阅读说明：本技术 一种二氢吡唑磺酰胺类化合物及其制备方法和用途 (Dihydropyrazole sulfonamide compound and preparation method and application thereof ) 是由 李青山 徐陈 沈邦念 高仰哲 吴法浩 李钢 褚冠武 王志航 阮班锋 于 2020-05-18 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种二氢吡唑磺酰胺类化合物及其制备方法和用途,其中二氢吡唑磺酰胺类化合物具有如下通式：<Image he="381" wi="587" file="DDA0002495815060000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>其中,R<Sup>1</Sup>选自OCH<Sup>3</Sup>、CH<Sup>3</Sup>、Cl或Br；R<Sup>2</Sup>选自OCH<Sup>3</Sup>、CH<Sup>3</Sup>或F；R<Sup>3</Sup>选自4-F、4-Cl、4-OCH<Sup>3</Sup>、4-NO<Sub>2</Sub>、3-Cl或3-CH<Sub>3</Sub>。本发明二氢吡唑磺酰胺类衍生物对vemurafenib有耐药性的人黑色素瘤细胞A375<Sup>R</Sup>和人结直肠癌细胞COLO 205<Sup>R</Sup>有良好的抗增殖活性。(The invention discloses a dihydropyrazole sulfonamide compound and a preparation method and application thereof, wherein the dihydropyrazole sulfonamide compound has the following general formula: wherein R is 1 Is selected from OCH 3 、CH 3 Cl or Br; r 2 Is selected from OCH 3 、CH 3 Or F; r 3 Selected from 4-F, 4-Cl, 4-OCH 3 、4‑NO 2 3-Cl or 3-CH 3 . The dihydropyrazole sulfonamide derivative has drug resistance to vemurafenib, namely human melanoma cell A375 R And human colorectal cancer cell CO L O205 R Has good antiproliferative activity.)

一种二氢吡唑磺酰胺类化合物及其制备方法和用途

技术领域

本发明涉及一种二氢吡唑磺酰胺类化合物及其制备方法和用途。本发明二氢吡唑磺酰胺类衍生物对vemurafenib有耐药性的人黑色素瘤细胞A375^R和人结直肠癌细胞COLO205^R有良好的抗增殖活性。

背景技术

二氢吡唑是极为重要的含氮的五元杂环化合物，具有较强的生物活性，如抗癌、抗病毒、抗真菌、抗结核、杀虫等活性。在自然界中，它可以由适当取代的不饱和酮类化合物生物转化，而自然产生的具有生物活性的类黄酮和异黄酮可作为其理想的合成单元。它是一个具有各种药理特性的结构性存在亚基，存在普遍药用生物活性的活性化合物先导。更为重要的是：因为多是手性的，导致环上的取代及分子的构象具有更大的多变性，具有更好的生物活性潜质。

靶向抑制剂在肿瘤治疗中占有重要地位，但对药物的耐药性也成为了抑制剂获得长久临床益处的最大的限制性因素。独立于MAPK信号通路的耐药机制中主要由PI3K作为代偿信号通路被激活与受体络氨酸激酶(RTK)的参与。以靶标生物大分子的三维结构为基础的直接药物设计方法可以在药理活性之前对数据库中的分子进行筛选，在虚拟筛选中药理实验中的生物样品被计算机的酶或者受体等生物大分子的三维图像代替，化合物样品将被与数据库中的化合物代替，以分子对接代替体外的药理筛选。这种方法大大缩短了药物研发的时间并提高了效率，目前已成为药物化学研究的常规手段。

本发明中，根据计算机辅助药物设计的方法，采用“组合药效团”的设计策略，选取在结合模型中起重要作用的药效团引入到具有良好活性的3,5-二芳基-4,5-二氢吡唑骨架上，筛选并合成具有良好空间互补性和结合能力的新结构作为抗耐药肿瘤细胞的化合物。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新型的二氢吡唑磺酰胺类化合物及其制备方法和用途。本发明二氢吡唑磺酰胺类化合物对vemurafenib有耐药性的人黑色素瘤细胞A375^R和人结直肠癌 COLO 205^R有良好的抗增殖活性。

所述人黑色素瘤细胞A375^R和人结直肠癌细胞COLO 205^R能对vemurafenib抑制剂产生耐药性。

本发明二氢吡唑磺酰胺类化合物，具有如下通式：

其中，R₁选自OCH₃、CH₃、Cl或Br；R₂选自OCH₃、CH₃或F；R₃选自4-F、4-Cl、4-OCH₃、 4-NO₂、3-Cl或3-CH₃。

进一步地，所述二氢吡唑磺酰胺类化合物的结构式优选如下：

本发明二氢吡唑磺酰胺类化合物的制备方法，包括如下步骤：

步骤1：将苯乙酮衍生物A(16mmol)溶于30mL无水乙醇中，然后缓慢滴加5mL浓度为10％的NaOH溶液，再加入苯甲醛衍生物B(16mmol)，常温下搅拌反应，并用TLC监测反应进度，约3h后，产物以固体的形式析出；反应完成后，静置，抽滤，重结晶，获得查尔酮衍生物C；

所述苯乙酮衍生物A的结构式为：

所述苯甲醛衍生物B的结构式为：

所述查尔酮衍生物C的结构式为：

其中，R₁选自OCH₃、CH₃、Cl或Br；R₂选自OCH₃、CH₃或F。

步骤2：取干燥后的查尔酮衍生物C(10mmol)溶于25mL的正丙醇中，然后再加入2mL 80％的水合肼，加热到90℃回流，TLC不断监测反应进度，反应完全后，将反应液于2-6℃下静置8-12h，产物自动析出，静置，抽滤并用乙醇重结晶得化合物D——3,5-二芳基-4,5-二氢-1H-吡唑衍生物。

其中，R₁选自OCH₃、CH₃、Cl或Br；R₂选自OCH₃、CH₃或F。

步骤3：将化合物D(2mmol)溶于15mL二氯甲烷中，然后加入3mL三乙胺和不同取代的苯磺酰氯(2.4mmol)，室温下搅拌并用TLC检测，反应完后，将反应液用水萃取，有机相用无水Na₂SO₄干燥，真空浓缩，最后柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1：4，v/v)分离纯化得到目标化合物。

所述不同取代的苯磺酰氯的结构式如下所示：

其中，R₃选自4-F、4-Cl、4-OCH₃、4-NO₂、3-Cl或3-CH₃。

步骤1中，苯乙酮衍生物A与苯甲醛衍生物B的物质的量之比为1:1。

步骤2中，每毫摩尔查尔酮衍生物C加入0.2mL 80％的水合肼。

步骤3中，化合物D和不同取代的苯磺酰氯的物质的量比为1:1.2。

本发明二氢吡唑磺酰胺类化合物的用途，是在制备P13K抑制剂中的应用。具体的，本发明二氢吡唑类衍生物对vemurafenib有耐药性的人黑色素瘤细胞A375^R和人结直肠癌细胞 COLO 205^R有良好的抗增殖活性。

具体实施方式

通过以下实施例进一步详细说明本发明，但应注意本发明的范围并不受这些实施例的任何限制。

实施例1：1-((4-氟苯基)磺酰基)-3,5-双(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物1) 的制备

1、取一个50mL圆底烧瓶，将4-甲氧基苯乙酮A(2.403g，16mmol)溶于30mL无水乙醇，然后缓慢滴加5mL浓度为10％的NaOH，再加入4-甲氧基苯甲醛B(2.178g，16mmol)。常温下搅拌反应，并用TLC监测反应进度，约3h后，产物以固体的形式析出。反应完成后，静置，抽滤，重结晶，得查尔酮衍生物C。

2、取干燥后的查尔酮衍生物C(2.683g，10mmol)溶于25mL的正丙醇，然后再加入2mL 80％的水合肼，加热到90℃回流，TLC不断监测反应进度，反应完全后，将反应液置于冰箱冷却过夜，产物自动析出，静置，抽滤并用乙醇重结晶得3,5-二芳基-4,5-二氢-1H-吡唑衍生物D。

3、取一个50mL圆底烧瓶中，将化合物D(565mg，2mmol)溶于15mL二氯甲烷，然后加入3mL三乙胺和4-氟苯磺酰氯(467mg，2.4mmol)，室温下搅拌并用TLC检测。反应完后，将反应液用水萃取，有机相用无水Na₂SO₄干燥，真空浓缩，最后柱层析(乙酸乙酯：石油醚＝1：4)分离纯化得到目标化合物1。产物1为白色固体，产率为27.3％，熔点 138.3–139.5℃。¹HNMR(600MHz,DMSO)δ7.85(dd,J＝8.8,5.2Hz,2H),7.68–7.55(m,2H), 7.46–7.35(m,2H),7.28(d,J＝8.6Hz,2H),7.00–6.93(m,2H),6.86(dd,J＝27.6,8.7Hz,2H), 4.88–4.81(m,1H),3.79–3.74(m,3H),3.71(d,J＝22.9Hz,3H),3.56(dd,J＝17.7,11.1Hz,1H), 3.08(dt,J＝15.8,7.9Hz,1H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ166.60,164.06,161.63,159.44, 156.61,132.45,132.21,132.18,131.16,131.06,128.55,128.13,123.22,116.07,115.84,114.12,114.08,64.73,55.43,55.33,43.70.

实施例2：3,5-双(4-甲氧基苯基)-1-((4-甲氧基苯基)磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物2)的制备

制备方法同实施例1。以4-甲氧基苯磺酰氯代替4-氟苯磺酰氯，得到白色固体，产率为 27.1％，熔点142.8-143.9℃。¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.76(t,J＝5.9Hz,2H),7.61(d,J＝8.8 Hz,2H),7.28(d,J＝8.6Hz,2H),6.89(t,J＝9.0Hz,4H),6.85(d,J＝8.7Hz,2H),4.86–4.78(m, 1H),3.82(s,6H),3.79(s,3H),3.44(dd,J＝17.1,11.2Hz,1H),3.06(dd,J＝17.1,9.0Hz,1H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ163.23,161.49,159.29,156.37,132.96,130.71,128.54,128.08,127.26, 123.45,114.09,114.05,113.94,64.77,55.59,55.42,55.33,43.85.

实施例3：3,5-双(4-甲氧基苯基)-1-((4-硝基苯基)磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物3) 的制备

制备方法同实施例1。以4-硝基苯磺酰氯代替4-氟苯磺酰氯，得到淡黄色固体，产率为35.2％，熔点121.4–122.6℃。¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ8.19(d,J＝8.7Hz,2H),7.87(d,J＝8.7Hz,2H),7.64(d,J＝8.8Hz,2H),7.10(t,J＝17.9Hz,2H),6.91(d,J＝8.8Hz,2H),6.74(d,J ＝8.6Hz,2H),5.06(dd,J＝11.1,7.0Hz,1H),3.83(s,3H),3.76(s,3H),3.58(dd,J＝17.2,11.1Hz, 1H),3.16(dd,J＝17.2,7.0Hz,1H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ161.85,159.72,157.05,149.96, 142.60,131.77,129.21,128.61,128.31,123.71,122.87,114.24,114.00,64.62,60.43,55.46,55.34, 43.35,21.09,14.22.

实施例4：1-((3-氯苯基)磺酰基)-3,5-双(4-甲氧基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物4) 的制备

制备方法同实施例1。以3-氯苯磺酰氯代替4-氟苯磺酰氯，得到白色固体，产率为21.6％，熔点146.9–148.1℃。¹H NMR(600MHz,CDCl₃)δ7.69(t,J＝7.2Hz,1H),7.62(t,J＝14.8Hz, 3H),7.44(t,J＝10.3Hz,1H),7.33(t,J＝7.9Hz,1H),7.18(t,J＝8.8Hz,2H),6.90(d,J＝8.7Hz, 2H),6.78(d,J＝8.5Hz,2H),5.00(dd,J＝11.0,7.6Hz,1H),3.82(d,J＝5.0Hz,3H),3.78(s,3H), 3.53(dd,J＝17.2,11.1Hz,1H),3.13(dd,J＝17.2,7.5Hz,1H).¹³CNMR(101MHz,CDCl₃)δ 161.66,159.55,156.58,138.31,134.81,132.88,131.97,129.87,128.57,128.27,128.18,126.30, 123.21,114.15,114.01,64.67,55.44,55.28,43.47.

实施例5：1-((4-氟苯基)磺酰基)-5-(4-甲氧基苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑 (化合物5)的制备

制备方法同实施例1。以4-甲基苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，得到白色固体，产率为35.1％. 熔点165.1–166.3℃.¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.88–7.79(m,2H),7.61(d,J＝8.2Hz,2H), 7.28–7.20(m,4H),7.17–7.08(m,2H),6.88–6.81(m,2H),4.95(dd,J＝11.1,8.4Hz,1H),3.83 (s,3H),3.55(dd,J＝17.2,11.2Hz,1H),3.15(dd,J＝17.3,8.4Hz,1H),2.41(s,3H).¹³C NMR (101MHz,CDCl₃)δ166.60,164.06,159.46,156.90,141.20,132.40,132.27,132.24,131.13, 131.03,129.45,128.15,127.85,126.88,116.08,115.85,114.09,64.80,55.33,43.63,21.54.

实施例6：5-(4-甲氧基苯基)-1-((4-硝基苯基)磺酰基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物6)的制备

制备方法同实施例1。以4-甲基苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以4-硝基苯磺酰氯代替4- 氟苯磺酰氯，得到淡黄色固体，产率为23.5％，熔点132.6–133.8℃。¹H NMR(600MHz,CDCl₃) δ8.20(dd,J＝6.3,4.7Hz,2H),7.88(t,J＝5.5Hz,2H),7.60(d,J＝8.1Hz,2H),7.22(d,J＝8.0 Hz,2H),7.13(t,J＝5.8Hz,2H),6.75(t,J＝5.8Hz,2H),5.10(dd,J＝11.2,6.9Hz,1H),3.77(s, 3H),3.61(dd,J＝17.3,11.2Hz,1H),3.18(dd,J＝17.3,6.9Hz,1H),2.39(s,3H).¹³C NMR(101 MHz,CDCl₃)δ159.75,157.30,149.96,142.70,141.55,131.69,130.05,129.56,129.17,128.32, 127.53,126.90,123.70,119.94,114.00,64.67,60.42,55.34,43.27,21.55,21.08,14.21.

实施例7：5-(4-甲氧基苯基)-1-((4-甲氧基苯基)磺酰基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1H- 吡唑(化合物7)的制备

制备方法同实施例1。以4-甲基苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以4-甲氧基苯磺酰氯代替 4-氟苯磺酰氯，得到白色固体，产率为41.3％，熔点163.7–164.9℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃) δ7.80(d,J＝8.2Hz,2H),7.61(d,J＝7.9Hz,2H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),7.22(d,J＝7.8Hz, 2H),6.94(d,J＝8.2Hz,2H),6.88(d,J＝8.2Hz,2H),4.86(t,J＝10.0Hz,1H),3.85(d,J＝7.0Hz, 3H),3.83(s,3H),3.50(dd,J＝17.1,11.1Hz,1H),3.11(dd,J＝17.1,9.0Hz,1H),2.40(s,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ163.25,159.31,156.62,140.97,132.91,130.70,129.38,128.11,128.07, 127.33,126.89,114.10,113.96,64.84,55.62,55.34,53.49,43.80,21.52.MS(ESI):427.1 (C₂₄H₂₄N₂O₄S,[M+H]⁺).

实施例8：1-((3-氯苯基)磺酰基)-5-(4-甲氧基苯基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑 (化合物8)的制备

制备方法同实施例1。以4-甲基苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以3-氯苯磺酰氯代替4-氟苯磺酰氯，得到淡黄色固体，产率为37.9％，熔点150.8–151.9℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃) δ7.75–7.70(m,1H),7.64(t,J＝5.2Hz,3H),7.49(ddd,J＝8.0,1.9,0.9Hz,1H),7.37(t,J＝7.9 Hz,1H),7.24(t,J＝5.6Hz,2H),7.22–7.18(m,2H),6.84–6.78(m,2H),5.05(dd,J＝11.1,7.5 Hz,1H),3.82(s,3H),3.60(dd,J＝17.3,11.2Hz,1H),3.19(dd,J＝17.3,7.5Hz,1H),2.41(s,3H). ¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ159.57,156.87,141.22,138.36,134.81,132.90,131.89,129.89, 129.47,128.30,128.14,127.83,126.90,126.26,114.00,64.74,55.28,43.39,21.54.

实施例9：5-(4-氯苯基)-1-((4-氟苯基)磺酰基)-3-(对甲苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物9)的制备

制备方法同实施例1。以4-甲基苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以4-氯苯甲醛代替4-甲氧基苯甲醛，得到白色固体，产率为31.2％，熔点171.9–173.3℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.92–7.85(m,2H),7.59(d,J＝8.2Hz,2H),7.38–7.30(m,4H),7.22(t,J＝7.6Hz,2H),7.20–7.13(m,2H),4.92(dd,J＝11.2,8.9Hz,1H),3.58(dd,J＝17.3,11.3Hz,1H),3.11(dd,J＝17.3, 8.9Hz,1H),2.41(s,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ166.79,164.25,156.90,141.44,139.09, 134.03,131.75,131.72,131.27,131.18,129.50,129.00,128.21,127.54,126.90,116.28,116.05, 64.47,43.74,21.55.

实施例10：3-(4-氟苯基)-1-((4-氟苯基)磺酰基)-5-(对甲苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物10)的制备

制备方法同实施例1。以4-氟苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以4-甲基苯甲醛代替4-甲氧基苯甲醛，得到白色固体，收率为43.9％，熔点151.1–152.1℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.88–7.82(m,2H),7.73–7.67(m,2H),7.27–7.22(m,2H),7.17–7.08(m,6H),4.97(dd,J＝11.2,8.8Hz,1H),3.57(dd,J＝17.3,11.2Hz,1H),3.15(dd,J＝17.3,8.8Hz,1H),2.37(s,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ166.70,165.44,164.16,162.94,155.74,138.12,137.25,132.10,131.19, 131.10,129.50,128.97,128.89,126.90,126.77,116.17,116.06,115.95,115.84,65.18,43.76, 21.19.

实施例11：1-((4-氯苯基)磺酰基)-3-(4-氟苯基)-5-(对甲苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物11)的制备

制备方法同实施例1。以4-氟苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以4-甲基苯甲醛代替4-甲氧基苯甲醛，以4-氯苯磺酰氯代替4-氟苯磺酰氯得到淡黄色固体，产率为34.9％，熔点133.6–135.1℃。¹H NMR(400MHz,CDCl3)δ7.78–7.74(m,2H),7.73–7.68(m,2H),7.45– 7.41(m,2H),7.23(d,J＝8.1Hz,2H),7.17–7.09(m,4H),4.97(dd,J＝11.2,8.7Hz,1H),3.58(dd,J＝17.3,11.2Hz,1H),3.16(dd,J＝17.3,8.6Hz,1H),2.37(s,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.46,162.96,155.79,139.74,138.18,137.14,134.57,129.76,129.50,129.07,128.99,128.90, 126.87,126.84,126.77,116.07,115.85,65.18,43.73,21.20.

实施例12：5-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1-((4-氟苯基)磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物12)的制备

制备方法同实施例1。以4-氟苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以4-溴苯甲醛代替4-甲氧基苯甲醛，得到白色固体，产率为23.5％，熔点153.2–154.4℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.90 –7.84(m,2H),7.72–7.66(m,2H),7.52–7.47(m,2H),7.28–7.23(m,2H),7.22–7.15(m,2H), 7.15–7.08(m,2H),4.95(dd,J＝11.3,9.0Hz,1H),3.59(dd,J＝17.3,11.3Hz,1H),3.11(dd,J＝ 17.3,9.0Hz,1H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ166.86,165.54,164.31,163.03,155.72,139.42, 132.01,131.77,131.74,131.25,131.16,129.02,128.93,128.51,126.62,126.59,116.36,116.14, 115.92,64.65,43.69.

实施例13：3,5-双(4-甲氧基苯基)-1-(间甲苯磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物13)的制备

制备方法同实施例1。以3-甲基苯磺酰氯代替4-氟苯磺酰氯，得到淡黄色固体，产率为 29.1％，熔点99.8–101.6℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.70–7.63(m,3H),7.60(s,1H),7.36 (dd,J＝6.4,5.8Hz,2H),7.32–7.29(m,1H),7.28–7.25(m,1H),6.96–6.90(m,2H),6.89–6.83 (m,2H),4.94(dd,J＝11.1,8.5Hz,1H),3.86(s,3H),3.82(s,3H),3.49(dd,J＝17.1,11.2Hz,1H), 3.12(dd,J＝17.1,8.4Hz,1H),2.37(s,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ161.51,159.33,156.29, 138.80,135.86,133.75,132.78,128.82,128.53,128.5,128.16,125.59,123.45,114.06,114.02, 64.63,55.41,55.29,43.71,21.27.

实施例14：5-(4-甲氧基苯基)-3-(对甲苯基)-1-(间甲苯磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物14)的制备

制备方法同实施例1。以4-甲基苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以3-甲基苯磺酰氯代替4- 氟苯磺酰氯，得到白色固体，产率为23.9％，熔点138.6–141.4℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃) δ7.72–7.65(m,1H),7.64–7.57(m,3H),7.38–7.32(m,2H),7.29(t,J＝2.4Hz,1H),7.28– 7.25(m,1H),7.22(d,J＝8.0Hz,2H),6.90–6.80(m,2H),4.96(dd,J＝11.2,8.4Hz,1H),3.82(s, 3H),3.51(dd,J＝17.2,11.2Hz,1H),3.13(dd,J＝17.2,8.4Hz,1H),2.40(s,3H),2.37(s,3H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ159.34,156.54,140.98,138.82,135.92,133.76,132.71,129.38,128.79, 128.55,128.18,128.07,126.85,125.55,114.02,64.70,55.29,43.64,21.52,21.27.

实施例15：5-(4-溴苯基)-3-(4-氟苯基)-1-(间甲苯磺酰基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物 15)的制备

制备方法同实施例1。以4-氟苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以4-溴苯甲醛代替4-甲氧基苯甲醛，以3-甲基苯磺酰氯代替4-氟苯磺酰氯，得到白色固体，产率为20.7％，熔点134.4–136.5℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.73–7.65(m,3H),7.61(s,1H),7.51–7.44(m,2H),7.42–7.35(m,2H),7.28–7.23(m,2H),7.14–7.07(m,2H),4.97(dd,J＝11.3,8.9Hz,1H), 3.55(dd,J＝17.2,11.3Hz,1H),3.10(dd,J＝17.2,8.8Hz,1H),2.40(s,3H).¹³C NMR(101MHz, CDCl₃)δ165.44,162.94,155.40,139.61,139.12,135.49,134.17,131.92,128.97,128.89,128.77, 128.57,126.83,126.80,125.59,122.14,116.06,115.84,64.57,43.66,21.36.

实施例16：5-(4-溴苯基)-1-((3-氯苯基)磺酰基)-3-(4-氟苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物16)的制备

制备方法同实施例1。以4-氟苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以4-溴苯甲醛代替4-甲氧基苯甲醛，以3-氯苯磺酰氯代替4-氟苯磺酰氯，得到白色固体，产率为41.3％，熔点155.2–156.9℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.78–7.75(m,1H),7.75–7.68(m,3H),7.56(ddd, J＝8.0,2.0,1.0Hz,1H),7.50–7.41(m,3H),7.25–7.21(m,2H),7.16–7.09(m,2H),5.02(dd,J＝11.3,8.4Hz,1H),3.62(dd,J＝17.3,11.3Hz,1H),3.14(dd,J＝17.3,8.4Hz,1H).¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.56,163.06,155.75,139.07,137.65,135.15,133.40,132.02,130.16, 129.04,128.95,128.54,128.32,126.58,126.55,126.40,122.47,116.17,115.95,64.63,43.60.

实施例17：1-((3-氯苯基)磺酰基)-3-(4-氟苯基)-5-(对甲苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑(化合物17)的制备

制备方法同实施例1。以4-氟苯乙酮代替4-甲氧基苯乙酮，以4-甲基苯甲醛代替4-甲氧基苯甲醛，以3-氯苯磺酰氯代替4-氟苯磺酰氯得到淡黄色固体，产率为21.7％，熔点111.1–113.2℃。¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.76–7.69(m,3H),7.65(dd,J＝4.8,3.0Hz,1H),7.54–7.49(m,1H),7.39(t,J＝7.9Hz,1H),7.19(d,J＝8.1Hz,2H),7.15–7.09(m,4H),5.07(dd, J＝11.2,7.9Hz,1H),3.61(dd,J＝17.3,11.2Hz,1H),3.19(dd,J＝17.3,7.9Hz,1H),2.37(s,3H). ¹³C NMR(101MHz,CDCl₃)δ165.46,162.95,155.75,138.39,138.16,136.77,134.90,133.05, 129.97,129.47,129.00,128.91,128.20,126.88,126.33,116.08,115.86,65.13,43.56,21.24.

实施例18：对vemurafenib具有耐药性的肿瘤细胞A375^R和COLO 205^R的培养

我们选取人黑色素瘤细胞A375和人结直肠癌细胞COLO 205作耐药性培养。将A375和 COLO 205在培养基培养到对数生长期。取对数生长期的细胞稀释后接种至T25培养瓶中，细胞数目选定3000000个，继续在细胞培养箱中培养24h。在耐药细胞培养时，先将vemurafenib 抑制剂加入培养基中，A375的抑制剂浓度为5μmol/L，COLO 205的抑制剂浓度为10μmol/L，然后将含有抑制剂的培养基加入到培养瓶中。放置培养箱中培养48h后，显微镜下观察，初期可见细胞大量死亡，PBS清洗后加入不含抑制剂的培养基培养，待细胞增殖至最初密度继续加药培养。直至细胞不明显死亡得到耐药细胞A375^R和COLO 205^R。

实施例19：二氢吡唑磺酰胺类衍生物(化合物1-17)对A375、A375^R、COLO 205和COLO 205^R四株肿瘤细胞系的作用活性评价

我们采用CCK-8法测定了二氢吡唑磺酰胺类衍生物(化合物1-17)对A375、A375^R、COLO 205和COLO 205^R四株肿瘤细胞株的生长抑制能力。将受试肿瘤细胞株在培养基培养到对数生长期。取对数生长期的细胞稀释后将其接种至96孔板中，继续在细胞培养箱中培养24h。在初筛中，将被测样品加入96孔板中，并且每一个化合物均设置3个作为平行试验。放置培养箱中培养48h后将各个孔里加入CCK-8溶液，继续培养3h。置于摇床上震荡后，利用酶标仪在波长为450nm下检测吸光度(OD值)，计算待测样品对肿瘤细胞株的存活率影响。测得的化合物1-17及对照品vemurafenib和PI3K抑制剂BEZ235浓度为10μmol/L 时的抑制率见表1所示。

表1.化合物对A375、A375^R、COLO 205和COLO 205^R肿瘤细胞株的抑制率(100％)

注:抑制率表示化合物浓度为10μmol/L时三个平行实验的平均值，A375^R和COLO205^R是对vemurafenib 有耐药性的细胞。

从表1中的数据可以看出，vemurafenib对A375^R没有抑制作用，对COLO 205^R基本上没有抑制作用，成功建立耐药黑色素瘤细胞系，化合物8对A375^R和COLO 205^R都有很好的抑制作用，有望成为解决临床上肿瘤细胞耐药性的先导化合物。