阅读说明：本技术 一种具有hdac3抑制活性的psa衍生物及其应用 (PSA derivative with HDAC3 inhibitory activity and application thereof ) 是由 刘丹 赵临襄 徐祺皓 包宇 魏云飞 景永奎 王蕊 于 2020-05-13 设计创作，主要内容包括：本发明属于医药技术领域,涉及一系列具有抗肿瘤活性的PSA衍生物,具体涉及含有(E)-3-溴-4-羟基苯基-2-肟基类片段化合物及其药学上可接受的盐、水合物,及其包含所述化合物和其药学上可接受的盐、水合物作为活性成分的药物组合物,以及它们在制备组蛋白去乙酰化酶抑制剂,用于制备治疗和/或预防癌症药物中的用途。本发明涉及的化合物、及其药学上可接受的盐,水合物如式Ⅰ所示,其中,R、n如权利要求和说明书所述。<Image he="306" wi="471" file="DDA0002489041710000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention belongs to the technical field of medicines, relates to a series of PSA derivatives with antitumor activity, and particularly relates to (E) -3-bromo-4-hydroxyphenyl-2-hydroxyimino fragment compounds, pharmaceutically acceptable salts and hydrates thereof, pharmaceutical compositions containing the compounds, the pharmaceutically acceptable salts and the hydrates thereof as active ingredients, and applications of the compounds, the pharmaceutically acceptable salts and the hydrates thereof in preparation of histone deacetylase inhibitors and medicines for treating and/or preventing cancers.The invention relates to a compound and a pharmaceutically acceptable salt, hydrate and hydrate thereof, which are shown as a formula I, wherein R, n is shown in the claims and the specification.)

一种具有HDAC3抑制活性的PSA衍生物及其应用

技术领域：

本发明属于医药技术领域，涉及一系列具有抗肿瘤活性的PSA衍生物，具体涉及含有 (E)-3-溴-4-羟基苯基-2-肟基类片段化合物及其药学上可接受的盐、水合物，及其包含所述化合物和其药学上可接受的盐、水合物作为活性成分的药物组合物，以及它们在制备组蛋白去乙酰化酶抑制剂，用于制备治疗和/或预防癌症药物中的用途。

背景技术：

组蛋白去乙酰化酶(Histone Deacetylases,HDACs)在基因表达、信号通路传导过程中都发挥了重要的调节作用。在肿瘤发生的前期，可以观察到肿瘤细胞内Lys16去乙酰化及 Lys20去甲基化组蛋白H4的含量明显高于正常细胞。HDAC与肿瘤细胞恶性表型的高度相关，使其成为抗肿瘤药物研究的重要靶点。

有报道指出，HDAC3与核因子κB(nuclear factorκB,NF-κB)的激活密切相关。在白血病细胞K562中，敲减HDAC3能够降低IκBα的表达及IκBα-HDAC3复合体的形成，进而降低NF-κB的表达、减弱其活性。HDAC3还能够参与调节雄激素受体(androgen receptor, AR)信号通路。微阵列分析实验表明，HDAC3在胃癌细胞SGC-7901中表现出明显的高表达，且与miR-454的表达直接相关。HDAC3能够促进miR-454表达，进而抑制抑癌基因 CHD5的表达。敲减或抑制HDAC3能够有效抑制该通路的传导，降低胃癌细胞增殖能力。在乳腺癌细胞MDA-MB-231、前列腺癌细胞LNCaP和胆管癌细胞HuCCT1中的研究表明， HDAC3能够调节p53 K120乙酰化水平。抑制HDAC3能够激活并提高p53稳定性，阻止寡聚化的发生，诱导促凋亡基因表达，发挥生长抑制作用。在乳腺癌细胞MCF-7中，敲除 HDAC3能够提高PHLPP1(pleckstrinhomology domain leucine-rich repeat phosphatases 1) 的表达量，从而降低蛋白激酶B(protein kinase B,AKT)磷酸化，抑制PI3K-AKT通路的激活。同时有报道指出，HDAC3可以直接调节AKT的磷酸化水平。在白血病细胞THP-1 中，HDAC3可以作为AKT的伴侣蛋白直接调节其Lys20乙酰化状态。

本发明在参考文献的基础上，设计并合成了一系列含有(E)-3-溴-4-羟基苯基-2-肟基类化合物，及其药学上可接受的盐、水合物，体外抗肿瘤活性测试结果表明，其具有良好的抗肿瘤活性，并表现出较好的HDAC3抑制作用。

发明内容

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本发明旨在提供一种具有HDAC3抑制活性且具有良好抗肿瘤活性的PSA衍生物及其制备方法，以及该类化合物作为组蛋白去乙酰化酶抑制剂在预防和/或治疗肿瘤中的应用。其中，化合物包含(E)-3-溴-4-羟基苯基-2-肟基片段。

本发明涉及式Ⅰ所示的化合物、及其药学上可接受的盐，水合物：

其中，

R选自一个或多个如下取代基：H、(C₂-C₄)酰基、(C₁-C₆)烷基、(C₆-C₁₀)芳基取代C1-C6酯基、(C₆-C₁₀)芳基、(C₁-C₆)烷氧基(C₁-C₆)烷基、羟基、羧基、2-氨基(C₆-C₁₀) 芳基酰胺基、异羟肟酸；所述(C₆-C₁₀)芳基可以被卤素、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基、硝基、氨基、羟基取代；

n为1-7之间的整数；

本发明优选定义如式Ⅰ所示的化合物、及其药学上可接受的盐，水合物：

其中，

R选自一个或多个如下取代基：(C₁-C₆)烷基、(C₆-C₁₀)芳基、羟基、羧基、2-氨基(C₆-C₁₀)芳基酰胺基、异羟肟酸；所述芳基可以被卤素、(C₁-C₆)烷基、(C₁-C₆)烷氧基、硝基、氨基、羟基取代；

n为1-7之间的整数；

本发明优选定义如式Ⅰ所示的化合物、及其药学上可接受的盐，水合物：

其中，

R选自一个或多个如下取代基：(C₁-C₄)烷基、苯基、羟基、羧基、2-氨基苯基酰胺基、异羟肟酸；所述苯基可以被卤素、(C₁-C₄)烷基、(C₁-C₄)烷氧基、硝基、氨基、羟基取代；

本发明优选定义如式Ⅰ所示的化合物、及其药学上可接受的盐，水合物：

R选自一个或多个如下取代基：甲基、乙基、羟基、羧基、异羟肟酸、

n为1-7之间的整数；

具体的，本发明优选如下化合物：

(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基-N-丙基丙酰胺

(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-N-丁基-2-肟基丙酰胺

(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-N-(2-羟乙基)-2-肟基丙酰胺

(E)-3-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)丙酸

(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-N-(2-羟氨基-2-氧代乙基)-2-肟基丙酰胺

(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-N-(3-羟氨基-3-氧代丙基)-2-肟基丙酰胺

(E)-4-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基丁酰胺

(E)-5-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基戊酰胺

(E)-6-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基己酰胺

(E)-7-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基庚酰胺

(E)-8-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基辛酰胺

(E)-N-(2-((2-氨基苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酰胺

(E)-N-(3-((2-氨基苯基)氨基)-3-氧代丙基)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酰胺

(E)-N-(2-氨基苯基)-4-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基丁酰胺

(E)-N-(2-氨基苯基)-5-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基戊酰胺

(E)-N-(2-氨基苯基)-6-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基己酰胺

(E)-N-(2-氨基苯基)-7-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基庚酰胺

(E)-N-(2-氨基苯基)-8-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基辛酰胺

或其水合物、溶剂化物、代谢化物以及药学上可接受的盐或它的前药。

此外，本发明还包括本发明化合物的前药。依据本发明，它们自身可能具有较弱的活性甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或者另外的方式) 被转化成相应的生物活性形式。

本发明包括药物组合物，该组合物含有上式Ⅰ所包含的片段的化合物和药学上可接受的赋形剂。所述药学上可接受的赋形剂是指任何可用于药物领域的稀释剂、辅助剂和/或载体。本发明的化合物可以与其他活性成分组合使用，只要他们不产生其他不利的作用，例如过敏反应。

本发明的药物组合物可配制成若干种剂型，其中含有药物领域中常用的一些赋形剂，例如，口服制剂(如片剂，胶囊剂，溶液或混悬液)；可注射的制剂(如可注射的溶液或者混悬液，或者是可注射的干燥粉末，在注射前加入注射用水可立即使用)；局部制剂(例如软膏或溶液)。

用于本发明药物组合物的载体是药物领域中可得到的常见类型，包括：口服制剂用的粘合剂、润滑剂、崩解剂、助溶剂、稀释剂、稳定剂、悬浮剂、色素、矫味剂等；可注射制剂用的防腐剂、加溶剂、稳定剂等；局部制剂用的基质、稀释剂、润滑剂、防腐剂等。药物制剂可以经口服或胃肠外方式(例如静脉内、皮下、腹膜内或局部)给药，如果某些药物在胃部条件下是不稳定的，可将其配制成肠衣片剂。

通过体外抑酶试验筛选，我们发现本发明化合物可抑制组蛋白去乙酰化酶活力，因此，本发明化合物可用于制备组蛋白去乙酰化酶抑制剂，用于制备治疗与组蛋白去乙酰化酶活性异常表达相关的疾病，如各种癌症。

通过体外活性筛选及体内药效学研究，我们发现本发明化合物具有抗肿瘤活性，因此本发明化合物可以用于制备治疗和/或预防各种癌症的药物，如乳腺、肺、结肠、直肠、胃、前列腺、膀胱、子宫、胰腺和卵巢癌。

本发明活性化合物可作为唯一抗癌药物使用，或者与一种或多种其他抗肿瘤药物联合使用。联合治疗通过将各个治疗组分同时、顺序或隔开给药来实现。

下文中提供的实施例和制备例进一步阐明和举例说明本发明化合物及其制备方法。应当理解，下述实施例和制备例的范围并不以任何方式限制本发明的范围。

下面的合成路线描述了本发明的式Ⅰ化合物的制备，所有的原料都是通过这些路线中描述的方法、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终化合物都是通过这些路线中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。这些路线中应用的全部可变因数如下文的定义或如权利要求中的定义。

按照本发明的式Ⅰ的化合物，按照如下路线的方法制备目标化合物，各取代基如发明内容部分所定义。

试剂和条件：(a)Imidazolidine-2,4-dione,NaHCO₃,H₂O,120℃,10h；(b)NaOH,H₂O,N₂, 95℃,12h；(c)NaOH,NaHCO₃,HONH₂.HCl,con.HCl,H₂O,r.t.,12h；(d)HOBt,EDCI,DIEA, DMF,10h；(e)LiAlH₄,THF,r.t.1h；(f)SOCl₂,MeOH,r.t.,3h；(g)HONH₂.H₂O,NaOH,MeOH, r.t.,0.5h；h)NaOH,MeOH,60℃,0.5h.

本发明制备方法操作简单、条件温和，所得化合物均具有组蛋白去乙酰化酶抑制活性，抗肿瘤作用显著。

具体实施方式

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下面通过具体的实施例对本发明进行详细说明，但这些例举性实施方式的用途和目的仅用来例举本发明，并非对本发明的实际保护范围构成任何形式的任何限定，更非将本发明的保护范围局限于此。

实施例1：(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基-N-丙基丙酰胺的制备

步骤A：(E)-5-(3-溴-4-羟基苯基亚甲基)咪唑啉-2,4-二酮的制备

将5.0g(49.8mmol)海因置于250ml茄形瓶中，向其中加入50ml水加热到70℃使其溶解，随后用饱和NaHCO₃调节pH至7，加入4.4ml乙醇胺后升温到90℃，滴加10.0g(49.8mmol)3-溴-4-羟基苯甲醛的50ml C₂H₅OH溶液，滴毕，继续升温到120℃，反应过程中析出黄色固体，10h后停止反应，将反应物置于冰箱中过夜，抽滤，所得黄色固体用水(10 ml×3)洗涤，干燥后得13.0g(45.9mmol)目标化合物，收率为92.3％。

步骤B：3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-氧代丙酸的制备

将5.0g(17.7mmol)化合物(E)-5-(3-溴-4-羟基苯基亚甲基)咪唑啉-2,4-二酮置于250ml 茄形瓶中，向其中加入8.0g(200.0mmol)NaOH的120ml水溶液，在N₂保护下升温到95℃，随着反应进行固体逐渐溶解至澄清，12h后停止反应，将反应液冷却，抽滤，所得滤液用 10％H₂SO₄酸化析出红棕色固体，抽滤，用乙酸乙酯(50ml×3)萃取，合并有机相，水洗(30ml×2)次，减压干燥后得3.3g(12.7mmol)目标化合物，收率为72.8％。

步骤C：(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酸的制备

将3.0g(11.6mmol)化合物3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-氧代丙酸置于250ml茄形瓶中，在0 ℃下，向其中加入0.9g(23.2mmol)NaOH的60ml水溶液。将1.0g(11.6mmol)NaHCO₃和0.8g(11.6mmol)盐酸羟胺混合物用23ml水溶解，然后把该溶液滴加到前述混合液中，滴毕，转移至室温，用浓HCl调节pH至7，过夜后停止反应，抽滤，将滤液用0.5N HCl 调节pH至4，用乙酸乙酯萃取(80ml×3)，合并有机层，水洗，饱和氯化钠洗，浓缩得 2.7g(10mmol)目标化合物，收率为84.0％。

步骤D：(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基-N-丙基丙酰胺的制备

将0.5g(1.8mmol)化合物(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酸置于25ml茄形瓶中，加入10ml DMF，在0℃下，向其中加入0.3g(2.2mmol)HOBt和0.2ml(2.2mmol)正丙胺，搅拌5min，加入0.4g(2.2mmol)EDCI和1.0ml(5.5mmol)DIEA，搅拌10min，转移至室温，10h后停止反应。将反应液倒入4倍量水中，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，合并有机层，水洗，饱和氯化钠洗，浓缩后的粗品柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝1/3，V/V)，得0.26g 目标化合物，收率为45.2％。LC-MS:312.8[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.76 (1H,s,-NOH),10.08(1H,s,-PhOH),7.92(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.28(1H,d,J＝1.8Hz, -Ph),7.01(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝6.6Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),3.69(2H,s,-CH₂Ph), 3.08(2H,m),1.43(2H,m),0.80(3H,t,J＝7.2Hz)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ：163.6, 152.8,152.6,133.2,129.6,129.3,116.6,109.3,40.9,28.2,22.8,11.7.

按照实施例1的制备方法，选择适当的原料，制得实施例2-实施例4的化合物。

实施例2：(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-N-丁基-2-肟基丙酰胺的制备

LC-MS:326.8[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.73(1H,s,-NOH),10.02(1H,s,-PhOH),7.90(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.28(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝6.6Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),3.69(2H,s,-CH₂Ph),3.11(2H,m),1.40(2H, m),1.23(2H,m),0.85(3H,t,J＝7.2Hz)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ：163.6,152.8,152.7, 133.2,129.6,129.3,116.6,109.3,38.8,31.6,28.2,19.9,14.1.

实施例3：(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-N-(2-羟乙基)-2-肟基丙酰胺的制备

LC-MS:315.0[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.83(1H,s,-NOH),10.02(1H,s,-PhOH),7.60(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.30(1H,d,J＝2.4Hz,-Ph),7.02(1H,dd,J₁＝2.4Hz,J₂＝8.4Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),4.71(1H,t,J＝5.4Hz,-OH),3.69(2H,s,-CH₂Ph),3.42(2H,m),3.21(2H,m)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ：163.4,152.7,152.1,133.2,129.5,129.2,116.5,109.2,59.9,41.8,28.0.

实施例4：(E)-3-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)丙酸的制备

LC-MS:367.0[M+Na]⁺,343.0[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.87(1H,s, -NOH),10.11(1H,s,-PhOH),7.90(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.29(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝2.4Hz,J₂＝6Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),3.68(2H,s,-CH₂Ph),3.33 (2H,m),2.40(2H,t,J＝7.2Hz)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ：173.5,163.3,152.7,152.1, 133.2,129.5,129.2,116.5,109.2,35.3,34.2,28.0.

实施例5：(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-N-(2-羟氨基-2-氧代乙基)-2-肟基丙酰胺的制备

步骤A-步骤C的方法同实施例1的制备方法；

步骤D：甘氨酸甲酯的制备

将1.0g(13.3mmol)甘氨酸溶于甲醇中，加入SOCl₂ 3.9ml(26.7mmol)，室温下搅拌3h，蒸干，用乙醚打浆，抽滤，得目标化合物，收率为93.4％。

步骤E：(E)-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基)甘氨酸甲酯的制备

将1.0g(3.7mmol)(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酸溶于25ml DMF中，在0℃下再加入0.5g(5.5mmol)甘氨酸甲酯和0.6g(4.4mmol)HOBt，搅拌5min，依次加入0.85g(4.4mmol)EDCI和2ml(11.0mmol)DIEA，搅拌10min转移至室温，反应10h后停止反应。将反应液倒入4倍量水中，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，合并有机层，水洗，饱和氯化钠洗，浓缩后的粗品柱层析分离(乙酸乙酯/石油醚＝1/3，V/V)，得0.26g目标化合物，收率为30.5％。

步骤F：(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-N-(2-羟氨基-2-氧代乙基)-2-肟基丙酰胺的制备

将0.15g(0.44mmol)(E)-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基)甘氨酸甲酯溶于甲醇中，在0℃下用2N NaOH水溶液调节pH至11，滴加3ml(0.1g/2ml)NH₂OH水溶液，转移至室温，反应0.5h。将甲醇蒸干，用2N HCl调节pH至6～7，用乙酸乙酯萃取(10 ml×3)，合并有机层，水洗，饱和氯化钠洗，浓缩后的粗品柱层析分离(MeOH/DCM＝1/20， V/V)，得0.11g目标化合物，收率为73.3％。LC-MS:368.0[M+Na]⁺,344.0[M-H]^-；¹H-NMR (600MHz,DMSO-d₆)δ：11.95(1H,s,-NOH),10.17(2H,m,-NHOH and-PhOH),8.82(1H,s, -NHOH),7.94(1H,t,J＝5.4Hz,-CONH),7.30(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.02(1H,dd,J₁＝1.2Hz, J₂＝6.6Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝7.8Hz,-Ph),3.67(4H,m)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ： 165.9,163.6,152.7,151.7,133.2,129.5,129.2,116.5,109.2,40.4,28.0.

按照实施例5的制备方法，选择适当的原料，制得实施例6-实施例11的化合物。

实施例6：(E)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-N-(3-羟氨基-3-氧代丙基)-2-肟基丙酰胺的制备

LC-MS:357.7[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.87(1H,s,-NOH),10.44(1H,s,-NHOH),10.03(1H,s,-PhOH),8.74(1H,s,-NHOH),7.92(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.29(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝2.4Hz,J₂＝8.4Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph), 3.68(2H,s),3.34(2H,m),2.17(2H,t,J＝7.2Hz)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ：167.8,163.3,152.7,152.0,133.2,129.5,129.2,116.5,109.2,35.9,32.4,28.0.

实施例7：(E)-4-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基丁酰胺的制备

LC-MS:371.7[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.77(1H,s,-NOH),10.35(1H,s,-NHOH),10.02(1H,s,-PhOH),8.67(1H,s,-NHOH),8.00(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.29(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝8.4Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph), 3.68(2H,s),3.11(2H,m),1.93(2H,t,J＝7.2Hz),1.64(2H,m)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆) δ：169.1,163.6,152.7,152.4,133.2,129.5,129.2,116.5,109.2,38.8,30.3,28.1,25.7.

实施例8：(E)-5-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基戊酰胺的制备

LC-MS:385.8[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.76(1H,s,-NOH),10.32(1H,s,-NHOH),10.02(1H,s,-PhOH),8.65(1H,s,-NHOH),7.94(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.29(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝6.6Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph), 3.68(2H,s),3.11(2H,m),1.93(2H,t,J＝7.2Hz),1.44(2H,m),1.38(2H,m)；¹³C-NMR(151 MHz,DMSO-d₆)δ：169.4,163.6,152.8,152.6,133.3,129.6,129.3,116.6,109.3,38.8,32.4,29.2, 28.2,23.0.

实施例9：(E)-6-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基己酰胺的制备

LC-MS:402.1[M+H]⁺；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.75(1H,s,-NOH),10.31(1H,s,-NHOH),10.03(1H,s,-PhOH),8.65(1H,s,-NHOH),7.91(1H,t,J＝6.6Hz,-CONH),7.28(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝6.6Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph), 3.68(2H,s),3.10(2H,m),1.91(2H,m),1.47(2H,m),1.40(2H,m),1.18(2H,m)；¹³C-NMR(151 MHz,DMSO-d₆)δ：169.5,163.5,152.8,152.6,133.2,129.6,129.3,116.6,109.3,39.1,32.7,29.3, 28.2,26.4,25.3.

实施例10：(E)-7-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基庚酰胺的制备

LC-MS:438.0[M+Na]⁺,413.8[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.74(1H,s, -NOH),10.31(2H,s,-NHOH and-PhOH),8.67(1H,s,-NHOH),7.91(1H,t,J＝6.0Hz, -CONH),7.28(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝2.4Hz,J₂＝6.0Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),3.68(2H,s),3.10(2H,m),1.92(2H,m),1.45(2H,m),1.40(2H,m),1.20(4H,m)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ：169.5,163.6,152.8,152.6,133.2,129.6,129.3,116.6,109.3, 39.1,32.7,29.4,28.8,28.2,26.5,25.6.

实施例11：(E)-8-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基)-N-羟基辛酰胺的制备

LC-MS:429.8[M+H]⁺；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.74(1H,s,-NOH),10.32(1H,s,-NHOH),10.03(1H,s,-PhOH),8.65(1H,s,-NHOH),7.91(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.28(1H,d,J＝2.4Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝6.6Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph), 3.68(2H,s),3.10(2H,m),1.92(2H,m),1.46(2H,m),1.40(2H,m),1.21(6H,m)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ：169.6,163.6,152.8,152.6,133.2,129.6,129.3,116.6,109.3,39.1,32.7, 29.5,29.0,28.9,28.2,26.7,25.5.

实施例12：(E)-N-(2-((2-氨基苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酰胺的制备

步骤A-步骤E的方法同实施例5的制备方法；

步骤F：(E)-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酰基甘氨酸的制备

将0.3g(0.87mmol)(E)-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-(羟基亚氨基)丙酰胺基)甘氨酸甲酯溶于 10ml甲醇中，加入2ml(4.0mmol)2N NaOH水溶液，60℃反应0.5h，将反应液倒入冷水中，2N HCl调节pH至4～5，用乙酸乙酯萃取(10ml×3)，合并有机层，水洗，饱和氯化钠洗，浓缩，得0.27g目标化合物，收率为93.8％。

步骤G：(E)-N-(2-((2-氨基苯基)氨基)-2-氧代乙基)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酰胺的制备

将0.2g(0.61mmol)(E)-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酰基甘氨酸溶于10mlDMF中，在0℃下依次加入0.1g(0.91mmol)邻苯二胺和0.12g(0.91mmol)HOBt，搅拌5min，再依次加入0.17g(0.91mmol)EDCI和0.3ml(1.8mmol)DIEA，搅拌5min，转移至室温，反应 10h。将反应液倒入4倍量水中，用乙酸乙酯萃取(20ml×3)，合并有机层，水洗，饱和氯化钠洗，浓缩后的粗品柱层析分离(MeOH/DCM＝1/50，V/V)，得93mg目标化合物，收率为37.9％。LC-MS:418.8[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.98(1H,s,-NOH), 10.03(1H,s,-NHPh),9.19(1H,s,-PhOH),8.04(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.32(1H,d,J＝1.8 Hz,-Ph),7.11(1H,d,J＝7.8Hz,-Ph),7.04(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝6.0Hz,-Ph),6.91(1H,t,J＝ 7.2Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),6.70(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),6.52(1H,t,J＝7.2Hz, -Ph),4.89(2H,s,-NH₂Ph),3.99(2H,d,J＝6.0Hz),3.71(2H,s)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆) δ：167.8,163.7,152.8,151.8,142.9,133.3,129.6,129.3,126.6,126.2,123.1,116.6,116.4,116.0, 109.3,43.0,28.1.

按照实施例12的制备方法，选择适当的原料，制得实施例13-实施例18的化合物。

实施例13：(E)-N-(3-((2-氨基苯基)氨基)-3-氧代丙基)-3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙酰胺的制备

LC-MS:435.0[M+H]⁺,432.8[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.86(1H,s, -NOH),10.02(1H,s,-NHPh),9.13(1H,s,-PhOH),8.00(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.31(1H,d,J＝2.4Hz,-Ph),7.13(1H,dd,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),7.02(1H,dd,J₁＝2.4Hz,J₂＝8.4Hz,-Ph),6.89(1H,dt,J₁＝1.8Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),6.70(1H,dd,J₁＝1.2Hz,J₂＝8.4Hz,-Ph),6.52(1H,dt,J₁＝1.8Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),4.84(2H,s,-NH₂Ph),3.69 (2H,s),3.44(2H,q,J＝6.6Hz),2.54(2H,t,J＝6.6Hz)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ： 170.1,163.4,152.8,152.2,142.5,133.3,129.6,129.3,126.3,126.0,123.6,116.6,116.5,116.2, 109.3,36.0,35.8,28.1.

实施例14：(E)-N-(2-氨基苯基)-4-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基丁酰胺的制备

LC-MS:449.0[M+H]⁺；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.78(1H,s,-NOH),10.02(1H,s,-NHPh),9.07(1H,s,-PhOH),8.03(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.30(1H,d,J＝2.4Hz,-Ph),7.14(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝8.4Hz,-Ph),7.03(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝8.4Hz,-Ph),6.88(1H, dt,J₁＝1.8Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),6.71(1H,dd,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8 Hz,-Ph),6.53(1H,dt,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),4.85(2H,s,-NH₂Ph),3.70(2H,s),3.19(2H, m),2.30(2H,t,J＝7.2Hz),1.75(2H,m)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ：171.2,163.6,152.7, 152.4,142.4,133.2,129.5,129.2,126.1,125.8,123.8,116.5,116.5,116.1,109.2,38.8,33.6,28.2, 25.8.

实施例15：(E)-N-(2-氨基苯基)-5-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基戊酰胺的制备

LC-MS:463.1[M+H]⁺,460.8[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.76(1H,s, -NOH),10.02(1H,s,-NHPh),9.07(1H,s,-PhOH),7.97(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.29(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.15(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),7.02(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),6.88(1H,dt,J₁＝1.8Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),6.71(1H,dd,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),6.53(1H,dt,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),4.81(2H,s,-NH₂Ph),3.69 (2H,s),3.15(2H,m),2.31(2H,t,J＝7.2Hz),1.56(2H,m),1.47(2H,m)；¹³C-NMR(151MHz, DMSO-d₆)δ：171.5,163.6,152.8,152.6,142.3,133.3,129.6,129.3,126.1,125.8,124.0,116.6, 116.3,109.3,38.9,35.9,29.2,28.2,23.1.

实施例16：(E)-N-(2-氨基苯基)-6-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基己酰胺的制备

LC-MS:477.1[M+H]⁺；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.74(1H,s,-NOH),10.01(1H,s,-NHPh),9.05(1H,s,-PhOH),7.92(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.29(1H,d,J＝1.8Hz,-Ph),7.14(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝8.4Hz,-Ph),6.88(1H, dt,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),6.71(1H,dd,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8 Hz,-Ph),6.53(1H,dt,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),4.79(2H,s,-NH₂Ph),3.69(2H,s),3.13(2H, m),2.29(2H,t,J＝7.2Hz),1.58(2H,m),1.46(2H,m),1.27(2H,m)；¹³C-NMR(151MHz, DMSO-d₆)δ：171.5,163.6,152.8,152.6,142.3,133.2,129.6,129.3,126.1,125.7,124.1,116.7, 116.6,116.4,109.3,39.1,36.2,29.4,28.2,26.5,25.5.

实施例17：(E)-N-(2-氨基苯基)-7-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基庚酰胺的制备

LC-MS:491.1[M+H]⁺,489.1[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.73(1H,s, -NOH),10.01(1H,s,-NHPh),906(1H,s,-PhOH),7.91(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.28(1H,d, J＝1.8Hz,-Ph),7.14(1H,dd,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝8.4Hz, -Ph),6.88(1H,dt,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),6.71(1H,dd,J₁＝ 1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),6.53(1H,dt,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),4.80(2H,s,-NH₂Ph),3.69 (2H,s),3.12(2H,m),2.29(2H,t,J＝7.2Hz),1.57(2H,m),1.43(2H,m),1.30(2H,m),1.26(2H, m)；¹³C-NMR(151MHz,DMSO-d₆)δ：171.6,163.6,152.8,152.6,142.3,133.2,129.6,129.3, 126.1,125.7,124.1,116.7,116.6,116.4,109.3,39.1,36.2,29.5,28.9,28.2,26.6,25.8.

实施例18：(E)-N-(2-氨基苯基)-8-(3-(3-溴-4-羟基苯基)-2-肟基丙氨基辛酰胺的制备

LC-MS:505.1[M+H]⁺,502.9[M-H]^-；¹H-NMR(600MHz,DMSO-d₆)δ：11.74(1H,s, -NOH),10.02(1H,s,-NHPh),9.07(1H,s,-PhOH),7.92(1H,t,J＝6.0Hz,-CONH),7.28(1H,d,J＝2.4Hz,-Ph),7.14(1H,d,J＝7.8Hz,-Ph),7.01(1H,dd,J₁＝1.8Hz,J₂＝8.4Hz,-Ph),6.88(1H,dt,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),6.83(1H,d,J＝8.4Hz,-Ph),6.71(1H,d,J＝7.8Hz,-Ph), 6.53(1H,dt,J₁＝1.2Hz,J₂＝7.8Hz,-Ph),4.83(2H,s,-NH₂Ph),3.69(2H,s),3.11(2H,m),2.29 (2H,t,J＝7.2Hz),1.57(2H,m),1.42(2H,m),1.29(4H,m),1.22(2H,m)；¹³C-NMR(151MHz, DMSO-d₆)δ：171.6,163.6,152.8,152.6,142.3,133.2,129.6,129.3,126.1,125.7,124.1,116.7, 116.6,116.4,109.3,39.1,36.2,29.5,29.1,29.0,28.2,26.7,25.7.

实施例19：本发明产物的药理作用研究

实验设阳性对照组(RGFP966)。以重组rHDAC1、2、3及rHDAC6蛋白(BPSBioscience, USA)为亚型酶源。所有反应均在96孔板中进行。反应缓冲液包含25mM Tris-HCl(pH 8.0)， 137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM MgCl₂及0.1mg/mLBSA。梯度浓度的化合物溶液(5μL) 及酶(5μL)于25℃预孵育15min，随后加入荧光底物Boc–Lys(Ac)–AMC(5μL)起始反应，于37℃孵育60min。最后向体系中加入含Trypsin及SAHA的终止缓冲液(25μL)，再孵育10min。以激发波长355nm，发射波长460nm，测量荧光强度(Thermo Scientific VarioskanFlash Station)。以GraphPad计算IC₅₀。目标化合物对HDAC的抑制活性见表1。

抗肿瘤细胞增殖的体外抑制活性实验

采用台盼蓝染色法，对所得的目标化合物进行了白血病细胞HL-60的抗肿瘤活性的测试。HL-60培养于RPMI 1640培养基，且培养基中添加10％FBS，添加双抗(100units/mL青霉素G及100ng/mL链霉素)，细胞培养于恒温培养箱(5％CO₂,37℃,Thermo/FormaScientific)。

将10×10⁴个白血病细胞HL-60接种于24孔板中，然后加入各浓度受试药。培养72h后，用1ml枪头悬浮细胞，取50μl细胞悬液加入含有50μl 0.4％台盼蓝的EP管中，染色2 分钟。取10μl细胞染色液打入血细胞计数板和盖玻片之间，在×10倍物镜下计数细胞。分别计数总细胞数和死细胞数。计算细胞生长抑制率，然后以GraphPad计算GI₅₀。

以RGFP966为阳性对照药，进行目标化合物的抗肿瘤细胞增殖的体外抑制活性实验。实验结果见表1。

表1目标化合物的体外抑制活性结果

上述实验结果表明，本发明要保护的通式的化合物具有良好的抗肿瘤活性和HDAC抑制作用。本发明的化合物具有很好的工业应用前景。