阅读说明：本技术 一种免洗消毒液及其制备方法与应用 (No-clean disinfectant and preparation method and application thereof ) 是由 丁兴龙 盖中涛 马万山 陈振 寇宗阳 朱之炜 于 2020-04-17 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种免洗消毒液,是由聚六亚甲基胍盐酸盐、甘草酸、甘油、纯化水组成。本发明的免洗消毒液利用聚六亚甲基胍盐酸盐、病毒蛋白受体ACE2)抑制剂甘草酸为主要杀菌、抗病毒成分,在抗菌和抗病毒中发挥作用。该产品克服了市售多数消毒剂存在刺激性强、微毒等缺点,成为一种广谱性杀菌消毒、作用速度快、稳定性好、毒性低、无腐蚀性、刺激性小的高效环保型消毒剂,尤其使用该产品时特别易于在人体手部形成一层“液体手套”,起到消毒防护的作用,应用前景广阔。(The invention discloses a no-clean disinfectant, which consists of polyhexamethylene guanidine hydrochloride, glycyrrhizic acid, glycerol and purified water. The washing-free disinfectant disclosed by the invention utilizes polyhexamethylene guanidine hydrochloride and a virus protein receptor ACE2) inhibitor glycyrrhizic acid as main sterilization and antiviral components, and plays a role in sterilization and antivirus. The product overcomes the defects of strong irritation, slight toxicity and the like of most disinfectants sold in the market, becomes a high-efficiency environment-friendly disinfectant with broad-spectrum sterilization and disinfection, high action speed, good stability, low toxicity, no corrosiveness and small irritation, particularly easily forms a layer of 'liquid gloves' on hands of a human body when the product is used, plays a role in disinfection and protection, and has wide application prospect.)

一种免洗消毒液及其制备方法与应用

技术领域

本发明涉及一种消毒剂及其制备方法与应用，尤其涉及一种免洗杀病毒消毒液及其制备方法与应用。属于化学消毒剂技术领域。

背景技术

医院、银行、超市、机关企事业单位、影剧院、部队、娱乐场所、大中小学校、幼儿园、家庭、宾馆、餐厅、机场、码头、火车站等场所，极容易引起细菌和病毒的传播，造成公众交叉感染。有害微生物的存在会给人类带来很多疾病，严重时还会危及人类生命。消毒杀菌是维护人类生命安全的有效措施。日常生活中，经常会用到各类消毒剂。

目前，常用的消毒剂其有效成分主要具有以下几类物质：氧化类物质、醛类、酚类、醇类、碱盐类、卤素类、表面活性剂类等，但均存在缺点。理想的消毒剂应具备杀菌谱广、杀菌能力强、作用速度快、稳定性好、毒性低、腐蚀性、刺激性小(应该是无毒、无残留、无腐蚀、无刺激)、易溶于水、对人和动物安全、价廉易得、对环境污染程度低等特点。因此，迫切需要开发这类更快速有效且无毒的消毒剂。

日常握手或手部触摸的栏杆、门把手、车厢内的扶手以及钱币票据等，是造成公众交叉感染的一个重要因素。在这种情况下，免洗消毒剂应运而生。免洗手消毒液在保证您健康的同时，还可节约宝贵的水资源，无需使用毛巾、水和肥皂。目前相关的免洗消毒剂已有报道或产品，但是利用聚六亚甲基胍盐酸盐杀菌消毒原理，配以甘草酸、甘油试剂，克服以往聚六亚甲基胍盐酸盐对铝、碳钢具有一定腐蚀性的缺点，制备的一种广谱性杀毒、作用速度快、稳定性好、毒性低、无腐蚀性、刺激性小的高效环保型消毒剂，尤其特别易于在人体手部形成一层“液体手套”，做到消毒防护作用的免洗杀病毒消毒液还鲜见报道。

发明内容

针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种免洗杀病毒消毒液及其制备方法与应用。

本发明所述的免洗消毒液，是由聚六亚甲基胍盐酸盐、甘草酸、甘油、纯化水组成，其特征在于：所述免洗消毒液的pH值为5.5～7，其组分含量以100ml溶液计，含质量浓度为25％的聚六亚甲基胍盐酸盐溶液1.5ml～3ml，甘草酸0.05ml～0.2ml，甘油3ml～6ml，纯化水余量。

其中：所述免洗消毒液的pH值优选为6.0～6.8，其组分含量优选以100ml溶液计，含质量浓度为25％的聚六亚甲基胍盐酸盐溶液2ml，甘草酸0.1ml，甘油5ml，纯化水92.9ml。

本发明所述免洗消毒液的制备方法，步骤是：

(1)在常温下向搅拌罐中加入70％～80％配方量的纯化水以及配方量的质量浓度为25％的聚六亚甲基胍盐酸盐溶液，搅拌至完全均匀后待用；

(2)在常温下加入配方量的甘草酸和甘油以及余量的纯化水，搅拌均匀；

(3)测试pH值，确定pH值是否达到5.5-7，若pH值为5.5-7之间，即可灌装；若pH值未达标用柠檬酸调节pH值。

上述免洗消毒液的制备方法，优选的实施方式是：

(1)以制备100ml消毒液计，在常温下向搅拌罐中加入70ml的纯化水以及质量浓度为25％的聚六亚甲基胍盐酸盐溶液2ml，搅拌至完全均匀后待用；

(2)在常温下加入的甘草酸0.1ml和甘油5ml以及22.9ml的纯化水，搅拌均匀；

(3)测试pH值，确定pH值是否达到6.0～6.8，若pH值为6.0～6.8之间，即可灌装；若pH值未达标用柠檬酸调节pH值。

本发明所述免洗消毒液在抗菌和抗病毒中的应用。

其中：所述菌优选指大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538、铜绿假单胞菌ATCC15442和白色念珠菌ATCC10231；所述病毒优选指新型冠状病毒，具体是新型冠状病毒SARS-CoV-2、新型冠状病毒2019-nCoV。

本发明提供的免洗消毒液可以应用于在皮肤、手消毒、空气消毒、及其他各个环境方面的杀菌消毒。

本发明公开的免洗消毒液的组分中，聚六亚甲基胍盐酸盐是杀菌组分，甲基胍本身具有很高的活性，使聚合物呈正电性，它的杀菌机理是化学与物理的共同作用，首先它能与通常呈负电荷的微生物细胞膜强烈作用，破坏微生物储存能量和运输养分所必须的离子梯度，造成细胞膜破裂；同时该物质呈正点性，很容易吸附在呈负电性的各类细菌、病毒表面，抑制了细菌、病毒的分裂功能，使其丧失繁殖能力，而且聚合物的形成堵塞了微生物的呼吸通道，使微生物窒息而死。因此，在极低的浓度(10ppm)下，聚六亚甲基胍盐酸盐即可杀灭棉织物细菌过氧化氢酶及真菌、棘阿米巴角膜炎病原菌、灭大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和白色念珠菌、皮肤自然菌、灭活病毒、细菌芽胞、细菌繁殖体等。甘草酸是一种新型冠状病毒(SARS-CoV-2)蛋白受体ACE2抑制剂，可与血管紧张素转换酶2(ACE2)结合，阻断病毒S蛋白与ACE2受体结合，减少病毒入侵人体表皮细胞，从而降低病毒对人体的伤害。美国斯坦福大学医学院神经外科与香港大学中医药学院联合发表论文，也证实甘草酸可以与ACE2结合，因此可以得出用甘草酸是潜在的抗SARS-CoV-2化合物，对预防新型冠状病毒(SARS-CoV-2)感染治疗SARS具有重要价值。甘油在医学方面，一般用以制备各种制剂、溶剂、吸湿剂、防冻剂和甜味剂，配剂外用软膏或栓剂等。因甘油有吸水性，故常用于化妆品、食品及纺织品的吸湿剂和滋润剂。在本发明的免洗消毒液中甘草酸、甘油的加入协同聚六亚甲基胍盐酸盐，使本发明的产品使用方便，易于涂抹，干燥后能形成较好的“膜”，在物体或人手部表面形成“隐形手套”，起到长期抑菌的效果。

本发明提供了一种免洗杀病毒消毒液及其制备方法与应用。其中所述消毒液是由聚六亚甲基胍盐酸盐、甘草酸、甘油组成的亲水溶液。该消毒液具有的显著优点是：1.广谱抗菌；2.作用速度快，5分钟见效；3.效果持续时间长，可达4-5小时，最长可达6小时；4.形成“液体手套”，具有温柔护肤的作用，防止皮肤损伤、滋润呵护手部皮肤；5.完全无毒、可降解，环保特性好；6.适用于物体表面、水、空气等各个环境方面的消毒杀菌。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明内容进行详细说明。如下所述例子仅是本发明的较佳实施方式而已，并非对本发明作任何形式上的限制，凡是依据本发明的技术实质对实施方式所做的任何简单修改，等同变化与修饰，均属于本发明技术方案的范围内。

实施例1：免洗杀病毒消毒液的制备

以制备100ml免洗杀病毒消毒液为例：

(1)在常温下向搅拌罐中加入70ml的纯化水以及质量浓度为25％的聚六亚甲基胍盐酸盐溶液2ml，搅拌至完全均匀后待用；

(2)在常温下加入的甘草酸0.1ml和甘油5ml以及22.9ml的纯化水，搅拌均匀；

(3)测试pH值，确定pH值是否达到6.0～6.8，若pH值为6.0～6.8之间，即制得100ml免洗杀病毒消毒液；若pH值未达标用柠檬酸调节pH值。

实施例2：消毒液消毒评价

2.1杀灭微生物试验

2.1.1菌悬液与菌片的制备

菌种:大肠杆菌8099、金黄色葡萄球菌ATCC6538、铜绿假单胞菌ATCC15442、白色念珠菌ATCC10231。

2.1.2按照《消毒技术规范》2002年版规定的杀菌试验方法进行试验，结果见表1。

表1：杀灭微生物效果评价

2.2消毒剂对手消毒现场实验

2.2.1在使用现场，随机选定受试者。试验不少于30人次。

2.2.2消毒前，在受试者双手相互充分搓擦后，让受试者左手指并拢，用无菌棉拭在含10ml稀释液试管中浸湿，于管壁上挤干后，在五指屈面指尖至指指根，往返涂擦2遍，每涂擦一遍将棉拭转动一次。采样后，以无菌操作方式将棉拭采样端剪入中和试剂管内，作为阳性对照组样本。

2.2.3根据消毒剂使用方法对右手进行消毒，对手的卫生消毒一般设定作用时间为1min。消毒后用中和剂代替稀释液，与阳性对照组同样的方法对受试者右手上残留的自然菌采样一次，用为试验组样本。

2.2.4分别将未用过的同批中和剂、稀释液各1.0ml、棉拭1份～2份作为阴性对照组样本。

2.2.5分别取试验组、阳性对照组和阴性对照组样本各1.0ml，以琼脂倾注法接种平皿，每个样本接种2个平皿，放37℃恒温箱中培养48h，观察最终结果。

3.3评价测定

阳性对照组应有较多细菌生长，阴性对照组应无菌生长，以对30人次手上自然菌的平均杀灭对数值≥1.00可判为消毒合格。杀菌效果见表2。

表2：30人喷涂消毒剂后杀菌效果

实施例3：消毒剂防护评价

3.1抑菌圈法测试消毒剂杀菌抑菌作用

3.1.1制备100mL LB液体培养基2瓶(酵母膏5g/L，胰蛋白胨10g/L，NaCl 10g/L，琼脂粉15g/L)，121℃高压灭菌20min，冷却后分别接入大肠杆菌斜面菌种1支，金黄色葡萄球菌斜面菌种1支。摇匀，37℃培养1～2天，至浑浊为止。

3.1.2在超净工作台内，放入100mL约45℃营养琼脂培养基中，摇匀，然后将培养基注皿，待凝固，倒4个培养皿。用无菌吸管吸取大肠杆菌菌(8099)悬液0.2mL和金黄色葡萄球菌(ATCC6538)0.2ml，涂布于培养基中。

3.1.3取用消毒液完全浸湿的无菌圆形滤纸片(5mm)分别水平放入含大肠杆菌培养皿和金黄色葡萄球菌培养皿中，37℃培养中静置培养，24h/48h/72h取出测定抑菌圈大小。结果见表3。

表3：抑菌圈测试实验

从抑菌圈大小可见，本发明提供的消毒剂可以有效抑制大肠杆菌及金黄色葡萄球菌的生长，并且可以持续稳定的发挥抑菌作用。

实施例4：免洗杀病毒消毒液的批量制备

1)在常温下向搅拌罐中加入纯化水和配方量的质量浓度为25％聚六亚甲基胍盐酸盐溶液至终浓度为2％，搅拌至完全均匀后待用；

2)在常温下加入纯化水和配方量的甘草酸至终浓度0.1％和甘油至终浓度5％，搅拌均匀；

3)测试pH值，如pH值不在5.5-7之间，可用柠檬酸调pH值为5.5-7后即可灌装。

实施例5：免洗杀病毒消毒液应用于新型冠状病毒核酸检测验证

为检测本发明所述免洗杀病毒消毒液对病毒类的消毒效果，利用济南市传染病医院新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸阳性患者提取的核酸样本5例，每例SARS-CoV-2阳性RNA中加入1％体积的免洗杀病毒消毒液混匀。并再次采用新型冠状病毒(SARS-CoV-2)核酸检测试剂盒(恒温核酸扩增法)(山东莱博生物科技有限公司，批号：202002001)与核酸快速增强液(山东莱博生物科技有限公司，批号：202002094)配套使用，检测每例SARS-CoV-2阳性RNA中的RNA含量，并验证消毒后低浓度的病毒RNA是否存在。具体操作方法：

5.1向反应管中加入2.5μL核酸模板(阳性对照、阴性对照各加5μL)。

5.2每个反应管加入2.5μL B Buffer,盖好管盖(对于多个反应，建议将B Buffer加至反应管的盖子内侧)；上下颠倒反应管8-10次充分混匀；混匀后，将反应液甩(或快速离心)至管子底部，转移至扩增区。

5.3若使用Roche LightCycler480，应将上述反应液转移至与罗氏适配的专用反应管中再行扩增反应。

5.4核酸扩增

步骤	温度	时间	循环次数
				①孵育	42℃	1min	1cycle
②扩增/检测荧光	42℃	30s	40ycle

5.5用移液器吹吸或涡旋混匀上述混合液，瞬时离心除气泡；可预混后分装；无需置冰上操作。将上述混匀的体系在qPCR仪上进行反应。

反应程序：48℃，20min，每30s检测一次FAM荧光。针对阴性(Ct≥40)样本的复检，建议将反应时间设为60min，扩大增敏效果。

5.6每个样本采集20组以上荧光值，以循环次数为X轴，荧光值为Y轴做直线拟合，求直线斜率K值。(K值<500为阴性)

表4：阳性RNA样本核酸检测结果

样本编号	未加入免洗杀消毒液前Ct	加入免洗杀消毒液后Ct	加入免洗杀消毒液后K
				1	33	未检出	50
2	30	未检出	55
				3	28	未检出	35
4	34	未检出	46
				5	31	未检出	73

从以上结果看出，(SARS-CoV-2)核酸阳性样本经过免洗杀消毒液处理后PCR检测及后续加入增强液提高灵敏度后的检测后，结果均为阴性。说明本发明的免洗杀消毒液对SARS-CoV-2具有极强的破坏作用，可以用于消杀SARS-CoV-2。这为该病毒的防护工作提供了良好的基础。