阅读说明：本技术 一种多项目炎症标志物质控品及其制备方法 (Multi-item inflammation marker quality control product and preparation method thereof ) 是由 张军 李海燕 宁妍 于 2020-05-25 设计创作，主要内容包括：本发明是关于一种多项目炎症标志物质控品及其制备方法,该方法包括以下步骤：采用血清或血浆作为基质液,将其恢复至室温；将得到的血清或血浆用孔径0.22μm-0.65μm的滤膜过滤,去除杂质得到质控品基质液；在得到的基质液中加入以下炎症标志物抗原：降钙素原、C反应蛋白、血清淀粉样蛋白A、白细胞介素-6、肝素结合蛋白,制成高、中、低三个浓度水平的质控品溶液；将制成的三水平质控溶液中加入防腐剂、稳定剂和保护剂,混合均匀；对获得的三水平质控品进行测试,待浓度达到要求时,真空冷冻干燥、密封,2-8℃保存。本发明只需要进行一次质控操作,即可对所需的多个项目进行同步地质量控制,大大简化了操作流程,具有生产成本低、准确度高、操作简单的优点。(The invention relates to a quality control product of a multinomial inflammation marker and a preparation method thereof, wherein the method comprises the following steps: adopting serum or plasma as matrix liquid, and returning to room temperature; filtering the obtained serum or plasma with a filter membrane with pore size of 0.22-0.65 μm, and removing impurities to obtain quality control substance matrix solution; the following inflammation marker antigens were added to the obtained matrix fluid: procalcitonin, C-reactive protein, serum amyloid A, interleukin-6 and heparin binding protein are prepared into quality control solution with high, medium and low concentration levels; adding a preservative, a stabilizer and a protective agent into the prepared three-level quality control solution, and uniformly mixing; testing the obtained three-level quality control product, and freeze-drying under vacuum when the concentration meets the requirement, sealing, and storing at 2-8 deg.C. The invention can synchronously control the quality of a plurality of required projects by only one-time quality control operation, greatly simplifies the operation flow and has the advantages of low production cost, high accuracy and simple operation.)

一种多项目炎症标志物质控品及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种炎症标志物质控品的制备方法，特别涉及一种多项目炎症标志物质控品及其制备方法。

背景技术

炎症是机体对外界刺激的一种防御性反应，可将其分为由细菌或病毒等感染引起的感染性炎症，以及由自身免疫系统缺陷等非感染性因素所引起的非感染性炎症。当前，在对感染性病症进行诊断治疗的过程中，大多仍依赖传统的方法，如白细胞计数、分类、血沉、酶活性等。但这些指标都有其局限性，如妊娠、激烈运动、中毒和急性出血等非感染状态下也可引起白细胞数增高。

炎症标志物是指当机体在感染、创伤或其他病症影响下产生应激反应时，血液中一系列受感染性炎症影响而升高的敏感物质，如降钙素原(Procalcitonin，PCT)、C反应蛋白(C-reactive protein，CRP)、血清淀粉样蛋白A(Serum amyloid A protein，SAA)、白细胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)、肝素结合蛋白(Heparin-binding protein，HBP)等，其检测不受抗菌药物、免疫抑制剂和激素影响，因此可作为炎症检测的可靠指标而收到广泛关注。

当前市面上各生产厂家对炎症标志物检测的方法学与生产工艺各不相同，导致可能出现使用不同厂家的产品检测所得的检测结果不一致的不良后果；目前多数厂家生产的检测试剂盒中不包含质控品，而临床实验室配制质控品具有一定的局限性；感染发生后，各炎症标志物含量升高的时间不同，各项目检测意义与临床应用有所差异，在临床检测中仅以单一标志物含量判断感染程度存在漏诊、误诊的可能性，因此临床检测常以多种标志物联合检测作为诊断依据，而市面上现有质控品大多是单一标志物质控，且种类较少。这就意味着实验室进行质量控制时需要重复多次单一标志物质控检测，操作较为复杂繁琐，且生产多个单项目需要逐一项目进行冷冻干燥，工作量大，成本较高。因此，临床上急需一种商品化稳定性好的多项炎症标志物的复合质控品，用于实验室的室内质量控制和室间质量评价。

发明内容

有鉴于此，本发明的主要目的在于提供一种性能稳定的多项目炎症标志物质控品及其制备方法，将多个炎症标志物复配成一种质控品，后续检测简便，准确度高，而且可降低成本，以满足临床的使用。

本发明的目的及解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。

依据本发明提出的一种多项目炎症标志物质控品的制备方法，包括以下步骤：

第一步，采用血清或血浆作为基质液，将其恢复至室温；

第二步，将第一步得到的血清或血浆用孔径0.22μm-0.65μm的滤膜过滤，去除杂质得到质控品基质液；

第三步，将第二步得到的质控品基质液中加入以下浓度的炎症标志物抗原：降钙素原(PCT)：(0～100)ng/mL、C反应蛋白(CRP)：(0～200)mg/L、血清淀粉样蛋白A(SAA)：(0～200)mg/L、白细胞介素-6(IL-6)：(0～4000)pg/mL、肝素结合蛋白(HBP)：(0～1000)ng/mL，分别制成高、中、低三个浓度水平的质控品溶液；

第四步，将第三步制成的三个浓度水平的质控溶液中分别加入0.005-0.1wt％的防腐剂、0.5-5wt％的稳定剂和0.5-5wt％的保护剂，混合均匀；

第五步，将第四步中获得的三水平质控品分别进行检测，待浓度达到要求时，真空冷冻干燥、密封，2-8℃保存。

本发明的目的及解决其技术问题进一步是采用以下技术方案来实现的。

优选地，前述的多项目炎症标志物质控品的制备方法中，其中第一步中，所述血清选自人血清、新生牛血清、小牛血清和兔血清中的一种；所述血浆选自人血浆；所述血清或血浆中乙型肝炎、丙型肝炎、艾滋病和梅毒标志物抗体的检测结果均为阴性。

优选地，前述的多项目炎症标志物质控品的制备方法中，其中第三步中，低浓度水平的所述质控品溶液中含有如下炎症标志物抗原：降钙素原(PCT)：(0.1～0.5)ng/mL；C反应蛋白(CRP)：(1～5)mg/L；血清淀粉样蛋白A(SAA)：(1～10)mg/L；白细胞介素-6(IL-6)：(4～10)pg/mL；肝素结合蛋白(HBP)：(1～5)ng/mL。

优选地，前述的多项目炎症标志物质控品的制备方法中，其中第三步中，中浓度水平的所述质控品溶液中含有如下炎症标志物抗原：降钙素原(PCT)：(0.5～2)ng/mL；C反应蛋白(CRP)：(10～50)mg/L；血清淀粉样蛋白A(SAA)：(10～50)mg/L；白细胞介素-6(IL-6)：(50～200)pg/mL；肝素结合蛋白(HBP)：(10～30)ng/mL。

优选地，前述的多项目炎症标志物质控品的制备方法中，其中第三步中，高浓度水平的所述质控品溶液中含有如下炎症标志物抗原：降钙素原(PCT)：(5～20)ng/mL；C反应蛋白(CRP)：(50～200)mg/L；血清淀粉样蛋白A(SAA)：(100～300)mg/L；白细胞介素-6(IL-6)：(500～2000)pg/mL；肝素结合蛋白(HBP)：(30～100)ng/mL。

优选地，前述的多项目炎症标志物质控品的制备方法中，其中第四步中所述防腐剂选自proclin-300、KroVin300、叠氮钠、硫柳汞和庆大霉素中的至少一种。

优选地，前述的多项目炎症标志物质控品的制备方法中，其中第四步中所述稳定剂选自海藻糖、蔗糖、乳糖、壳聚糖和葡聚糖中的至少一种。

优选地，前述的多项目炎症标志物质控品的制备方法中，其中第四步中所述保护剂选自聚乙二醇、黄原胶、明胶、甘露醇、甘油和牛血清白蛋白中的至少一种。

优选地，前述的多项目炎症标志物质控品的制备方法中，其中第五步具体包括：将第四步中获得的三水平质控品使用荧光免疫分析仪进行检测，待其浓度满足定值质控检测值偏差不超过标示值的10％，真空冷冻干燥后密封，2-8℃保存。

本发明的目的及解决其技术问题进一步是采用以下技术方案来实现的。

依据本发明提出的一种多项目炎症标志物质控品，所述多项目炎症标志物质控品是通过上述的方法制备的。

相比于现有技术，本发明具有以下有益效果：

1.本发明所述的多项目炎症标志物质控品的制备方法，其只需要进行一次质控操作，即可对所需的多种项目进行同步地质量控制，大大简化了操作流程，具有生产成本低、准确度高、操作简单的优点。

2.本发明所述的多项目炎症标志物质控品的制备方法，其通过将多种炎症标志物复配之后同时进行检测，减少干扰，同时简化了质控操作。

3.本发明所述的多项目炎症标志物质控品的制备方法，其减少了生产过程中冷冻干燥的次数，降低了成本。

4.本发明所述的多项目炎症标志物质控品，其使用血清或血浆作为基质液，临床一致性好，增加了检测的准确度。

上述说明仅是本发明技术方案的概述，为了能够更清楚了解本发明的技术手段，并可依照说明书的内容予以实施，以下以本发明的较佳实施例详细说明如后。

具体实施方式

为了进一步理解本发明，下面结合实施例对本发明优选实施方案进行描述，但是应当理解，这些描述只是为进一步说明本发明的特征和优点，而不是对本发明权利要求的限制。

以下材料或试剂，除非特别说明，均为市售。

实施例1.制备高、中、低三个水平的炎症标志物质控品

第一步，取血清原料1000ml，该血清原料来自HyTest的正常人血清，并且经检测，以下指标呈阴性：HBsAg、HCV-Ab、HIV-Ab、TP；将血清室温放置30min恢复至室温；

第二步，将第一步血清用孔径0.22μm的滤膜除去杂质，得到质控品基质液；

第三步，将上述质控品基质液中加入以下炎症标志物抗原：降钙素原(PCT)：0.2ng/mL、1ng/mL、10ng/mL；C反应蛋白(CRP)：3mg/L、25mg/L、150mg/L；血清淀粉样蛋白A(SAA)：5mg/L、25mg/L、200mg/L；白介素6(IL-6)：7pg/mL、100pg/mL、1000pg/mL；肝素结合蛋白(HBP)：3ng/mL、20ng/mL、70ng/mL，分别配制成高、中、低三个浓度水平的质控品溶液；三个浓度水平的质控品溶液中所含的炎症标志物抗原的最终含量分别为：

高浓度水平的质控品溶液含有：10ng/mL降钙素原、100mg/mL C反应蛋白、150mg/L血清淀粉样蛋白A、1000pg/mL白介素6、100ng/mL肝素结合蛋白；

中浓度水平的质控品溶液含有：2ng/mL降钙素原、10mg/mL C反应蛋白、20mg/L血清淀粉样蛋白A、50pg/mL白介素6、15ng/mL肝素结合蛋白；

低浓度水平的质控品溶液含有：0.25ng/mL降钙素原、2.5mg/mL C反应蛋白、5mg/L血清淀粉样蛋白A、5pg/mL白介素6、4ng/mL肝素结合蛋白；

第四步，将第三步制成的三水平质控溶液中分别加入0.05wt％的Proclin-300、1.0wt％的海藻糖及1.0wt％的聚乙二醇，混合均匀；

第五步，将第四步的高、中、低质控品分别进行检测，若检测结果符合如下质量标准就进行下一步的分装和冻干；若检测结果不符合如下标准，可以通过添加血清血浆稀释或继续添加炎症标志物抗原进行浓度调整，直至符合如下质量标准；

质量标准：低浓度水平的所述质控品溶液中含有如下炎症标志物抗原：降钙素原：(0.1～0.5)ng/mL；C反应蛋白：(1～5)mg/L；血清淀粉样蛋白A：(1～10)mg/L；白细胞介素-6：(4～10)pg/mL；肝素结合蛋白：(1～5)ng/mL；

中浓度水平的所述质控品溶液中含有如下炎症标志物抗原：降钙素原：(0.5～2)ng/mL；C反应蛋白：(10～50)mg/L；血清淀粉样蛋白A：(10～50)mg/L；白细胞介素-6：(50～200)pg/mL；肝素结合蛋白：(10～30)ng/mL。

高浓度水平的所述质控品溶液中含有如下炎症标志物抗原：降钙素原：(5～20)ng/mL；C反应蛋白：(50～200)mg/L；血清淀粉样蛋白A：(100～300)mg/L；白细胞介素6：(500～2000)pg/mL；肝素结合蛋白：(30～100)ng/mL。

第六步，将第五步符合标准的高、中、低三种浓度水平的炎症标志物质控品溶液分装于玻璃瓶中，每瓶分装量为1ml，然后敞口经真空冷冻干燥机(-30℃，10Pa，24h)冻干后密封，得到三种浓度水平的质控品(分别为低值质控品、中值质控品及高值质控品)，并分别将其在荧光免疫分析仪上重复检测20次，均值作为靶值，均值+3倍偏差作为范围上限，均值-3倍偏差作为范围下限，2～8℃条件下保存。

实施例2.质控品的准确度测定

取实施例1中的高、中、低三种浓度水平的质控品(低值质控品、中值质控品及高值质控品)，室温放置30min，准确量取1mL纯化水分别加入到三种水平的质控品中，混合均匀，使用荧光分析仪对各炎症标志物抗原的浓度进行检测，重复3次，计算平均值以及平均值与靶值的偏差，对质控品的准确度进行了评价，检测结果如表1所示。

表1

从表1的数据可以看出，低、中、高三组质控品的偏差最高依次为3.03％、5.50％和4.30％，这表明质控品的检测值与标定靶值的偏差不超过10％，该三组质控品的准确度符合标准。

实施例3.质控品的稳定性测定

将实施例1中的中值质控品分别于4℃下保存15天、30天，于37℃下保存15天、30天，然后通过荧光免疫分析仪进行检测，得到检测值，将该些检测值与靶值相比计算偏差，以验证该中值质控品的稳定性，检测结果如表2所示。

表2

项目	PCT(ng/mL)	CRP(mg/L)	SAA(mg/L)	IL-6(pg/mL)	HBP(ng/mL)
						靶值	1.01	23.02	24.4	95.05	21.3
4℃，15天	1.02	221	24.25	96.76	21.85
						偏差	0.99％	860.03％	-0.61％	1.80％	2.58％
4℃，30天	1	23.95	24.67	91.41	21.48
						偏差	-0.99％	4.04％	1.11％	-3.83％	0.85％
37℃，15天	0.98	22.99	25.19	89.46	20.45
						偏差	-2.97％	-0.13％	3.24％	-5.88％	-3.99％
37℃，30天	0.92	22.87	23.31	88.85	19.58
						偏差	-8.91％	-0.65％	-4.47％	-6.52％	-8.08％

从表2的检测结果可以看出，本发明实施例1的中值质控品在4℃和37℃热加速条件下保存15天、30天的检测值与靶值偏差不超过10％，说明该中值质控品的稳定性良好。

本发明以血清或血浆作为质控品的基质液，同时添加不同浓度水平的降钙素原，血清淀粉样蛋白A，C反应蛋白，白细胞介素6，肝素结合蛋白标准物质，得到不同水平的多项炎症标志物联合质控品，加入防腐剂、保护剂、稳定剂后冷冻干燥，密封保存。

使用多项炎症标志物联合质控品相比使用各自单项目质控品进行多次质量控制，只需一次检测即可对多个指标进行质量控制，具有准确度高，操作简便，成本低廉的优点。

本发明的说明书中，说明了大量具体细节。然而，能够理解，本发明的实施例可以在没有这些具体细节的情况下实践。在一些实施例中，并未详细示出公知的方法、结构和技术，以便不模糊对本说明书的理解。

另外需要说明的是，在上述具体实施方式中所描述的各个具体技术特征，在不矛盾的情况下，可以通过任何合适的方式进行组合，为了避免不必要的重复，本发明对各种可能的组合方式不再另行说明。

此外，本发明的各种不同的实施方式之间也可以进行任意组合，只要其不违背本发明的思想，其同样应当视为本发明所公开的内容。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰，均仍属于本发明技术方案的范围内。