阅读说明：本技术 一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法 (Detection method of tumor marker 8-hydroxydeoxyguanosine ) 是由 邱彬 赵华楠 罗子伊 傅志宏 林敏� 于 2020-06-12 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法,包括以下步骤：准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精(β-CD)、五水硫酸铜(CuSO<Sub>4</Sub>·5H<Sub>2</Sub>O)、L(+)-抗环血酸(AA)、尿酸(UA)、羧基化多壁碳纳米管(MWCNTSs)、Nafion?全氟化树脂溶液(Nafion)、8-羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)、氯化钾(KCl)；本发明通过设置准备试剂和设备、CuNCs材料合成、CuNCs-MWCNTSs材料的合成、CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成、电极的修饰、8-OHdG的检测和电化学测试的工艺流程,解决了传统的8-OHdG测定方法预处理步骤复杂,使用的仪器昂贵,操作程序十分繁琐,这些限制了传统的8-OHdG测定方适用性的问题,该肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法,具备预处理步骤十分简单、操作程序比较容易仪器较为普通的优点。(The invention discloses a detection method of tumor marker 8-hydroxydeoxyguanosine, which comprises the following steps of preparing reagents and equipment, wherein the main reagents comprise β -cyclodextrin (β -CD) and copper sulfate pentahydrate (CuSO) 4 ·5H 2 O), L (+) -Ascorbic Acid (AA), Uric Acid (UA), carboxylated multi-walled carbon nanotubes (MWCNTSs), Nafion perfluorinated resin solution (Nafion), 8-hydroxydeoxyguanosine (8-OHdG) and potassium chloride (KCl); the invention solves the problems of complex pretreatment steps, expensive used instruments and complicated operation procedures of the traditional 8-OHdG measuring method by setting the preparation reagent and equipment, the synthesis of CuNCs materials, the synthesis of CuNCs-MWCNTSs materials, the synthesis of CuNCs-MWCNTs-nafion materials, the modification of electrodes, the detection of 8-OHdG and the process flow of electrochemical testsThe method for detecting the tumor marker 8-hydroxydeoxyguanosine has the advantages of very simple pretreatment steps and relatively easy operation procedures and relatively common instruments.)

一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法

技术领域

本发明涉及医疗检测技术领域，具体为一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法。

背景技术

研究表明，8-OHdG是人类DNA分子中鸟嘌呤碱基的第8位C原子在过量的ROS攻击下结合∙OH而生成的一种氧化性加合物。由于8-OHdG的生成及修饰不受饮食等因素的影响，是目前学术界公认的衡量氧化应激及DNA氧化损伤的高效指标。越来越多的研究表明，8-OHdG的含量还与肿瘤的发生，发展密切相关。在肝癌、乳腺癌、胃癌、卵巢癌、肺癌和食道癌等患者体液及癌组织内，8-OHdG水平均有较高表达。因此8-OHdG的测量是评估DNA内源性氧化损伤的程度以及作为癌发生的起始和促进因素的关键标志物。

传统的8-OHdG测定方法：如高效液相色谱电化学检测（HPLC-ECD）、液相色谱-串联质谱（LC-MS/MS）、酶联免疫吸附法（ELISA）、毛细管电泳-电化学检测法（CE-ECD）和32P标记等。但是传统的8-OHdG测定方法预处理步骤复杂，使用的仪器昂贵，操作程序十分繁琐，这些限制了传统的8-OHdG测定方的适用性，为此提出一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法，来解决此问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法，解决了传统的8-OHdG测定方法预处理步骤复杂，使用的仪器昂贵，操作程序十分繁琐，这些限制了传统的8-OHdG测定方适用性的问题。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法，包括以下步骤：

步骤1：准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精（β-CD）、五水硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、L(+)-抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、氯化钾（KCl）、铁***（K₃Fe(CN)₆）、亚铁***（K₄Fe(CN)₆·3H₂O）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、十二水合磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），所用到的主要仪器包括Milli-Q超纯水系统、分析天平、漩涡混匀器、精密移液枪、透射电子显微镜、电化学工作站、数显恒温多头磁力搅拌器、数控超声清洗器、台式酸度计；

步骤2：CuNCs材料合成：首先，称0.011 g β-CD溶于3.0 mL水中；其次，先后加入400.0μL 10.0 mmol/L CuSO₄和100.0μL 1 mol/L AA；在40℃水浴搅拌下反应10h，得到淡黄色CuNCs；

步骤3：CuNCs-MWCNTSs材料的合成：0.65 mg MWCNTSs溶于1400.0 μL水，超声和搅拌各15 min后，快速加入CuNCs，常温下搅拌，得到均匀的CuNCs-MWCNTSs悬浮液；

步骤4：CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成：80.0 μL CuNCs-MWCNTSs中加入20.0 μL0.5% nafion溶液，涡旋混匀以备修饰电极使用；

步骤5：电极的修饰：首先，玻碳电极（GCE）依次用0.3 μm和0.05 μm Al₂O₃粉末抛光至呈镜面，用蒸馏水冲洗干净；其次，无水乙醇和超纯水分别超声3 min；最后，将清洗好的电极氮气吹干备用；取CuNCs- MWCNTSs-nafion分散液滴于干净的玻碳电极表面，自然晾干，得到CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE；同时制备了MWCNTSs-nafion/GCE，CuNCs-nafion/GCE，β-CD-MWCNTSs-nafion/GCE，制备好的电极在使用前于4 ℃储存；

步骤6：8-OHdG的检测：选用三电极工作系统进行测量：CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE为工作电极；Ag/AgCl电极为参比电极；铂丝电极为对电极，在GCE的表面滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion，放入含有不同浓度8-OHdG的PBS中静置9 min，对8-OHdG进行DPV检测；

步骤7：电化学测试：经过修饰的工作电极放入测试池中准备进行电化学测试，选择循环伏安法（CV）、电化学阻抗法（EIS）和差分脉冲伏安法（DPV）作为电化学检测的方法。

优选的，所述在步骤1中，试剂均为分析纯，无需进一步纯化可以直接使用。

优选的，所述在步骤1中，用水均为Millipore Milli-Q系统净化的超纯水（电阻率18.2 MΩ·cm），磷酸盐缓冲溶液（Phosphate buffer solution，PBS）：0.2 mol/LNaH₂PO₄·2H₂O，0.2 mol/L Na₂HPO₄·12H₂O，0.1 mol/L KCl。

优选的，所述在步骤3中，加入的CuNCs量为300.0 μL，并在常温下搅拌6小时。

优选的，所述在步骤5中，随着滴涂体积的增大，8-OHdG氧化峰电流值逐渐增大，当滴涂体积为7.0 μL时，峰电流值不再增大，因此，选择在电极上滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion作为最佳的滴涂体积。

优选的，所述在步骤6中，随着PBS浓度的增大，8-OHdG的氧化峰电流先增大后略微减小，当PBS浓度为0.1 mol/L时，8-OHdG峰电流值最大，因此，选择的是0.1 mol/L PBS作为支持电解质的最佳浓度。

优选的，所述在步骤7中，循环伏安测试在含有1 mmol/L [Fe(CN)₆]^3−/4−和0.1mol/L KCl的溶液中进行，扫描范围为-0.1 V ~ 0.6 V，扫描速率50 mV/s。

优选的，所述在步骤7中，电化学阻抗测试在含有5 mmol/L [Fe(CN)₆]^3−/4−和0.1mol/L KCl的溶液中进行，初始电位：0.243 V，振幅宽度：5.0 mV，频率范围：0.1 Hz ~ 10⁴Hz。

优选的，所述在步骤7中，DPV电位测试在含有不同目标物浓度的0.1 mol/L的PBS（pH = 7.0）中进行，扫描范围0.1 V ~ -0.8 V，振幅宽度：5.0 mV，脉冲宽度50，静止时间为2min。

与现有技术相比，本发明的有益效果是：本发明通过设置准备试剂和设备、CuNCs材料合成、CuNCs-MWCNTSs材料的合成、CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成、电极的修饰、8-OHdG的检测和电化学测试的工艺流程，解决了传统的8-OHdG测定方法预处理步骤复杂，使用的仪器昂贵，操作程序十分繁琐，这些限制了传统的8-OHdG测定方适用性的问题，该肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法，具备预处理步骤十分简单、操作程序比较容易仪器较为普通的优点。

具体实施方式

下面将通过实施例的方式对本发明作更详细的描述，这些实施例仅是举例说明性的而没有任何对本发明范围的限制。

本发明提供一种技术方案：一种肿瘤标志物8-羟基脱氧鸟苷的检测方法，包括以下步骤：

步骤1：准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精（β-CD）、五水硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、L(+)-抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、氯化钾（KCl）、铁***（K₃Fe(CN)₆）、亚铁***（K₄Fe(CN)₆·3H₂O）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、十二水合磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），所用到的主要仪器包括Milli-Q超纯水系统、分析天平、漩涡混匀器、精密移液枪、透射电子显微镜、电化学工作站、数显恒温多头磁力搅拌器、数控超声清洗器、台式酸度计；

步骤2：CuNCs材料合成：首先，称0.011 g β-CD溶于3.0 mL水中；其次，先后加入400.0μL 10.0 mmol/L CuSO₄和100.0μL 1 mol/L AA；在40℃水浴搅拌下反应10h，得到淡黄色CuNCs；

步骤3：CuNCs-MWCNTSs材料的合成：0.65 mg MWCNTSs溶于1400.0 μL水，超声和搅拌各15 min后，快速加入CuNCs，常温下搅拌，得到均匀的CuNCs-MWCNTSs悬浮液；

步骤4：CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成：80.0 μL CuNCs-MWCNTSs中加入20.0 μL0.5% nafion溶液，涡旋混匀以备修饰电极使用；

步骤5：电极的修饰：首先，玻碳电极（GCE）依次用0.3 μm和0.05 μm Al₂O₃粉末抛光至呈镜面，用蒸馏水冲洗干净；其次，无水乙醇和超纯水分别超声3 min；最后，将清洗好的电极氮气吹干备用；取CuNCs- MWCNTSs-nafion分散液滴于干净的玻碳电极表面，自然晾干，得到CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE；同时制备了MWCNTSs-nafion/GCE，CuNCs-nafion/GCE，β-CD-MWCNTSs-nafion/GCE，制备好的电极在使用前于4 ℃储存；

步骤6：8-OHdG的检测：选用三电极工作系统进行测量：CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE为工作电极；Ag/AgCl电极为参比电极；铂丝电极为对电极，在GCE的表面滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion，放入含有不同浓度8-OHdG的PBS中静置9 min，对8-OHdG进行DPV检测；

步骤7：电化学测试：经过修饰的工作电极放入测试池中准备进行电化学测试，选择循环伏安法（CV）、电化学阻抗法（EIS）和差分脉冲伏安法（DPV）作为电化学检测的方法。

实施例一：

准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精（β-CD）、五水硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、L(+)-抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、氯化钾（KCl）、铁***（K₃Fe(CN)₆）、亚铁***（K₄Fe(CN)₆·3H₂O）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、十二水合磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），所用到的主要仪器包括Milli-Q超纯水系统、分析天平、漩涡混匀器、精密移液枪、透射电子显微镜、电化学工作站、数显恒温多头磁力搅拌器、数控超声清洗器、台式酸度计；CuNCs材料合成：首先，称0.011 g β-CD溶于3.0 mL水中；其次，先后加入400.0 μL 10.0 mmol/LCuSO₄和100.0μL 1 mol/L AA；在40℃水浴搅拌下反应10h，得到淡黄色CuNCs；CuNCs-MWCNTSs材料的合成：0.65 mg MWCNTSs溶于1400.0 μL水，超声和搅拌各15 min后，快速加入CuNCs，常温下搅拌，得到均匀的CuNCs-MWCNTSs悬浮液；CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成：80.0 μL CuNCs-MWCNTSs中加入20.0 μL 0.5% nafion溶液，涡旋混匀以备修饰电极使用；电极的修饰：首先，玻碳电极（GCE）依次用0.3 μm和0.05 μm Al₂O₃粉末抛光至呈镜面，用蒸馏水冲洗干净；其次，无水乙醇和超纯水分别超声3 min；最后，将清洗好的电极氮气吹干备用；取CuNCs- MWCNTSs-nafion分散液滴于干净的玻碳电极表面，自然晾干，得到CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE；同时制备了MWCNTSs-nafion/GCE，CuNCs-nafion/GCE，β-CD-MWCNTSs-nafion/GCE，制备好的电极在使用前于4 ℃储存；8-OHdG的检测：选用三电极工作系统进行测量：CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE为工作电极；Ag/AgCl电极为参比电极；铂丝电极为对电极，在GCE的表面滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion，放入含有不同浓度8-OHdG的PBS中静置9 min，对8-OHdG进行DPV检测；电化学测试：经过修饰的工作电极放入测试池中准备进行电化学测试，选择循环伏安法（CV）、电化学阻抗法（EIS）和差分脉冲伏安法（DPV）作为电化学检测的方法。

实施例二：

在实施例一中，再加上下述工序：

在步骤1中，试剂均为分析纯，无需进一步纯化可以直接使用，用水均为MilliporeMilli-Q系统净化的超纯水（电阻率18.2 MΩ·cm），磷酸盐缓冲溶液（Phosphate buffersolution，PBS）：0.2 mol/L NaH₂PO₄·2H₂O，0.2 mol/L Na₂HPO₄·12H₂O，0.1 mol/L KCl，仪器的型号及生产厂家为：Milli-Q超纯水系统为密理博中国有限公司生产，型号为Academic、分析天平为德国赛多利斯科学仪器有限公司生产，型号为BS124S、漩涡混匀器为艾卡广州仪器设备有限公司生产，型号为MS-3、精密移液枪为艾本德中国有限公司生产，型号为Eppendorf、透射电子显微镜为TEM，HITACHI，Japan生产，型号为HT7700、电化学工作站为上海辰华仪器公司生产，型号为CHI-660A 、数显恒温多头磁力搅拌器为金坛市梅香仪器有限公司生产，型号为HJ-6B、数控超声清洗器为昆山市超声仪器有限公司生产，型号为KQ5200DE、台式酸度计为德国赛多利斯仪器有限公司生产，型号为PB-10，方便使用者使用，减少需要预先处理的步骤，而且相关仪器相对容易采购，价格较低。

准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精（β-CD）、五水硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、L(+)-抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、氯化钾（KCl）、铁***（K₃Fe(CN)₆）、亚铁***（K₄Fe(CN)₆·3H₂O）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、十二水合磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），所用到的主要仪器包括Milli-Q超纯水系统、分析天平、漩涡混匀器、精密移液枪、透射电子显微镜、电化学工作站、数显恒温多头磁力搅拌器、数控超声清洗器、台式酸度计；CuNCs材料合成：首先，称0.011 g β-CD溶于3.0 mL水中；其次，先后加入400.0 μL 10.0mmol/L CuSO₄和100.0μL 1 mol/L AA；在40℃水浴搅拌下反应10h，得到淡黄色CuNCs；CuNCs-MWCNTSs材料的合成：0.65 mg MWCNTSs溶于1400.0 μL水，超声和搅拌各15 min后，快速加入CuNCs，常温下搅拌，得到均匀的CuNCs-MWCNTSs悬浮液；CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成：80.0 μL CuNCs-MWCNTSs中加入20.0 μL 0.5% nafion溶液，涡旋混匀以备修饰电极使用；电极的修饰：首先，玻碳电极（GCE）依次用0.3 μm和0.05 μm Al₂O₃粉末抛光至呈镜面，用蒸馏水冲洗干净；其次，无水乙醇和超纯水分别超声3 min；最后，将清洗好的电极氮气吹干备用；取CuNCs- MWCNTSs-nafion分散液滴于干净的玻碳电极表面，自然晾干，得到CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE；同时制备了MWCNTSs-nafion/GCE，CuNCs-nafion/GCE，β-CD-MWCNTSs-nafion/GCE，制备好的电极在使用前于4 ℃储存；8-OHdG的检测：选用三电极工作系统进行测量：CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE为工作电极；Ag/AgCl电极为参比电极；铂丝电极为对电极，在GCE的表面滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion，放入含有不同浓度8-OHdG的PBS中静置9 min，对8-OHdG进行DPV检测；电化学测试：经过修饰的工作电极放入测试池中准备进行电化学测试，选择循环伏安法（CV）、电化学阻抗法（EIS）和差分脉冲伏安法（DPV）作为电化学检测的方法。

实施例三：

在实施例二中，再加上下述工序：

在步骤3中，加入的CuNCs量为300.0 μL，并在常温下搅拌6小时，选择在CuNCs-MWCNTSs复合材料中加入300.0 μL CuNCs合成的CuNCs-MWCNTSs复合材料为最佳的电极修饰材料。

准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精（β-CD）、五水硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、L(+)-抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、氯化钾（KCl）、铁***（K₃Fe(CN)₆）、亚铁***（K₄Fe(CN)₆·3H₂O）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、十二水合磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），所用到的主要仪器包括Milli-Q超纯水系统、分析天平、漩涡混匀器、精密移液枪、透射电子显微镜、电化学工作站、数显恒温多头磁力搅拌器、数控超声清洗器、台式酸度计；CuNCs材料合成：首先，称0.011 g β-CD溶于3.0 mL水中；其次，先后加入400.0 μL 10.0mmol/L CuSO₄和100.0μL 1 mol/L AA；在40℃水浴搅拌下反应10h，得到淡黄色CuNCs；CuNCs-MWCNTSs材料的合成：0.65 mg MWCNTSs溶于1400.0 μL水，超声和搅拌各15 min后，快速加入CuNCs，常温下搅拌，得到均匀的CuNCs-MWCNTSs悬浮液；CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成：80.0 μL CuNCs-MWCNTSs中加入20.0 μL 0.5% nafion溶液，涡旋混匀以备修饰电极使用；电极的修饰：首先，玻碳电极（GCE）依次用0.3 μm和0.05 μm Al₂O₃粉末抛光至呈镜面，用蒸馏水冲洗干净；其次，无水乙醇和超纯水分别超声3 min；最后，将清洗好的电极氮气吹干备用；取CuNCs- MWCNTSs-nafion分散液滴于干净的玻碳电极表面，自然晾干，得到CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE；同时制备了MWCNTSs-nafion/GCE，CuNCs-nafion/GCE，β-CD-MWCNTSs-nafion/GCE，制备好的电极在使用前于4 ℃储存；8-OHdG的检测：选用三电极工作系统进行测量：CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE为工作电极；Ag/AgCl电极为参比电极；铂丝电极为对电极，在GCE的表面滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion，放入含有不同浓度8-OHdG的PBS中静置9 min，对8-OHdG进行DPV检测；电化学测试：经过修饰的工作电极放入测试池中准备进行电化学测试，选择循环伏安法（CV）、电化学阻抗法（EIS）和差分脉冲伏安法（DPV）作为电化学检测的方法。

实施例四：

在实施例三中，再加上下述工序：

在步骤5中，随着滴涂体积的增大，8-OHdG氧化峰电流值逐渐增大，当滴涂体积为7.0 μL时，峰电流值不再增大，因此，选择在电极上滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion作为最佳的滴涂体积，从而保障最佳效果。

准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精（β-CD）、五水硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、L(+)-抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、氯化钾（KCl）、铁***（K₃Fe(CN)₆）、亚铁***（K₄Fe(CN)₆·3H₂O）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、十二水合磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），所用到的主要仪器包括Milli-Q超纯水系统、分析天平、漩涡混匀器、精密移液枪、透射电子显微镜、电化学工作站、数显恒温多头磁力搅拌器、数控超声清洗器、台式酸度计；CuNCs材料合成：首先，称0.011 g β-CD溶于3.0 mL水中；其次，先后加入400.0 μL 10.0mmol/L CuSO₄和100.0μL 1 mol/L AA；在40℃水浴搅拌下反应10h，得到淡黄色CuNCs；CuNCs-MWCNTSs材料的合成：0.65 mg MWCNTSs溶于1400.0 μL水，超声和搅拌各15 min后，快速加入CuNCs，常温下搅拌，得到均匀的CuNCs-MWCNTSs悬浮液；CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成：80.0 μL CuNCs-MWCNTSs中加入20.0 μL 0.5% nafion溶液，涡旋混匀以备修饰电极使用；电极的修饰：首先，玻碳电极（GCE）依次用0.3 μm和0.05 μm Al₂O₃粉末抛光至呈镜面，用蒸馏水冲洗干净；其次，无水乙醇和超纯水分别超声3 min；最后，将清洗好的电极氮气吹干备用；取CuNCs- MWCNTSs-nafion分散液滴于干净的玻碳电极表面，自然晾干，得到CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE；同时制备了MWCNTSs-nafion/GCE，CuNCs-nafion/GCE，β-CD-MWCNTSs-nafion/GCE，制备好的电极在使用前于4 ℃储存；8-OHdG的检测：选用三电极工作系统进行测量：CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE为工作电极；Ag/AgCl电极为参比电极；铂丝电极为对电极，在GCE的表面滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion，放入含有不同浓度8-OHdG的PBS中静置9 min，对8-OHdG进行DPV检测；电化学测试：经过修饰的工作电极放入测试池中准备进行电化学测试，选择循环伏安法（CV）、电化学阻抗法（EIS）和差分脉冲伏安法（DPV）作为电化学检测的方法。

实施例五：

在实施例四中，再加上下述工序：

在步骤6中，随着PBS浓度的增大，8-OHdG的氧化峰电流先增大后略微减小，当PBS浓度为0.1 mol/L时，8-OHdG峰电流值最大，因此，选择的是0.1 mol/L PBS作为支持电解质的最佳浓度。

准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精（β-CD）、五水硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、L(+)-抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、氯化钾（KCl）、铁***（K₃Fe(CN)₆）、亚铁***（K₄Fe(CN)₆·3H₂O）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、十二水合磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），所用到的主要仪器包括Milli-Q超纯水系统、分析天平、漩涡混匀器、精密移液枪、透射电子显微镜、电化学工作站、数显恒温多头磁力搅拌器、数控超声清洗器、台式酸度计；CuNCs材料合成：首先，称0.011 g β-CD溶于3.0 mL水中；其次，先后加入400.0 μL 10.0mmol/L CuSO₄和100.0μL 1 mol/L AA；在40℃水浴搅拌下反应10h，得到淡黄色CuNCs；CuNCs-MWCNTSs材料的合成：0.65 mg MWCNTSs溶于1400.0 μL水，超声和搅拌各15 min后，快速加入CuNCs，常温下搅拌，得到均匀的CuNCs-MWCNTSs悬浮液；CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成：80.0 μL CuNCs-MWCNTSs中加入20.0 μL 0.5% nafion溶液，涡旋混匀以备修饰电极使用；电极的修饰：首先，玻碳电极（GCE）依次用0.3 μm和0.05 μm Al₂O₃粉末抛光至呈镜面，用蒸馏水冲洗干净；其次，无水乙醇和超纯水分别超声3 min；最后，将清洗好的电极氮气吹干备用；取CuNCs- MWCNTSs-nafion分散液滴于干净的玻碳电极表面，自然晾干，得到CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE；同时制备了MWCNTSs-nafion/GCE，CuNCs-nafion/GCE，β-CD-MWCNTSs-nafion/GCE，制备好的电极在使用前于4 ℃储存；8-OHdG的检测：选用三电极工作系统进行测量：CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE为工作电极；Ag/AgCl电极为参比电极；铂丝电极为对电极，在GCE的表面滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion，放入含有不同浓度8-OHdG的PBS中静置9 min，对8-OHdG进行DPV检测；电化学测试：经过修饰的工作电极放入测试池中准备进行电化学测试，选择循环伏安法（CV）、电化学阻抗法（EIS）和差分脉冲伏安法（DPV）作为电化学检测的方法。

实施例六：

在实施例五中，再加上下述工序：

在步骤7中，循环伏安测试在含有1 mmol/L [Fe(CN)₆]^3−/4−和0.1 mol/L KCl的溶液中进行，扫描范围为-0.1 V ~ 0.6 V，扫描速率50 mV/s，电化学阻抗测试在含有5 mmol/L[Fe(CN)₆]^3−/4−和0.1 mol/L KCl的溶液中进行，初始电位：0.243 V，振幅宽度：5.0 mV，频率范围：0.1 Hz ~ 10⁴ Hz，DPV电位测试在含有不同目标物浓度的0.1 mol/L的PBS（pH =7.0）中进行，扫描范围0.1 V ~ -0.8 V，振幅宽度：5.0 mV，脉冲宽度50，静止时间为2min，从而获得良好的效果。

准备试剂和设备：所用的主要试剂包括β-环糊精（β-CD）、五水硫酸铜（CuSO₄·5H₂O）、L(+)-抗环血酸（AA）、尿酸（UA）、羧基化多壁碳纳米管（MWCNTSs）、Nafion®全氟化树脂溶液（Nafion）、8-羟基脱氧鸟苷（8-OHdG）、氯化钾（KCl）、铁***（K₃Fe(CN)₆）、亚铁***（K₄Fe(CN)₆·3H₂O）、磷酸二氢钠（NaH₂PO₄·2H₂O）、十二水合磷酸氢二钠（Na₂HPO₄·12H₂O），所用到的主要仪器包括Milli-Q超纯水系统、分析天平、漩涡混匀器、精密移液枪、透射电子显微镜、电化学工作站、数显恒温多头磁力搅拌器、数控超声清洗器、台式酸度计；CuNCs材料合成：首先，称0.011 g β-CD溶于3.0 mL水中；其次，先后加入400.0 μL 10.0mmol/L CuSO₄和100.0μL 1 mol/L AA；在40℃水浴搅拌下反应10h，得到淡黄色CuNCs；CuNCs-MWCNTSs材料的合成：0.65 mg MWCNTSs溶于1400.0 μL水，超声和搅拌各15 min后，快速加入CuNCs，常温下搅拌，得到均匀的CuNCs-MWCNTSs悬浮液；CuNCs-MWCNTSs-nafion材料的合成：80.0 μL CuNCs-MWCNTSs中加入20.0 μL 0.5% nafion溶液，涡旋混匀以备修饰电极使用；电极的修饰：首先，玻碳电极（GCE）依次用0.3 μm和0.05 μm Al₂O₃粉末抛光至呈镜面，用蒸馏水冲洗干净；其次，无水乙醇和超纯水分别超声3 min；最后，将清洗好的电极氮气吹干备用；取CuNCs- MWCNTSs-nafion分散液滴于干净的玻碳电极表面，自然晾干，得到CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE；同时制备了MWCNTSs-nafion/GCE，CuNCs-nafion/GCE，β-CD-MWCNTSs-nafion/GCE，制备好的电极在使用前于4 ℃储存；8-OHdG的检测：选用三电极工作系统进行测量：CuNCs-MWCNTSs-nafion/GCE为工作电极；Ag/AgCl电极为参比电极；铂丝电极为对电极，在GCE的表面滴涂7.0 μL CuNCs-MWCNTSs-nafion，放入含有不同浓度8-OHdG的PBS中静置9 min，对8-OHdG进行DPV检测；电化学测试：经过修饰的工作电极放入测试池中准备进行电化学测试，选择循环伏安法（CV）、电化学阻抗法（EIS）和差分脉冲伏安法（DPV）作为电化学检测的方法。

尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。