阅读说明：本技术 淫羊藿炮制的一体化制备方法 (Integrated preparation method for processing epimedium ) 是由 胡芳弟 王燕萍 李成楠 贾旭森 于 2020-07-20 设计创作，主要内容包括：本发明公开了淫羊藿炮制的一体化制备方法,是将鲜心叶淫羊藿烘制一定含水量,切丝,加羊油炒干即可；烘干温度为70℃-120℃；烘干程度为烘至含水量为药材原始含水量的30%；羊油的加入量为鲜淫羊藿重量的20%。本发明的有益效果为：本发明提供的制备方法,能大大的缩短加工时间,与传统饮片加工方法相比,因避免了药材二次闷润的过程,极大程度地保留了淫羊藿中的活性成分,能有效的促进淫羊藿的开发利用；采用此制备方法炮制的淫羊藿药材,无掉渣现象,5种主要黄酮含量和、总黄酮含量较高,且DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力较强。(The invention discloses an integrated preparation method for processing epimedium, which comprises the steps of baking fresh epimedium heartleaf with certain water content, shredding, adding mutton fat and frying to dry; the drying temperature is 70-120 ℃; the drying degree is that the water content is dried to be 30% of the original water content of the medicinal materials; the addition amount of the mutton fat is 20 percent of the weight of the fresh epimedium herb. The invention has the beneficial effects that: compared with the traditional decoction piece processing method, the preparation method provided by the invention can greatly shorten the processing time, greatly retains the active ingredients in the epimedium due to avoiding the secondary moistening process of the medicinal materials, and can effectively promote the development and utilization of the epimedium; the epimedium herb processed by the preparation method has no slag drop phenomenon, the content of 5 main flavones is high, the content of total flavones is high, and the scavenging capacity of DPPH free radicals and superoxide anion free radicals is strong.)

淫羊藿炮制的一体化制备方法

技术领域

本发明涉及中药材制备方法技术领域，具体涉及淫羊藿炮制的一体化制备方法。

背景技术

中药从药用植物到中药饮片，经历了产地加工和饮片炮制2个环节。前者的目标产物是中药材，后者的目标产物为中药饮片。近些年，国家加大了中药饮片的监管力度，但问题饮片时有出现，很大程度是由于加工混乱造成的，因此，一些学者提出中药材产地加工与饮片炮制一体化概念(简称一体化)，旨在从源头抓起，杜绝问题隐患，确保饮片质量及临床安全和疗效。

淫羊藿醇浸出物、总黄酮、朝藿定A-C、淫羊藿苷和宝藿苷I具有显著的药理活性。现代药理学研究表明，淫羊藿醇浸出物具有抗氧化和神经保护作用；淫羊藿总黄酮具有抗骨质疏松、抗氧化、增强免疫、神经保护作用、抗衰老和肾保护作用；朝藿定A具有抗菌和抗氧化活性；朝藿定B具有抗骨质疏松、抗菌和抗氧化活性；朝藿定C具有抗骨质疏松、抗氧化、抗菌和抗肿瘤的活性；淫羊藿苷具有抗骨质疏松、保护神经、抗肿瘤、抗炎和抗氧化等活性；宝藿苷Ⅰ具有抗肿瘤、抗骨质疏松、降血糖和抗氧化活性。研究表明淫羊藿的主要活性成分是黄酮类，其中朝藿定A-C、淫羊藿苷和宝藿苷I的含量较高。

发明内容

本发明的目的就是针对上述现有技术中的缺陷，提供了淫羊藿炮制的一体化制备方法。

为了实现上述目的，本发明提供的技术方案为：淫羊藿炮制的一体化制备方法，是将鲜淫羊藿烘至一定含水量或阴干后，切丝，加羊油炒干即可；所述鲜淫羊藿为鲜心叶淫羊藿；所述烘干温度为30℃-120℃；所述烘干程度为烘至含水量为药材原始含水量的0％-100％；所述羊油的加入量为鲜淫羊藿重量的20％；所述阴干后需闷润切丝。

进一步的，上述的淫羊藿炮制的一体化制备方法，所述制备方法为：将鲜淫羊藿直接切丝后，加入羊油炒干，所述羊油的加入量为鲜淫羊藿重量的20％。

进一步的，上述的淫羊藿炮制的一体化制备方法，所述烘干温度为50℃，所述烘干程度为烘至含水量为药材原始含水量的0％-100％。

进一步的，上述的淫羊藿炮制的一体化制备方法，所述烘干温度为30℃-120℃；所述烘干程度为烘至含水量为药材原始含水量的30％。

进一步的，上述的淫羊藿炮制的一体化制备方法，所述烘干温度为70-120℃；所述烘干程度为烘至含水量为药材原始含水量的30％。

本发明的有益效果为：本发明提供的淫羊藿炮制的一体化制备方法，能大大的缩短加工时间，与传统饮片加工方法相比，因避免了药材二次闷润的过程，极大程度地保留了淫羊藿中的活性成分，能有效的促进淫羊藿的开发利用；采用此制备方法炮制的淫羊藿药材，无掉渣现象，总黄酮含量较高，DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除能力较强，且淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量和、5种主要黄酮含量和、醇浸出物含量相对较高。

附图说明

图1显示为不同工艺样品照片。

图2显示为淫羊藿中5种黄酮类成分(A-对照品，B-样品，1-朝藿定A，2-朝藿定B，3-朝藿定C，4-淫羊藿苷，5-宝藿苷1)

图3显示为S1-S12的5种黄酮含量和。

图4显示为S12-S22的5种黄酮含量和。

图5显示为S1-S12的总黄酮含量。

图6显示为S12-S22的总黄酮含量。

图7显示为醇浸出物含量。

图8显示为S12-S22的DPPH自由基清除率。

图9显示为S12-S22的羟自由基清除率。

图10显示为S12-S22的超氧阴离子自由基清除率。

具体实施方式

本实验从鲜心叶淫羊藿(以下简称淫羊藿)出发，以5种主要黄酮(朝藿定A-C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ，以下简称5种黄酮)含量和、总黄酮含量、醇浸出物含量和自由基清除率为指标，采用烘箱干燥法干燥，并用羊脂油炒制优选最佳的产地加工炮制一体化工艺，共设计了21个新工艺，1个传统工艺，分别是：趁鲜切丝，加20％羊油炒干，制得样品S1；烘箱50℃烘至含水量为药材原始含水量不同百分比(0％-90％，即一成至完全干燥)时，分别取出切丝，加20％羊油炒干，制得10个饮片样品(S2-S11)；将鲜药材用传统方法阴干，加20％羊油炒干，制得饮片样品S12；在不同温度(30-120℃)分别烘至含水量为药材原始含水量的30％(七成干)时，取出切丝，加20％羊油炒干，制得10个饮片样品(S13-S22)。

实施例1：

1试剂、仪器与药材

1.1试剂

朝藿定A(110623-72-8)、朝藿定B(110623-73-9)、朝藿定C(110642-44-9)、淫羊藿苷(489-32-7)、宝藿苷Ⅰ(113558-15-9)对照品，均购自宝鸡市辰光生物科技有限公司；甲醇、乙腈(Oceanpak，瑞典)，乙腈和乙酸均为色谱纯；其他试剂均为分析纯。

1.2仪器

十万分之一分析天平(赛多利斯科学仪器，北京有限公司)；安捷伦1260Ⅱ高效液相色谱仪；超声波清洗仪(KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗仪)；紫外分光光度计(UV-1700，Shimadzu)；FA2004分析电子天平(上海良华仪器仪表有限公司)。

1.3药材

淫羊藿药材采自甘肃省礼县中坝乡，采收时间：2019年6月10日，由礼县春天药业提供，由甘肃中医药大学附属医院杨锡仓主任中药师鉴定为心叶淫羊藿(Epimediumbrevicomu Maxim.)的叶。

2方法及结果

2.1样品制备

①趁鲜切丝，加20％的羊油炒干，制得样品S1；

②烘箱50℃烘至含水量为药材原始含水量不同百分比(0％～90％)时，分别取出切丝，加20％的羊油炒干，制得10个样品(S2-S11)；

③将鲜药材用传统方法阴干，加20％的羊油炒干，制的样品S12；

④实验发现50℃下干燥至七成干的时，5种主要黄酮成分含量和最高，且高于传统工艺，因此设计在不同温度(30～120℃)分别烘至含水量为药材原始含水量的30％时，取出切丝，加20％的羊油炒干，制得10个样品(S13-S22)。

样品信息及具体工艺见表1。

表1

2.2指标成分测定

2.2.1水分含量测定

根据2015年版《中国药典》四部项下0831干燥失重测定法测定。

2.2.2五种黄酮含量测定

采用HPLC法，按2015年版《中国药典》淫羊藿项下炙淫羊藿中淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ含量的测定方法测定5种黄酮含量。

2.2.2.1样品制备

按药典规定制备样品溶液。

取药材0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，称定重量，超声提取(20℃，频率160HZ)1小时，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，用0.45μL滤膜过滤，即得。

2.2.2.2色谱条件

色谱条件如下：

色谱柱：Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18柱；

柱温：30℃；

进样量：20μL；

检测波长：270nm；

流动相：乙腈-水

洗脱程序如表2所示。

表2

时间(分钟)	流动相A(％)	流动相B(％)
			0～29	75	25
29～30	75～59	25～41
			30～55	59	41

2.2.2.3含量测定

标准曲线绘制：

精密称取朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C、淫羊藿苷、宝藿苷I对照品适量，分别加甲醇溶解并定容至5mL容量瓶中，分别吸取200μL，置于1mL容量瓶中，混合均匀，得含朝藿定A、B、C、淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ分别为0.59、0.54、0.50、0.50和0.52mg/mL的混合对照品溶液，稀释成系列混合对照品溶液，将上述系列对照品溶液各注入液相色谱仪20μL，根据峰面积分别绘制标准曲线。

样品测定：

取样品溶液10μL注入高效液相色谱仪，根据各标准曲线测定黄酮含量。

2.2.3总黄酮含量测定

按2015年版《中国药典》淫羊藿项下总黄酮的测定方法测定。

2.2.3.1样品制备

同“2.2.2.1”。

2.2.3.2对照品溶液的制备

取淫羊藿苷对照品2.50mg，加甲醇制成每mL含0.500mg的溶液，得对照品溶液。分别取对照品原液0、100、200、300、400、500μL，置于10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，得标准品系列溶液。

2.2.3.3标准曲线的绘制

以空白溶剂较零，在270nm波长下测定系列对照品溶液的吸光值A，测定三次，取平均值，以淫羊藿苷对照品的浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准曲线。

2.2.3.4含量测定

精密吸取供试品溶液50μL，置于5mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，混匀。测定吸光值A，平行三份，根据吸光值A计算总黄酮含量。

2.2.4醇浸出物含量测定

按2015年版《中国药典》四部醇浸出物项下测定方法测定。

2.2.5抗氧化活性测定

2.2.5.1提取方法

同“2.2.2.1”。

2.2.5.2测定方法

DPPH自由基清除实验

20mgDPPH加无水乙醇定容于250mL容量瓶中，即为DPPH储备液。样品液稀释10倍后取1mL；加入1mLDPPH储备液。混匀后，避光30min后，在517nm处测定吸光度A_样品，用无水乙醇代替样品溶液测得空白组吸光值A_空白。

清除率＝(A_空白-A_样品)/A_空白×100％

羟自由基清除实验

称取40mg结晶紫加水定容于250mL容量瓶，得0.4mM结晶紫。

称取Na₂H_PO₄·12H₂O晶体35.81g溶解，用500mL容量瓶定容，得0.2mol/L的Na₂H_PO₄溶液。称取NaH₂PO₄·2H₂O晶体3.12g溶解，用100mL容量瓶定容，得0.2mol/L的NaH₂PO₄溶液。取前者81mL，再取后者19mL混合，即得。

量取20mL 30％H₂O₂加水定容于100mL容量瓶，得6％H₂O₂。

称取0.112g FeSO₄·7H₂O加水定容于100mL，得2mM FeSO₄。

向离心管中分别加入0.4mM结晶紫1.0mL，PBS(PH7.4)2.6mL，2mM FeSO₄ 0.1mL，分别加入样品0.2mL，最后加入6％H₂O₂ 0.1mL，水浴37℃加热30min，在584nm处测定吸光度A。

清除率＝(A₁-A₂)/(A₃-A₂)×100％

A₁：1.0mL结晶紫+2.6mL PBS+0.1mL FeSO4+0.2mL样品储备液+0.1mLH2O2；

A₂：1.0mL结晶紫+2.6mL PBS+0.1mLFeSO4+0.2mL蒸馏水+0.1mLH2O2；

A₃：1.0mL结晶紫+2.6mL PBS+0.1mL FeSO4+0.3mL蒸馏水。

超氧阴离子自由基清除实验

称取12.11gTris-Base溶于1000mL容量瓶，得0.1M Tris-Base液。量取36％-38％HCl4.29mL定容于500mL容量瓶，得0.1M HCl。量取Tris液500mL+HCL液229mL+水定容于1000mL容量瓶，得Tris-HCl(50mM)缓冲液。精密量取10mL 0.1M HCl加水定容于100mL容量瓶，得10mM HCl。称取0.1261g邻苯三酚用10mM HCI定容于100mL容量瓶，得10mM邻苯三酚溶液。

量取pH值为8.2的Tris-HCl缓冲液3.3mL，置于试管中，分别加入0.6mL样品储备液，再加入10mmol/L邻苯三酚0.1mL，摇匀后，静置30min，在320nm处测定吸光度。

清除率＝[1－(A₁－A₂)/A₃]×100％

A₁：3.3mL Tris－HCl+0.1mL邻苯三酚+0.6mL样品储备液；

A₂：3.3mL Tris－HCl+0.1mL蒸馏水+0.6mL样品储备液；

A₃：3.3mL Tris－HCl+0.1mL邻苯三酚+0.6mL蒸馏水。

2.3结果

2.3.1含水量结果

药典规定淫羊藿的水分不得高于12％，根据表3显示的水分测定结果，上述淫羊藿样品中水分均低于药典规定。

表3

样品编号	含水量(％)	样品编号	含水量(％)
				S1	4.00	S12(传统)	6.14
S2	4.16	S13	5.15
				S3	4.22	S14	5.72
S4	4.41	S15	5.59
				S5	4.17	S16	5.54
S6	4.53	S17	4.98
				S7	4.57	S18	5.00
S8	4.25	S19	4.81
				S9	4.43	S20	4.67
S10	4.43	S21	4.70
				S11	4.11	S22	4.24

2.3.2 5种黄酮含量结果

《中国药典》2015年版一部淫羊藿项下规定炙淫羊藿饮片的淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量和不得少于0.60％，50℃烘至含水量为药材原始含水量不同百分比(0％～100％)时所得11个样品中淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量在0.98-1.32％之间，均满足药典要求。除S8(50℃烘至七成干，切丝，加羊油炒干)外，其他样品的5种主要黄酮含量均低于传统样品，结果见表4。

实验发现50℃下干燥至七成干(样品S8)的时，5种主要黄酮成分含量和最高，且高于传统工艺。

因此又在不同温度(30～120℃)下分别烘至含水量为药材原始含水量的30％时(七成干)，取出切丝，加20％的羊油炒干，制得10个样品(S13-S22)。

测得S13-S22样品中淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量在1.14-1.51％，均满足药典要求，含量结果见表5，随着烘制温度的增加，5种黄酮含量和呈先增加后减低的趋势，70℃烘制开始(S17)，5种黄酮含量和均高于传统工艺所得样品(S12)，100℃烘制所得样品(S20)中5种黄酮含量和最高。

表4

表5

2.3.3总黄酮含量结果

50℃下将鲜心叶淫羊藿烘至不同含水量，切丝，加羊油炒干所得样品(S1-S11)中总黄酮含量均低于传统工艺所得样品(S12)，结果见表6。

随着烘制温度的增加，总黄酮含量呈先增加后降低的趋势，从70℃(S17)开始，总黄酮含量高于传统工艺所得样品(S12)，100℃所得样品中(S20)总黄酮达到了最高，与5种主要黄酮含量结果具有一致性。结果见表7。

表6

样品编号	含量(％)	样品编号	含量(％)
				S1	6.01	S7	6.58
S2	6.27	S8	6.76
				S3	6.36	S9	6.49
S4	6.40	S10	6.82
				S5	6.59	S11	5.84
S6	6.23	S12(传统)	7.05

表7

样品编号	含量(％)	样品编号	含量(％)
				S12(传统)	7.05	S18	7.14
S13	6.46	S19	7.25
				S14	6.74	S20	7.28
S15	6.37	S21	7.15
				S16	6.95	S22	6.63
S17	7.04

2.3.4醇浸出物含量结果

22个工艺制得的样品中醇浸出物含量差异不大，说明不同制备工艺对醇浸出物的影响不大，结果见表8。

表8

2.3.5抗氧化活性结果

鲜心叶淫羊藿在50℃下烘制不同含水量切丝后，加羊油炒干所得样品(S1-S11)中总黄酮含量均低于传统工艺所得样品(S12)，因此，对其抗氧化活性不再进行研究。对传统工艺及不同温度烘制七成干样品(S12-S22)的醇提取物进行体外抗氧化活性研究，发现DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除活性与5种主要黄酮含量和以及总黄酮含量成正相关，当5种黄酮含量和以及总黄酮含量达到最大时，DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除率也达到了最大(分别为37.61％和60.21％)，羟自由基清除活性与5种主要黄酮含量无明显的关联性。三种自由基清除活性结果见表9。

表9

样品编号	DPPH自由基清除率％	羟自由基清除率％	超氧阴离子自由基清除率％
				S12(传统)	35.88	46.53	54.61
S13	32.37	41.40	55.09
				S14	32.49	44.09	56.37
S15	32.96	38.58	55.61
				S16	31.63	39.46	55.08
S17	35.47	40.12	56.24
				S18	36.31	40.21	58.59
S19	37.37	42.95	58.48
				S20	37.61	34.97	60.21
S21	36.59	42.97	58.53
				S22	36.47	38.74	54.42

3小结

本发明实验对鲜淫羊藿产地加工炮制一体化工艺进行了研究，设计了21个新工艺和一个传统工艺，以5种黄酮含量和(朝藿定A-C，淫羊藿苷、宝藿苷Ⅰ)、醇浸出物含量和总黄酮含量以及抗氧化活性为指标，优选最佳的产地加工炮制一体化工艺。表10显示为本发明工艺与传统工艺的操作比较。

表10

淫羊藿在不同含水量下切丝，加20％的羊油炒干所得样品的淫羊藿苷和宝藿苷Ⅰ的含量在0.98-1.33％，均满足药典要求，除S8(50℃烘制七成干，切丝，加羊油炒干)，5种主要黄酮含量和均低于传统工艺所得样品(S12)。将鲜淫羊藿叶在不同温度下烘制七成干，切丝，加20％的羊油炒干制得10个样品(S13-S22)，测定其黄酮类成分含量，发现随着温度的增加，5种主要黄酮和总黄酮含量均呈先增加后降低的趋势，其中S20(100℃烘制七成干，切丝，加羊油炒干)中5种主要黄酮和总黄酮含量均最高。22个工艺制得的样品中醇浸出物含量差异不大，说明不同制备工艺对醇浸出物的影响不大。

鲜心叶淫羊藿在50℃下烘制不同含水量切丝后，加羊油炒干所得样品(S1-S11)中总黄酮含量均低于传统工艺所得样品(S12)，对传统工艺及不同温度烘制七成干样品(S12-S22)的醇提取物进行体外抗氧化活性研究，发现DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除活性与5种主要黄酮含量和以及总黄酮含量成正相关，当5种黄酮含量和以及总黄酮含量达到最大时，DPPH自由基和超氧阴离子自由基清除率也达到了最大，羟自由基清除活性与5种主要黄酮含量无明显的关联性。

最后应说明的是：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。