阅读说明：本技术 一种注射用l-苹果酸的精制提纯方法 (Refining and purifying method of L-malic acid for injection ) 是由 李元珍 周梦君 宁瑞博 喻海 张晶昊 于 2018-09-05 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种注射用L-苹果酸的精制提纯方法。该方法采用有机溶剂萃取的方式除去琥珀酸、富马酸、马来酸等有机酸,采用2.5％水/乙酸乙酯体系除去未知杂质。得到的L-苹果酸达到注射剂使用的标准,琥珀酸、富马酸、马来酸、未知杂质A和未知杂质B均低于检出限。该工艺操作简单、条件温和、易于工业化生产。(The invention discloses a refining and purifying method of L-malic acid for injection. The method adopts an organic solvent extraction mode to remove organic acids such as succinic acid, fumaric acid, maleic acid and the like, and adopts a 2.5% water/ethyl acetate system to remove unknown impurities. The obtained L-malic acid reaches the standard of injection use, and succinic acid, fumaric acid, maleic acid, unknown impurity A and unknown impurity B are all lower than the detection limit. The process is simple to operate, mild in condition and easy for industrial production.)

一种注射用L-苹果酸的精制提纯方法

技术领域

本发明涉及一种L-苹果酸的精制提纯方法，特别涉及一种注射级L-苹果酸的精制提纯方法，属于化学提纯领域。

背景技术

L-苹果酸广泛分布于动植物及微生物细胞中，在生物代谢过程中起到重要作用，常配以复合氨基酸注射液(手术后重要的营养药品)中，以提高氨基酸的利用率，这对手术后虚弱和肝功能障碍病人尤其重要。

目前人工制备L-苹果酸的方法主要是通过微生物发酵法、酶转化法及化学合成法。药用辅料级的L-苹果酸有关物质中琥珀酸含量在《中国药典2015年版第四部》没有列出限度，市场所售一般高于0.2％，达不到注射剂的要求。

CN 106220493公开了一种L-苹果酸的精制方法，该方法采用常规的萃取化学手段可以有效除去琥珀酸。但是该方法仍然存在以下两种缺陷：1、采用了纯化水作为溶媒，在后续步骤中需要蒸馏出水得到产品，实验发现在给定的实验条件下琥珀酸、富马酸、马来酸等有关物质可以达到注射剂的标准，但是在蒸出水的过程出现两个严重超标的未知杂质，且蒸馏时间越长，两个未知杂质含量越高；2、采用了异丙醚、正丁醇、乙酸乙酯的一种或混合物进行最后精制，两个未知杂质不仅不能除去反而增加。关于这两个未知杂质的除去方法未见有文献报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种注射剂用L-苹果酸的制备方法，该方法采用纯化水作为溶媒，有机溶剂萃取的方式除去琥珀酸、富马酸、马来酸等有有机酸类杂质，用含水乙酸乙酯打浆的方法除掉未知杂质(未知杂质A和未知杂质B)。具有操作简单、条件温和、易于工业化生产等特点，产品的质量符合注射剂的使用标准。

为了达到上述目的，本发明采用的技术手段为：

提供一种注射用L-苹果酸的精制纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)溶解样品：将待提纯的L-苹果酸样品溶解到纯化水中，搅拌完全溶解；

(2)萃取：加入有机溶剂搅拌，静置后分液；

(3)继续萃取：水相继续加入有机溶剂进行萃取，重复步骤(2)直到琥珀酸、马来酸、富马酸符合质量标准；

(4)减压蒸馏：水相过滤后减压下蒸馏除去水，加入相应的有机溶剂带出残留水，得到固体；

(5)最后精制：将步骤(4)得到的固体加入到乙酸乙酯中，加入纯化水，搅拌，过滤，滤饼进行干燥得到注射用L-苹果酸。

优选的，步骤(1)中所述的有机溶剂为乙酸乙酯。

优选的，步骤(2)和(3)中每次萃取所使用的乙酸乙酯的用量为样品重量的1～5倍；更优选的，步骤(2)和(3)中每次萃取所使用的乙酸乙酯的用量为样品重量的2倍。

优选的，步骤(5)中所述乙酸乙酯的用量为步骤(4)得到的固体重量的1～5倍；更优选的，步骤(5)中所述乙酸乙酯的用量为步骤(4)得到的固体重量的2倍。

优选的，步骤(5)中所述纯化水的用量为乙酸乙酯重量的1～5％；更优选的，步骤(5)中所述纯化水的用量为乙酸乙酯重量的2～2.5％。

与现有技术相比，本发明的有益效果体现在：

现有技术中的方法不仅无法除去未知杂质A和未知杂质B，反而使其增加，严重超出注射级水平。本发明首次采用水/乙酸乙酯体系(通常情况下认为两者不互溶，往往是忽略了水在乙酸乙酯中有一定的溶解度)对L-苹果酸进行最后精制，少量的水对除去两个未知杂质起到了关键作用，可有效除去这两种未知杂质，保证了L-苹果酸的两个未知杂质均可达到注射剂的标准要求。

附图说明

图1为本发明精制前样品HPLC图；

图2为本发明对比例1精制后HPLC图；

图3为本发明实施例1精制后HPLC图；

图4为本发明实施例2精制后HPLC图；

图5为本发明实施例3精制后HPLC图；

图6为本发明实施例4精制后HPLC图；

图7为本发明实施例5精制后HPLC图。

具体实施方式

下面结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明技术方案的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。

对比例1(CN 106220493)

向单口瓶中加入200g纯化水，搅拌下加入100g L-苹果酸样品，继续搅拌至溶清后，加入400g乙酸乙酯萃取，连续萃取3次。水相用0.45μm滤膜过滤后，在60-63℃下进行减压蒸馏，基本无馏分时再次加入50g乙酸乙酯反复三次带出残留水分。

取样，监控体系水分含量为小于0.44％。加入250g乙酸乙酯转移到洁净干燥的500ml三口瓶中，0℃～25℃、打浆1h，然后抽滤。将滤饼50℃～60℃真空干燥至恒重，得74.0g，收率74％。

对精制前后的样品采用HPLC检测其杂质成分，其结果如表1所示。

表1对比例1样品精制前后的HPLC检测结果

杂质	琥珀酸	富马酸	马来酸	未知A	未知B
						样品	0.38	0.02	未检出	0.28	0.11
精制后	0.05	未检出	未检出	0.31	0.37

实施例1

向单口瓶中加入200g纯化水，搅拌下加入100g L-苹果酸样品，继续搅拌至溶清后，加入200g乙酸乙酯萃取，连续萃取5次，每次萃取后取水层少许，除去水后进行HPLC检测。水相过滤后，在60-63℃下进行减压蒸馏，基本无馏分时加入50g乙酸乙酯带出残留水分，得到固体。

将所得固体在50-55℃下减压干燥至恒重，得到71.0g。加入142g乙酸乙酯、1.42g纯化水，搅拌6小时，过滤，收集滤饼，在50-55℃下减压干燥至恒重，得56.0g注射用L-苹果酸，收率56％。

对精制前后的样品采用HPLC检测其杂质成分，其结果如表2所示。

表2实施例1样品精制前后的HPLC检测结果

杂质	琥珀酸	富马酸	马来酸	未知A	未知B
						样品	0.38	0.02	未检出	0.28	0.11
EA萃取一次	0.13	未检出	未检出	0.29	0.11
						EA萃取两次	0.08	未检出	未检出	0.31	0.14
EA萃取三次	0.06	未检出	未检出	0.28	0.10
						EA萃取四次	0.05	未检出	未检出	0.30	0.11
精制后	未检出	未检出	未检出	0.06	0.08

实施例2

向单口瓶中加入200g纯化水，搅拌下加入100g L-苹果酸样品，继续搅拌至溶清后，加入200g乙酸乙酯萃取，连续萃取3次。水相过滤后，在60-63℃下进行减压蒸馏，基本无馏分时加入50g乙酸乙酯带出残留水分，得到固体。

将所得固体在50-55℃下减压干燥至恒重，得到75.0g。加入150g乙酸乙酯、3.75g纯化水，搅拌6小时，过滤，收集滤饼，在50-55℃下减压干燥至恒重，得64.0g注射用L-苹果酸，收率64％。

对精制前后的样品采用HPLC检测其杂质成分，其结果如表3所示。

表3实施例2样品精制前后的HPLC检测结果

杂质	琥珀酸	富马酸	马来酸	未知A	未知B
						样品	0.38	0.02	未检出	0.28	0.11
精制后	0.04	未检出	未检出	0.06	0.04

实施例3

向单口瓶中加入200g纯化水，搅拌下加入100g L-苹果酸样品，继续搅拌至溶清后，加入100g乙酸乙酯萃取，连续萃取3次，水相过滤后，在60-63℃下进行减压蒸馏，基本无馏分时加入50g乙酸乙酯带出残留水分，得到固体。

将所得固体在50-55℃下减压干燥至恒重，得到82.0g。加入164g乙酸乙酯、4.0g纯化水，搅拌6小时，过滤，收集滤饼，在50-55℃下减压干燥至恒重，得68.0g注射用L-苹果酸，收率68％。

对精制前后的样品采用HPLC检测其杂质成分，其结果如表4所示。

表4实施例3样品精制前后的HPLC检测结果

杂质	琥珀酸	富马酸	马来酸	未知A	未知B
						样品	0.38	0.02	未检出	0.28	0.11
精制后	0.11	未检出	未检出	0.08	0.05

实施例4

向单口瓶中加入200g纯化水，搅拌下加入100g L-苹果酸样品，继续搅拌至溶清后，加入200g乙酸乙酯萃取，连续萃取3次，水相过滤后，在60-63℃下进行减压蒸馏，基本无馏分时加入50g乙酸乙酯带出残留水分，得到固体。

将所得固体在50-55℃下减压干燥至恒重，得到76.0g。加入152g乙酸乙酯、7.6g纯化水，搅拌6小时，过滤，收集滤饼，在50-55℃下减压干燥至恒重，得30.0g注射用L-苹果酸，收率30％。

对精制前后的样品采用HPLC检测其杂质成分，其结果如表5所示。

表5实施例4样品精制前后的HPLC检测结果

杂质	琥珀酸	富马酸	马来酸	未知A	未知B
						样品	0.38	0.02	未检出	0.28	0.11
精制后	0.03	未检出	未检出	0.04	0.03

实施例5

向反应釜中加入20kg纯化水，搅拌下加入10kg L-苹果酸样品，继续搅拌至溶清后，加入20kg乙酸乙酯萃取，连续萃取3次，水相过滤后，在60-63℃下进行减压蒸馏，基本无馏分时加入5kg乙酸乙酯带出残留水分，得到固体。

将所得固体在50-55℃下减压干燥至恒重，得到8.2kg。加入16.4kg乙酸乙酯，410g纯化水，搅拌6小时，过滤，收集滤饼，在50-55℃下减压干燥至恒重，得6.6kg注射用L-苹果酸，收率66％。

对精制前后的样品采用HPLC检测其杂质成分，其结果如表7所示。

表6实施例5样品精制前后的HPLC检测结果

杂质	琥珀酸	富马酸	马来酸	未知A	未知B
						样品	0.38	0.02	未检出	0.28	0.11
精制后	0.04	未检出	未检出	0.05	0.04