Sup>、R<Sup>4</Sup>不同时为叔丁基二甲基甲硅烷基；n是2～5的整数。本发明肉桂酸酯衍生物对蘑菇酪氨酸酶二酚酶活性和B16F10小鼠黑色素瘤细胞内酪氨酸酶与黑素含量具有明显的抑制活性,可用于酪氨酸酶抑制剂的制备。同时本发明肉桂酸酯衍生物在橄榄油中能够形成稳定的凝胶,可作为小分子凝胶剂用于化妆品等。(The invention discloses cinnamate derivatives and application thereof as tyrosinase inhibitors and gels, wherein the structural general formula of the cinnamate derivatives is as follows: wherein X, Y independently represents any one of O, S, NH; r 1 、R 2 Each independently represents H, OH, methoxyl, allyl, acetyl; r 3 、R 4 Each independently represents H, OH, methoxyl, tert-butyl dimethyl siloxy, carbethoxy, and R 3 、R 4 Is not tert-butyldimethylsilyl at the same time; n is an integer of 2 to 5. The cinnamate derivative has obvious inhibition activity on mushroom tyrosinase diphenol enzyme activity and tyrosinase and melanin content in B16F10 mouse melanoma cells, and can be used for preparing tyrosinase inhibitors. Meanwhile, the cinnamate derivative can form stable gel in olive oil, and can be used as a micromolecule gel for cosmetics and the like.)

肉桂酸酯衍生物及其作为酪氨酸酶抑制剂和凝胶剂的应用

技术领域

本发明涉及一类具有抑制酪氨酸酶活性的肉桂酸酯衍生物。

背景技术

酪氨酸酶参与黑色素的生成，并且是限制黑色素生成的关键酶。由于酪氨酸酶的异常活性，会产生一系列高活性醌导致色素的过度沉着，从而影响皮肤美观，如黄褐斑、雀斑、老年斑、炎症后黑皮病等黑色素沉着症，多项研究报道黑色素过度沉着甚至导致黑色素瘤及早发性老年痴呆疾病。尤其是黑色素瘤其以恶性化程度高，死亡率高为特征，据2018北大肿瘤医院统计，目前我国黑色瘤检出率快速增加，每年新发病例2万例。而酪氨酸酶在黑色素生成过程中起关键作用，已经成为抑制黑色素过度生成的主要靶点。

酪氨酸酶抑制剂在药物和化妆品中的应用越来越多，主要用于预防和治疗色素沉着疾病。目前应用的酪氨酸酶抑制剂例如曲酸(Contact Dermatitis,1995,32(1)：9-13)、熊果苷及氢醌(丹皮酚结构类似物及其化学修饰物对酪氨酸酶抑制作用的研究[D].南昌大学,2014)等化合物大多数仍具有相应的缺点，例如细胞毒性、致癌性、导致皮炎、神经退行性症状、过敏、白斑病、褐黄病(Bioorganic&Medicinal Chemistry,2017，25(5):1687-1695)，以及对骨髓具有潜在的毒性和自身的不稳定性，使其在医药领域和食品工业的应用受到限制；此外，铅和汞离子具有抑制黑色素生成的作用，但是会导致部分使用者皮肤白斑，神经系统失调，视力减退，肾脏损坏，皮肤粘膜敏感及影响胚胎发育。鉴于当下市场使用酪氨酸酶抑制剂的诸多缺点，寻求更加安全有效稳定的酪氨酸酶抑制剂成为研究者关注的焦点。

近年来，随着酪氨酸酶抑制剂作为食品添加剂和美白剂的需求日益增加，一大批高活性的酪氨酸酶抑制剂接连被报道，尤其值得关注的是利用天然活性化合物骨架进行适当的结构修饰及活性筛选，得到具有较强活性的酪氨酸酶抑制剂。其中，槲皮素、阿魏酸和肉桂酸等天然活性酚类化合物表现出对蘑菇酪氨酸酶的抑制活性(Food Chem,2019,297:124910)。肉桂酸香草基酯类似物的IC₅₀为213.2μM(Bioorg Chem,2019,93:103316)。肉桂酸酰胺类衍生物活性略优于曲酸(78.8μM)(Food Chem,2012,134(2):1081-1087)。肉桂酸苯乙酯具有酪氨酸酶抑制活性(J Nat Prod,2013,76(8):1399-1405)。此外，一系列研究均表明小分子酚酸类成分与肉桂酸类成分具有较好的酪氨酸酶抑制活性(复合抑制剂对酪氨酸酶抑制的相互作用研究[D].广东药学院,2015；抑制剂对蘑菇酪氨酸酶的抑制效应及抗菌活性[D].厦门大学,2007)。香芹酚衍生物的IC₅₀值为16.69μM(Plos One,2017,12(5):351-359)。

综上，根据目前国内外所报道新型酪氨酸酶抑制剂的合成与活性研究，一方面部分活性较高化合物缺少细胞毒性等细胞实验，无法证实其可靠的安全性；另一方面酪氨酸酶的抑制活性不足。

发明内容

本发明的目的是提供一类安全且高效的具有酪氨酸酶抑制活性的肉桂酸酯衍生物，以及所述肉桂酸酯衍生物的应用。

解决上述技术问题所采用的肉桂酸酯衍生物的结构通式如下所示：

式中，X、Y各自独立的代表O、S、NH中任意一种；R¹、R²各自独立的代表H、OH、甲氧基、烯丙基、乙酰基中任意一种；R³、R⁴各自独立的代表H、OH、甲氧基、叔丁基二甲基硅氧基、乙酯基中任意一种，且R³、R⁴不同时为叔丁基二甲基硅氧基；n是2～5的整数。

上述肉桂酸酯衍生物进一步优选下述化合物1～14中任意一种：

化合物1：(E)-3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)丙基-3-(3-甲氧基-4-(丙-1-烯-2-基氧基)苯基)丙烯酸酯

化合物2：(E)-3-(3-乙酰-4-羟基苯氧基)丙基-3-(4-乙酰氧基-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯

化合物3：(E)-3-(4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基)丙基-3-(4-乙酰氧基-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯

化合物4：(E)-4-(3-(3-(3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)丙氧基)-3-氧代-1-丙烯基)-1,2-苯二乙酸酯

化合物5：(E)-4-(3-(3-(3-(3-乙酰基-4-羟基苯氧基)丙氧基)-3-氧代-1-丙烯基)-1,2-苯二乙酸酯

化合物6：(E)-4-(3-(3-(3-(4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基)丙氧基)-3-氧代-1-丙烯-1-基)-1,2-苯二乙酸酯

化合物7：3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)肉桂酸丙酯

化合物8：3-(3-乙酰基-4-羟基苯氧基)肉桂酸丙酯

化合物9：3-(4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基)肉桂酸丙酯

化合物10：(E)-3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)丙基3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯

化合物11：(E)3-(3-乙酰基-4-羟基苯氧基)丙基(E)-3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯

化合物12：(E)-3-(4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基)丙基3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-甲基苯基)丙烯酸酯

化合物13：(E)-3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)丙烯酸-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙酯

化合物14：(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸-3-(3-乙酰基-4-羟基苯氧基)丙酯

本发明肉桂酸酯衍生物的结构式中，R³、R⁴各自独立的代表H、甲氧基、乙酯基中任意一种时，其合成方法由下述步骤组成：

1、将化合物I、化合物II、无水K₂CO₃、有机溶剂A加至圆底烧瓶中，化合物I与化合物II、无水K₂CO₃的摩尔比为1:1.2～1.5:0.5～0.8，升温至60～100℃，反应2～8小时，分离纯化产物，得到化合物III，其反应方程式如下：

2、将化合物IV与二氯亚砜按质量-体积比为1g:4～8mL加至圆底烧瓶中，连接尾气吸收装置，升温至40～80℃，反应至无气体产生后升温至90℃回收二氯亚砜，得到化合物V，其反应方程式如下：

3、在氮气保护下，将化合物III、有机溶剂B、缚酸剂加入圆底烧瓶中，降温至0℃，滴加化合物V，化合物III、缚酸剂、化合物V的摩尔比为1:1.5～2.0:2.～2.5，滴加完后升至室温，室温反应4～5小时。反应结束后，减压除去溶剂，分别用质量分数5％的NaHCO₃水溶液及饱和NaCl水溶液萃取，无水硫酸镁干燥，100～200目硅胶柱色谱分离(石油醚:乙酸乙酯＝1:2，V/V)，得到化合物VI，即肉桂酸酯衍生物，其反应方程式如下：

本发明肉桂酸酯衍生物的结构式中，R³、R⁴中有一个为叔丁基二甲基硅氧基时，其合成方法由下述步骤组成：

1、按照上述步骤1合成化合物III。

2、将化合物IV'与叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)按摩尔比为1:2.5～3.5加入到盛有有机溶剂A的圆底烧瓶中，温度降至-10℃，搅拌至完全溶解，慢慢滴入三乙胺的二氯甲烷溶液，搅拌1～2小时后，温度逐渐升至室温，继续搅拌反应3～5小时。反应结束后用水洗涤，有机层经MgSO₄干燥，减压回收过量溶剂，100～200目硅胶柱色谱分离(石油醚:乙酸乙酯＝2:1，V/V)，得到中间体化合物。将中间体化合物与有机溶剂A加于圆底烧瓶中，连接尾气吸收装置，并加入SOCl₂，升温至40～80℃，反应至无气体产生后升温至90℃回收二氯亚砜，冷却至室温后减压浓缩，得到化合物V'；其中化合物IV'与三乙胺的摩尔比为1:0.8～1，化合物IV'与SOCl₂的质量-体积比为1g:2～5mL。反应方程式如下：

式中R'代表H、OH、甲氧基、乙酯基中任意一种。

3、在氮气保护下，将化合物III、有机溶剂B、缚酸剂加入圆底烧瓶中，降温至0℃，滴加中间体V'，化合物III、缚酸剂、化合物V'的摩尔比为1:1.5～2.0:2.～2.5，滴加完后升至室温，室温反应4～5小时。反应结束后，减压除去溶剂，分别用质量分数5％的NaHCO₃水溶液及饱和NaCl水溶液萃取，无水硫酸镁干燥，100～200目硅胶柱色谱分离(石油醚:乙酸乙酯＝1:2，V/V)，得到化合物VI'，即肉桂酸酯衍生物，其反应方程式如下：

本发明肉桂酸酯衍生物的结构式中，R³、R⁴中有一个为OH，另一个为H、甲氧基、乙酯基中任意一种时，其合成方法是：按照上述方法合成化合物VI'，然后在氮气保护下，将化合物VI'溶于四氢呋喃中，再将慢慢滴加1mol/LNH₄F的四氢呋喃溶液，化合物VI'与NH₄F的摩尔比为1:1.1～1.3，在室温下搅拌反应1小时。反应结束后减压回收溶剂，得到粗品，分别用饱和NaHCO₃水溶液、去离子水和盐水洗涤，有机层用MgSO₄干燥后通过100目硅胶柱色谱纯化，得到化合物Ⅶ，即肉桂酸酯衍生物，其反应方程式如下：

上述的有机溶剂A为N,N-二甲基甲酰胺、丙酮、二甲基亚砜、四氢呋喃中的任意一种；有机溶剂B为N,N-二甲基甲酰胺、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、四氢呋喃中的任意一种。上述的缚酸剂为三乙胺或无水吡啶。

本发明肉桂酸酯衍生物在制备酪氨酸酶抑制剂中的用途。实验结果证明，本发明肉桂酸酯衍生物对蘑菇酪氨酸酶的双酚酶活性及黑素细胞中酪氨酸酶活性和黑素生成具有良好的抑制作用，因此可用于制备抗酪氨酸酶抑制剂。

另外，本发明肉桂酸酯衍生物在橄榄油中能够形成稳定的凝胶，可作为小分子凝胶剂用于化妆品等。

本发明的有益效果如下：

1、本发明利用中药中活性成分的天然骨架，成功合成了一系列对酪氨酸酶具有较强抑制活性的肉桂酸酯衍生物，合成路径短，操作简单，反应原料廉价易得。

2、本发明合成的肉桂酸酯衍生物对蘑菇酪氨酸酶的双酚酶活性及黑素细胞中酪氨酸酶活性和黑素生成具有较强的抑制作用，可用于制备抗酪氨酸酶活性药物。既可以独自使用，亦可与其它酪氨酸酶抑制剂联合使用，其活性明显强于当下广泛使用的酪氨酸酶抑制剂曲酸和熊果苷。

3、本发明肉桂酸酯衍生物在橄榄油中能够形成稳定的凝胶，可作为小分子凝胶剂用于化妆品等。

附图说明

图1是化合物8的¹H NMR图谱。

图2是化合物8的¹³C NMR图谱。

图3是化合物11的¹H NMR图谱。

图4是化合物11的¹³C NMR图谱。

图5是化合物13的¹H NMR图谱。

图6是化合物13的¹³C NMR图谱。

图7是化合物14的¹H NMR图谱。

图8是化合物14的¹³C NMR图谱。

图9是化合物8、13、14和曲酸在10种不同浓度下的酪氨酸酶抑制曲线。

图10是化合物8、11、13和14不同剂量下对B₁₆F₁₀细胞的细胞活力。

图11是化合物8、11、13和14不同剂量下对B₁₆F₁₀细胞抗黑素生成抑制效应。

图12是化合物8、11、13和14对B₁₆F₁₀黑色素细胞中酪氨酸酶的抑制活性。

图13是化合物8、11、13和14在橄榄油中形成凝胶前后的照片。

说明：图10～12中，*:p<0.05，**:p<0.01，***:p<0.001(与模型组对比)，^###：p<0.01(与模型组对比)。

具体实施方式

下面结合附图和实施例对本发明进一步详细说明，但本发明的保护范围不仅限于这些实施例。

实施例1

合成化合物1：(E)-3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)丙基-3-(3-甲氧基-4-(丙-1-烯-2-基氧基)苯基)丙烯酸酯

1、称取1.66g(10.0mmol)丹皮酚(化合物I-1)和0.83g(6.0mmol)K₂CO₃置于圆底烧瓶，并加入100mL丙酮做溶剂，室温下搅拌0.5h，再加入2.08g(15.0mmol)3-溴-1-丙醇(化合物II-1)，加热至80℃回流反应8h，反应完后冷却至室温，减压除去溶剂，硅胶柱色谱纯化，得到2.691g晶体化合物III-1，其产率65％，m.p.56℃。

2、将1.96g(10mmol)化合物IV-1、15mL二氯亚砜加至圆底烧瓶中，连接尾气吸收装置，升温至80℃，反应至无气体产生后升温至90℃回收二氯亚砜，得到化合物V-1。

3、在冰浴、氮气保护条件下，称取2.24g(10mmol)化合物III-1和4.77g(20mmol)化合物V-1置于圆底烧瓶，加入50mL二氯甲烷作溶剂，在搅拌条件下缓慢滴加10mL含1.5g(15mmol)三乙胺的二氯甲烷液，滴加完后升至室温，室温反应4h。反应结束后，减压除去溶剂，分别用质量分数5％的NaHCO₃水溶液及饱和NaCl水溶液萃取，无水硫酸镁干燥，100～200目硅胶柱色谱分离(石油醚:乙酸乙酯＝1:2，V/V)，得到3.92g白色晶体化合物VI-1，即化合物1，m.p.110～111℃，产率56％，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.85(d,J＝8.7Hz,1H),7.66(t,J＝10.9Hz,1H),7.26(d,J＝2.0Hz,1H),7.12(d,1H),7.05(d,J＝8.0Hz,1H),6.53(dd,J＝8.7,1H),6.46(d,J＝2.2Hz,1H),6.38(d,J＝15.9Hz,1H),4.44(t,J＝6.2Hz,2H),4.18(t,J＝6.1Hz,2H),3.86(t,J＝6.7Hz,6H),2.61(s,3H),2.32(s,3H)；¹³CNMR(100MHz,CDCl₃)δ:197.71,168.97,166.82,164.54,160.22,151.45,141.53,132.91,117.94,111.26,105.18,99.06,77.14,76.82,65.14,61.43,55.99,55.66,32.27,28.78,20.78；IR(cm^-1):2976.23,2331.06,1720.48,1605.26,1580.56,1551.26,1414.64,1279.38,1246.35,1225.36,1030.18,1002.64,750.42,716.24。

实施例2

合成化合物2：(E)-3-(3-乙酰-4-羟基苯氧基)丙基-3-(4-乙酰氧基-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯

本实施例的步骤1中，用等摩尔2,4-二羟基苯乙酮(化合物I-2)替换实施例1步骤1中的丹皮酚，其它步骤与实施例1步骤1相同，得到3.52g白色晶体化合物III-2，产率85％。本实施例的步骤3中，用等摩尔化合物III-2替换实施例1步骤3中的化合物III-1，其它步骤与实施例1步骤3相同，得到4.71g白色固体化合物VI-2，即化合物2，产率65％，m.p.143～144℃，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:12.74(s,1H),7.66(s,1H),7.64(d,J＝1.2Hz,1H),7.63(t,1H),7.17(s,1H),7.13(d,J＝1.9Hz,1H),7.10(dd,J＝3.8,1.8Hz,2H),7.06(s,1H),7.04(s,1H),6.45(d,J＝2.5Hz,1H),6.44-6.42(m,2H),6.40(s,1H),6.36(s,1H),4.40(t,J＝6.2Hz,2H),4.14(t,J＝6.1Hz,2H),3.88(s,6H),2.55(s,3H),2.23(s,3H)2.19-2.16(m,2H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:202.77,168.98,166.86,165.34,165.28,151.44,141.51,132.45,121.40,114.01,108.15,101.31,77.14,76.82,64.80,61.22,55.99,28.49,26.39,20.79；IR(cm^-1):2962.35,2889.58,2359.82,1757.29,1715.34,1632.21,1509.73,1377.54,1327.59,1253.68,1189.7,1170.32,1160.73,1063.45,998.03,844.99,819.08,598.06。

实施例3

合成化合物3：(E)-3-(4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基)丙基-3-(4-乙酰氧基-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯

本实施例的步骤1中，用等摩尔丁香酚(化合物I-3)替换实施例1步骤1中的丹皮酚，其它步骤与实施例1步骤1相同，得到2.58g白色晶体化合物III-3，产率88％。本实施例的步骤3中，用等摩尔化合物III-3替换实施例1步骤3中的化合物III-1，其它步骤与实施例1步骤3相同，得到3.78g白色晶体化合物VI-3，即化合物3，产率68％，m.p.79～80℃，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.64(d,J＝16.0Hz,1H),7.26(s,1H),7.10(s,2H),7.05(d,J＝8.0Hz,1H),6.84(d,J＝8.7Hz,1H),6.71(d,J＝6.1Hz,1H),6.38(d,J＝16.0Hz,1H),5.95(d,J＝16.8,6.7Hz,1H),5.08(d,J＝17.0Hz,2H),4.42(t,J＝5.1Hz,2H),4.14(t,J＝6.3Hz,2H),3.86(d,J＝7.8Hz,3H),3.33(d,J＝6.7Hz,1H),2.24(dd,J＝8.1,4.5Hz,2H),1.57(s,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:168.97,168.89,151.42,149.51,146.58,144.21,141.44,137.73,133.42,133.30,123.34,120.49,118.28,115.79,113.51,112.38,111.22,77.47,77.15,76.83,65.82,61.65,55.99,39.92,28.78；IR(cm^-1):2920.34,2360.96,1725.26,1606.95,1552.89,1417.52,1319.77,1247.40,1175.28,1139.46,1064.98,995.54,786.96,710.54,610.51。

实施例4

合成化合物4：(E)-4-(3-(3-(3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)丙氧基)-3-氧代-1-丙烯基)-1,2-苯二乙酸酯

本实施例的步骤2中，用等摩尔化合物IV-2替换实施例1步骤2中的化合物IV-1，其它步骤与实施例1步骤2相同，得到2.58g白色晶体化合物V-2，产率88％。本实施例的步骤3中，用等摩尔化合物V-2替换实施例1步骤3中的化合物V-1，其它步骤与实施例1步骤3相同，得到4.87g白色晶体化合物VI-4，即化合物4，产率71％，m.p.126～127℃，结构表征数据为：¹HNMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.86(d,J＝1.0Hz,1H),7.83(d,J＝1.0Hz,1H),7.65(s,1H),7.61(s,1H),7.41(s,1H),7.39(s,1H),7.36(s,1H),7.26(s,1H),7.23(s,1H),7.21(s,1H),6.53(d,J＝10.0Hz,2H),6.45(s,2H),6.40(s,1H),6.36(s,1H),4.43(t,J＝6.2Hz,3H),4.17(t,J＝6.1Hz,3H),3.84(d,J＝1.0Hz,3H),2.61(d,J＝1.0Hz,3H),2.30(d,J＝2.4Hz,3H),2.27(m,J＝6.1Hz,2H),2.17(s,2H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:197.93,177.73,166.58,164.56,160.23,143.35,142.50,132.92,124.10,122.87,118.93,105.26,99.02,77.33,76.81,65.09,61.48,55.67,32.27,28.73,20.76；IR(cm^-1):2955.64,1780.24,1750.35,1630.24,1580.64,1496.51,1410.38,1382.36,1366.35,1010.94,820.64,704.52,650.32。

实施例5

合成化合物5：(E)-4-(3-(3-(3-(3-乙酰基-4-羟基苯氧基)丙氧基)-3-氧代-1-丙烯基)-1,2-苯二乙酸酯

本实施例的步骤1中，用等摩尔2,4-二羟基苯乙酮(化合物I-2)替换实施例4中丹皮酚(化合物I-1)，其它步骤与实施例4步骤1相同，即得到化合物III-2，产率61％。本实施例的步骤3中，用等摩尔化合物III-2替换实施例4步骤3中的化合物III-1，其它步骤与实施例4步骤3相同，得到4.3g白色固体化合物VI-5，即化合物5，产率61％，m.p:88～89℃，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:12.74(s,1H),7.66-7.58(m,2H),7.41(d,J＝2.1Hz,1H),7.39(d,J＝2.1Hz,1H),7.36(d,J＝2.1Hz,1H),7.23(s,2H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),6.45(d,J＝2.5Hz,1H),6.43(d,J＝8.4Hz,1H),6.38(d,J＝8.4Hz,1H),4.39(t,J＝6.2Hz,2H),4.13(t,J＝6.1Hz,2H),2.56(s,3H),2.32-2.29(m,6H),2.25-2.16(m,2H),1.57(s,2H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:202.81,168.30,166.65,165.34,165.27,143.26,142.49,132.48,124.07,119.01,108.12,101.35,77.15,76.83,64.78,61.33,28.45,26.35,20.80,20.76；IR(cm^-1):3412.74,3072.89,2963.33,2899.11,2621.23,1770.16,1701.95,1630.20,1559.66,1420.12,1375.31,1251.94,1195.70,1054.45,998.21,899.14,827.47,710.46,601.39.

实施例6

合成化合物6：(E)-4-(3-(3-(3-(4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基)丙氧基)-3-氧代-1-丙烯-1-基)-1,2-苯二乙酸酯

本实施例的步骤1中，用等摩尔丁香酚(化合物I-3)替换实施例4中丹皮酚(化合物I-1)，其它步骤与实施例4步骤1相同，得到2.58g化合物III-3，产率88％。本实施例的步骤3中，用等摩尔化合物III-3替换实施例4步骤3中的化合物III-1，其它步骤与实施例4步骤3相同，得到3.25g白色固体化合物VI-1，即化合物6，产率60％，m.p:74～75℃，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.63(d,J＝16.0Hz,1H),7.41(dd,J＝8.5Hz,1H),δ7.39(d,J＝8.5Hz,1H),δ7.35(d,J＝16.0Hz,1H),7.22(d,J＝8.4Hz,1H),6.83(d,J＝8.4Hz,1H),6.71(d,J＝6.4Hz,1H),6.38(d,J＝6.4Hz,1H),5.95(m,J＝6.7Hz,1H),5.07(t,J＝14.5Hz,1H),4.17(t,2H),3.82(d,J＝14.5Hz,9H),3.32(s,1H),2.79(s,1H),2.30(s,3H),2.11-1.97(m,2H),1.63(s,2H),1.25-1.22(m,2H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:168.27,168.20,166.67,146.56,142.97,137.74,133.27,120.50,119.25,115.78,113.49,112.34,77.45,77.13,76.81,65.78,61.74,55.97,39.93,28.75,20.81,20.77；IR(cm^-1):2941.43,2890.54,2364.27,2327.87,1968.56,1642.92,1603.43,1564.35,1415.99,1258.56,1206.17,1058.54,961.62,832.27,711.23,613.01。

实施例7

合成化合物7：3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)丙基肉桂酸酯

本实施例的步骤2中，用等摩尔肉桂酸(化合物IV-3)替换实施例1步骤2中化合物Ⅳ-1，其它步骤与实施例1相同，得到化合物V-3。本实施例的步骤3中，用等摩尔化合物V-3替换实施例1步骤3中的化合物V-1，其它步骤与实施例1步骤3相同，得到4.55g白色固体化合物VI-7，即化合物7，产率65％，m.p:75～76℃，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.90(d,J＝10.4Hz,1H),7.70(d,J＝15.9Hz,1H),7.57(d,J＝15.9Hz,1H),7.41(d,J＝18.29Hz,1H),7.27(s,1H),6.87(s,1H),6.68(d,J＝18.29Hz,2H),4.42(d,J＝5.9Hz,2H),4.17(d,J＝5.9Hz,2H),2.40-2.15(m,2H),1.60(d,J＝9.3Hz,2H),1.25(s,2H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:195.99,167.03,165.32,162.99,145.23,134.09,129.09,128.56,123.68,116.90,109.62,77.45,77.13,76.81,65.05,61.11,29.70,28.59；IR(cm^-1):2941.43,2890.54,2364.27,2327.87,1968.56,1642.92,1603.43,1564.35,1415.99,1258.56,1206.17,1058.54,961.62,832.27,711.23,613.01。

实施例8

合成化合物8：3-(3-乙酰基-4-羟基苯氧基)肉桂酸丙酯

本实施例的步骤2中，用等摩尔2,4-二羟基苯乙酮(化合物I-2)替换实施例7中丹皮酚(化合物I-1)，其它步骤与实施例7步骤1相同，即得到化合物III-2，产率61％。本实施例的步骤3中，用等摩尔化合物III-2替换实施例7步骤3中的化合物III-1，其它步骤与实施例7相同，得到4.60g白色固体化合物VI-8，即化合物8，产率64％，m.p:117℃，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:12.74(s,1H),7.63(s,1H),7.22(d,J＝8.2Hz,2H),7.08(d,J＝8.2Hz,2H),7.06(s,1H),7.02(d,J＝15.9Hz,1H),6.84(d,J＝8.6Hz,1H),6.46(d,J＝8.6Hz,1H),6.29(d,J＝15.9Hz,1H),4.38(t,J＝2Hz,2H),4.13(t,J＝6.1Hz,2H),3.81(s,3H),2.54(s,3H),2.34-2.09(m,2H)，如图1所示；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:196.00,167.03,165.33,163.00,145.24,134.09,129.09,128.56,123.68,116.90,109.62,77.45,77.13,76.81,65.04,61.10,29.70,28.58，如图2所示；IR(cm^-1):3414.76,2910.35,2360.96,1720.21,1606.95,1552.89,1415.66,1319.77,1247.40,1175.28,1138.83,1062.98,995.54,766.96,710.38,620.15。

实施例9

合成化合物9：3-(4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基)肉桂酸丙酯

本实施例的步骤1中，用等摩尔丁香酚(化合物I-3)替换实施例7步骤1中的丹皮酚，其它步骤与实施例7步骤1相同，得到2.58g白色晶体化合物III-3，产率88％。本实施例的步骤3中，用等摩尔化合物III-3替换实施例7步骤3中的化合物III-1，其它步骤与实施例7相同，得到3.49g化合物VI-9，即化合物9，产率63％，m.p:115℃，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.69(d,1H),7.36(s,1H),7.53(s,J＝8.5Hz,2H),7.22(d,J＝8.2Hz,2H),7.08(d,J＝8.2Hz,2H),7.06(d,J＝8.5Hz,2H),7.02(d,J＝14.5Hz,1H),6.92(s,J＝14.5Hz,1H),6.85(d,J＝8.6Hz,1H),6.72(d,J＝5.5Hz2H),6.44(d,J＝16.0Hz,1H),5.95(m,J＝5.5Hz,1H),5.08(d,J＝16.0Hz,1H),4.42(t,J＝6.2Hz,2H),4.14(t,J＝6.3Hz,2H),3.85(s,3H),3.34(d,J＝6.6Hz,2H),2.30-2.19(m,2H),1.57(s,1H)；IR(cm^-1):3218,2966.26,2359.96,1771.99,1706.48,1629.35,1554.31,1417.05,1249.95,1228.36,1009.59,837.03,813.41,711.19,608.22。

实施例10

合成化合物10：(E)-3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)丙基3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯

本实施例的步骤2中，将13.95g(0.09mol)叔丁基二甲基氯硅烷(TBDMSCl)和5.9g(0.03mol)化合物Ⅳ-1加入到盛有100mL N,N-二甲基甲酰胺的圆底烧瓶中，温度降至-10℃，搅拌至完全溶解，慢慢滴入120mL含8.08g(0.08mol)三乙胺的二氯甲烷溶液，搅拌1h后，温度逐渐升至室温，继续搅拌反应4h。反应结束后用水洗涤，有机层经MgSO₄干燥，然后减压浓缩回收过量溶剂，100～200目硅胶柱色谱纯化(石油醚:乙酸乙酯＝1:2，V/V)，得到白色粉末状中间体化合物(收率90％)。将所得白色粉末加入盛有20mL N,N-二甲基甲酰胺的圆底烧瓶中，连接尾气吸收装置，并加入15mL SOCl₂，升温至80℃，反应至无气体产生后升温至90℃回收二氯亚砜，冷却至室温后减压浓缩，得到黄色固体化合物Ⅴ'-1，直接进行进一步反应。本实施例的步骤3中，用等摩尔化合物Ⅴ'-1替换实施例1步骤3中化合物I-1，其他步骤与实施例1步骤3相同，得到3.45g白色固体化合物Ⅵ-10，即化合物10，产率63％，m.p:115℃，结构表征数据为:¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:7.85(d,J＝8.8Hz,1H),7.63(d,J＝15.9Hz,1H),7.26(s,1H),7.03(dd,J＝5.4,2.0Hz,3H),6.84(d,J＝8.7Hz,1H),6.53(dd,J＝8.8,2.3Hz,1H),6.46(d,J＝2.3Hz,1H),6.29(d,J＝15.9Hz,1H),4.42(t,J＝6.2Hz,2H),4.18(t,J＝6.2Hz,2H),3.84(d,J＝4.1Hz,8H),2.61(d,J＝2.5Hz,3H),2.36-2.20(m,2H),1.58(d,J＝1.2Hz,1H),1.01-0.95(m,9H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:202.75,167.30,165.38,165.30,151.26,147.69,145.32,132.43,115.46,113.99,110.76,108.17,101.31,77.45,77.13,76.81,64.85,60.96,55.50,28.55,26.38,25.73,18.58；IR(cm^-1):3891.33,2855.73,2362.10,1700.70,1610.32,1552.48,1415.97,1272.62,904.53,842.09,710.08。

实施例11

合成化合物11：(E)3-(3-乙酰基-4-羟基苯氧基)丙基(E)-3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-甲氧基苯基)丙烯酸酯

本实施例的步骤1中，用等摩尔的化合物I-2替换实施例10步骤1中的化合物I-1，其它步骤与实施例10步骤1相同，得到化合物III-2。本实施例的步骤3中，用等摩尔量化合物III-2替换实施例10步骤3中的化合物III-1，其他步骤与实施例10步骤3相同，得到3.31g白色固体化合物VI'-11，即化合物11，产率62％，m.p:79～80℃，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:12.74(s,1H),7.62(s,1H),7.61(d,1H),7.02(s,2H),6.84(d,J＝8.6Hz,1H),6.45(d,J＝8.5Hz,2H),6.29(d,J＝15.9Hz,1H),4.39(t,J＝6.2Hz,2H),4.14(t,J＝6.2Hz,2H),3.83(s,3H),2.55(s,3H),2.27-2.10(m,2H),1.57(s,2H),0.99(s,9H)，如图3所示；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:173.23,165.21,132.37,128.22,122.48,120.80,115.46,114.19,111.31,107.65,100.64,77.52,76.98,76.8,65.04,60.98,55.58,26.31,25.65，如图4所示；IR(cm^-1):3238.39,2944.03,2891.54,2855.82,2622.35,2359.74,1701.44,1608.34,1553.95,1416.34,1272.61,1152.55,905.83,842.02,710.98,612.37。

实施例12

合成化合物12：(E)-3-(4-烯丙基-2-甲氧基苯氧基)丙基3-(4-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)-3-甲基苯基)丙烯酸酯

本实施例的步骤1中，用等摩尔的化合物I-3替换实施例10步骤1中的化合物I-1，其它步骤与实施例10步骤1相同，得到化合物III-3。本实施例的步骤3中，用等摩尔量化合物III-3替换实施例10步骤3中的化合物III-1，其他步骤与实施例10步骤3相同，得到3.42g白色固体化合物VI'-12，即化合物12，产率61％，m.p.155～156℃，结构表征数据为：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:12.54(s,1H),7.61(d,J＝7.9Hz,1H),7.36(s,1H),7.22(d,J＝8.5Hz,1H),7.08(d,J＝8.2Hz,1H),7.06(d,J＝8.5Hz,1H),7.02(d,J＝8.2Hz,1H),6.92(s,J＝8.5Hz,1H),6.46(d,J＝14.5Hz,1H),4.39(t,J＝6.2Hz,2H),4.11(t,J＝6.2Hz,2H),3.86(s,3H),2.54(s,3H),2.31(d,J＝2.5Hz,2H),2.21(s,1H),2.21(s,1H),1.58(s,1H)；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:202.75,165.39,165.29,164.89,151.27,147.71,145.31,132.41,121.19,115.48,108.45,108.15,77.43,76.15,64.86,60.95,55.76,37.31,25.63；IR(cm^-1):2861.34,256.19,1745.26,1680.59,1671.64,1630.29,1601.34,1580.61,850.32,790.25,751.38,680.24。

实施例13

合成化合物13：(E)-3-(2-乙酰基-5-甲氧基苯氧基)丙烯酸3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙酯

在氮气保护下，将2.0g(3.82mmol)化合物VI'-11溶于10mL四氢呋喃中，再慢慢滴加4.5mL1mol/LNH₄F的四氢呋喃溶液，室温搅拌反应1小时。反应结束后减压回收溶剂，得到粗品，分别用饱和NaHCO₃水溶液、去离子水和盐水洗涤，有机层用MgSO₄干燥后通过100目硅胶柱色谱纯化，得到1.16g白色粉末化合物VII-13，即化合物13，产率75％，m.p:127～128℃，结构表征数据：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:12.76(s,2H),7.61(s,1H),7.08(d,J＝8.2Hz,1H),7.06(d,J＝8.5Hz,1H),7.02(d,J＝8.2Hz,1H),6.92(s,J＝8.5Hz,1H),6.90(s,1H),6.46(d,1H),6.30(s,1H),6.25(s,1H),5.96(d,J＝1.4Hz),4.38(t,J＝6.2Hz,2H),4.13(t,J＝6.2Hz,2H),3.92(s,3H),2.55(s,3H),2.20(m,J＝6.2Hz,2H)，如图5所示；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:202.74,168.54,166.47,165.28,142.04,142.25,132.36,123.67,118.72,107.66,101.83,77.43,77.11,76.79,64.79,61.10,28.10,26.50,26.12,20.68，如图6所示；IR(cm^-1):3434.96,3238.39,2955.44,2893.19,2856.26,1699.01,1628.08,1509.92,1469.06,1280.11,1265.24,1180.25,1020.38,903.50。

实施例14

合成化合物14：(E)-3-(4-羟基-3-甲氧基苯基)丙烯酸3-(3-乙酰基-4-羟基苯氧基)丙酯

在氮气保护下，将2.0g(3.8mmol)化合物VI'-12溶于10mL四氢呋喃中，再慢慢滴加4.5mL 1mol/L NH₄F的四氢呋喃溶液，室温搅拌反应1小时。反应结束后减压回收溶剂，得到粗品，分别用饱和NaHCO₃水溶液、去离子水和盐水洗涤，有机层用MgSO₄干燥后通过100目硅胶柱色谱纯化，得到1.06g白色粉末化合物VII-14，即化合物14，产率68％，m.p.:152～153℃，结构表征数据：¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ:12.76(s,1H),7.65(d,1H),7.10(d,J＝1.0Hz,1H),7.07(d,J＝8.2Hz,1H),6.92(d,J＝8.2Hz,1H),6.84(d,J＝8.5Hz,1H),6.44(d,J＝8.5Hz,1H),6.30(s,1H),6.29-6.24(m,1H),4.40(d,J＝6.4Hz,2H),4.15(d,J＝6.3Hz,2H),3.93(s,3H),3.33(d,J＝6.7Hz,3H),2.70-2.48(m,2H),2.19(s,3H),2.04(s,1H),1.31-1.21(m,2H)，如图7所示；¹³C NMR(100MHz,CDCl₃)δ:197.63,197.61,194.74,164.61,164.60,164.46,133.25,120.62,105.07,105.06,105.03,100.0,99.04,77.33,76.81,66.69,55.65,55.62,32.01,30.99，如图8所示；IR(cm^-1):3585.91,3414.30,1653.24,1630.48,1582.63,1430.25,1120.56,840.65,730.28,708.51,620.65。

实施例15

本发明化合物1～14的酪氨酸酶抑制活性评价

1、蘑菇酪氨酸酶抑制活性评价

左旋多巴用于研究化合物1～14对蘑菇酪氨酸酶的抑制活性，分别在1mM、0.5mM、0.25mM和0.125mM的浓度下筛选目标化合物的酪氨酸酶抑制活性，并以1mM浓度的抑制率(I％)和IC₅₀评价其抑制活性。具体试验方法如下：

以左旋多巴为底物、曲酸为阳性对照测试化合物1～14的双酚酪氨酸酶的活性。蘑菇酪氨酸酶(Sigma-aldrich，2687U mg^-1)用于活性测定。将化合物1～14分别溶解在DMSO中，得到抑制剂溶液；在96孔板中依次加入160μL磷酸盐缓冲液(pH6.86)、20μL蘑菇酪氨酸酶(终浓度33.3U mL^-1)和10μL抑制剂溶液(抑制剂最终浓度1mM，DMSO的最终体积浓度为5.0％)，室温下预孵育10min后，加入10μL左旋多巴(最终浓度0.2mM)，在475nm下利用酶标仪监测酶反应1min，得吸光度A。酪氨酸酶反应的抑制率计算公式如下：

酪氨酸酶活性(I％)＝[(A_sample-A_blank)/(A_control-A_blank)]×100

A_sample为样品的吸光度；A_blank为空白的吸光度；A_control为阳性对照的吸光度，化合物1～14的蘑菇酪氨酸酶的双酚酶抑制活性结果见表1。

表1化合物1～14的酪氨酸酶抑制率(I％)

表1的结果表明，化合物1～14具有不同程度的酪氨酸酶抑制活性，在浓度为1mM时对酪氨酸酶的抑制率均大于母体化合物(丹皮酚、丁香酚、肉桂酸、阿魏酸和咖啡酸)，其中化合物1、3、5、6、8、10、11、12、13、14对酪氨酸酶活性的抑制率均超过60％，表现出中等强度的抑制活性；化合物8、化合物14、化合物13的抑制率分别为80.1％，80.6％和82.4％。

为了评价化合物1～14的抑制活性，将其与母体化合物(丹皮酚、丁香酚、肉桂酸、阿魏酸和咖啡酸)的活性进行比较，计算IC₅₀值(见表2)，并通过Graphpad Prism8.0软件得到10种不同浓度下化合物8、13和14的抑制曲线(见图9)。

表2化合物1～14及母体化合物的IC₅₀值(μM)

表2的结果表明，母体化合物的IC₅₀值范围为154.6μM至1135.8μM。化合物1、4、5、6、8、10、11、12、13、14的IC₅₀值均低于母体化合物，表明其活性优于母体化合物(丹皮酚、丁香酚、肉桂酸、阿魏酸和咖啡酸)。其中，化合物13与14的IC₅₀分别是13.98μM和15.16μM，低于阳性药曲酸(30.83μM)，抑制活性分别是阳性药物曲酸的2倍和2.3倍。

2、细胞实验

(1)化合物8、13和14对B₁₆F₁₀细胞的细胞毒性

B₁₆F₁₀黑色素瘤细胞(1.5*10⁵细胞/mL)，胰酶消化细胞，计数调整细胞浓度至1×10⁵/mL。将96孔板移入培养箱中培养(37℃，5％CO₂)，用DMEM培养基(含有100IU/mL青霉素和100μg/mL链霉素)37℃和5％CO₂培养箱。待细胞贴壁后，根据各实验分组分别加入药物处理24h。将化合物8、11、13和14分别溶解于DMSO，并用培养基稀释至200μM、100μM、50μM、25μM、12.5μM，添加到细胞培养板中继续培养24h。培养结束后，每孔加入10μL 5mg/mL MTT溶液(注意不能产生气泡)，在培养箱内孵育5h。孵育完成后吸去孔内培养液。每孔加入150μLDMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶产物充分溶解。同时设置空白孔、MTT、DMSO三组，在酶标仪检测490nm处各孔吸光度值。MTT法测定细胞活力，并以对照的百分比计算结果，测定细胞活力。

以B₁₆F₁₀黑色素瘤细胞为对象测定并评价化合物8、11、13和14的细胞活力，将四种化合物分别以浓度0、25、50、100和200μM作用于细胞24h，阳性组采用熊果苷和曲酸进行对照，实验结果见图10。由图可得熊果苷、化合物8和11在200μM均表现出一定的细胞毒性，而当浓度在100μM水平时，化合物13和14比曲酸和熊果苷更具安全性，双因素分析结果表明化合物13和14在50μM时与空白组在(α<0.05时)细胞生存率已无显著性差异，表示其具有较高安全性。

(2)细胞抗黑素生成实验与评价

B₁₆F₁₀黑色素瘤细胞(1.5*10⁵细胞/mL)在37℃和5％CO₂的条件下接种于细胞培养板中孵化24h，并用1μMα-MSH激活增加黑色素的产生。然后与化合物8、11、13和14(分别为200μM、100μM、50μM和25μM)在细胞培养基中孵育24h，再用PBS洗涤细胞缓冲液洗2～3次以除去培养基内容物，并与200μL 1N NaOH孵育溶解黑色素。用酶标仪在405nm波长处分光光度法测定黑色素含量。每孔重复三次。模型组加入1μMα-MSH(细胞促黑色素生成激素)以增强黑素含量并稳定黑素细胞中黑素生成的含量。以曲酸和熊果苷为阳性对照。计算公式为：

黑色素生成抑制率(I％)＝[(A_sample-A_blank)/(A_control-A_blank)]×100

A_sample为样品空白对照空白×样品表示测试化合物的OD₄₀₅吸光度；A_blank为空白的OD₄₀₅吸光度；A_control代表对照品的OD₄₀₅吸光度。结果见图13。

图11的抗黑色素生成抑制实验结果表明，化合物8、11、13和14在200μM浓度水平以内与模型组具有较显著差异并呈现一定程度的浓度依赖性，在100μM水平化合物8、11和14与α-MSH模型组相比表现出极显著的统计学差异，其抑制率分别是19.62％、20.59％和23.83％，其中以化合物14的抗黑素生成活性最高，化合物11、8次之。

(3)细胞酪氨酸酶活性的测定与评价

为了测定细胞酪氨酸酶活性，将B₁₆F₁₀黑色素瘤细胞置于48孔板中，控制每孔含有1×10⁵个细胞，包含1μMα-MSH和各浓度梯度样品持续48h(将B₁₆F₁₀细胞用1μMα-MSH处理以激活细胞中黑色素的产生)，加入不同浓度样品、曲酸与熊果苷(阳性对照)孵育24小时后，将细胞用PBS洗涤2～3次，然后用100μL裂解缓冲液破碎，该裂解缓冲液由50mM PBS(90μL，pH6.8，0.1mM组成PMSF(5μL)和1％Triton X-100(5μL)。将所得裂解细胞在-80℃下冷冻30min，然后在4℃下以12000rpm离心30min。然后加入80μL裂解液将上清液与20μL 2mM L-DOPA(L-多巴)混合，并在96孔板中于37℃孵育30min。用酶标仪测量475nm处的光密度。每组重复三次。

酪氨酸酶活性抑制率(I％)＝[(A_sample-A_blank)/(A_control-A_blank)]×100

A_sample为样品空白对照空白×样品表示测试化合物的OD₄₇₅吸光度；A_blank为空白的OD₄₇₅吸光度；A_control代表对照的OD₄₇₅吸光度。

化合物8、11、13和14不同剂量水平对B₁₆F₁₀细胞酪氨酸酶活性的抑制活性见图12。其中空白组为正常B₁₆F₁₀细胞，结果表明在200μM和100μM水平4种化合物与控制组相比具有显著性差异(α<0.05)，100μM水平化合物13表现出中等抑制活性，但化合物8、11和14表现出较强的酪氨酸酶抑制活性，尤其以化合物11和14抑制活性最高，抑制活性高于同浓度水平的阳性药曲酸和熊果苷(19.21％和20.45％)，其抑制率分别是20.59％和23.83％并成一定程度的浓度依赖性。

综上，由蘑菇酪氨酸酶活性抑制实验与相关细胞实验综合结果表明化合物8与11对蘑菇酪氨酸酶的抑制活性较高；在100μM水平时，化合物13与14细胞活力较阳性对照药物曲酸更高，更具安全性，细胞酪氨酸酶抑制活性中，化合物14在50～100μM范围内抑制活性最强；在抗黑素生成活性方面，化合物8和13在低浓度水平活性稍优于化合物14。

实施例16

分别取30mg化合物8、11、13、14加至样品瓶中，并加入1mL橄榄油，加热至完全溶解，然后室温下静置10分钟。由图13可见，化合物8、11、13、14在橄榄油中均形成稳定的凝胶(从左到右依次为化合物8、11、13、14)，可作为小分子凝胶剂用于化妆品等。