阅读说明：本技术 一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法以及组合物 (Preparation method and composition of bovine or ovine spine bone marrow peptide ) 是由 宋根昌 于 2019-12-16 设计创作，主要内容包括：本发明属于骨髓肽制备技术领域,公开了一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法以及组合物,制备方法包括步骤：冷冻粉碎、一次过滤、提取、酶解、二次过滤、浓缩和干燥制成牛或羊脊骨骨髓肽粉；提取步骤包括：将一次过滤得到的过滤液超声处理,得到牛或羊脊骨骨髓提取液；酶解步骤包括：向牛或羊脊骨骨髓提取液中加入骨胶原蛋白酶进行一次酶解,得到一次酶解液；调节一次酶解液的pH值为6~7,然后加入纤维蛋白酶,进行二次酶解,二次酶解结束后进行灭酶处理得到二次酶解液。本发明通过超声处理和三次酶解使得到的牛或羊脊骨骨髓肽,更容易吸收,品质更好；本发明的组合物对于治疗血虚、血瘀等气血虚弱的疾病具有较佳的疗效。(The invention belongs to the technical field of preparation of bone marrow peptide, and discloses a preparation method and a composition of bovine or ovine spine bone marrow peptide, wherein the preparation method comprises the following steps: freezing and crushing, filtering for the first time, extracting, performing enzymolysis, filtering for the second time, concentrating and drying to prepare the bovine or sheep spine bone marrow peptide powder; the extraction step comprises: carrying out ultrasonic treatment on the filtrate obtained by the primary filtration to obtain a cattle or sheep spine bone marrow extracting solution; the enzymolysis step comprises: adding bone collagenase into the cattle or sheep spine bone marrow extract for primary enzymolysis to obtain primary enzymolysis liquid; and adjusting the pH value of the primary enzymolysis liquid to 6-7, adding the fibrous protease to carry out secondary enzymolysis, and carrying out enzyme deactivation treatment after the secondary enzymolysis is finished to obtain secondary enzymolysis liquid. The obtained bovine or ovine spine bone marrow peptide is easier to absorb and has better quality through ultrasonic treatment and three times of enzymolysis; the composition has better curative effect on treating the diseases of deficiency of qi and blood such as blood deficiency, blood stasis and the like.)

一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法以及组合物

技术领域

本发明属于骨髓肽制备技术领域，具体涉及一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法以及组合物。

背景技术

骨髓肽，一般是指从牛、羊等动物骨髓中用酶解法提取出的多肽。众所周知，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓的重要功能就是产生生成各种细胞的干细胞，这些干细胞通过分化再生成各种血细胞如红细胞、白细胞、血小板、淋巴细胞等，简单的说骨髓的作用就是造血。因此，骨髓对于维持机体的生命和免疫力具有非常重要的作用。目前骨髓肽主要用于保健品使用，用于实现补血和抗衰老的保健效果。

目前骨髓肽一般采用酶解法制成多肽进行使用，但是单一的使用酶解法生产成本较高且对原料利用率不高，容易造成浪费。且目前缺少一种利用骨髓肽治疗血虚、血瘀等气血虚弱的疾病的组合物。

发明内容

为了解决现有技术存在的上述问题，本发明目的在于提供一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法以及组合物。

本发明一方面提供如下技术方案：

一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法，包括步骤：冷冻粉碎、一次过滤、提取、酶解、二次过滤、浓缩和干燥制成牛或羊脊骨骨髓肽粉；

所述提取步骤包括：将一次过滤得到的过滤液于12~15℃、超声频率400~2000HZ下，超声处理10~20min，得到牛或羊脊骨骨髓提取液；

所述酶解步骤包括：向牛或羊脊骨骨髓提取液中加入骨胶原蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为42~48℃，一次酶解时间为2.2h~3h，骨胶原蛋白酶的加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.35%~0.4%；一次酶解处理结束后，进行灭酶处理，得到一次酶解液；

调节一次酶解液的pH值为6~7，然后加入纤维蛋白酶，进行二次酶解；二次酶解时间为1-2h；纤维蛋白酶加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.35%~0.4%，二次酶解结束后进行灭酶处理得到二次酶解液。

进一步的，所述酶解步骤还包括：调节二次酶解液的pH值为7-9，然后加入胰蛋白酶，进行三次酶解，三次酶解时间为1-2h，胰蛋白酶加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.35%~0.4%，二次酶解结束后进行灭酶处理得到三次酶解液。

进一步的，所述冷冻粉碎步骤包括：取去肉以及***的健康牛或羊脊骨，置于-35~-40℃下冷冻6-12h后，清除所述脊骨上未去净的***及筋膜，粉碎，得到脊骨粉碎物。

进一步的，所述一次过滤包括步骤：将脊骨粉碎物与无热原去离子水混匀搅拌，过滤，得到过滤液。

进一步的，所述二次过滤包括步骤：将酶解过后得到的三次酶解液依次通过筒式过滤器、棉饼过滤器和孔径小于0.1μm的多层膜过滤器进行过滤得到二次过滤液。

进一步的，所述浓缩包括步骤：将二次过滤液在蒸发容器中浓缩至固形物含量为40-45%后，得到浓缩液。

进一步的，所述干燥包括步骤：将浓缩液进行喷雾干燥，得到牛或羊脊骨骨髓肽粉。

另一方面，本发明还提供一种组合物：

一种牛或羊脊骨骨髓肽组合物，包括如下重量份数的组分：黄芪提取物5-15份、当归提取物1-3份、浓缩乳清蛋白40-60份、牛或羊骨髓肽15-25份、人参提取物6-10份和丹参提取物8-12份。

进一步的，一种牛或羊脊骨骨髓肽组合物，包括如下重量份数的组分：黄芪提取物15份、当归提取物3份、浓缩乳清蛋白60份、牛或羊骨髓肽20份、人参提取物7份和丹参提取物9份。

进一步的，还包括调味用量的低聚果糖。

本发明的有益效果为：本发明的一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法以及组合物，本发明通过超声处理牛或羊脊骨的骨髓细胞中的蛋白提取更彻底、效率更高，避免了原材料的浪费，同时通过采用骨胶原蛋白酶、纤维蛋白酶和胰蛋白酶三次酶解依次进行处理；使牛或羊脊骨骨髓细胞中的蛋白质降解成肽链更短的牛或羊脊骨骨髓肽，从而更便于吸收；从而，本发明通过超声处理和三次酶解使得到的牛或羊脊骨骨髓肽，更容易吸收，品质更好；另外本发明的组合物，利用黄芪当归补血汤、加入丹参活血、人参补足元气并通过浓缩乳清蛋白补充人体所需的蛋白，从而减少了牛或羊脊骨骨髓肽的使用，节省成本的同时，最大限度的保证了使用的效果，从而本发明的组合物对于治疗血虚、血瘀等气血虚弱的疾病具有较佳的疗效。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明做进一步阐释。

实施例1

一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法，包括步骤：

冷冻粉碎：取去肉以及***的健康牛或羊脊骨，置于-35℃下冷冻6h后，清除所述脊骨上未去净的***及筋膜，粉碎，得到脊骨粉碎物；

一次过滤：将脊骨粉碎物与无热原去离子水混匀搅拌，过滤，得到过滤液；

提取：将一次过滤得到的过滤液于12℃、超声频率400HZ下，超声处理20min，得到牛或羊脊骨骨髓提取液；

酶解步骤包括：向牛或羊脊骨骨髓提取液中加入骨胶原蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为42℃，一次酶解时间为2.2h，骨胶原蛋白酶的加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.35%；一次酶解处理结束后，进行灭酶处理，得到一次酶解液；

调节一次酶解液的pH值为6~7，然后加入纤维蛋白酶，进行二次酶解；二次酶解时间为1h；纤维蛋白酶加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.4%，二次酶解结束后进行灭酶处理得到二次酶解液。

进一步的，在一些实施例中，酶解步骤还包括：调节二次酶解液的pH值为8，然后加入胰蛋白酶，进行三次酶解，三次酶解时间为1h，胰蛋白酶加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.35%，二次酶解结束后进行灭酶处理得到三次酶解液。

二次过滤包括步骤：将酶解过后得到的三次酶解液依次通过筒式过滤器、棉饼过滤器和孔径小于0.1μm的多层膜过滤器进行过滤得到二次过滤液。

浓缩：将二次过滤液在蒸发容器中浓缩至固形物含量为40%后，得到浓缩液。

干燥：将浓缩液进行喷雾干燥，得到牛或羊脊骨骨髓肽粉。

实施例2

一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法，包括步骤：

冷冻粉碎：取去肉以及***的健康牛或羊脊骨，置于-40℃下冷冻12h后，清除所述脊骨上未去净的***及筋膜，粉碎，得到脊骨粉碎物；

提取：将一次过滤得到的过滤液于15℃、超声频率2000HZ下，超声处理10min，得到牛或羊脊骨骨髓提取液；

一次过滤：将脊骨粉碎物与无热原去离子水混匀搅拌，过滤，得到过滤液。酶解步骤包括：向牛或羊脊骨骨髓提取液中加入骨胶原蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为48℃，一次酶解时间为3h，骨胶原蛋白酶的加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.4%；一次酶解处理结束后，进行灭酶处理，得到一次酶解液；

调节一次酶解液的pH值为6~7，然后加入纤维蛋白酶，进行二次酶解；二次酶解时间为2h；纤维蛋白酶加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.4%，二次酶解结束后进行灭酶处理得到二次酶解液。

进一步的，在一些实施例中，酶解步骤还包括：调节二次酶解液的pH值为9，然后加入胰蛋白酶，进行三次酶解，三次酶解时间为2h，胰蛋白酶加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.4%，二次酶解结束后进行灭酶处理得到三次酶解液。

二次过滤包括步骤：将酶解过后得到的三次酶解液依次通过筒式过滤器、棉饼过滤器和孔径小于0.1μm的多层膜过滤器进行过滤得到二次过滤液。

浓缩：将二次过滤液在蒸发容器中浓缩至固形物含量为45%后，得到浓缩液。

干燥：将浓缩液进行喷雾干燥，得到牛或羊脊骨骨髓肽粉。

实施例3

一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法，包括步骤：

冷冻粉碎：取去肉以及***的健康牛或羊脊骨，置于-38℃下冷冻8h后，清除所述脊骨上未去净的***及筋膜，粉碎，得到脊骨粉碎物；

一次过滤：将脊骨粉碎物与无热原去离子水混匀搅拌，过滤，得到过滤液；

提取：将一次过滤得到的过滤液于13℃、超声频率1000HZ下，超声处理15min，得到牛或羊脊骨骨髓提取液；

酶解步骤包括：向牛或羊脊骨骨髓提取液中加入骨胶原蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为45℃，一次酶解时间为2.6h，骨胶原蛋白酶的加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.37%；一次酶解处理结束后，进行灭酶处理，得到一次酶解液；

调节一次酶解液的pH值为6~7，然后加入纤维蛋白酶，进行二次酶解；二次酶解时间为1.2h；纤维蛋白酶加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.37%，二次酶解结束后进行灭酶处理得到二次酶解液。

进一步的，在一些实施例中，酶解步骤还包括：调节二次酶解液的pH值为7，然后加入胰蛋白酶，进行三次酶解，三次酶解时间为1.2h，胰蛋白酶加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.37%，二次酶解结束后进行灭酶处理得到三次酶解液。

二次过滤：将酶解过后得到的三次酶解液依次通过筒式过滤器、棉饼过滤器和孔径小于0.1μm的多层膜过滤器进行过滤得到二次过滤液。

浓缩：将二次过滤液在蒸发容器中浓缩至固形物含量为42%后，得到浓缩液。

干燥：将浓缩液进行喷雾干燥，得到牛或羊脊骨骨髓肽粉。

实施例1-3使牛或羊脊骨骨髓细胞中的蛋白质降解成肽链更短的牛或羊脊骨骨髓肽，从而更便于吸收。

对比例1

一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法，包括步骤：

粉碎：取去肉以及***的健康牛或羊脊骨，捣碎，得到脊骨粉碎物；

一次过滤：将脊骨粉碎物与无热原去离子水混匀搅拌，过滤，得到过滤液；

酶解：向牛或羊脊骨骨髓提取液中加入骨胶原蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为45℃，一次酶解时间为2.6h，骨胶原蛋白酶的加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.37%；一次酶解处理结束后，进行灭酶处理，得到一次酶解液；

二次过滤：将酶解过后得到的一次酶解液依次通过筒式过滤器、棉饼过滤器和孔径小于0.1μm的多层膜过滤器进行过滤得到二次过滤液；

浓缩：将二次过滤液在蒸发容器中浓缩至固形物含量为42%后，得到浓缩液；

干燥：将浓缩液进行喷雾干燥，得到牛或羊脊骨骨髓肽粉。

对比例2

一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法，包括步骤：

粉碎：取去肉以及***的健康牛或羊脊骨，捣碎，得到脊骨粉碎物；

一次过滤：将脊骨粉碎物与无热原去离子水混匀搅拌，过滤，得到过滤液；

酶解：向pH值为7的牛或羊脊骨骨髓提取液中加入纤维蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为45℃，一次酶解时间为1.2h，纤维蛋白酶的加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.37%；一次酶解处理结束后，进行灭酶处理，得到一次酶解液；

二次过滤：将酶解过后得到的一次酶解液依次通过筒式过滤器、棉饼过滤器和孔径小于0.1μm的多层膜过滤器进行过滤得到二次过滤液；

浓缩：将二次过滤液在蒸发容器中浓缩至固形物含量为42%后，得到浓缩液；

干燥：将浓缩液进行喷雾干燥，得到牛或羊脊骨骨髓肽粉。

对比例3

一种牛或羊脊骨骨髓肽的制备方法，包括步骤：

粉碎：取去肉以及***的健康牛或羊脊骨，捣碎，得到脊骨粉碎物；

一次过滤：将脊骨粉碎物与无热原去离子水混匀搅拌，过滤，得到过滤液；

酶解：向pH值为7的牛或羊脊骨骨髓提取液中加入胰蛋白酶进行一次酶解，一次酶解温度为45℃，一次酶解时间为1.2h，胰蛋白酶的加入量为牛或羊脊骨骨髓提取液的0.37%；一次酶解处理结束后，进行灭酶处理，得到一次酶解液；

二次过滤：将酶解过后得到的三次酶解液依次通过筒式过滤器、棉饼过滤器和孔径小于0.1μm的多层膜过滤器进行过滤得到二次过滤液。

浓缩：将二次过滤液在蒸发容器中浓缩至固形物含量为42%后，得到浓缩液。

干燥：将浓缩液进行喷雾干燥，得到牛或羊脊骨骨髓肽粉。

对比实验

为更好的说明本发明的牛或羊脊骨骨髓肽粉的制备方法的优势，将实施例1-3和对比例1-3对比如下表1。

表1

	分子量在100-400道尔顿之间的比例	提取率
			实施例1	70.2%	87%
实施例2	68.1%	89%
			实施例3	69.5%	86%
对比例1	32.1%	41.2%
			对比例2	31.5%	42.3%
对比例3	31.8%	40.6%

显然，本发明的实施例1-3的提取效率更高，本发明使牛或羊脊骨骨髓细胞中的蛋白质降解成肽链更短的牛或羊脊骨骨髓肽，从而更便于吸收。

实施例4

一种牛或羊脊骨骨髓肽组合物，包括如下重量份数的组分：黄芪提取物10份、当归提取物2份、浓缩乳清蛋白50份、牛或羊骨髓肽21份、人参提取物8份和丹参提取物10份。

实施例5

一种牛或羊脊骨骨髓肽组合物，包括如下重量份数的组分：黄芪提取物5份、当归提取物1份、浓缩乳清蛋白40份、牛或羊骨髓肽15份、人参提取物6份和丹参提取物8份。

实施例6

一种牛或羊脊骨骨髓肽组合物，包括如下重量份数的组分：黄芪提取物15份、当归提取物3份、浓缩乳清蛋白60份、牛或羊骨髓肽20份、人参提取物7份和丹参提取物9份和调味用量的低聚果糖。

实施例7

一种牛或羊脊骨骨髓肽组合物，包括如下重量份数的组分：黄芪提取物15份、当归提取物3份、浓缩乳清蛋白60份、牛或羊骨髓肽25份、人参提取物10份和丹参提取物12份和调味用量的低聚果糖。

实施例4-7得到的组合物通过制成各种口服剂型如冲剂、汤剂、丸剂等可以根据患者的情况适当调整用量以患者服用不上火为宜；实施例4-7的组合物对于血虚、血瘀等气血虚弱的疾病具有较佳的治疗效果。

本发明不局限于上述可选的实施方式，任何人在本发明的启示下都可得出其他各种形式的产品。上述具体实施方式不应理解成对本发明的保护范围的限制，本发明的保护范围应当以权利要求书中界定的为准，并且说明书可以用于解释权利要求书。