一种信息素组合物喷雾制剂及其制备方法和应用
阅读说明：本技术 一种信息素组合物喷雾制剂及其制备方法和应用 (Pheromone composition spray preparation and preparation method and application thereof ) 是由 岑桂英 钱星宇 李伟 吴春山 原敏 何玲飞 于 2019-10-14 设计创作，主要内容包括：本发明涉及信息素组合物,尤其涉及一种信息素组合物喷雾制剂及其制备方法和应用。一种信息素组合物喷雾制剂,该喷雾制剂按质量比计包括：雄甾烯酮和/或雄甾烯醇0.001-0.02%；淫羊藿提取物0.001-0.02%；二甲基亚砜0.2-20%；吐温-800.01-0.5%；防腐剂0.1-1.0%；纯化水80.0-99.0%。该喷雾制剂更为安全可靠,并且可靠地改善母猪的生殖表现(即更高的可配发情率),提高母猪利用率,提高母猪生育力。(The invention relates to a pheromone composition, in particular to a pheromone composition spray preparation, a preparation method and application thereof. A pheromone composition spray preparation, which comprises the following components in percentage by mass: androstenone and/or androstenol 0.001-0.02%; herba Epimedii extract 0.001-0.02%; 0.2 to 20 percent of dimethyl sulfoxide; tween-800.01-0.5%; 0.1 to 1.0 percent of preservative; 80.0-99.0% of purified water. The spray preparation is safer and more reliable, reliably improves the reproductive performance of sows (namely higher matchable estrus rate), improves the utilization rate of the sows and improves the fertility of the sows.)
技术领域
本发明涉及信息素组合物，尤其涉及一种信息素组合物喷雾制剂及其制备方法和应用。
背景技术
“信息素(Pheromone)”一词由研究人员在上世纪五十年代提出，是由两个古希腊词Pherein(传送)和hormone(兴奋)合成的。它被认为是一类能够引起同种类异性动物性反应的化学物质，因此也称作信息素，在一些行为和性的相互作用中，以及繁殖的控制中起着重要作用。信息素是昆虫的外分泌腺分泌到体外的化学物质，通过个体检的接触或空气传播，作用于同种类的其他个体，引起特定的行为或生理反应。昆虫性信息素主要可作用于害虫的预测预报、直接诱杀雄虫、切断害虫间的联系等方面。人工合成的性信息素叫“性诱剂”，在田间大量散放性诱剂，可使雄虫迷失方向，不能完成交配，从而达到防治的目的。
目前，已经已知并已经辨明化学结构的外激素及其类似物已经有18种以上。而研究发现，公猪的体内分泌并释放的信息素素“雄甾烯酮(雄甾-16-烯-3-酮)”和“雄甾烯醇(雄甾-16-烯-3-醇)”可在母猪生殖性行为中发挥重要作用。然而，公猪的雄甾烯酮和雄甾烯醇不但在化学结构上已得到确定，并且已经生产出喷雾剂和粉剂用于养猪生产之中以及用于科学研究。根据过去累积起来的有关知识，公猪在交配前有性刺激母猪。这个过程中涉及信息素，听觉，视觉和触觉刺激，所有这些都会影响母猪和后备母猪脑垂体催产素的释放(Madej等，2005)。Langendijk等(2003)报道，公猪的存在诱导了母猪体内催产素的释放，并明显增加了母猪的子宫肌层活动。公猪接触的影响还包括刺激卵泡生长，导致更多初产母猪的发情和***(Langendijk等，2000)。10个月龄的公猪颌下腺释放的唾液信息素即可刺激母猪的发情和发情行为。使用含有猪信息素的药物产品，可用于增强母猪的发情表现，检测母猪发情行为变化。实际应用中发现，对母猪使用公猪信息素，可以促进母猪初情期的到来。另外研究表明，公猪外激素还可影响母猪发情的节律和强度，并影响断奶再发情的间隔时间。在断奶母猪中，当碰到公主刺激刺激或其他形式的信息素刺激时，母猪便会出现一定的行为变化，例如脊柱前凸或直立反射，这是它们发出的信号，招揽雄性接近，对于配种人员来说，此时意味着母猪可进行配种或人工授精(A.I.)。
发情是指性成熟的雌性哺乳动物在特定季节表现的生殖周期现象，在生理上表现为***，准备受精和怀孕，在行为上表现为吸引和接纳异性。首先是卵巢上的卵泡正在成熟，继而***；卵泡分泌的***引起***，接受雄性动物的爬跨；同时发生生殖导管的黏膜充血、水肿，黏液增多，子宫颈放开等生理变化。出现发情行为和生殖生理变化持续的时间为发情期。动物出现发情表现，这是产生繁殖结果的一个重要前提条件。然而，在实际生产中，也可以使用一些激素，例如***，诱导母畜发情，但此种情况下产生的发情，大多数时候仅仅是“假发情的现象”，即单纯的发情，并不能进行配种(人工授精)，也不能产生正常的的繁殖结果。因为，***等方法诱导的母畜出现发情表现时，母畜卵巢上的活动或发育状态并不处于发情期应有的状态，要么无卵泡发育，要么不具备正常的***机能，甚至卵巢上还有黄体，其他生殖器官也未做好配种、繁殖的各方面准备。而外激素诱导或促进母畜发情的作用，能使母畜受精、妊娠并产仔，其发情具有正常的***机能。
然后影响母猪繁殖的因素有很多，例如发情、发情鉴定、***质量、配种技术、营养状况、环境因素等，而母猪发情鉴定是繁殖工作中的重要技术环节之一，通过发情鉴定，可正确确定配种时期，提高受胎率。目前的发情鉴定大多采用外部观察，结合压背试验、公猪试情等法。但是，在实际生产中，有部分母猪卵巢机能正常，卵泡发育正常，生殖系统也正常，而且正常***，但就是不发情(无发情表现或行为)，这即隐性发情或发情不明显，发情鉴定困难，生产上往往造成失配、漏配，损失不小。外部观察虽简单，但对这些隐性发情或发情不明显的母猪则难以作判定，易错过配种时期。大规模生产中，一头母猪从出生到性成熟，再到配种，可能就没有见过几次公猪，也未接触过公猪，这也是母猪出现隐性发情的一个因素。也有认为造成隐性发情的原因是由于某些外界因素干扰垂体的正常功能，引起***分泌不足所致。
目前，大多数猪场在母猪配种或人工授精前均使用公猪来检查断奶母猪或经产母猪是否处于发情，以提高配种率；然而即使使用公猪来查情方法，也会存在约20％的母猪无应答反应。另外，一个主要问题就是，需要单独的圈舍，饲养公猪，公猪在一个猪场的日常生产中，发挥的作用单一，而且饲养成本较高。此外，公猪查情也增加了疾病传染风险，是防疫环节中的一大漏洞，例如现在蔓延中国的非洲猪瘟，很大一部分疫情都是由于公猪随意进出母猪圈舍，本来未发生感染的母猪圈舍也发生了感染，对部分猪场造成了毁灭性打击。据不完全统计，2018年～2019年，因非洲猪瘟导致中国约1/3的母猪死亡(病死+屠宰)。公猪试情法不仅较繁琐，且不利于猪场防疫。
国外曾有采用仿生法，即模拟种公猪的声音、气味来测试母猪是否发情。
1968年的英国专利GB1267514A中，提到了信息素在改善母猪人工授精中作用，其产品使用***作为雄甾烯酮的溶剂，***低沸点，闪点约为34.6℃，在温度较高情况下使用、保存时，容易发生***；另外其包装为压力瓶，内部充入了大量的丙丁烷等烷烃类作为抛射剂，而丙丁烷也属于易燃易爆危险化学品，特别是炎热的夏天，该产品保存、运输都存在极大风险；日常保存需要阴凉处或冰箱保存；使用过程中，易挥发，对操作人员呼吸道等有一定的刺激性毒性。因此，这类产品在使用，保存中极不方便，存在安全隐患。该产品的实际有效率较低，也只有55％(22/40)，效果不是很理想，主要原因是其产品挥发性太快，活性成分还未被母猪接触到，就已经挥发到环境空气中，浓度被稀释，从而导致实际使用效果较差。
D.R.Melrose等，BRITISH VETERINARY JOURNAL(英国兽医学报)127(1971)497-502中比较了不同信息素用于母猪时的发情情况，即使用两种类固醇激素——5α-雄甾-16-烯-3-酮与3α-羟基-5α-雄甾-16-烯之后，母猪出现静立反应(发情表现，可进行配种)的比例最高也只有56％；C.B Breed等，BRITISH VETERINARY JOURNAL(英国兽医学报)130(1974)61-67中研究了不同雄激素类固醇激素配伍使用时用于母猪发情检测的情况，单纯使用这一类信息素时，母猪出现静立反应(发情表现，可进行配种)的比例只有58％。
国内研究人员何英俊，母猪的仿生法发情鉴定[J].浙江畜牧兽医,1995(4)中报道采用仿生法与外部观察法在发情鉴定率上基本相同(276vs 284)，但受胎率明显高于其他方法。主要是由于母猪只有在求偶时(即发情盛期)，对仿生法发情鉴定才有求偶反应，而发情初期、末期或其他未发情的母猪则无求偶反应因此，有求偶反应的母猪基本上进人了配种适期，此时配种，受胎率较高，所以说仿生法不仅是一种有效的发情鉴定法。
美国专利US9480689B1中提到了一种信息素药物组合和方法，可以刺激母猪的生殖行为和生殖成功率。该组合包括至少一种类固醇激素和一种杂环芳族化合物，该产品使用后，母猪出现静立反应的比率为88％，尽管临床效果显著提升，但是类固醇激素种类繁多，很多为同化类激素，不能随意使用，否则可能影响食品安全，例如***(不利于胚胎着床)、雄激素(抑制卵泡发育)等，如果使用时间不当或不准确，不仅不会刺激母猪生殖行为，反而会抑制母畜的生殖行为。此外，其中杂环芳族化合物，这一类物质也比较特殊，除了有一定的气味之外，也存在一定的吸入性毒性，例如喹啉是芳香类化合物，遇明火、高热可燃。与氧化剂可发生反应。受热分解放出有毒的氧化氮烟气。使用人员使用时，喹啉蒸气对鼻、喉有刺激性。吸入后引起头痛、头晕、恶心，对眼睛、皮肤也有刺激性。此外，喹啉具有一定的生态毒性，例如可杀死水水蚤、藻类等生物，影响水生态稳定。其生物降解的半衰期可长达960h，空气中光氧化半衰期可长达99h。因此，如果喹啉使用不当，将影响使用人员的健康，也会对生态环境造成一定的影响。另外有一些研究发现杂环芳族化合物可能具有一定的促生长作用，促生长则会干预母畜的生长发育，不利于胚胎发育，这也会影响食品安全，具有促生长作用的物质或药物，在很多国家地区是严禁用于食品性动物的。因此，该产品组合也不够完善，也存在很大的安全隐患。
因此，现有的方法在有效性、安全性等方面均不能满足目前母猪批次化生产技术中的需要，即更高的可配发情率。
发明内容
有鉴于此，本申请的目的是提供一种信息素组合物喷雾制剂，该喷雾制剂更为安全可靠，并且可靠地改善母猪的生殖表现(即更高的可配发情率)，提高母猪利用率，提高母猪生育力。
为了实现上述的目的，本申请采用了以下的技术方案：
一种信息素组合物喷雾制剂，该喷雾制剂按质量比计包括：
作为优选，该喷雾制剂按质量比计包括：
本申请组合物最佳的技术方案是：包含雄甾烯酮、雄甾烯醇和淫羊藿提取物的组合。作为优选，该喷雾制剂包括雄甾烯酮和雄甾烯醇；按质量比计，雄甾烯酮为0.001-0.005％，雄甾烯醇为0.001-0.005％。中医认为，淫羊藿味辛甘性温，走肝肾二经。为补命门、益精气、强筋骨、补肾壮阳之要药，临床常用于治疗男子阳痿不举、滑精早泄、小便不禁以及女子***等症。淫羊藿提取物是从多年生草本植物淫羊藿(学名：Epimediumbrevicornu Maxim.)中提取出的物质，主要成分包括淫羊藿苷、挥发油、蜡醇、植物甾醇、鞣 质、维生素E等成分，属于中草药提取物，更加安全，不会对使用人员和靶动物产生不良刺激。优选淫羊藿苷(icariin)，优选纯度≥94.0％。
作为优选，本申请的制剂pH范围为5-8之间。在此pH范围之间，能够使该组合物获得意外的稳定效果。为此，我们进一步发现，pH在5-8之间能够满足使用需求，当pH低于4时或高于8时，会对母猪鼻腔造成一定刺激，甚至损伤鼻粘膜，母猪接受程度较差，且此种情况下，药物稳定性较差，而pH在5-8之间，组合物溶液稳定性提高，且则基本接近机体正常情况，使用本品时，母猪接受程度较高。
作为一种
具体实施方式
，该喷雾制剂按质量比计由以下的组分构成：
作为一种具体实施方式，该喷雾制剂按质量比计由以下的组分构成：
作为一种具体实施方式，该喷雾制剂按质量比计由以下的组分构成：
作为一种具体实施方式，该喷雾制剂按质量比计由以下的组分构成：
本申请还公开了所述的一种信息素组合物喷雾制剂的制备方法，按照配方量精密称取雄甾烯酮、雄甾烯醇、淫羊藿提取物，加入到处方量的二甲基亚砜中，超声助溶10-30分钟；待其完全溶解后，加入到纯化水中，开始搅拌，在搅拌的同时加入处方量的吐温-80，然后继续搅拌，再加入防腐剂，然后加纯化水至处方量，然后继续搅拌1.5-3小时，0.40-0.50微米滤膜过滤后即得。
本申请还公开了所述的一种信息素组合物喷雾制剂用于在雌性猪属动物中刺激生殖行为和提高生殖成功率以及生产率中的应用。本申请的技术方案可靠地改善母猪的生殖表现(即更高的可配发情率)，提高母猪利用率，提高母猪生育力。
附图说明
图1为不同类型的喷雾器材；A,B为两种不同的机械性喷雾瓶；C,D为电动喷雾装置。
图2为不同信息素处理组的实际有效性增加情况；备注：雄甾烯酮，5α；雄甾烯醇，3α；雄甾烯酮+雄甾烯醇，5α+3α；淫羊藿1，Y-1；淫羊藿2，Y-2；雄甾烯酮+淫羊藿1，5α+Y-1；雄甾烯醇+淫羊藿1，3α+Y-1；雄甾烯酮+雄甾烯醇+淫羊藿1，5α+3α+Y-1；雄甾烯酮+雄甾烯醇+淫羊藿2，5α+3α+Y-2。
图3为同一猪场同一舍不同圈分布示意图(Ⅰ～Ⅵ代表不同圈舍分布情况)。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，本发明用以下具体实施例和实例进行说明，所属的实施例是为了更好地解释本发明，而不是对本发明保护范围的限制，所有基于本发明基本思想和原则内所做的任何修改和变动，都属于本发明请求保护的范围。
制备实施例
下列用语说明本发明的实施例中，雄甾烯酮、雄甾烯醇和淫羊藿提取物特定混合比例构成的组合物。
对比例1
根据表1列出的含有信息素组合物溶液配方量，将20.0mg的雄甾烯酮(Sigma-Aldrich,≥98.00％)，加入到10.0g的二甲基亚砜(Sigma-Aldrich,色谱级)中，超声助溶20分钟；待其完全溶解后，加入到500ml MilliQ-水中，开始搅拌，在搅拌的同时加入0.5g的吐温-80(Sigma-Aldrich)，然后继续搅拌，再加入3g的防腐剂(卡松，LONZA，瑞士)，然后加MilliQ-水至1000.0g，然后继续搅拌2小时，最后使用0.45微米滤膜(Merk-Millipore)过滤后即得A组合物溶液。在使用前，将溶液分装于喷雾装置中，每瓶100ml。
表1 信息素组合物溶液配方
组分
百分比，％
g
雄甾烯酮
0.002
0.002
二甲基亚砜
1.0
1.0
吐温-80
0.05
0.05
防腐剂
0.3
0.3
纯化水
98.648
98.648
总计
100.000
100.000
对比例2
根据表2列出的含有信息素雄甾烯醇(Sigma-Aldrich,≥98.00％)组合物溶液配方。取20.0mg雄甾烯醇，加入到10.0g的二甲基亚砜中，超声助溶20分钟；待其完全溶解后，加入到500ml MilliQ-水中，开始搅拌，在搅拌的同时加入0.5g的吐温-80，然后继续搅拌，再加入3g的防腐剂(卡松，LONZA，瑞士)，然后加MilliQ-水至1000.0g，然后继续搅拌2小时，最后使用0.45微米滤膜(Merk-Millipore)过滤后即得B组合物溶液。在使用前，将溶液分装于喷雾装置中，每瓶100ml。
表2 信息素组合物溶液配方
组分
百分比，％
g
雄甾烯醇
0.002
0.002
二甲基亚砜
1.0
1.0
吐温-80
0.05
0.05
防腐剂
0.3
0.3
纯化水
98.648
98.648
总计
100.000
100.000
对比例3
根据表3列出的含有信息素雄甾烯酮、雄甾烯醇组合物溶液配方。参照实例1、2的溶液配制方法配制1000ml C组合物溶液。在使用前，将溶液分装于喷雾装置中，每瓶100ml。
表3 信息素组合物溶液配方
实施例1
根据表4列出的含有信息素雄甾烯酮、淫羊藿提取物(Icariin,Simga-Aldrich,≥94.0％，HPLC)组合物溶液配方。参照实例1、2的溶液配制方法配制1000ml D组合物溶液。在使用前，将溶液分装于喷雾装置中，每瓶100ml。
表4 信息素组合物溶液配方
组分
百分比，％
g
雄甾烯酮
0.002
0.002
淫羊藿提取物
0.002
0.002
二甲基亚砜
1.0
1.0
吐温-80
0.05
0.05
防腐剂
0.3
0.3
纯化水
98.646
98.646
总计
100.000
100.000
实施例2
根据表5列出的含有信息素雄甾烯醇、淫羊藿提取物组合物溶液配方。参照实例1、2的溶液配制方法配制1000ml E组合物溶液。在使用前，将溶液分装于喷雾装置中，每瓶100ml。
表5 信息素组合物溶液配方
组分
百分比，％
g
雄甾烯醇
0.002
0.002
淫羊藿提取物
0.002
0.002
二甲基亚砜
1.0
1.0
吐温-80
0.05
0.05
防腐剂
0.3
0.3
纯化水
98.646
98.646
总计
100.000
100.000
实施例3
根据表6列出的含有信息素雄甾烯酮、雄甾烯醇、淫羊藿提取物组合物溶液配方。按照表6中的配方量精密称取雄甾烯酮、雄甾烯醇、淫羊藿提取物，加入到处方量的二甲基亚砜中，超声助溶20分钟；待其完全溶解后，加入到纯化水中，开始搅拌，在搅拌的同时加入处方量的吐温-80，然后继续搅拌，再加入防腐剂，然后加纯化水至处方量，然后继续搅拌2小时，0.45微米滤膜过滤后即得F组合物溶液。在使用前，将溶液分装于喷雾装置中，每瓶100ml。
表6 信息素组合物溶液配方
组分
百分比，％
g
雄甾烯酮
0.002
0.002
雄甾烯醇
0.002
0.002
淫羊藿提取物
0.002
0.002
二甲基亚砜
1.0
1.0
吐温-80
0.05
0.05
防腐剂
0.3
0.3
纯化水
98.644
98.644
总计
100.000
100.000
实施例4
根据表7列出的含有信息素雄甾烯酮、雄甾烯醇、淫羊藿提取物组合物溶液配方。按照表7中的配方量精密称取雄甾烯酮、雄甾烯醇、淫羊藿提取物，加入到处方量的二甲基亚砜中，超声助溶20分钟；待其完全溶解后，加入到纯化水中，开始搅拌，在搅拌的同时加入处方量的吐温-80，然后继续搅拌，再加入防腐剂，然后加纯化水至处方量，然后继续搅拌2小时，0.45微米滤膜过滤后即得G组合物溶液。在使用前，将溶液分装于喷雾装置中，每瓶100ml。
表7 信息素组合物溶液配方
对比例4
根据表8列出配方配制含0.002％的淫羊藿提取物的溶液。按照表8中的配方量精密称取淫羊藿提取物0.002％，加入到处方量的二甲基亚砜中，超声助溶20分钟；待其完全溶解后，加入到纯化水中，开始搅拌，在搅拌的同时加入处方量的吐温-80，然后继续搅拌，再加入防腐剂，然后加纯化水至处方量，然后继续搅拌2小时，0.45微米滤膜过滤后即得H组合物溶液。在使用前，将溶液分装于喷雾装置中，每瓶100ml。
表8 信息素组合物溶液配方
组分
百分比，％
g
淫羊藿提取物
0.002
0.002
二甲基亚砜
1.0
1.0
吐温-80
0.05
0.05
防腐剂
0.3
0.3
纯化水
98.648
98.648
总计
100.000
100.000
对比例5
根据表9列出配方配制含0.004％的淫羊藿提取物的溶液。按照表9中的配方量精密称取淫羊藿提取物0.004％，加入到处方量的二甲基亚砜中，超声助溶20分钟；待其完全溶解后，加入到纯化水中，开始搅拌，在搅拌的同时加入处方量的吐温-80，然后继续搅拌，再加入防腐剂，然后加纯化水至处方量，然后继续搅拌2小时，0.45微米滤膜过滤后即得I组合物溶液。在使用前，将溶液分装于喷雾装置中，每瓶100ml。
表9 信息素组合物溶液配方
组分
百分比，％
g
淫羊藿提取物
0.004
0.004
二甲基亚砜
1.0
1.0
吐温-80
0.05
0.05
防腐剂
0.3
0.3
纯化水
98.646
98.646
总计
100.000
100.000
试验例1
测定本组合物溶液对母猪生殖行为表现，生育力的效果。
本研究评估了雄甾烯酮、雄甾烯醇和淫羊藿提取物单独和组合的效力，以确定其在母猪生殖行为、生育力方面的效果。本研究的目的是确定在改善母猪生殖行为和生育力方面，雄甾烯酮、雄甾烯醇与淫羊藿提取物组合比单独一种信息素或淫羊藿提取物更有效果，表10为用于测试的几种信息素组合方式。
表10 测试的各种信息素组合物方案
分组序号
实例
主要成分
A
对比例1
雄甾烯酮
B
对比例2
雄甾烯醇
C
对比例3
雄甾烯酮+雄甾烯醇
D
实施例1
雄甾烯酮+淫羊藿提取物
E
实施例2
雄甾烯醇+淫羊藿提取物
F
实施例3
雄甾烯酮+雄甾烯醇+淫羊藿提取物(0.002％)
G
实施例4
雄甾烯酮+雄甾烯醇+淫羊藿提取物(0.004％)
H
对比例4
淫羊藿提取物(0.002％)
I
对比例5
淫羊藿提取物(0.004％)
J
DMSO对照组
在某商业养殖场测试雄甾烯酮、雄甾烯醇和淫羊藿提取物组合物的效果。断奶后的母猪通常在断奶后第4～6天进入发情阶段，因此在断奶后第4天开始在断奶母猪鼻孔前方进行喷雾，喷完后进行“压背测试”(即按压母猪的背部)，如果母猪出现“站立”反应，则表示该母猪已经发情，可以进行授精。如第4天未出现“站立”反应，次日继续使用本品。喷雾时间为早晚各一次，共两次。在断奶后4-6天的母猪中使用本信息素组合物后，共有168头母猪出现发情表现，并进行了人工配种(A.I.)。表11为测试结果。
表11 不同信息素组合方案的试验测试结果
a通过背压测试，发现母猪出现站立反应；b其中有22头发情时间超过了规定期限(断奶后第4～6天)。
表12 不同信息素处理组增效测试结果
处理
配比
有效
增效值，％
对照组
0
43.82
——
雄甾烯酮
1:0
60.20
16.38
雄甾烯醇
1:0
54.99
11.17
雄甾烯酮+雄甾烯醇
1:1
65.00
21.18
淫羊藿提取物
1:0
60.68
16.86
淫羊藿提取物
2:0
62.89
19.07
雄甾烯酮+淫羊藿提取
1:1
74.74
30.92
雄甾烯醇+淫羊藿提取
1:1
74.75
30.93
雄甾烯酮+雄甾烯醇+
1:1:1
89.44
45.62
雄甾烯酮+雄甾烯醇+
1:1:2
87.00
43.18
试验例2
测定信息素组合物溶F对母猪生殖行为表现，生育力的效果，以公猪作为对照。试验方法参照实例10进行，其中断奶母猪在第4-6天早晚各一次使用信息素组合物溶液F处理，即在母猪鼻孔前方进行喷雾，每次1ml，喷完后进行“压背测试”(即按压母猪的背部)，如果母猪出现“站立”反应，则表示该母猪已经发情，可以进行授精。如第4天未出现“站立”反应，次日继续使用本品。对照组，使用18个月龄公猪在圈舍走过，与待发情母猪进行近距离接触，刺激、交流。在断奶后4-6天的母猪中使用本信息素组合物后，共有238头断奶母猪出现发情表现，并进行了人工配种(A.I.)。表13为测试结果。
表13 信息素组合物溶F与公猪检测的效果比较
试验例3
测定不同剂量的信息素组合物溶液F对母猪生殖行为表现，生育力的效果，以公猪作为对照。试验方法参照实例11进行，其中试验组分为3组，每组给药剂量分别为0.5ml、1ml、2ml；断奶母猪在第4-6天早晚各一次使用信息素组合物溶F处理，即在母猪鼻孔前方进行喷雾，喷完后进行“压背测试”(即按压母猪的背部)，如果母猪出现“站立”反应，则表示该母猪已经发情，可以进行授精。如第4天未出现“站立”反应，次日继续使用本品。对照组，使用18个月龄公猪在圈舍走过，与待发情母猪进行近距离接触，刺激、交流。在断奶后4-6天的母猪中使用本信息素组合物后，共有238头断奶母猪出现发情表现，并进行了人工配种(A.I.)。表14为测试结果。
表14 不同剂量信息素组合物溶液F试验测试结果
分组
试验头数
平均胎次
发情头数
发情率，％
受孕头数
受孕率，％
0.5ml
91
2.6±0.72
72
79.12
65
87.14
1.0ml
102
2.5±0.63
95
93.14
89
93.68
2.0ml
109
2.6±0.43
102
93.58
95
93.13
对照组
81
2.7±0.47
69
85.19
64
92.75
试验例4
测定信息素组合物溶液F在不同胎次母猪上的效果，对母猪生殖行为表现，生育力的效果。在某商业猪场挑选不同胎次的断奶母猪，分别为第2胎次，第3胎次，第4胎次，第5胎次，相同胎次的断奶母猪为同一组。每组母猪在断奶后第4-6天早晚各一次，使用信息素组合物溶液F处理，即在母猪鼻孔前方进行喷雾，每次1ml，喷完后进行“压背测试”(即按压母猪的背部)，如果母猪出现“站立”反应，则表示该母猪已经发情，可以进行授精。如第4天未出现“站立”反应，次日继续使用本品。表15为测试结果。
表15 信息素组合物溶液F对在不同胎次母猪的效果统计
试验胎次
试验头数
发情头数
发情率，％
受孕头数
受孕率，％
2
51
47
92.16
44
93.62
3
50
46
92.00
42
91.30
4
49
47
91.83
44
93.62
5
53
50
92.45
46
92.00
对照组
41
34
82.93
29
85.29
试验例5
测定信息素组合物溶液F在不同季节用于断奶母猪上的效果，对母猪生殖行为表现，生育力的效果。在某商业猪场随机挑选相同头数的断奶母猪，分别在4月份，7月份，10月份，12月份，进行测试信息素组合物溶液F用于断奶母猪上的效果，对母猪生殖行为表现，生育力的效果相同胎次的断奶母猪为同一组。每组母猪在断奶后第4～6天早晚各一次，使用信息素组合物溶液F处理，即在母猪鼻孔前方进行喷雾，每次1ml，喷完后进行“压背测试”(即按压母猪的背部)，如果母猪出现“站立”反应，则表示该母猪已经发情，可以进行授精。如第4天未出现“站立”反应，次日继续使用本品。表16为测试结果。
表16 不同季节使用信息素组合物溶液F测试结果
试验例6
其他8种中药提取物+信息素组合物的临床效果研究
参照实例1、2，配制下列8种中药提取物+信息素组合物溶液，每个溶液配制1000ml，然后分装，每瓶100ml。各种中药提取物浓度均为0.002％(w/w)，其余成分比例不变。使用方法参照实例10进行，统计结果如下。
表17 8种中药提取物+信息素组合物溶液测试结果
从以上的数据可以看出本申请筛选的8种中药提取物+信息素组合物均可以促进发情率。
试验例7
其他中药提取物+信息素组合物的临床效果研究
参照实例1、2，配制下列4种中药提取物+信息素组合物溶液，每个溶液配制1000ml，然后分装，每瓶100ml。各种中药提取物浓度均为0.002％(w/w)，其余成分比例不变。使用方法参照实例10进行，统计结果如下。
表18 4种中药提取物+信息素组合物溶液测试结果
从以上的数据可以看出对于4种中药提取物+信息素组合物则没有出现增效的效果。
试验例8
喹啉+信息素组合物与中药提取物+信息素组合物在同一猪场同一舍不同圈(不同批次)母猪中的实际效果比较。图3显示了同一猪场同一舍不同圈分布示意图(Ⅰ～Ⅵ代表不同圈舍分布情况)。
喹啉在环境中长时间残留，导致同一猪场，不同大圈的母猪发情率显著波动，主要是降低，而中药提取物则不存在类似现象(很稳定)；喹啉长时间导致母猪对其适应，对其不敏感了，不再发生初次较好的效果。中草药提取物+信息素则比较稳定。
表19 不同信息素组合物溶液在猪场同一舍不同圈(不同批次)母猪中测试结果
试验例9
不同信息素组合物对母猪发情率的效果比较。
参照实例1、2，配制下列4种中药提取物+信息素组合物溶液，每个溶液配制1000ml，然后分装，每瓶100ml。各种中药提取物浓度均为0.002％(w/w)，其余成分比例不变。使用方法参照实例10进行。
表20 不同信息素组合物溶液测试结果比较
试验例10
不同pH值得信息素组合物配制。参照上述实例7制备方法进行操作。分别使用滴加不同量的冰醋酸和10％氢氧化钠溶液调节溶液pH值至4.0、5.0、7.0、8.0、10.0。
表21 配制不同pH值的信息素组合物溶液
试验例11
参照2015版《中国兽药典》附录302原料药物与制剂稳定性试验指导原则进行稳定性试验研究。重点考察项目包括含量、pH值。试验条件：温度，40℃±2℃；相对湿度，75％±5％；试验周期，6个月；考察时间点如表10所示。将上述不同pH值得样品置于稳定性试验箱(满足上述试验条件)进行稳定性考察。
表22 不同pH条件下的溶液稳定性考察
以上为对本发明实施例的描述，通过对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的。本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施列，而是要符合与本文所公开的原理和新颖点相一致的最宽的范围。