一种制备艾贝司他的方法、中间体及中间体的制备方法
阅读说明：本技术 一种制备艾贝司他的方法、中间体及中间体的制备方法 (Method for preparing abemostat, intermediate and preparation method of intermediate ) 是由 陆晟 王晗 朱晓磊 李波 许志勇 蒋顺 康琳琳 茆勇军 于 2021-06-21 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种艾贝司他的制备方法,包括如下步骤：(1)将第一中间体3-((二甲氨基)甲基)苯并呋喃-2-羧酸和第二中间体4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸甲酯经酰胺缩合后制得第三中间体4-[2-(3-二甲基氨基苯并呋喃-2-基-羰基氨基)乙氧基]苯甲酸甲酯；(2)将第三中间体脱酯后再经酸调制备得到艾贝司他。该方法原料易得,工艺简洁,反应条件温和,操作方便,收率高,成本低,易于工业化生产。本发明还提供制备艾贝司他的第一中间体和第二中间体及其制备方法。(The invention provides a preparation method of abersat, which comprises the following steps: (1) performing amide condensation on a first intermediate 3- ((dimethylamino) methyl) benzofuran-2-carboxylic acid and a second intermediate 4- (2-aminoethoxy) methyl benzoate to obtain a third intermediate 4- [2- (3-dimethylamino benzofuran-2-yl-carbonylamino) ethoxy ] methyl benzoate; (2) and (4) carrying out deesterification on the third intermediate, and then carrying out acid modulation to obtain the abeditat. The method has the advantages of easily available raw materials, simple process, mild reaction conditions, convenient operation, high yield, low cost and easy industrial production. The invention also provides a first intermediate and a second intermediate for preparing the abedit and a preparation method thereof.)
技术领域
本发明涉及有机合成和原料药及中间体的制备技术领域，具体涉及一种制备艾贝司他的方法、中间体及中间体的制备方法。
背景技术
艾贝司他是由徐诺药业研发的选择性HDAC(histone deacetylase，组蛋白去乙酰化酶)抑制剂。目前，在中国开展的艾贝司他关于非霍奇金淋巴瘤的临床试验已进入Ⅱ期，在全球进行的肾细胞癌的临床试验也已进入Ⅲ期。
艾贝司他的化学结构如式I所示：
目前艾贝司他的制备主要包括以下几种方法：
WO 2004092115 A2(2004.10.28)公开的合成路线如式II所示。
该路线以四氢呋喃(THF)为溶剂，于3-甲基-苯丙呋喃-2-羧酸(化合物6)中滴加草酰氯、甲醇-三乙胺及催化量的DMF，在室温条件下反应，得到3-甲基苯并呋喃-2-羧酸甲酯(3)；将化合物3溶于CCl4，进一步通过AIBN及NBS的作用，经加热回流3h后得到3-溴甲基苯并呋喃-2-羧酸甲酯(4)；将化合物4溶于无水DMF中，在室温下加入二甲胺的四氢呋喃溶液，反应后粗品经硅胶柱纯化得到3-二甲基氨基甲基苯并呋喃-2-羧酸甲酯(5)；将化合物5溶于甲醇后，加入NaOH水溶液调节pH至13，并在此碱性条件下反应60-90min后再以HCl水溶液酸调pH至3，得到苯并呋喃羧酸盐(16)；将化合物16溶于无水DMF中，依次加入EDCI、HOBt，室温反应30～60min后分别加入(4-(2-乙氧基胺))苯甲酸甲酯盐酸盐(7)、TEA，于室温下搅拌过夜后得到4-[2-(3-二甲基氨基苯并呋喃-2-基-羰基氨基)乙氧基]苯甲酸甲酯(8)；在化合物8的THF溶液中加入过量羟胺水溶液、NaOH水溶液，至pH为10～11，将混合物于室温下搅拌反应过夜，加入HCl调节pH至7～8，浓缩，粗品经制备型HPLC纯化，最终得到目标产物艾贝司他。
原研药的合成路线直接以化合物6为原料，该物质在化工七日讯等专业网站无厂家提供，不易购得，需定制开发，价格昂贵；路线中多次涉及酸调、碱调等后处理，产生的废水对环境造成较大负担；关于化合物7的合成方法原研路线中未报道；对接后的化合物8需通过柱层析纯化，且最终艾贝司他采用HPLC微量制备，无法批量生产。
另有以下方法：CN 102391222 B(2004.4.6)公开的合成路线如式III所示。
该路线将化合物6、化合物7溶于乙腈中，在0℃条件下快速加入吡啶，随后缓慢滴加氯氧化磷的乙腈溶液，于室温下反应，得到4-{2-[(3-甲基苯并呋喃-2-羰基)氨基]乙氧基}苯甲酸甲酯(9)；在溶有化合物9的氯苯溶液中加入AIBN、NBS，并于80℃下反应得到4-{2-[(3-溴-甲基苯并呋喃-2-羰基)氨基]乙氧基}苯甲酸甲酯(10)；将化合物10的氯苯溶液、DCM滴加至0～5℃二甲胺的四氢呋喃溶液中，于室温下反应1h后，得到化合物8；将化合物8溶于甲醇溶液中，加入KOH水溶液，在60℃加热后得到白色固体4-{2-[(3-二甲基氨基甲基-苯并呋喃-2-羰基)氨基]乙氧基}苯甲酸钾盐(11)；将化合物11溶于DMF中，分别加入二恶烷、EDCI、HOBt，于室温搅拌，经酸化回流，最终得到目标产物艾贝司他。其中化合物7是由4-羟基-苯甲酸甲酯(12)和(2-羟基乙基)氨基甲酸叔丁酯(13)在THF溶液中，与三苯基膦及DIDA于0～5℃下过夜而得。
上述反应路线仍采用化合物6为原料，依次经过酰基化、溴化、胺取代、成盐等反应后得到目标化合物艾贝司他。与原研路线相同，起始原料无工业销售，不易购得，定制价格昂贵。
因此，需要针对现有技术中所存在的缺陷，对现有技术加以改进，提供一种原料易得、工艺简洁、操作方便、收率更高的制备方法，以降低成本。
发明内容
针对现有技术的缺陷，本发明提供一种艾贝司他的制备方法，该方法原料易得，工艺简洁，操作方便，收率高，成本低，易于工业化生产。
本发明还提供制备艾贝司他的中间体及中间体的制备方法。
本发明是通过以下技术方案来实现的：
艾贝司他的制备方法，包括以下步骤：
(1)第一中间体3-((二甲氨基)甲基)苯并呋喃-2-羧酸(化合物2)与第二中间体4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸甲酯(化合物7)经酰胺缩合后制得第三中间体4-[2-(3-二甲基氨基苯并呋喃-2-基-羰基氨基)乙氧基]苯甲酸甲酯(化合物8)；
(2)将第三中间体用碱脱酯后再经酸调制备得到艾贝司他(化合物1)。
步骤(2)中，所述的脱酯反应的条件为：于25～60℃下，加入含有碱的醇溶液反应25～60分钟；
脱酯后用酸调节pH至中性；3-((二甲氨基)甲基)苯并呋喃-2-羧酸与碱的摩尔比为1:2-6。
所述的含有碱的醇溶液为含有羟胺的乙醇溶液，其制备方法为，将羟胺盐酸盐溶解于无水甲醇中，加入KOH或NaOH搅拌后去除沉淀并干燥；3-((二甲氨基)甲基)苯并呋喃-2-羧酸与盐酸羟胺的摩尔比为1：2～6。
步骤(1)中，酰胺缩合反应的条件为：保护气氛下或者不用保护气氛，第一中间体和第二中间体中的一种先用缩合剂和碱活化，然后加入另一种中间体，20～50℃下，反应4～9小时；所使用的有机溶剂包括N,N-二甲基甲酰胺、乙腈、四氢呋喃或丙酮，所述的缩合剂包括EDCI/HOBt、DCI/DMAP或HATU，所述的碱包括氢氧化钠、碳酸钾、氢化钠或三乙胺；活化时间包括10～40分钟；第一中间体、第二中间体、缩合剂和碱的摩尔比为1：0.9-1.1：1-1.1：1-2.5。
一种合成艾贝司他的中间体，为3-((二甲氨基)甲基)苯并呋喃-2-羧酸(第一中间体)。
第一中间体3-((二甲氨基)甲基)苯并呋喃-2-羧酸的制备方法为：以2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯(21)为原料，加入碱，在无氧条件下关环、酯水解生成3-((二甲氨基)甲基)苯并呋喃-2-羧酸。
第一中间体粗品可以不经过纯化直接进行下一步反应。
优选的，反应温度为65-75℃，使用的有机溶剂为甲醇、无水甲醇、甲苯、无水甲苯、乙醇、无水乙醇、四氢呋喃、无水四氢呋喃、N,N-二甲基甲酰胺或无水N,N-二甲基甲酰胺，所述的碱为碳酸钾、氢化钠、碳酸氢钠、氢氧化钠、甲醇钠或乙醇钠，2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯与碱的摩尔比为1：1.8～2.3。所述的碱为醇钠，优选为甲醇钠。
一种合成艾贝司他的中间体，为2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯。
所述的2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯制备方法包括以下步骤：
(A)由邻羟基苯酮(化合物14)和2-氯乙酸甲酯(化合物26)经过Williamson醚化反应制备得到2-(2-乙酰基苯氧基)乙酸甲酯(化合物20)；
(B)2-(2-乙酰基苯氧基)乙酸甲酯(化合物20)在催化剂的作用下，经过卤化取代制备得到2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯(化合物27)；
(C)-5～0℃条件下，2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯(27)与二甲胺取代反应，生成2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯(化合物21)。
优选的，步骤(A)反应条件为，邻羟基苯酮(14)与2-氯乙酸甲酯(26)于60～90℃醚化反应0.75～6小时，使用的有机溶剂包括乙腈、丙酮、异丙醇或N,N-二甲基甲酰胺，使用的碱包括氢氧化钾、氢氧化钠、氢化钠、碳酸钾或碳酸钠，碱与邻羟基苯酮的当量比为1：1～3，邻羟基苯酮(14)与2-氯乙酸甲酯(26)的摩尔比为1：1～1.7；
步骤(B)中，2-(2-乙酰基苯氧基)乙酸甲酯(20)的卤代反应条件为：室温下在有机溶剂中用催化剂催化溴代试剂完成溴代，使用的有机溶剂包括二氯甲烷、丙酮、甲基叔丁基醚、乙腈或四氢呋喃，使用的催化剂包括三氯化铝或三氯化铁，2-(2-乙酰基苯氧基)乙酸甲酯与催化剂当量比为1：0.05～0.13，使用的溴代试剂包括溴化铜、液溴或N-溴代丁二酰亚胺，2-(2-乙酰基苯氧基)乙酸甲酯与溴代试剂中溴的摩尔比为1：0.7～1.1；
步骤(C)中，2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯(27)制备生成2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯的反应条件为：2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯和二甲胺分别溶于有机溶剂并在-5～0℃下混合；使用的有机溶剂包括N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃、乙醚或丙酮。
步骤(C)中，2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯与二甲胺的摩尔比为1：1.5-2，还加入缚酸剂，缚酸剂为二甲胺、三乙胺、氢化钠、碳酸钾、氢氧化钠或碳酸氢钠。2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯与缚酸剂的摩尔比为1：0.5-1.5，优选为1：1-1.2。
采用二甲胺作为缚酸剂时，步骤(C)中，2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯与二甲胺的摩尔比为1：2-3.2；采用二甲胺以外的缚酸剂时，2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯与二甲胺的摩尔比为1：1.5-2。
优选的，采用二甲胺作为缚酸剂，步骤(C)中2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯与二甲胺的摩尔比为1：2-3.5，更优选为1：2.5-3。
二甲胺的溶液为二甲胺的水溶液、甲醇溶液、乙醇溶液或四氢呋喃溶液。
一种合成艾贝司他的中间体，为4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸甲酯(第二中间体)。
第二中间体4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸甲酯(化合物7)的制备方法包括以下步骤：
S1.4-羟基苯甲酸甲酯(12)与经Boc保护的2-溴代乙胺(即叔丁基(2-溴乙基)氨基甲酸酯)反应制备得到4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)苯甲酸甲酯；
S2.4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)苯甲酸甲酯经脱保护得到4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸甲酯。
步骤S1的反应条件为：4-羟基苯甲酸甲酯与碱和有机溶剂混合，60～105℃下，加入经Boc保护的2-溴代乙胺(即叔丁基(2-溴乙基)氨基甲酸酯)反应5-12小时，使用的有机溶剂为乙腈、丙酮或N,N-二甲基甲酰胺，4-羟基苯甲酸甲酯与2-溴代乙胺即叔丁基(2-溴乙基)氨基甲酸酯的摩尔比为1：1.5～2.2，使用的碱包括氢氧化钾、氢氧化钠、碳酸钾、氢化钠或碳酸钠，4-羟基苯甲酸甲酯与碱的摩尔比为1：1～3；
步骤S2的反应条件为：4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)苯甲酸甲酯溶解于有机溶剂中，25～75℃下加入含有酸的有机溶剂，反应1.5～12小时；所述的酸为三氟乙酸或氯化氢；所述的有机溶剂为二氯甲烷、乙酸乙酯或甲醇溶液，4-(2-((叔丁氧羰基)氨基)乙氧基)苯甲酸甲酯与酸的当量比为1：1～6。
本发明以2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯为原料制备第一中间体3-((二甲氨基)甲基)苯并呋喃-2-羧酸；以4-羟基苯甲酸甲酯为原料制备第二中间体4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸甲酯；将第一中间体和第二中间体经酰胺缩合后制得第三中间体4-[2-(3-二甲基氨基苯并呋喃-2-基-羰基氨基)乙氧基]苯甲酸甲酯；再经过脱酯和酸调制备得到艾贝司他，所使用的的原料易得，工艺简洁，操作方便，而且每一步的收率高；以第一中间体计，最终产物的收率为72.4％；以2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯计，第一中间体的产率可以达到66.8％。
具体实施方式
以下结合具体的实施例来对本发明的技术方案加以说明。制备路线如式IV所示：
实施例1 2-(2-乙酰基苯氧基)乙酸甲酯制备(化合物20)
在2L三口瓶中分别加入DMF(500mL)，K2CO3(101.5g，0.734mol)和邻羟基苯酮(化合物14)(50g，0.367mol)，室温下搅拌30min，反应液由白色浑浊逐渐转变为鹅黄色浑浊，待搅拌无明显砂砾声后将温度升至70℃，并缓慢滴加2-氯乙酸甲酯(化合物26)(59.8g，0.551mol)，随着反应的不断推进，反应液由鹅黄色转变为淡橘色，内温显示为70～80℃。
反应1h后原料无剩余，停止反应。待反应液冷却至室温后，直接在反应液中倒入1.5L水，搅拌30min后静置分层，抽滤得到固体，烘干，称重得到75.1g类白色固体。收率为98.3％，HPLC纯度为99.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.59(dd,J＝7.6,1.7Hz,1H),7.55–7.47(m,1H),7.19–6.98(m,2H),4.97(s,2H),3.73(s,3H),2.62(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ199.42,169.30,157.14,134.05,130.01,128.77,121.64,113.74,65.51,52.34,32.11.
实施例2 2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯的制备(化合物27)
称取2-(2-乙酰基苯氧基)乙酸甲酯(化合物20)(50g，0.24mol)溶于装有甲基叔丁基醚(300mL)的1L三口瓶中，加入催化量AlCl3(3.5g，26.42mmol)于室温搅拌，将稀释过的Br2(34.5g，0.216mol)分三批缓慢滴加，反应液由无色澄清转变为橘红色，并伴有白烟生成，内温保持在25～30℃，随后反应液呈黄色澄清状，待三批Br2全部滴加完毕(约1h)，搅拌10min后反应液开始浑浊，随着反应的进一步发生，有大量白色固体析出，并伴有酸性刺激气味，对气体进行吸收。TLC板层显示无明显变化，辅助HPLC数据显示反应已结束，并有新物质生成，且生成新物质与原料20的极性较为接近，反应共计1h，将反应液于冰浴条件下冷却，搅拌10min后静置，抽滤得固体，烘干，称重得到类白色固体67.1g，收率为97.2％，HPLC纯度为99.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.73–7.52(m,2H),7.23–7.07(m,2H),5.00(s,2H),4.95(s,2H),3.74(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ192.68,169.25,157.11,135.10,130.90,125.58,122.10,114.15,65.89,52.48,39.14.
实施例3 2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯的合成(化合物21)
称取2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯(化合物27)(30g，0.104mol)溶于装有无水THF(150mL)的1L三口瓶中，在冰浴条件下搅拌至溶清。量取二甲胺(兼做缚酸剂)的四氢呋喃溶液(2M，146.3mL，0.293mol)，于-5～0℃下以4mL/min的速度缓慢滴入上述溶液中，溶液由澄清逐渐至鹅黄色浑浊，并有大量白色固体生成，滴加结束静置待固液分层后抽滤除去白色粉状固体，室温减压旋干溶剂，称重得淡黄色粘稠状液体共23.5g。收率为89.5％，HPLC纯度为98.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.57–7.46(m,2H),7.12–7.04(m,2H),4.93(s,2H),3.78(s,2H),3.74(s,3H),2.23(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ199.99,169.25,156.66,133.85,129.98,128.08,121.78,113.64,69.20,65.67,52.36,45.46.
也可以在反应体系中加入三乙胺、氢化钠、碳酸钾、氢氧化钠或碳酸氢钠作为缚酸剂，2-[2-(2-溴乙酰基)苯氧基]乙酸甲酯与上述缚酸剂的摩尔比为1：1.1，对应的二甲胺用量相应减少到1：1.7，但使用上述缚酸剂的实验收率只有50％～80％。
实施例4 3-((二甲氨基)甲基)苯并呋喃-2-羧酸的合成(化合物2，第一中间体)
称取2-(2-(二甲基甘氨酰基)苯氧基)乙酸甲酯(化合物21)(20g，79.59mmol)溶于装有60mL无水甲醇的充氮封管中，加入NaOCH3(1M，167.1mL，0.167mol)，在70℃下反应5h。反应过程中溶液由澄清逐渐变为黄色悬浊，伴有大量白色固体生成。冷却至室温，过滤除去白色固体，溶液旋干，得到淡黄色粉末粗品20.63g，经过柱层析(DCM:MeOH＝1000:80)纯化后得到白色纯品13.47g，收率为77.2％。
后经实验研究分析，关环脱酯所得粗品无需处理，可直接进行下步反应投递，对后续反应无影响。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.37(s,1H),7.90(d,J＝7.7Hz,1H),7.70(d,J＝8.2Hz,1H),7.51(t,J＝7.6Hz,1H),7.40(t,J＝7.3Hz,1H),4.63(s,2H),2.87(s,6H).13CNMR(101MHz,DMSO)δ161.84,153.26,150.00,127.98,126.93,123.66,120.83,114.06,112.31,50.81,41.97.MS(ESI):m/z＝220.1[M+H]+.
其中甲醇钠的制备：量取400mL无水甲醇溶液置于1L茄瓶中，将称取的固体金属钠(9.2g，0.4mol)缓慢加入上述溶液内，在冰浴下搅拌，待金属钠固体反应完全后，冷却至室温装瓶待用，所配置的甲醇钠溶液为1M。
实施例5 4-(2-氨基乙氧基)苯甲酸甲酯的制备(化合物7，第二中间体)
在500mL三口瓶中分别加入DMF(100mL)，K2CO3(36.3g，0.262mol)和4-羟基苯甲酸甲酯(12)(20g，0.131mol)，于室温下，搅拌30min，反应液由白色浑浊逐渐转变为鹅黄色浑浊，且反应搅拌无明显砂砾声。升温至90℃，称取化合物24(58.9g，0.262mol)，缓慢滴加，保持内温90～100℃，溶液呈淡黄色浑浊状，并有白色附着物于容器壁上。期间TLC板层监测，5h后反应原料无剩余。待反应液冷却至室温后，在反应液中倒入300mL水，搅拌20min后静置分层，过滤得到淡黄色固体，烘干，称重得到中间体25共38.3g，收率为98.7％，HPLC纯度为99.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ7.88(d,J＝8.0Hz,2H),7.01(d,J＝8.1Hz,3H),4.03(s,2H),3.79(s,3H),3.32(d,J＝4.3Hz,2H),1.36(s,9H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ166.32,162.80,156.15,131.67,122.38,114.91,78.27,67.19,52.22,28.65.
进一步的将上述所得中间体化合物25(38.3g，0.13mol)溶解于100mL EA中，量取10％HCl/EA(237.3g，0.65mol)，在45～55℃下缓慢滴加，随着反应的进行，有大量白色固体析出，溶液逐渐浑浊，最终根据TLC板层监测显示反应完全，停止反应，冷却至室温，抽滤，冰EA(3*30mL)洗涤，烘干，称重得白色固体25g，收率为98.4％。两步反应总收率为97.1％，HPLC纯度为99.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.45(s,3H),7.92(d,J＝8.7Hz,2H),7.08(d,J＝8.7Hz,2H),4.28(t,J＝4.8Hz,2H),3.80(s,3H),3.20(t,J＝4.9Hz,2H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ166.29,162.17,131.70,122.85,115.14,65.01,52.32,38.57.
其中10％的HCl/EA是经乙酰氯与无水乙醇的反应制备而来，具体实验操作：称取无水乙醇(38.2g，0.829mol)装入茄瓶中，缓慢滴加乙酰氯(65g，82.8mol)，加入199g EA，得到最终含量为10％的HCl(g)/EA溶液，待用。
实施例6 (2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯的制备(化合物24)
化合物24是现制现用：由2-溴乙胺氢溴酸盐(22)在无水THF溶液中，与TEA、BOC酸酐反应得到。具体实验操作：将称取的化合物22(54g，0.264mol)置于三口瓶内，分别加入200mL无水THF、BOC酸酐(23)(63.3g，0.290mol)，在N2保护下，于冰浴条件缓慢滴加三乙胺TEA(32g，0.316mol)，溶液逐渐由澄清转为白色浑浊。滴加完毕撤除冰浴，室温搅拌12h后过滤除去固体，旋干溶剂得到淡黄色透明液，待用。
实施例7 艾贝司他的制备(化合物1)
将实施例4制备的经柱层析纯化的化合物2(10g，45.61mmol)及称量的HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯，17.3g，45.61mmol)溶于60mL无水四氢呋喃溶液中，在N2保护下，于-5～0℃中，缓慢加入TEA(三乙胺，9.2g，91.22mmol)进行搅拌，反应中有白烟产生，且伴有白色固体析出。活化30min后缓慢加入化合物7(9g，46.1mmol)，在40～45℃下反应5h后停止反应，过滤除去固体杂质收集滤液，旋干后得到19.6g黄棕色粘稠状液体的化合物8(第三中间体)。
将上述未处理的物质溶于含有羟胺的甲醇(75.9g，0.23mol，10％)溶液中，在35～40℃下搅拌30min，随后用乙酸(约90mL)调节pH至7，浓缩后得到棕色固体混合物19.3g，将反应粗品通过柱层析后得到最终纯化物，再由甲醇回流精制，烘干，称重得到粉色固体13.1g。产率72.4％，HPLC纯度为99.8％。
1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ11.08(s,1H),10.06(t,J＝4.8Hz,1H),8.92(s,1H),7.86(d,J＝7.8Hz,1H),7.75(d,J＝8.7Hz,2H),7.64(d,J＝8.3Hz,1H),7.46(t,J＝7.7Hz,1H),7.33(t,J＝7.5Hz,1H),7.04(d,J＝8.7Hz,2H),4.22(t,J＝5.2Hz,2H),3.82(s,2H),3.74–3.68(m,2H),2.19(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO)δ161.11,159.67,153.42,146.28,129.17,128.88,127.31,125.67,123.81,122.01,120.52,114.58,112.11,66.87,51.73,44.80,38.94.HRMS(ESI)calcd for:C21H23N3O5[M+Na]+420.1535,Found:420.15298.
其中，制备羟胺的甲醇溶液，具体实验操作：将羟胺盐酸盐(107.41g，1.55mol)溶解在568mL无水甲醇溶液中，于0℃条件下缓慢加入KOH(129.03g，2.3mol)，搅拌30min后停止反应，滤出沉淀物，加入无水硫酸钠(3*10g)干燥，最终得到10％的羟胺的甲醇溶液，待用。
实施例8 艾贝司他的制备(化合物1)
将实施例4所制备的粗品化合物2(41.1g，纯度约为65％，121.92mmol)及称量的HATU(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N,N,N′,N′-四甲基脲六氟磷酸酯，46.3g，121.84mmol)溶于150mL无水四氢呋喃溶液中，在N2保护下，于-5～0℃中，缓慢加入TEA(三乙胺，24.7g，244.10mmol)进行搅拌，反应中有白烟产生，且伴有白色固体析出。活化30min后缓慢加入化合物7(24g，122.94mmol)，在40～45℃下反应5h后停止反应，过滤除去固体杂质收集滤液，旋干后得到52.3g黄棕色粘稠状液体的化合物8(第三中间体)。
将上述未处理的物质溶于含有羟胺的甲醇(201.3g，0.61mol，10％)溶液中，在35～40℃下搅拌30min，随后用乙酸(约220mL)调节pH至7，浓缩后得到棕色固体混合物51.4g，将反应粗品通过柱层析后得到最终纯化物，再由甲醇回流精制，烘干，称重得到粉色固体34.11g。产率70.4％，HPLC纯度为99.8％。表征数据同实施例7。
需要指出的是，上述实施例仅为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项目技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。