阅读说明：本技术 一种深海鱼小分子活性肽及其制备方法 (Deep sea fish small molecule active peptide and preparation method thereof ) 是由 路书刚 于 2019-12-07 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种深海鱼小分子活性肽及其制备方法,具体涉及生物肽领域,其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼25-32份、鳕鱼15-25份、秋刀鱼18-24份,所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％。本发明通过以鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼共同作为小分子活性肽的生产原料,因鲐鲅鱼和秋刀鱼较低的价格配合鳕鱼中的营养元素,可大大降低生产者的成本投入且不影响产品中的营养物质含量,且可降低传统产品中因原料产自海域而带有的次氯酸钠和氯化钠含量,从而保证本产品的食用口感,大大提高了本产品的适用范围。(The invention discloses a deep sea fish small molecule active peptide and a preparation method thereof, and particularly relates to the field of biological peptide, wherein the used main materials comprise the following raw materials in parts by weight: 25-32 parts of mackerel, 15-25 parts of cod and 18-24 parts of pacific saury, wherein the auxiliary materials comprise, by weight, 30-40% of 0.1mol/L sodium hydroxide, 55-65% of 0.2mol/L hydrochloric acid, 1% of alkaline protease, 2% of proteolytic enzyme and 2% of pepsin. The mackerel, cod and pacific saury are used as the production raw materials of the small molecule active peptide, and the lower price of the mackerel and pacific saury is matched with the nutrient elements in the cod, so that the cost investment of a producer can be greatly reduced, the content of nutrient substances in the product is not influenced, the content of sodium hypochlorite and sodium chloride in the traditional product caused by the raw materials produced from the sea can be reduced, the edible mouthfeel of the product is ensured, and the application range of the product is greatly improved.)

一种深海鱼小分子活性肽及其制备方法

技术领域

本发明涉及生物肽技术领域，更具体地说，本发明涉及一种深海鱼小分子活性肽及其制备方法。

背景技术

蛋白质是人体所必须的八大营养素之一，人体每天细胞组织的更新、构成及修补，保证机体正常运作，都需要蛋白质的参与。蛋白质的缺乏会导致人体疲劳、消瘦、浮肿，长期缺乏可导致患病。蛋白质如此重要，而我们每天在食用的食物中吸取的蛋白质却严重不足，现代科学发现，人除了饮食外，每天还必须补充10克蛋白质，以保障人体新陈代谢及生理活动。所以，要想保持健康，人体就必须补充充足的蛋白质。目前世界公认补充蛋白质尤以小分子蛋白肽的形式补充为好。

小分子活性肽是介于氨基酸与蛋白质之间一种生化物质，它比蛋白质分子量小，又比氨基酸分子量大，是一个蛋白质的片段。两个以上的氨基酸之间以肽键相连，形成的"氨基酸链"或"氨基酸串"就叫做肽。其中，10-15个以上氨基酸组成的肽被称为多肽，而由2至9个氨基酸组成的就叫做寡肽，由2至15个氨基酸组成的就叫做小分子肽或小肽。从消化道总体来讲，肽在胃肠道中消化吸收比蛋白质、游离氨基酸消化吸收均好，速度快，而且肽比蛋白质在肠胃滞留的时间短，胃下垂感与腹部涨满感频度低，对小肠吸收面积减少，消化功能受损更是如此。

现有技术中小分子活性肽是通过生物酶解技术分解动植物中的蛋白质，从而获取小分子活性肽。其中以深海鱼为原料的小分子活性肽，因深海鱼的主要成分是蛋白质和多不饱和脂肪酸，所以在零下18摄氏度的保存状态下并不会导致营养流失，气逆鲜度和质量可以被很好的保留，且相比淡水鱼和近海鱼，深海鱼被当代工业污染的可能性会更低。由于深海鱼含有丰富的多不饱和脂肪酸和矿物质。如钙，铁，锌等微量元素，而且还含有维生素a.b.c等，所以对人体健康具有以下益处。

但现有技术虽然可以用深海鱼作为原料制备小分子活性肽，但制得的小分子活性肽获得率较低，从而造成生产成本的增加，且制得的小分子活性肽口感较差，无法满足口味较淡的人群食用。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明的实施例提供一种深海鱼小分子活性肽及其制备方法，本发明所要解决的技术问题是：增加由深海鱼制得小分子活性肽的产量及改善其口味。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种深海鱼小分子活性肽，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼25-32份、鳕鱼15-25份、秋刀鱼18-24份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％。

在一个优选地实施方式中，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼25份、鳕鱼25份、秋刀鱼18份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％。

在一个优选地实施方式中，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼29份、鳕鱼20份、秋刀鱼21份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％。

在一个优选地实施方式中，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼32份、鳕鱼15份、秋刀鱼24份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％。

本发明还包括深海鱼小分子活性肽的制备方法，具体制备步骤如下：

S1、准备原料：按照比例准备鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼，然后去腮去内脏后冲洗、浸泡血水后沥水备用；

S2、粉碎原料：将步骤S1清洗干净的鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼分别进行切块、去骨，将各块状鱼肉原料放入粉碎机中粉碎成肉泥状原料；

S3、一轮酶解：将得到的肉泥状原料中加入0.1mol/L氢氧化钠，然后加水调节溶液pH值至7.5-9，采用水浴加热的方式对溶液进行升温至50-60℃并保持，加入碱性蛋白酶进行一轮酶解，一轮酶解过程中进行搅拌；

S4、二轮酶解：将一轮酶解液降温至35-40并保持，加入蛋白水解酶进行二轮酶解，二轮酶解过程中进行搅拌；

S5、三轮酶解：向二轮酶解液中加入0.2mol/L盐酸调节溶液pH值至4-6.5，随后加入胃蛋白酶进行三轮酶解，三轮酶解过程中进行搅拌，得到三轮酶解液；

S6、过滤：

S6.1、将步骤S5中得到的三轮酶解液使用纱网进行过滤，将未完全分解的部分鱼肉、鱼骨与液体分离，得到过滤液；

S6.2、将步骤S6.1得到的过滤液通过反渗透膜过滤，去除过滤液中的氯化钠，得到澄清的溶解液；

S7、干燥：将步骤S6制得的溶液采用水浴加热的方式进行浓缩至浓稠浆液，随后进行喷雾干燥得到深海鱼小分子肽干制品。

在一个优选地实施方式中，所述步骤S3、步骤S4和步骤S5中搅拌速度设置为15-20r/min。

在一个优选地实施方式中，所述步骤S6.1中纱网设置为500目、孔径为12-18μm的涤纶纱网，所述步骤S6.2中反渗透膜设置为反渗透RO膜。

在一个优选地实施方式中，所述步骤S3反应时长设置为60-75min，所述步骤S4反应时长设置为40-56min，所述步骤S5反应时长设置为20-40min。

本发明的技术效果和优点：

本发明通过以鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼共同作为小分子活性肽的生产原料，因鲐鲅鱼和秋刀鱼较低的价格配合鳕鱼中的营养元素，可大大降低生产者的成本投入且不影响产品中的营养物质含量，且可降低传统产品中因原料产自海域而带有的次氯酸钠和氯化钠含量，从而保证本产品的食用口感，大大提高了本产品的适用范围。

具体实施方式

下面将结合本发明中的实施例，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

实施例1：

本发明提供了一种深海鱼小分子活性肽，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼25-32份、鳕鱼15-25份、秋刀鱼18-24份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％；

而具体到本实施例中，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼25份、鳕鱼25份、秋刀鱼18份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％。

本发明还包括深海鱼小分子活性肽的制备方法，具体制备步骤如下：

S1、准备原料：按照比例准备鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼，然后去腮去内脏后冲洗、浸泡血水后沥水备用；

S2、粉碎原料：将步骤S1清洗干净的鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼分别进行切块、去骨，将各块状鱼肉原料放入粉碎机中粉碎成肉泥状原料，去骨一方面可方便后续的鱼肉粉碎，另一方面可降低钙质骨料消耗盐酸，降低溶液中钙元素的增加，而鱼肉粉碎可增加与各种酶反应接触面积，加快酶解速度；

S3、一轮酶解：将得到的肉泥状原料中加入0.1mol/L氢氧化钠，然后加水调节溶液pH值至7.5-9，采用水浴加热的方式对溶液进行升温至50-60℃并保持，加入碱性蛋白酶进行一轮酶解60-75min，一轮酶解过程中以15-20r/min的转速进行搅拌，在碱性环境下碱性蛋白酶将鱼肉组织中的蛋白质之间的肽键进行水解成大分子多肽；

S4、二轮酶解：将一轮酶解液降温至35-40并保持，加入蛋白水解酶进行二轮酶解40-56min，二轮酶解过程中以15-20r/min的转速进行搅拌，蛋白水解酶将大分子多肽的肽键进行水解，使生成各种小肽甚至游离氨基酸；

S5、三轮酶解：向二轮酶解液中加入0.2mol/L盐酸调节溶液pH值至4-6.5，随后加入胃蛋白酶进行三轮酶解20-40min，三轮酶解过程中以15-20r/min的转速进行搅拌，得到三轮酶解液，在盐酸调节的酸性溶液环境中由胃蛋白酶模拟胃部消化环境，对小分子多肽进行预降解和活化处理，使制得的小分子活性肽更易于被吸收；

S6、过滤：

S6.1、将步骤S5中得到的三轮酶解液使用500目、孔径为12-18μm的涤纶纱网进行过滤，将未完全分解的部分鱼肉、鱼骨与液体分离，得到过滤液，将未分解原料进行除杂，避免制得的小分子活性肽中有杂质的析出；

S6.2、将步骤S6.1得到的过滤液通过反渗透RO膜过滤，去除过滤液中的氯化钠，得到澄清的溶解液，氢氧化钠与盐酸反应生成的氯化钠溶液，可增加溶液中的氯离子和钠离子，可将鱼肉酶解液中溶解的少量次氯酸钠向氯化钠的转化方向，从而降低制得的小分子活性肽中次氯酸钠的含量，从而提高制得的小分子活性肽食品安全；

S7、干燥：将步骤S6制得的溶液采用水浴加热的方式进行浓缩至浓稠浆液，随后进行喷雾干燥得到深海鱼小分子肽干制品。

实施例2：

本发明提供了一种深海鱼小分子活性肽，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼25-32份、鳕鱼15-25份、秋刀鱼18-24份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％；

而具体到本实施例中，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼29份、鳕鱼20份、秋刀鱼21份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％。

本发明还包括深海鱼小分子活性肽的制备方法，具体制备步骤如下：

S1、准备原料：按照比例准备鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼，然后去腮去内脏后冲洗、浸泡血水后沥水备用；

S2、粉碎原料：将步骤S1清洗干净的鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼分别进行切块、去骨，将各块状鱼肉原料放入粉碎机中粉碎成肉泥状原料，去骨一方面可方便后续的鱼肉粉碎，另一方面可降低钙质骨料消耗盐酸，降低溶液中钙元素的增加，而鱼肉粉碎可增加与各种酶反应接触面积，加快酶解速度；

S3、一轮酶解：将得到的肉泥状原料中加入0.1mol/L氢氧化钠，然后加水调节溶液pH值至7.5-9，采用水浴加热的方式对溶液进行升温至50-60℃并保持，加入碱性蛋白酶进行一轮酶解60-75min，一轮酶解过程中以15-20r/min的转速进行搅拌，在碱性环境下碱性蛋白酶将鱼肉组织中的蛋白质之间的肽键进行水解成大分子多肽；

S4、二轮酶解：将一轮酶解液降温至35-40并保持，加入蛋白水解酶进行二轮酶解40-56min，二轮酶解过程中以15-20r/min的转速进行搅拌，蛋白水解酶将大分子多肽的肽键进行水解，使生成各种小肽甚至游离氨基酸；

S5、三轮酶解：向二轮酶解液中加入0.2mol/L盐酸调节溶液pH值至4-6.5，随后加入胃蛋白酶进行三轮酶解20-40min，三轮酶解过程中以15-20r/min的转速进行搅拌，得到三轮酶解液，在盐酸调节的酸性溶液环境中由胃蛋白酶模拟胃部消化环境，对小分子多肽进行预降解和活化处理，使制得的小分子活性肽更易于被吸收；

S6、过滤：

S6.1、将步骤S5中得到的三轮酶解液使用500目、孔径为12-18μm的涤纶纱网进行过滤，将未完全分解的部分鱼肉、鱼骨与液体分离，得到过滤液，将未分解原料进行除杂，避免制得的小分子活性肽中有杂质的析出；

S6.2、将步骤S6.1得到的过滤液通过反渗透RO膜过滤，去除过滤液中的氯化钠，得到澄清的溶解液，氢氧化钠与盐酸反应生成的氯化钠溶液，可增加溶液中的氯离子和钠离子，可将鱼肉酶解液中溶解的少量次氯酸钠向氯化钠的转化方向，从而降低制得的小分子活性肽中次氯酸钠的含量，从而提高制得的小分子活性肽食品安全；

S7、干燥：将步骤S6制得的溶液采用水浴加热的方式进行浓缩至浓稠浆液，随后进行喷雾干燥得到深海鱼小分子肽干制品。

实施例3：

本发明提供了一种深海鱼小分子活性肽，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼25-32份、鳕鱼15-25份、秋刀鱼18-24份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％；

而具体到本实施例中，其中所使用的主料包括以下重量份数的原料：鲐鲅鱼32份、鳕鱼15份、秋刀鱼24份，所述辅料按重量百分比计包括0.1mol/L氢氧化钠30wt％-40wt％、0.2mol/L盐酸55wt％-65wt％、碱性蛋白酶1wt％、蛋白水解酶2wt％、胃蛋白酶2wt％。

本发明还包括深海鱼小分子活性肽的制备方法，具体制备步骤如下：

S1、准备原料：按照比例准备鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼，然后去腮去内脏后冲洗、浸泡血水后沥水备用；

S2、粉碎原料：将步骤S1清洗干净的鲐鲅鱼、鳕鱼和秋刀鱼分别进行切块、去骨，将各块状鱼肉原料放入粉碎机中粉碎成肉泥状原料，去骨一方面可方便后续的鱼肉粉碎，另一方面可降低钙质骨料消耗盐酸，降低溶液中钙元素的增加，而鱼肉粉碎可增加与各种酶反应接触面积，加快酶解速度；

S3、一轮酶解：将得到的肉泥状原料中加入0.1mol/L氢氧化钠，然后加水调节溶液pH值至7.5-9，采用水浴加热的方式对溶液进行升温至50-60℃并保持，加入碱性蛋白酶进行一轮酶解60-75min，一轮酶解过程中以15-20r/min的转速进行搅拌，在碱性环境下碱性蛋白酶将鱼肉组织中的蛋白质之间的肽键进行水解成大分子多肽；

S4、二轮酶解：将一轮酶解液降温至35-40并保持，加入蛋白水解酶进行二轮酶解40-56min，二轮酶解过程中以15-20r/min的转速进行搅拌，蛋白水解酶将大分子多肽的肽键进行水解，使生成各种小肽甚至游离氨基酸；

S5、三轮酶解：向二轮酶解液中加入0.2mol/L盐酸调节溶液pH值至4-6.5，随后加入胃蛋白酶进行三轮酶解20-40min，三轮酶解过程中以15-20r/min的转速进行搅拌，得到三轮酶解液，在盐酸调节的酸性溶液环境中由胃蛋白酶模拟胃部消化环境，对小分子多肽进行预降解和活化处理，使制得的小分子活性肽更易于被吸收；

S6、过滤：将步骤S5中得到的三轮酶解液使用500目、孔径为12-18μm的涤纶纱网进行过滤，将未完全分解的部分鱼肉、鱼骨与液体分离，得到过滤液，将未分解原料进行除杂，避免制得的小分子活性肽中有杂质的析出；

S7、干燥：将步骤S6制得的溶液采用水浴加热的方式进行浓缩至浓稠浆液，随后进行喷雾干燥得到深海鱼小分子肽干制品。

实施例4：

分别取上述实施例1-3所制得的深海鱼小分子活性肽给90位高血糖患者使用，每30人为一组，分三组分别试用三个实施例中制备的深海鱼小分子活性肽，使用2个月后，得到以下数据：

由上表可知，实施例2中原料配合比例适中，患者使用后，血糖值趋于稳定，体内电解质环境得到改善，未发现发病情况，并且在使用过程中服用口感较佳，无患者因口味问题无法使用，此外整体生产成本降低近三成，相同成本投入的产品中含有的营养物质较多。

最后：以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。