阅读说明：本技术 Magl抑制剂、制备方法和用途 (MAGL inhibitor, preparation method and application ) 是由 张贵民 李�杰 肖贺 支卓尔 于 2020-01-19 设计创作，主要内容包括：本发明属于药物领域,涉及一种化合物及其药学上可接受的盐；其制备方法；及含有这样的化合物或盐的组合物；及其用于治疗MAGL介导的疾病及病症(包括例如疼痛、炎症性病症、创伤性脑损伤、抑郁症、焦虑症、阿尔茨海默病、代谢紊乱、中风或癌症等)的用途。(The invention belongs to the field of medicines, and relates to a compound and pharmaceutically acceptable salts thereof; a process for the preparation thereof; and compositions containing such compounds or salts; and their use for the treatment of MAGL mediated diseases and disorders including, for example, pain, inflammatory disorders, traumatic brain injury, depression, anxiety, alzheimer's disease, metabolic disorders, stroke, or cancer.)

MAGL抑制剂、制备方法和用途

技术领域

本发明涉及药物领域，特别涉及一种MAGL抑制剂及其制备方法和用途。

背景领域

单酰基甘油脂肪酸酶(Monoacylglycerol Lipase,MAGL)，又称甘油一酯酶，是一类促进脂肪分解成甘油和脂肪酸的丝氨酸水解酶，是α/β水解酶超家族的成员之一，系丝氨酸水解酶，在人侵袭性肿瘤细胞和原发性肿瘤细胞内高表达。MAGL广泛表达于脂肪组织、肌肉、肾、卵巢、睾丸和肝中。在脂质代谢组织中，MAGL可协同激素敏感性脂解酶将储存的三酰甘油分解为脂肪酸和甘油，为机体供能。在中枢神经系统中，MAGL可将2-花生四烯酸甘油(2-AG)水解成花生四烯酸和甘油，调节内源性大麻素系统。Numura等(Nomura DK,LombardiDP,Chang JW,et al.Monoacylglycerol Lipase Exerts Dual Control overEndocannabinoid and Fatty Acid Pathways to Support Prostate Cancer[J].ChemBiol,2011,18(7):846-56.)的研究显示，MAGL是上皮间质转化和肿瘤干细胞的基因表达标记的一部分。MAGL是上皮间质转化和肿瘤干细胞的基因表达标记，且可通过调节脂肪酸代谢网络、内源性大麻素系统和周期蛋白D1、Bcl-2的水平等，促进肿瘤的发生。高水平的MAGL可调节富含促癌信号脂质的脂肪酸网络，促进肿瘤转移、侵袭、存活以及在体内生长，能够通过提高自由脂肪酸的水平来维持肿瘤细胞的高致病性。MAGL已成为抗肿瘤药物研发的重要靶点，然而其具体机制尚不明确。

发明内容

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本发明提供式I化合物或其药学上可接受的盐：

本发明提供式I化合物的合成方法，具体步骤如下：醋酐中加入马尿酸，醋酸钠，间苯氧基苯甲醛，加热搅拌制得。所述加热温度为100℃-150℃，优选为120℃-140℃，最优选130℃。

本发明提供药物组合物，包含上述化合物或其药学上可接受的盐，和一种或多种药学上可接受的药用辅料。

本申请提供了一种药物组合物，其包含本申请所述的化合物或其药学可接受的盐和药学可接受的载体。所述药物组合物包括但不限于口服剂型、胃肠外给药剂型、外用剂型和直肠给药剂型。所述组合物可以是液体、固体、半固体、凝胶或气溶胶形式。在一些实施方式中，所述药物组合物可以是口服的片剂、胶囊、丸剂、粉剂、缓释制剂、溶液和悬浮液，用于胃肠外注射的无菌溶液、悬浮液或乳液，用于外用的软膏或乳膏，或者用于直肠给药的栓剂。在其它实施方式中，所述药物组合物为适合单次施予精确剂量的单位剂型

本发明提供了上述所有化合物或其药学上可接受的盐及其药物组合物，其作为单酰基甘油酯酶抑制剂的用途；或其用于制备治疗具有单酰基甘油酯酶代谢途径的病理学特征的疾病或病症的药物的用途。

本发明提供了上述所有化合物或其药学上可接受的盐及其药物组合物用于抑制单酰基甘油酯酶的方法。该方法包括体内和体外抑制单酰基甘油酯酶的方法。还提供了上述所有化合物或其药学上可接受的盐及其药物组合物用于治疗单酰基甘油酯酶介导的疾病或病症的方法。

其中所述病症选自：代谢紊乱(例如肥胖症)；肾病(例如急性炎症性肾损伤及糖尿病肾病)；呕吐或涌吐(例如化学疗法诱导的呕吐)；恶心(例如难治性恶心或化学疗法诱导的恶心)；进食障碍(例如厌食症或贪食症)；神经病变(例如糖尿病神经病变、糙皮病性神经病变、酒精性神经病变、脚气病神经病变)；烧灼样足综合征；神经变性病症[多发性硬化(MS)、帕金森病(PD)、亨廷顿病、痴呆、阿尔茨海默病、肌萎缩侧索硬化(ALS)、癫痫、额颞叶痴呆、睡眠障碍、克雅氏病(CJD)或朊病毒病]；心血管疾病(例如高血压、血脂异常、动脉粥样硬化、心律不齐或心肌缺血)；骨质疏松症；骨关节炎；精神分裂症；抑郁症；双相障碍；震颤；运动障碍；张力失常；痉挛状态；图雷特氏综合征；睡眠呼吸暂停；听力损失；眼疾病(例如青光眼、高眼压症、黄斑变性或源于眼内压升高的疾病)；恶病质；失眠；脑膜炎；睡眠病；进行性多灶性白质脑病；De Vivo病；脑水肿；大脑性瘫痪；戒断综合征[戒酒综合征、抗抑郁药停药综合征、抗精神病药停药综合征、苯并二氮停药综合征、大麻戒断、新生儿戒断、尼古丁戒断或阿片类戒断]；外伤性脑损伤；非外伤性脑损伤；脊髓损伤；癫痫发作；兴奋毒素暴露；缺血[中风、肝缺血或再灌注、CNS缺血或再灌注]；肝纤维化、铁超负荷、肝硬化；肺病症[哮喘、变态反应、COPD、慢性支气管炎、肺气肿、囊性纤维化、肺炎、结核病、肺水肿、肺癌、急性呼吸窘迫综合征、间质性肺病(ILD)、结节病、特发性肺纤维化、肺栓塞、胸腔积液或间皮瘤]；肝病症[急性肝衰竭、Alagille综合征、肝炎、肝肿大、吉尔伯特氏综合征、肝囊肿、肝血管瘤、脂肪肝疾病、脂肪性肝炎、原发性硬化性胆管炎、片形吸虫病、原发性胆管硬化、巴-希二氏综合征、血色素沉着病、威尔逊氏症或转甲状腺素相关遗传性淀粉样变性]、中风[例如缺血性中风、出血性中风]；蛛网膜下腔出血；脑内出血；血管痉挛；AIDS消耗综合征；肾缺血；与异常细胞生长或增殖有关的病症[例如良性肿瘤或癌症，例如良性皮肤肿瘤、脑瘤、乳头状瘤、前列腺肿瘤、脑肿瘤(胶质母细胞瘤、髓上皮瘤、髓母细胞瘤、神经母细胞瘤、星形细胞瘤、星形母细胞瘤、室管膜瘤、少突神经胶质瘤、丛肿瘤、神经上皮瘤、骨骺肿瘤、室管膜母细胞瘤、恶性脑膜瘤、肉瘤病、黑色素瘤、神经鞘瘤)、黑色素瘤、转移性肿瘤、肾癌、膀胱癌、脑癌、胶质母细胞瘤(GBM)、胃肠癌、白血病或血癌]；自身免疫病[例如银屑病、红斑狼疮、干燥综合征、强直性脊柱炎、未分化脊柱炎、贝赫切特氏病、溶血性贫血、移植物排斥]；炎症性病症[例如阑尾炎、滑囊炎、结肠炎、膀胱炎、皮炎、静脉炎、鼻炎、肌腱炎、扁桃体炎、血管炎、寻常痤疮、慢性前列腺炎、肾小球肾炎、超敏反应、IBS、盆腔炎性疾病、结节病、HIV脑炎、狂犬病、脑脓肿、神经炎症、中枢神经系统(CNS)炎症]；免疫系统病症(例如移植排斥或乳糜泻)；创伤后应激障碍(PTSD)；急性应激障碍；惊恐障碍；物质诱导性焦虑；强迫症(OCD)；广场恐怖症；特定恐怖症；社交恐怖症；焦虑症；注意缺陷障碍(ADD)；注意缺陷多动障碍(ADHD)；阿斯佩各综合征；疼痛[例如急性疼痛；慢性疼痛；炎症性疼痛；内脏痛；手术后疼痛；偏头痛；下腰痛；关节疼痛；腹痛；胸痛；乳房切除术后疼痛综合征；月经疼痛；子宫内膜异位症疼痛；由物理创伤所致的疼痛；头痛；窦性头痛；紧张性头痛、蛛网膜炎、疱疹病毒疼痛、糖尿病性疼痛；由选自以下的病症所致的疼痛：骨关节炎、类风湿性关节炎、骨关节炎、脊椎炎、痛风、阵痛、肌骨骼疾病、皮肤病、牙痛、胃灼热、烧伤、晒伤、蛇咬伤、毒蛇咬伤、蜘蛛咬伤、昆虫叮咬、神经源性膀胱、间质性膀胱炎、尿路感染(UTI)、鼻炎、接触性皮炎/超敏反应、发痒、湿疹、咽炎、黏膜炎、肠炎、肠易激综合征(IBS)、胆囊炎及胰腺炎；神经性疼痛(例如神经性腰痛、复杂性区域疼痛综合征、支柱三叉神经痛、灼性神经痛、中毒性神经病、反射性交感神经营养不良、糖尿病神经病变、化学治疗剂所致的慢性神经病变或坐骨神经痛疼痛)]；脱髓鞘病[例如多发性硬化(MS)、德维克氏病、CNS神经病变、脑桥中央髓鞘溶解、梅毒性脊髓病、脑白质病、脑白质营养不良症、格林-巴利综合征、慢性炎症性脱髓鞘性多神经病、抗髓磷脂相关糖蛋白(MAG)周围神经病变、夏科-马里-图思病、周围神经病变、脊髓病变、视神经病变、进展性炎症性神经病变、视神经炎、横贯性脊髓炎]；及认知损害[例如与唐氏综合征有关的认知损害；与阿尔茨海默病有关的认知损害；与PD有关的认知损害；轻度认知损害(MCI)、痴呆、化学疗法后认知损害(PCCI)、手术后认知功能障碍(POCD)]。

本文所用术语“药学可接受的盐”是指保留了指定化合物的游离酸和游离碱的生物效力，并且在生物学或其它方面上没有不良作用的盐。本申请化合物还包括药学可以接受的盐。药学可接受的盐是指把母体化合物中的碱基基团转换成盐的形式。药学可接受的盐包括，但不仅限于，碱基基团例如胺(氨)基的无机或有机酸盐类。本申请药学可接受的盐可以由母体化合物合成，即母体化合物中的碱性基团与1-4当量的酸在一个溶剂系统中反应。合适的盐列举在Remingtong’s Pharmaceutical Scicences,17^th ed.,MackPublishing Company,Easton,Pa.,1985,p.1418和Journal of Pharmaceutical Science,66,2(1977)中。

除特别指示外，本申请中的盐指用有机酸/无机酸形成的酸式盐，以及用有机碱/无机碱形成的碱式盐。另外，当通式化合物的碱性官能团是吡啶或咪唑(但不限制于吡啶或咪唑)，酸性官能团是羧酸(但不限制于羧酸)时就会形成两性离子(内盐)，内盐也包括在本申请中的盐内。

具体实施方式

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下面结合具体的实施方式对本发明做进一步描述，但本发明并不受其限制。且本领域技术人员不需要付出创造性劳动即可得到的其它具体化合物，均在本发明范围内。

实施例1

1ml醋酐中加入马尿酸(156.3mg，1.335mmol)，醋酸钠(94.9mg，1.157mmol，)，间苯氧基苯甲醛(176mg，0.89mmol)，130℃搅拌1.5h。停止反应，加入饱和碳酸氢钠溶液淬灭，乙酸乙酯萃取3次，饱和氯化钠溶液洗3次，无水硫酸钠干燥，经柱层析分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100:1)得到目标化合物黄色粉末143.4mg(54.2％)。

¹HNMR(DMSOd6)δ(ppm):8.14(s,1H),7.87-7.96(m,2H),7.78-7.85(m,1H),7.70-7.78(m,1H),7.61-7.69(m,2H),7.48-7.58(m,3H),7.29-7.38(m,2H),7.15-7.26(m,3H)；MS测得分子量与理论值相符。

实施例A：MAGL酶分析

采用Cayman的MAGL抑制剂筛选试剂盒，根据其说明书，以4-硝基苯乙酸的乙醇溶液作为MAGL的底物，底物的终浓度为236UM.96孔板中每孔加入150微升的1Xassaybuffer，10微升的重组人MAGL蛋白,以及10微升的不同浓度的MAGLinhibitor(1nM-1000nM间的六个点).JZL195(阳性对照抑制剂)作为阳性对照孔，室温孵育5min后，每孔加入10微升的MAGL底物，将86孔震荡10秒，室温下放置10min，检测410nm的吸光值。其中，还要设置100％抑制对照孔(96孔板中每孔加入150微升的1Xassaybuffer，10微升的MAGL,以及10微升的DMSO,设置三个复孔)，背景孔(每孔加入160微升的1Xassay buffer以及10微升的DMSO,设置三个复孔)。然后采用graphad prism 5.0计算拟合各抑制剂的IC50曲线，得MAGLZ-III-12IC50为9.632μM。

实施例B：动物试验

1材料与方法

1.1实验动物

体重18～22g雄性ICR小鼠。动物在正常的12h光照，12h黑暗时间表下活动。环境温度和相对湿度分别保持在22±1℃和55±5％。

1.2实验方法

1.2.1动物分组和给药方法

3组实验小鼠，每组10只，设为对照组(生理盐水组)，阳性对照组(盐酸氟西汀胶囊，5mg/kg)，式I化合物给药处理组，给药浓度为5mg/kg。

所有药物通过灌胃以20mL/kg体重的剂量使用，1次/天，持续10天。最后一次给药1h后，开始进行动物行为学的检测。

1.2.2小鼠强迫游泳试验

小鼠强迫游泳实验根据Porsolt(Porsalt R D.Behavioural despair in mice:Aprimary screening test for antidepressants[J].Arch.Int.Pharmacolodyn.1977,229)建立的方法进行检测。小鼠单独在开放的圆柱形容器(直径10cm，高25cm)中强迫游泳，该容器水温25±1℃，水深19cm，每只动物在6分钟的过程中保持不动的总时间被记录为不动时间(以秒为单位)。每只小鼠在停止挣扎时被判定为不动，并且在水中保持悬浮不动，只做出必要的动作以保持头部高于水面。不动时间的减少表明具有抗抑郁作用。

1.2.3小鼠悬尾试验

尾部悬浮试验(TST)根据Porsolt等(Porsolt R D,Le Pichon M,JalfreM.Depression:a new animal model sensitive to antidepressant treatments[J].Nature,1977,266(5604):730-732)建立的方法进行检测。使用悬尾夹子，在距离盒子(250mm×250mm×300mm)尾部10mm，头部距离底部5cm处将小鼠分别悬挂在尾部。在具有最小背景的黑暗房间中测试噪声，每只小鼠悬挂6分钟，在最后4分钟间隔记录不动时间。判定标准是小鼠停止挣扎，完全静止不动。

1.2.4数据处理

所有数据以x±SD表示，组间比较采用单因素方差分析。

2结果

2.1式I化合物对小鼠强迫游泳行为的影响

式I化合物对小鼠强迫游泳行为影响实验表明阳性对照药盐酸氟西汀、式I化合物组均能明显缩短小鼠强迫游泳累积不动时间(P＜0.1)(表1)。

表1式I化合物对小鼠强迫游泳行为的影响

注：与对照组比较，P＜0.1，P＜0.05。

2.2式I系列化合物对小鼠悬尾行为的影响

与对照组相比，式I化合物式I各化合物组能明显缩短悬尾小鼠的累计不动时间(P＜0.1)(表2)。

表2式I化合物对小鼠悬尾行为的影响

注：与对照组比较，P＜0.1，P＜0.05。

3讨论

小鼠强迫游泳和小鼠悬尾是较为常用的、经典的抑郁症动物模型。模型所体现出的小鼠绝望、行为扭曲等状态是体外模拟抑郁症的显著特征，同时由于其对抗抑郁药物比较敏感且便于操作，因此是抗抑郁药物常用的筛选模型。本研究采用这两种经典的抑郁动物模型对式I化合物的抗抑郁活性进行进一步的评价与验证。结果表明，式I化合物能显著缩短小鼠强迫游泳和小鼠悬尾的累积不动时间，表明式I化合物具有明确的抗抑郁作用。