具体实施方式

以下，针对本发明的一个实施方式进行说明。

本实施方式的皮下或黏膜下用的膨胀剂(以下有时简称为膨胀剂)，是被注入至皮下或黏膜下而使该皮下或黏膜下膨胀的膨胀剂，该膨胀剂包含：含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)、以及水(B)。

上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)由阴离子改性后的纤维素形成。就阴离子改性后的纤维素而言，只要是具有阴离子基的纤维素，则没有特别的限定。该纤维素优选为硝酸纤维素、硫酸化纤维素、磷酸化纤维素、羧甲基纤维素等，最优选利用以N-氧基化合物作为催化剂的氧化法而含有经阴离子改性的羧基。即，纤维素纤维(A)最优选在N-氧基化合物的存在下使用共氧化剂进行氧化后而含有经阴离子改性的羧基。

这样，作为含有“利用以N-氧基化合物作为催化剂的氧化法而含有经阴离子改性的羧基的纤维素”的纤维素纤维(A)，可举出：一种纤维素纤维，其数均纤维直径为2nm至150nm的纤维素纤维，其具有纤维素I型结晶结构，并且纤维素分子中的各葡萄糖单元的C6位选择性地成为醛基、酮基或羧基中任一者，其中，羧基的含量为1.2mmol/g至2.5mmol/g，在利用氨基脲(semicarbazide)法进行的测定中的醛基与酮基的合计含量为0.3mmol/g以下，利用斐林试剂未检测到醛基。此外，该纤维素至少具有该羧基，除了该羧基以外，也可以具有该醛基及酮基中至少一者。

该含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)是对具有I型结晶结构的来自天然的纤维素固体原料进行表面氧化并微细化而形成的纤维。

即，在天然纤维素的生物合成过程中，几乎毫无例外地会先形成被称为微纤维(microfibril)的奈米纤维，并将这些多束化而构成高阶的固体结构，但为了弱化成为上述微纤维间的强凝聚力的原动力的表面间氢键，其羟基(纤维素分子中的各葡萄糖单元的C6位的羟基)的一部分被氧化而变换成羧基、醛基或酮基。

在此，构成上述纤维素纤维(A)的经阴离子改性的纤维素具有I型结晶结构是通过例如在由广角X射线衍射图像测定得到的衍射图谱中于2θ＝14至17°附近、2θ＝22至23°附近这2个位置检测出典型的峰来鉴定。

上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)的数均纤维直径是必须在2nm至150nm的范围内，但从分散稳定性的观点来看，优选为2nm至100nm，特别优选为3nm至80nm。若上述数均纤维直径过小，则纤维素纤维(A)基本上会溶解于分散介质，若上述数均纤维直径过大，则纤维素纤维(A)会沉降，变得无法表现通过调配纤维素纤维(A)而得到的功能性。

上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)的最大纤维直径优选为1000nm以下，特别优选为500nm以下。若上述纤维素纤维(A)的最大纤维直径过大，则纤维素纤维(A)会沉降，观察到纤维素纤维(A)的功能性表现有降低的倾向。

上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)的数均纤维直径及最大纤维直径是如下地测定的值。

即，制备固形物浓度0.05质量％至0.1质量％的纤维素纤维(A)的水分散体，将该水分散体浇铸(cast)于已完成亲水化处理的碳膜包覆网格上，作为透射电子显微镜(TEM)的观察用试样。此外，当含有较大的纤维直径的纤维时，也可以观察浇铸于玻璃上的表面的扫描式电子显微镜(SEM)图像。然后，根据构成的纤维的尺寸大小，以5,000倍、10,000倍、50,000倍或100,000倍中任一种倍率进行基于电子显微镜图像的观察。此时，在所得到的图像内，假定纵横任意的图像宽度的轴，以使20根以上的纤维与该轴交叉的方式调整试样及观察条件(倍率等)。然后，在得到满足该条件的观察图像之后，针对该图像，在每1张图像中，画上纵横各2条的随机的轴，以目视读取与轴交错的纤维的纤维直径。通过这样操作，用电子显微镜拍摄最少3张不重复的表面部分的图像，分别读取与2条轴交错的纤维的纤维直径的值(因此，得到最少20根×2×3＝120根纤维直径的数据)。根据这样得到的纤维直径的数据，算出数均纤维直径以及最大纤维直径。

在上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)中，该纤维素是该纤维素分子中的各葡萄糖单元的C6位的羟基的至少一部分被选择性地氧化成醛基、酮基或羧基的任一者。

羧基的含量(羧基量)是在1.2mmol/g至2.5mmol/g的范围内，优选为1.5mmol/g至2.0mmol/g的范围。

若羧基量过小，则有可能发生纤维素纤维(A)的沉降或凝聚，若羧基量过大，则有可能水溶性变得过高。

相对于此，通过使羧基的含量(羧基量)为1.2mmol/g至2.5mmol/g的范围内，能够抑制纤维素纤维(A)的沉降或凝聚，并能够抑制水溶性变得过高。

上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)的羧基量的测定是例如使经精确称量干燥质量的纤维素纤维分散于水中而制备60mL的0.4质量％至1质量％浆料，利用0.1M盐酸水溶液使其pH成为约2.5后，滴加0.05M氢氧化钠水溶液，进行导电率测定。测定持续至pH达到约11为止。可根据在导电率的变化缓慢的弱酸的中和阶段中消费的氢氧化钠量(V)利用下述式(1)来求得羧基量。

羧基量(mmol/g)＝V(mL)×[0.05/纤维素质量(g)] (1)

此外，羧基量的调整如后所述，可通过控制在纤维素纤维(A)的氧化工序中所使用的共氧化剂的添加量或反应时间而进行。

在上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)中，优选在上述氧化改性后利用还原剂进行还原。基于此，将醛基及酮基的一部分或全部还原，回到羟基。此外，羧基通常不被还原。并且，优选通过上述还原而将纤维素纤维(A)的利用氨基脲法测定的醛基及酮基的合计含量设为0.3mmol/g以下，特别优选为0至0.1mmol/g的范围，最优选为实质上为0mmol/g。基于此，相比于仅进行氧化改性的情况，分散稳定性提高，特别是不受气温等左右且分散稳定性长期间地优异。另外，如上所述，如果将在利用氨基脲法的测定中的醛基及酮基的合计含量为0.3mmol/g以下的纤维素纤维作为纤维素纤维(A)而使用于本实施方式的无机材料含有组成物中，可更进一步抑制由于长期保存而导致的凝聚物的产生。

在此，针对在N-氧基化合物的存在下使用共氧化剂的氧化进行说明。在N-氧基化合物的存在下使用共氧化剂的氧化是指，将来自针叶树的牛皮纸浆等天然纤维素在2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(TEMPO)等N-氧基化合物的存在下使用共氧化剂进行氧化的方法。

在上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)中，优选通过上述氧化反应而产生的醛基及酮基被还原剂还原。基于此，变得能够容易地得到含有上述经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)，作为皮下或黏膜下用膨胀剂变得能够得到更良好的结果。另外，从该观点来看，上述还原剂更优选为硼氢化钠(NaBH₄)。

利用氨基脲法进行的醛基及酮基的合计含量的测定是如下所述地进行。即，在干燥后的试样中精确地添加50mL的经磷酸缓冲液调整成pH＝5的氨基脲盐酸盐3g/L水溶液，塞严并震荡二天。其次，将此溶液10mL精确地采集至100mL烧杯中，添加5N硫酸25mL、0.05N碘酸钾水溶液5mL，搅拌10分钟。然后，添加5％碘化钾水溶液10mL，立即使用自动滴定装置，以0.1N硫代硫酸钠溶液进行滴定，利用下述式(2)根据该滴定量等来求出试样中的羰基量(醛基及酮基的合计含量)。此外，氨基脲会与醛基及酮基反应而形成席夫碱(亚胺)，但不会与羧基反应，因此认为通过上述测定可仅对醛基及酮基进行定量。

羰基量(mmol/g)＝(D-B)×f×[0.125/w] (2)

D：试样的滴定量(mL)

B：空白试验的滴定量(mL)

f：0.1N硫代硫酸钠溶液的因子(-)

w：试样量(g)

在上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)中，只有纤维表面上的纤维素分子中的各葡萄糖单元的C6位的羟基被选择性地氧化成醛基、酮基或羧基的任一者。对于是否只有该纤维素纤维(A)表面上的葡萄糖单元的C6位的羟基被选择性地氧化，可以通过例如¹³C-NMR图表来确认。即，可以通过氧化前的纤维素的¹³C-NMR图表确认的相当于葡萄糖单元的伯羟基的C6位的62ppm峰在氧化反应后消失，取而代之的是出现来自羧基等的峰(178ppm的峰是来自羧基的峰)。据此可确认，只有葡萄糖单元的C6位羟基被氧化成羧基等。

另外，关于上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)中的醛基的检测，也可以通过例如斐林试剂来进行。即，例如在干燥后的试样中添加斐林试剂(酒石酸钠钾与氢氧化钠的混合溶液以及硫酸铜五水合物水溶液)后，以80℃加热1小时后，上清液呈蓝色且纤维素纤维部分呈深蓝色者能够判断为没有检测到醛基，上清液呈黄色且纤维素纤维部分呈红色者能够判断为有检测到醛基。

上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)可以通过例如(1)氧化反应工序、(2)还原工序、(3)精制工序、(4)分散工序(微细化处理工序)等来进行制造。以下，依序说明各工序。

(1)氧化反应工序

使天然纤维素与N-氧基化合物分散于水(分散介质)中后，添加共氧化剂，开始进行反应。反应中，滴加0.5M氢氧化钠水溶液而使pH保持在10至11，将变成未观察到pH变化的时间点视为反应结束。在此，所谓共氧化剂并非意指直接将纤维素的羟基氧化的物质，而是指将作为氧化催化剂而使用的N-氧基化合物氧化的物质。

上述天然纤维素意指从植物、动物、细菌产生的凝胶等纤维素生物合成系统中单离出的精制纤维素。更具体而言，可列举：针叶树系纸浆、阔叶树系纸浆；棉短绒、皮棉等棉系纸浆；稻草纸浆、甘蔗渣纸浆等非木材系纸浆；细菌纤维素(BC)、从海鞘单离的纤维素、从海草单离的纤维素等。这些可单独使用，也可以并用二种以上。这些的中，优选从针叶树系纸浆、阔叶树系纸浆、棉短绒、皮棉等绵系纸浆、稻草纸浆、甘蔗渣纸浆等非木材系纸浆单离出的纤维素，从针叶树系纸浆、阔叶树系纸浆单离出的纤维素通过实施打浆(beating)等提高表面积的处理从而能够提升反应效率，能够提高生产性，因此优选。另外，若使用在单离、精制后以不使其干燥(never dry)的方式保存者，则由于微纤维的集束体为容易膨润的状态，而可以提升反应效率，使微细化处理后的数均纤维直径变小，因此优选。

上述反应中的天然纤维素的分散介质为水，反应水溶液中的天然纤维素浓度是设定成能够使试剂(天然纤维素)充分地扩散的任意浓度。相对于反应水溶液的质量，反应水溶液中的天然纤维素浓度通常约为5质量％以下，但可以通过使用机械性搅拌力强的装置来提高浓度。

另外，上述N-氧基化合物可举出例如一般作为氧化催化剂而使用的具有氮氧自由基(nitroxy radical)的化合物。上述N-氧基化合物优选水溶性的化合物，其中，优选哌啶氮氧氧自由基，特别优选2,2,6,6-四甲基哌啶-1-氧基(TEMPO)或4-乙酰胺-TEMPO。上述N-氧基化合物的添加量是以催化剂量为充分，优选为0.1mmol/L至4mmol/L，更优选为0.2mmol/L至2mmol/L。

上述共氧化剂可列举例如：次卤酸或其盐、亚卤酸或其盐、过卤酸或其盐、过氧化氢、过有机酸等。这些可单独使用也可以并用二种以上。其中，优选次氯酸钠、次溴酸钠等次卤酸碱金属盐。另外，使用上述次氯酸钠时，从反应速度的观点来看，优选在溴化钠等溴化碱金属的存在下进行反应。相对于上述N-氧基化合物，上述溴化碱金属的添加量约是1倍～40倍摩尔量，优选为约10倍至20倍摩尔量。

上述反应水溶液的pH优选维持在约8至11的范围。反应水溶液的温度可任意为约4℃至40℃的范围，但反应可以在室温(25℃)下进行，通常不需要进行温度控制。为了得到所期望的羧基量等，只要利用共氧化剂的添加量及反应时间来控制氧化的程度即可。反应时间通常为约5分钟至120分钟，即使在时间较长的情形下，也为240分钟以内。

(2)还原工序

在上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)的制造中，优选在上述氧化反应后，进一步进行还原反应。具体而言，将氧化反应后的氧化纤维素分散于精制水中，通过氢氧化钠水溶液等将该水分散体的pH调整成约10，并利用各种还原剂进行还原反应，得到醛基及酮基被还原后的反应物纤维。本实施方式所使用的还原剂可以使用一般的还原剂，但优选LiBH₄、NaBH₃CN，NaBH₄等。其中，从成本及可利用性的观点来看，优选NaBH₄。

以氧化纤维素的质量为基准，还原剂的添加量优选为0.1质量％至4质量％的范围，特别优选为1质量％至3质量％的范围。反应温度通常为室温或略高于室温的温度。另外，反应时间通常为10分钟至10小时，优选为30分钟至2小时。

上述反应完成后，通过盐酸水溶液等各种酸将反应混合物的pH调整成约2，一边洒上精制水一边利用离心机进行固液分离，得到滤饼(cake)状的反应物纤维。固液分离进行到滤液的导电率为5mS/m以下为止。

(3)精制工序

接着，以去除未反应的共氧化剂(次氯酸等)、各种副产物等为目的进行精制。反应物纤维通常在此阶段中并未松散至奈米纤维单位，因此，可以通过通常的精制法，即重复进行水洗和过滤，来制成高纯度(99质量％以上)的反应物纤维与水的分散体。

上述精制工序中的精制方法，只要是像利用离心脱水的方法(例如连续式倾析器(decanter))的那样可以达成上述目的的装置，则何种装置都可利用。这样得到的反应物纤维的水分散体在挤压的状态下以固形物(纤维素)浓度计处于约10质量％至50质量％的范围。考量到此后的分散工序，若设为高于50质量％的固形物浓度，则在分散时会需要极高的能量，因此不优选。

(4)分散工序(微细化处理工序)

将由上述精制工序得到的含浸有水的反应物纤维(水分散体)分散在分散介质中，进行分散处理。黏度随着处理而上升，可以得到微细化处理后的纤维素纤维的分散体。然后，通过将上述纤维素纤维的分散体干燥，从而能够得到上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)。此外，也可以不将上述纤维素纤维分散体干燥，而是以分散体的状态使用于皮下或黏膜下用膨胀剂。

本实施方式的膨胀剂中，上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)的分散介质可使用水(B)、或是水(B)与有机溶媒的混合溶液等。

关于上述分散工序中使用的分散机，从可以更有效率且达成高度小型化并在经济上有利地得到含有无机微粒子的组成物的观点来看，优选使用高速旋转下的均质机、高压均质机、超高压均质机、超音波分散处理机、打浆机、盘型精磨机、锥型精磨机、双盘型精磨机、研磨机等具有强力且具有打浆能力的装置。此外，上述分散机也可以使用例如：螺旋(screw)型搅拌机(mixer)、叶片(paddle)搅拌机、分散型搅拌机、涡轮(turbine)型搅拌机、分散器(disper)、螺旋桨(propeller)搅拌机、捏合机(kneader)、掺合机(blender)、均质机、超音波均质机、胶体磨机(Colloid mill)、卵石磨机(Pebble mill)、珠磨(bead mill)粉碎机等。另外，也可以组合使用2种类以上的分散机。

也可以根据需要而将上述含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)干燥，关于上述纤维素纤维(A)的分散体的干燥法，例如当分散介质为水时，可使用喷雾干燥、冻结干燥法、真空干燥法等，当分散介质为水与有机溶媒的混合溶液时，可以使用基于滚筒干燥机的干燥法、基于喷雾干燥机的喷雾干燥法等。

此外，在不干燥上述纤维素纤维(A)的情况，所使用的水可以作为水(B)而使用。

由于上述纤维素纤维(A)的透明性优异，因此膨胀剂的透明性也成优异。基于此，例如在ESD中被注入至黏膜下时，使应剥离的黏膜下层容易辨认，而能够进行更安全的内视镜治疗。另外，由于透明性高，在美容整形术或美容成形术中被注入至皮下时，有不容易留有手术后痕迹这样的优点。

本实施方式的膨胀剂中的纤维素纤维(A)的浓度优选0.1质量％至5质量％的范围，更优选0.2质量％至2质量％的范围。

通过使纤维素纤维(A)的浓度为0.1质量％以上，能够发挥充分的膨胀性。

另一方面，通过使纤维素纤维(A)的浓度为2质量％以下，能够抑制由黏度过高而导致的给药性降低。

本实施方式的膨胀剂中的水(B)的浓度以使纤维素纤维(A)成为上述浓度的方式适当设定。

本实施方式的膨胀剂中，除了含有纤维素纤维(A)及水(B)以外，也可以含有其他添加剂。

这样的添加剂可举出例如靛胭脂(Indigo carmine)等色素。本实施方式的膨胀剂通过含有色素，从而在ESD中使应剥离的黏膜下层变得更容易辨认。

除此之外，上述添加剂可举出例如氯化钠、葡萄糖等糖类等渗透压调整剂。本实施方式的膨胀剂通过含有渗透压调整剂，从而可以配合皮下或黏膜下层内的体液的渗透压来调整膨胀剂的渗透压。

本实施方式的膨胀剂的黏度优选为100mPa·s至100,000mPa·s，更优选为1,000mPa·s至50,000mPa·s。

通过使上述黏度为100mPa·s以上，从而可以在皮下或黏膜下发挥更充分的膨胀性。

此外，上述黏度是使用BM型黏度计，在3rpm、20℃、3分钟的条件下进行测定。

在通过注入而给药至皮下或黏膜下这一点上，本实施方式的膨胀剂相当于注射剂。

本实施方式的膨胀剂可以在使用时被填充至注射剂，也可以预先填充在注射剂(载药注射器的方式)。

接着，针对本实施方式的膨胀剂用于皮下或黏膜下的适用例进行说明。

本实施方式的膨胀剂应用于皮下时，例如该膨胀剂被填充至注射筒并从该注射筒经由内径0.35mm至0.5mm左右的局部注射针而注入至皮下。基于此，膨胀剂滞留于皮下组织内，皮下组织膨胀。另外，基于此，将皮肤表面的皱纹伸展。在此情形下，本实施方式的膨胀剂发挥作为皮下隆起剂的功能。

此时，可以将本实施方式的膨胀剂以与现有技术同等程度的力注入至皮下，而且相比于现有技术，能够使皮下组织变大(即，朝向皮肤表面变高)，并且长时间地膨胀。

本实施方式的膨胀剂应用于黏膜时，例如，该膨胀剂被填充至注射筒并从该注射筒经由内径0.35mm至0.5mm左右的局部注射针而被注入至形成有息肉的消化道的黏膜内，例如息肉正下方的黏膜下层(作为消化道管壁的最表面侧的层即肌肉层的正上方的层)。基于此，黏膜下层会膨胀，伴随此现象，能够使黏膜上层与息肉一起隆起。在此状态下，利用线圈刃(snare)等将注入有膨胀剂的部分切除/剥离时，息肉被切除。此时，本实施方式的膨胀剂发挥作为黏膜隆起剂的功能。

此时，能够将本实施方式的膨胀剂以与现有技术同等程度的力注入至黏膜下层内。另外，相比于现有技术，能够使黏膜变大(即，朝向黏膜表面变高)，并且长时间地膨胀。

本实施方式的膨胀剂可以适宜使用于EMR/ESD等内视镜手术或皱纹去除等成形手术等的用途。

如上所述，本实施方式的皮下或黏膜下用膨胀剂被注入至皮下或黏膜下而使该皮下或黏膜下膨胀，该膨胀剂包含：含有经阴离子改性的纤维素的纤维素纤维(A)、以及水(B)。

使上述纤维素纤维(A)分散至水(B)而成的水分散体尽管在剪切力较小时是黏度比玻尿酸的水溶液高的凝胶状，但在剪切力变大时，其黏度会降低至与玻尿酸的水溶液同等程度，流动性变高。

这样，上述纤维素纤维(A)的水分散体具有高黏度及优异的触变性。

所以，本实施方式的膨胀剂在被注入至皮下或黏膜下层内时，尽管其具有比含有玻尿酸的膨胀剂更高的黏度，但在经由局部注射针而被注入至皮下或黏膜下层内时，由于其优异的触变性而提升流动性，仅需施加与含有玻尿酸的膨胀剂同等程度的压力(抵抗少)，因此能够充分地确保给药性。

因此，该含有纤维素纤维(A)及水(B)的本实施方式的膨胀剂不仅膨胀性优于现有技术、膨胀状态持续较长时间，而且能够充分地确保给药性。

本实施方式的皮下或黏膜下用膨胀剂中，上述纤维素纤维(A)可含有羧基作为阴离子基。

根据该构成，使羧基作为阴离子基而存在于纤维素纤维(A)中，从而能够使纤维素纤维(A)成为经微细化者，因此使纤维素纤维(A)更均匀地分散于膨胀剂中。所以，膨胀剂中的膨胀性的偏差受到抑制。通过消除膨胀性的偏差，从而能够形成治疗效果更高的皮下或黏膜下的膨隆。

本实施方式的皮下或黏膜下用膨胀剂中，上述纤维素可以是在N-氧基化合物的存在下使用共氧化剂而氧化者。

根据该构成，通过以N-氧基化合物作为催化剂并使用共氧化剂的氧化法，使经阴离子改性的纤维素存在于纤维素纤维(A)中，从而能够使纤维素纤维(A)成为经微细化者，因此使纤维素纤维(A)更均匀地分散于膨胀剂中。所以，膨胀剂中的膨胀性的偏差更进一步受到抑制。通过消除膨胀性的偏差，从而能够形成治疗效果更高的皮下或黏膜下的膨隆。

本实施方式的皮下或黏膜下用膨胀剂中，上述纤维素纤维(A)可以从来自针叶树的牛皮纸浆得到。

根据该构成，从来自针叶树的牛皮纸浆得到的纤维素纤维(A)具有容易被微细化的特性，因而可以得到使纤维素纤维(A)更均匀地分散的具有较高黏度的膨胀剂。所以，可以使膨胀剂的黏度提高，使膨胀性更优异。

[实施例]

以下，依据实施例，更具体地说明本发明，但本发明只要不超出其要旨，即不被下列实施例所限定。此外，例中的“％”只要没有特别的限定，即指基于质量基准的值。

[实施例1]制造在实施例1的膨胀剂中使用的纤维素纤维。

[纤维素水分散体B1的制造]

(1)氧化工序

使TEMPO 0.5g(3.2mmol，每1g纸浆中为0.08mmol)、溴化钠5.0g(48.6mmol，每1g纸浆中为1.215mmol)溶解于精制水1600g，并冷却至10℃。在此溶液中，使干燥重量相当于40g的漂白针叶树牛皮纸浆(NBKP)(主要包含纤维直径超过1000nm的纤维)分散后，添加以固形物换算为15.0g(每1g纸浆中为5mmol)的12％次氯酸钠水溶液，开始进行反应。pH随着反应的进行而降低，因此，以一边添加24％氢氧化钠水溶液一边使pH＝10至10.5的方式适当调整并反应2.0小时，从而得到氧化纤维素。

(2)还原工序

利用离心机对将上述氧化纤维素进行固液分离、精制后，以加热水分计测定氧化纤维素的固形物量(质量％)。然后，添加精制水而调整至固形物浓度为4％。然后，利用24％氢氧化钠水溶液将浆料的pH调整成10。将浆料的温度设为30℃，添加NaBH₄ 0.3g(0.2mmol/g)，进行反应2小时而得到反应物纤维。

(3)精制工序

在上述反应物纤维中添加1M盐酸水溶液并将pH调整为2后，利用玻璃过滤器进行过滤。然后，利用充分量的离子交换水进行水洗、过滤，测定所得的滤液的导电率。通过重覆地进行水洗，在滤液的导电率不再变化的时间点结束精制工序。这样地，得到含有水的固形物浓度20％的反应物纤维。

(4)分散工序

在上述反应物纤维中适量地添加水及氢氧化钠，制成2％的浆料，使用高压均质机，以150MPa进行双程(two pass)的微细化处理，从而得到纤维素水分散体B1。

利用后述的方法进行测定时，所得的纤维素水分散体B1的羧基含量为1.97mmol/g，羰基的含量为0.10mmol，另一方面，没有检测到醛基。纤维素水分散体B1的黏度为65110mPa·s。纤维素水分散体B1所含有的纤维素纤维的数均纤维直径为4nm。该纤维素纤维所含有的纤维素的结晶结构“有”I型结晶结构。

[羧基量的测定]

使用纤维素水分散体B1，制备在水中分散有0.25g纤维素纤维的纤维素水分散体60mL，使用0.1M盐酸水溶液使pH成为约2.5后，滴加0.05M氢氧化钠水溶液，进行导电率测定。测定持续进行至pH达到约11为止。按照下述式(1)，根据从在导电率的变化缓慢的弱酸的中和阶段中消费的氢氧化钠量(V)来求出羧基量。

羧基量(mmol/g)＝V(mL)×[0.05/纤维素质量(g)] (1)

[羰基量的测定(氨基脲法)]

将由纤维素水分散体B1干燥而成的试样精确称量约0.2g，在其中精确地添加50mL的被磷酸缓冲液调整成pH＝5的氨基脲盐酸盐3g/L水溶液，塞严并震荡二天。接着，将该溶液10mL精确地采集至100mL烧杯中，添加5N硫酸25mL及0.05N碘酸钾水溶液5mL，搅拌10分钟。然后，添加5％碘化钾水溶液10mL，立即使用自动滴定装置，利用0.1N硫代硫酸钠溶液进行滴定，按照下述式(2)，根据其滴定量等来求出试样中的羰基量(醛基及酮基的合计含量)。

羰基量(mmol/g)＝(D-B)×f×[0.125/w] (2)

D：试样的滴定量(mL)

B：空白试验的滴定量(mL)

f：0.1N硫代硫酸钠溶液的因子(-)

w：试样量(g)

[醛基的检测]

将纤维素水分散体B1中的纤维素纤维精确称量0.4g，添加根据日本药局配方制备成的斐林试剂(酒石酸钠钾与氢氧化钠的混合溶液5mL、以及硫酸铜五水合物水溶液5mL)后，以80℃加热1小时。然后，上清液呈蓝色且纤维素纤维部分呈深蓝色者被判断为没有检测到醛基，评价为“无”。另外，上清液呈黄色且纤维素纤维部分呈红色者被判断为检测到醛基，评价为“有”。

[数均纤维直径]

使用透射电子显微镜(TEM)(日本电子公司制，JEM-1400)，观察纤维素水分散体B1中的纤维素纤维的数均纤维直径。即，将各纤维素纤维浇铸于已完成亲水化处理的碳膜包覆网格上，然后，按照上述的方法，根据从用2％乙酸铀酰(Uranyl acetate)水溶液进行负(negative)染色后的TEM图像(倍率：10000倍)来计算出数均纤维直径。

[结晶结构]

使用X射线衍射装置(Rigaku公司制，RINT-Ultima3)，测定纤维素纤维的衍射图谱，将在2θ＝14°至17°附近及2θ＝22°至23°附近这2个位置检测到典型峰的情况下，评价为“有”结晶结构(I型结晶结构)，在没有检测到峰的情况下，评价为“无”。

另外，关于纤维素水分散体B1，针对是否只有纤维素纤维表面上的葡萄糖单元的C6位的羟基被选择性地氧化成羧基等，利用¹³C-NMR图表进行确认，结果是，在氧化前的纤维素的¹³C-NMR图表中能够确认的相当于葡萄糖单元的伯羟基的C6位的62ppm的峰在氧化反应后消失，取而代之的是，在178ppm确认了来自羧基的峰。据此而确认，纤维素水分散体B1中只有葡萄糖单元的C6位羟基被氧化成醛基等。

[实施例1的膨胀剂的制备]

作为上述制造的纤维素水分散体B1，将作为市贩品的商品名RHEOCRYSTA(注册商标，第一工业制药股份有限公司制，纤维素纤维浓度2.0质量％)以使纤维素纤维的浓度成为0.4质量％的方式进行稀释，作为实施例1的膨胀剂使用。

[比较例1的膨胀剂]

使用作为氯化钠的0.9％(g/mL)水溶液的日本药局配方/生理盐水(注射剂)作为比较例1的膨胀剂。

[比较例2的膨胀剂]

使用作为玻尿酸钠的0.4％(g/mL)水溶液的商品名MucoUp(生化学工业股份有限公司制)作为比较例2的膨胀剂。

[评价]

使用实施例1、比较例1及2的各膨胀剂，根据下述方法来测定其黏度，评价注射针的通过性。另外，使用实施例1、比较例1及2的膨胀剂，根据下述方法来评价黏膜隆起性。

[黏度的测定]

使用BM型黏度计，在3rpm、20℃、3分钟的条件下，测定实施例1、比较例1及2的各膨胀剂的黏度。将结果示于表1。

[表1]

[不同的剪切速度区域中的连续性黏度测定]

使用安装有锥板型冶具的流变计(rheometer)，针对高剪切区域(6,000S^-1)中的黏度于20℃测定2分钟，然后，将剪切速度变更为0.01S^-1，针对低剪切区域中的黏度更进一步测定2分钟。将各剪切速度时的黏度示于表2。

[表2]

[注射针的通过性的评价]

使用一端接续有10mL注射筒(TERMO SYRINGE(注册商标)，TERMO股份有限公司制)且另一端具有25G(内径0.25mm)的内视镜用穿刺针(注射针)的局部注射用导管(TOP内视镜用穿刺针SUPER GRIP(注册商标)，TOP股份有限公司制)，在注射筒中填充实施例1、比较例1及2的各膨胀剂10mL，从穿刺针压出，从而评价穿刺针的通过性。在评价时，使用数字评价量表(Numerical Rating Scale，NRS)作为评价标尺，试验者进行膨胀剂的压出时，将可毫无抵抗地压出膨胀剂的状态设为得分“0”，将完全无法压出的状态的设为得分“100”，在0至100中，用数值(NRS)表示相当于哪个得分。作为试验者，随机选择成人男女各5名，合计10名，进行盲测。

然后，在各膨胀剂之间，对基于10名的NRS平均值进行比较。

将结果示于图1。

[黏膜隆起性的评价]

作为进行黏膜内注入的对象，使用切成约3cm×3cm的从猪取出的胃切片。

在装设有23G(内径0.35mm)的注射针(TERMO Cattelan needle(注册商标)，TERMO股份有限公司制)的2.5mL的注射筒(TERMO SYRINGE(注册商标)，TERMO股份有限公司制)中，填充实施例1、比较例1及2的各膨胀剂2.5mL，将注射针从该猪取出胃切片的切断端边缘以水平方式刺入黏膜下层，在中央附近分别各注入2mL。

各膨胀剂注入后，立即将注入后的该猪取出胃切片与数码相机以使拍摄距离及拍摄角度(与载物台平行)成为恒定的方式固定于载物台，在此状态下，每5分钟进行拍摄，从得到的各图像，测定在各时间点的黏膜隆起的高度(黏膜隆起高度)。

黏膜隆起高度是如图2所示，以没有注入各膨胀剂的部位(非给药部位)的黏膜表面作为基准，设为从该表面至隆起顶点(最高点)为止的高度。

将此针对各膨胀剂分别重复6次(n＝6)，将注入刚开始后、5分钟后、10分钟后、20分钟后、30分钟后、60分钟后、90分钟后、120分钟后的时间点的黏膜隆起高度的平均值在各膨胀剂间进行比较。结果示于图3。另外，将各膨胀剂注入后立即拍摄的结果示于图4。

另外，图2中的双箭头表示黏膜隆起高度。另外，在图4中，箭头表示黏膜隆起的立起位置。

如表1所示，实施例1的膨胀剂具有远高于比较例1及2的膨胀剂的黏度。

如表2所示，对于实施例1的膨胀剂，在高剪切区域中显示与比较例2同等程度的黏度，相对于此，在低剪切区域显示相比于比较例2而高出约1000倍的黏度。由此可推测，对于实施例1的膨胀剂，在注入至黏膜下等时的高剪切区域，黏度低，可毫无抵抗地注入，另外，在注入后的静置时等的低剪切区域下则变成非常高黏度，因而具有高膨胀性。

如图2所示，相比于比较例2的膨胀剂，实施例1的膨胀剂尽管在统计学上没有显著差异，但内视镜用穿刺针的通过性稍微优异。

如图3所示，相比于比较例1及2的膨胀剂，实施例1的膨胀剂具有显著大的黏膜隆起高度。另外，该大的黏膜隆起高度的状态能够长时间地维持。

如图4所示，相比于比较例1及2的膨胀剂，实施例1的膨胀剂黏膜隆起的尖锐，且非常陡峭。

此外，足以推测不仅是注入于黏膜下时，在注入于皮下时也可以得到同样的倾向。

由上述结果显示，相比于比较例1及2的膨胀剂，实施例1的膨胀剂不仅具有优异的膨胀性，而且可充分地确保给药性。