具体实施方式

随着多肽(例如，抗体、受体的配体结合结构域、酶、配体、肽)作为用于各种犬疾病的预防和治疗的治疗剂的使用增加，开发具有延长的半衰期的多肽是重要的，特别是在其中必须重复施用多肽的慢性疾病的预防或治疗的情况中。

因此，本公开的特征在于犬免疫球蛋白CH2、CH3、和Fc区，其包含增强含有这些序列的一种或多种多肽的半衰期的突变。还公开了包含这些结构域的多肽及其使用方法。这些肽可用于各种治疗和诊断目的。

犬抗体

犬具有被称为A、B、C、和D的4种IgG重链。这些重链表示犬IgG的四种不同亚类，被称为IgG.A、IgG.B、IgG.C和IgG.D。这些重链的氨基酸和DNA序列可获得自Tang等人,Vet.Immunol.Immunopathol.,80:259-270(2001)和GENBANK数据库。例如，IgG.A重链的氨基酸序列具有GENBANK登录号AAL35301.1，IgG.B具有GENBANK登录号AAL35302.1，IgG.C具有GENBANK登录号AAL35303.1，和IgG.D具有GENBANK登录号AAL35304.1。犬抗体还包括两种轻链：κ和λ。这些轻链的DNA和氨基酸序列也可获得自GENBANK数据库。例如，犬κ轻链氨基酸序列具有登录号ABY 57289.1和犬λ轻链具有登录号ABY 55569.1。

犬Fc区的CH2区：

犬抗体的CH2区包括犬IgG抗体的氨基酸237至340(根据EU编号)或由其组成。应理解，CH2区可在它们N末端和/或C末端处包括1至6个(例如，1、2、3、4、5、6个)附加的氨基酸或缺失。

以下提供犬IgG.A的CH2区的氨基酸序列：

以下提供犬IgG.B的CH2结构域的氨基酸序列：

以下提供犬IgG.C的CH2结构域的氨基酸序列：

以下提供犬IgG.D的CH2结构域的氨基酸序列：

犬Fc区的CH3区：

犬抗体的CH3区包括犬IgG抗体的氨基酸345至447(根据EU编号)或由其组成。应理解，CH3区可在它们N末端和/或C末端处包括1至6个(例如，1、2、3、4、5、6个)附加的氨基酸或缺失。

以下提供犬IgG.A的CH3结构域的氨基酸序列：

以下提供犬IgG.B的CH3结构域的氨基酸序列：

以下提供犬IgG.C的CH3结构域的氨基酸序列：

以下提供犬IgG.D的CH3结构域的氨基酸序列：

犬Fc区的Fc区：

犬IgG抗体的Fc区包括犬IgG抗体的氨基酸231至447(根据EU编号)或由其组成。

以下提供犬IgG.A的Fc结构域的氨基酸序列：

以下提供犬IgG.B的Fc结构域的氨基酸序列：

以下提供犬IgG.C的Fc结构域的氨基酸序列：

以下提供犬IgG.D的Fc结构域的氨基酸序列：

改善半衰期的犬IgG Fc中的取代

增加的血清持久性是治疗性多肽的有益性质。本公开的特征在于野生型犬IgG.A、IgG.B、IgG.C、和IgG.D Fc区中的取代，其相对于一种或多种对照多肽，增强包含这些Fc区的一种或多种多肽在犬中的半衰期，其中所述一种或多种对照多肽除了具有代替IgG Fc区变体的相应的野生型犬IgG Fc区以外，与一种或多种多肽相同。增加半衰期的取代可发生于犬CH2区、犬CH3区中、或发生于犬Fc(即，CH2+CH3)区的情况中。

在一些情况中，本公开提供了犬IgG CH2区变体，其包含与SEQ ID NOs.:1至4的任一者中记载的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。还提供了犬IgG CH2区变体，其包含以1至15个氨基酸不同于SEQ ID NOs.:1至4的任一者的氨基酸序列。

在其它情况中，本公开的特征在于犬IgG CH3区变体，其包含与SEQ ID NOs.:5至8的任一者中记载的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。还提供了犬IgG CH3区变体，其包含以1至15个氨基酸不同于SEQ ID NOs.:5至8的任一者的氨基酸序列。

在某些情况中，本公开的特征在于犬IgG Fc区变体，其包含与SEQ ID NOs.:9至12的任一者中记载的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。还提供了犬IgG Fc区变体，其包含以1至20个氨基酸不同于SEQ ID NOs.:9至12的任一者的氨基酸序列。

在一些情况中，犬IgG Fc CH2区变体中的以下区域的至少一处(例如，1、2、或3处)与野生型犬IgG Fc CH2区中的相应区域相同：

氨基酸位置250-256；

氨基酸位置285-288；和

氨基酸位置307-315，其中所述氨基酸位置基于EU编号。在一些情况中，犬IgG FcCH2区变体中的全部上述区域与野生型犬IgG Fc CH2区中的相应区域相同。

在一些情况中，犬IgG Fc CH3区变体中的以下区域的至少一处(例如，1或2处)与野生型犬IgG Fc CH3区中的相应区域相同：

氨基酸位置376-380；和

氨基酸位置428-436，其中所述氨基酸位置基于EU编号。在一些情况中，犬IgG FcCH3区变体中的全部上述区域与野生型犬IgG Fc CH3区中的相应区域相同。

在一些情况中，犬IgG Fc变体中的以下区域的至少一处(例如，1、2、3、4、或5处)与野生型犬IgG Fc中的相应区域相同：

氨基酸位置250-256；

氨基酸位置285-288；

氨基酸位置307-315；

氨基酸位置376-380；和

氨基酸位置428-436，其中所述氨基酸位置基于EU编号。在一些情况中，犬IgG Fc变体中的全部上述区域与野生型犬IgG Fc中的相应区域相同。

还在其它实施方案中，提供了包含犬IgG Fc CH2区变体的一种或多种多肽，所述CH2区变体包含与SEQ ID NOs.:1至4的任一者中记载的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，特征为包含犬IgG Fc CH3区变体的一种或多种多肽，所述CH3区变体包含与SEQ ID NOs.:5至8的任一者中记载的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。

在一些实施方案中，特征为包含犬IgG Fc区变体的一种或多种多肽，所述Fc区变体包含与SEQ ID NOs.:9至12的任一者中记载的氨基酸序列具有至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性的氨基酸序列。

在一些情况中，上述一种或多种多肽包括含有以下的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、或12个)的犬IgG CH2区：

存在于氨基酸位置250处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置251处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置252处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置254处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置256处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置285处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置286处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置307处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置308处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置309处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置311处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、或

存在于氨基酸位置315处的除野生型氨基酸以外的氨基酸，

其中所述氨基酸位置基于犬IgG.A、IgG.B、IgG.C、和IgG.D抗体的EU编号。

在一些实施方案中，上述一种或多种多肽包括含有以下的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、或8个)的犬IgG CH3区：

存在于氨基酸位置378处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置380处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置428处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置430处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置433处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置434处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置435处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、或

存在于氨基酸位置436处的除野生型氨基酸以外的氨基酸，

其中所述氨基酸位置基于犬IgG.A、IgG.B、IgG.C、和IgG.D抗体的EU编号。

在某些实施方案中，上述一种或多种多肽包括含有以下的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个)的犬IgG Fc区：

存在于氨基酸位置250处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置251处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置252处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置254处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置256处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置285处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置286处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置307处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置308处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置309处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置311处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置315处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置378处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置380处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置428处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置430处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置433处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置434处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置435处的除野生型氨基酸以外的氨基酸、

存在于氨基酸位置436处的除野生型氨基酸以外的氨基酸，

其中所述氨基酸位置基于犬IgG.A、IgG.B、IgG.C、和IgG.D抗体的EU编号。

本公开包含的取代包括表1中公开的那些的一个或多个(例如，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、或20个)。

表1

在一些情况中，本公开包含的取代包括表2中公开的那些的一个或多个(例如，1、2、3、或4个)。

表2

本公开包括以上公开的取代的所有可能组合和排列。在一些情况中，取代包括以下取代的一种或多种：

(i)氨基酸位置252处的Tyr、氨基酸位置254处的Thr、和氨基酸位置256处的Glu；

(ii)氨基酸位置428处的Leu和氨基酸位置434处的Ser；

(iii)氨基酸位置256处的Asp、氨基酸位置307处的Arg、和氨基酸位置311处的Val；

(iv)氨基酸位置256处的Asp、氨基酸位置315处的Asp、和氨基酸位置378处的Val；

(v)氨基酸位置256处的Asp、氨基酸位置286处的Asp、氨基酸位置307处的Arg、和氨基酸位置311处的Val；

(vi)氨基酸位置285处的Asn、氨基酸位置307处的Gln、和氨基酸位置315处的Asp；

(vii)氨基酸位置256处的Asp、氨基酸位置307处的Arg、氨基酸位置311处的Val、和氨基酸位置378处的Val；

(viii)氨基酸位置285处的Asp、氨基酸位置311处的Val、和氨基酸位置378处的Val；

(ix)氨基酸位置256处的Asp、氨基酸位置285处的Asp、和氨基酸位置378处的Val；

(x)氨基酸位置256处的Asp、氨基酸位置311处的Val、和氨基酸位置378处的Val；

(xi)氨基酸位置256处的Asp、氨基酸位置285处的Asp、氨基酸位置286处的Asp、氨基酸位置307处的Arg、和氨基酸位置378处的Val；

(xii)氨基酸位置256处的Asp、氨基酸位置286处的Asp、氨基酸位置307处的Arg、氨基酸位置311处的Val、和位置378处的Val；

(xiii)氨基酸位置307处的Gln、氨基酸位置311处的Val、和氨基酸位置378处的Val；

(xiv)氨基酸位置285处的Asp、氨基酸位置307处的Gln、和氨基酸位置378处的Val；

(xv)氨基酸位置256处的Asp、氨基酸位置285处的Asp、氨基酸位置307处的Arg、氨基酸位置311处的Val、和氨基酸位置378处的Val；

(xvi)氨基酸位置307处的Gln、氨基酸位置380处的Ala、氨基酸位置434处的Ser或Ala；

(xvii)氨基酸位置428处的Leu、和氨基酸位置434处的Ser或Ala；

(xviii)氨基酸位置250处的Gln和氨基酸位置428处的Leu；

(xix)氨基酸位置250处的Glu和氨基酸位置251处的Glu；

(xx)氨基酸位置256处的Phe和氨基酸位置309处的Phe；

(xxi)氨基酸位置430处的Ala和氨基酸位置433处的Lys；

(xxii)氨基酸位置434处的Phe和氨基酸位置436处的His；

(xxiii)氨基酸位置435处的Tyr和氨基酸位置436处的His；

在一些情况中，取代不包括氨基酸位置252处的Tyr、氨基酸位置254处的Thr、和氨基酸位置256处的Glu的组合。

取代可在CH2结构域、CH3结构域、或Fc结构域的一条或两条链上进行。在一些情况中，CH2结构域、CH3结构域、或Fc结构域的两条链上的取代是相同的。在一些情况中，CH2结构域、CH3结构域、或Fc结构域的两条链上的取代是不同的。在一些情况中，Fc区包括增加或减少效应器功能、改善产物异质性的一种或多种附加的取代。

可与半衰期增强取代组合的其它取代

治疗性多肽/蛋白(例如，单克隆抗体)的研发是复杂的过程，涉及协调一系列复杂的活动以产生期望的多肽/蛋白。这些包括特异性、亲和性、功能活性、工程化细胞系中的表达水平、长期稳定性的优化，效应器功能的消除或增强，和商业可行的制造和纯化方法的研发。本公开包括促进任何一个或多个上述目标的任何附加的取代。

在一些实施方案中，引入取代以降低犬Fc区的效应器功能。此类取代可位于犬IgG的以下位置(根据EU编号进行编号)的一处或多处(例如，1、2、3、4、5、6、或7处)：238、265、297、298、299、327、和329。取代(一个或多个)可为至其它19个氨基酸的任何。在一些情况中，取代为保守的。在某些非限定性情况中，位置238处的取代的氨基酸为Ala；位置265处的取代的氨基酸为Ala；位置297处的取代的氨基酸为Ala或Gln；位置298处的取代的氨基酸为Pro；位置299处的取代的氨基酸为Ala；位置327处的取代的氨基酸为Gly；位置329处的取代的氨基酸为Ala。在一些情况中，变体Fc区来自犬IgG.B或IgG.C抗体。

在一些实施方案中，将取代引入野生型犬IgG Fc区以增强与蛋白A(Protein A)的结合，使得促进由蛋白A色谱法的纯化。此类取代可在犬IgG的以下位置(根据EU编号进行编号)的一处或两处(例如，1、2、3、4、5、6、或7处)：252和254。取代(一个或多个)可为至其它19个氨基酸的任何。在一些情况中，取代为保守的。在某些非限定性情况中，位置252处的取代的氨基酸为Met；和位置254处的取代的氨基酸为Ser。

在一些实施方案中，与亲代多肽或野生型多肽相比，进行取代以改变对FcRn的结合亲和性(例如，增加或减少与FcRn的结合亲和性)。在一些变化中，修饰可为选自由以下组成的组的一个、两个、三个、或四个修饰：308F、428L、434M和434S，其中编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc变体包括选自由以下组成的组的一个或多个修饰：252Y/428L、428L/434H、428L/434F、428L/434Y、428L/434A、428L/434M、和428L/434S，其中编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc变体包括选自由以下组成的组的一个或多个修饰：428L/434S、308F/428L/434S，其中编号根据EU编号。在一些实施方案中，Fc变体包括选自由以下组成的组的一个或多个修饰：259I/434S、308F/434S、308F/428L/434S、259I/308F/434S、307Q/308F/434S、250I/308F/434S、和308F/319L/434S，其中编号根据EU编号。这些修饰的详细说明描述于例如US8883973B2，其以其整体引用结合在此。

在一些实施方案中，多肽包括犬抗体的铰链区。在一些实施方案中，可对犬抗体的铰链区进行修改以增加半衰期。在一些实施方案中，根据EU编号，修饰为228P。

在一些实施方案中，与FcRn结合为pH依赖性的。H310和H435(EU编号)对于pH依赖性结合可为重要的。因此，在一些实施方案中，位置310(EU编号)处的氨基酸为组氨酸。在一些实施方案中，位置435(EU编号)处的氨基酸为组氨酸。在一些实施方案中，两个位置处的氨基酸为组氨酸。

在一些实施方案中，Fc区具有LALA突变(EU编号中的L234A和L235A突变)、或LALA-PG突变(EU编号中的L234A、L235A、P329G突变)。在一些实施方案中，位置234(EU编号)处的氨基酸残基为Ala。在一些实施方案中，位置234(EU编号)处的氨基酸残基为Ala。在一些实施方案中，位置234和235(EU编号)处的氨基酸残基为Ala。

包含犬IgG Fc变体的多肽

本公开包括可受益于具有犬中增加的半衰期的任何多肽。为了增加半衰期，这些多肽被设计成包含以上公开的Fc区变体(例如，CH2区、CH3区、CH2+CH3区)。

示例性多肽包括但不限于，完整抗体、scFv、纳米抗体、受体的配体结合部分、细胞因子、生长因子、酶、和肽。例如，以上公开的CH3结构域变体可连接至scFv纳米抗体、受体的配体结合部分(例如，犬IL-13Rα1或IL-13Rα2的配体结合部分)、细胞因子、生长因子、酶、或肽。可选地，以上公开的Fc区变体可连接至这些多肽。在另一实施方案中，犬或犬源化抗体被修饰成包含本文所公开的Fc区变体。

在某些实施方案中，本公开的多肽包括抗体铰链区。铰链区可位于抗原或多肽的配体结合结构域与Fc区变体之间。在一些情况中，铰链区连接至细胞因子、生长因子、酶、或肽的C末端，和铰链区连接至Fc区变体的N末端。以下提供示例性铰链区序列。

IgG.A:FNECRCTDTPPCPVPEP(SEQ ID NO:17)；

IgG.B:PKRENGRVPRPPDCPKCPAPEM(SEQ ID NO:18)；

IgG.C:AKECECKCNCNNCPCPGCGL(SEQ ID NO:19)；

IgG.D:PKESTCKCISPCPVPES(SEQ ID NO:20)；和

IgG.Dmut:PKESTCKCIPPCPVPES(SEQ ID NO:21)。

如果使用，相对于SEQ ID NOs.:17-21的任一者中记载的氨基酸序列，本公开的重组蛋白中的铰链区可包括0至6个(即，0、1、2、3、4、5、或6个)氨基酸取代。在一些情况中，用于本公开的重组蛋白的铰链区可与SEQ ID NOs.:17-21的任一者中记载的氨基酸序列具有至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％、或100％同一性。

在某些实施方案中，可使用连接子序列代替抗体铰链序列以将多肽(例如，抗体、受体的配体结合结构域、酶、配体、肽)连接至本文所公开的犬Fc区变体。在某些实施方案中，连接子可由通过肽键连接的1至20个氨基酸构成，其中所述氨基酸选自20个天然存在的氨基酸。这些氨基酸的一些可为糖基化的，如本领域技术人员所理解的。在其它实施方案中，1至20个氨基酸选自甘氨酸、丙氨酸、脯氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、和赖氨酸。在其它实施方案中，连接子由空间上不受阻碍的大部分氨基酸构成，例如甘氨酸和丙氨酸。肽连接子的实例包括：Gly,Ser；Gly Ser；Gly Gly Ser；Ser Gly Gly；Gly Gly Gly Ser(SEQ ID NO:22)；Ser Gly Gly Gly(SEQ ID NO:23)；Gly Gly Gly Gly Ser(SEQ ID NO:24)；Ser GlyGly Gly Gly(SEQ ID NO:25)；Gly Gly Gly Gly Gly Ser(SEQ ID NO:26)；Ser Gly GlyGly Gly Gly(SEQ ID NO:27)；Gly Gly Gly Gly Gly Gly Ser(SEQ ID NO:28)；Ser GlyGly Gly Gly Gly Gly(SEQ ID NO:29)；(Gly Gly Gly Gly Ser)_n(SEQ ID NO:24)n，其中n为1以上的整数(例如，1、2、3、4、5)；和(Ser Gly Gly Gly Gly)_n(SEQ ID NO:25)n，其中n为1以上的整数(例如，1、2、3、4、5)。

非肽连接子也可被用于将感兴趣的一种或多种多肽连接至本文所公开的Fc区变体。例如，可使用烷基连接子，例如-NH(CH₂)_nC(O)-，其中n＝2-20。这些烷基连接子可进一步由例如低级烷基(例如，C₁-C₆)低级酰基、卤素(例如，Cl、Br)、CN、NH₂、苯基等任何非空间上受阻碍的基团取代。

本公开的一种或多种多肽可包含结合结构域。结合结构域可特异性地结合至本文所描述的所选的靶的蛋白、亚单元、结构域、基序、和/或表位。在一些实施方案中，一种或多种多肽(例如，融合多肽)可包括蛋白，其中所述蛋白为本文所描述的治疗性蛋白。在一些实施方案中，靶(例如，用于结合结构域的靶)或治疗性蛋白(例如，用于融合蛋白)选自由以下组成的组：17-IA、4-1BB、4Dc、6-keto-PGF1a、8-iso-PGF2a、8-oxo-dG、A1腺苷受体、A33、ACE、ACE-2、活化素(Activin)、活化素A、活化素AB、活化素B、活化素C、活化素RIA、活化素RIA ALK-2、活化素RIB ALK-4、活化素RIIA、活化素RIIB、ADAM、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAMS、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、地址素(Addressins)、aFGF、ALCAM、ALK、ALK-1、ALK-7、α-1-抗胰蛋白酶、α-V/β-1拮抗剂、ANG、Ang、APAF-1、APE、APJ、APP、APRIL、AR、IgE、血管紧张素1型(AT1)受体、血管紧张素2型(AT2)受体、ARC、ART、Artemin、抗Id、ASPARTIC、心房利钠因子、av/b3整合素、Axl、b2M、B7-1、B7-2、B7-H、B淋巴细胞刺激物(BlyS)、BACE、BACE-1、Bad、BAFF、BAFF-R、Bag-1、BAK、Bax、BCA-1、BCAM、Bcl、BCMA、BDNF、b-ECGF、bFGF、BID、Bik、BIM、BLC、BL-CAM、BLK、BMP、BMP-2BMP-2a、BMP-3成骨素、BMP-4BMP-2b、BMP-5、BMP-6Vgr-1、BMP-7(OP-1)、BMP-8(BMP-8a、OP-2)、BMPR、BMPR-IA(ALK-3)、BMPR-IB(ALK-6)、BRK-2、RPK-1、BMPR-II(BRK-3)、BMPs、b-NGF、BOK、铃蟾肽(Bombesin)、骨源性神经营养因子、BPDE、BPDE-DNA、BTC、补体因子3(C3)、C3a、C4、C5、C5a、C10、CA125、CAD-8、降钙素(Calcitonin)、cAMP、癌胚抗原(CEA)、癌相关抗原、组织蛋白酶A(Cathepsin A)、组织蛋白酶B、组织蛋白酶C/DPPI、组织蛋白酶D、组织蛋白酶E、组织蛋白酶H、组织蛋白酶L、组织蛋白酶O、组织蛋白酶S、组织蛋白酶V、组织蛋白酶X/Z/P、CBL、CC1、CCK2、CCL、CCL1、CCL11、CCL12、CCL13、CCL14、CCL15、CCL16、CCL17、CCL18、CCL19、CCL2、CCL20、CCL21、CCL22、CCL23、CCL24、CCL25、CCL26、CCL27、CCL28、CCL3、CCL4、CCL5、CCL6、CCL7、CCL8、CCL9/10、CCR、CCR1、CCR10、CCR10、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、CCR6、CCR7、CCR8、CCR9、CD1、CD2、CD3、CD3E、CD4、CD5、CD6、CD7、CD8、CD10、CD11a、CD11b、CD11c、CD13、CD14、CD15、CD16、CD18、CD19、CD20、CD21、CD22、CD23、CD25、CD27L、CD28、CD29、CD30、CD30L、CD32、CD33(p67蛋白)、CD34、CD38、CD40、CD40L、CD44、CD45、CD46、CD47、CD49a、CD52、CD54、CD55、CD56、CD61、CD64、CD66e、CD74、CD80(B7-1)、CD89、CD95、CD123、CD137、CD138、CD140a、CD146、CD147、CD148、CD152、CD164、CEACAM5、CFTR、cGMP、CINC、肉毒杆菌毒素、产气荚膜梭菌毒素(Clostridium perfringenstoxin)、CKb8-1、CLC、CMV、CMV UL、CNTF、CNTN-1、COX、C-Ret、CRG-2、CT-1、CTACK、CTGF、CTLA-4、CX3CL1、CX3CR1、CXCL、CXCL1、CXCL2、CXCL3、CXCL4、CXCL5、CXCL6、CXCL7、CXCL8、CXCL9、CXCL10、CXCL11、CXCL12、CXCL13、CXCL14、CXCL15、CXCL16、CXCR、CXCR1、CXCR2、CXCR3、CXCR4、CXCR5、CXCR6、细胞角蛋白肿瘤相关抗原、DAN、DCC、DcR3、DC-SIGN、衰变加速因子、des(1-3)-IGF-I(脑IGF-1)、Dhh、地高辛(digoxin)、DNAM-1、Dnase、Dpp、DPPIV/CD26、Dtk、ECAD、EDA、EDA-A1、EDA-A2、EDAR、EGF、EGFR(ErbB-1)、EMA、EMMPRIN、ENA、内皮素受体、脑啡肽酶、eNOS、Eot、嗜酸粒细胞趋化蛋白1(eotaxin1)、EpCAM、Ephrin B2/EphB4、EPO、ERCC、E-选择素、ET-1、Factor IIa、Factor VII、Factor VIIIc、Factor IX、成纤维细胞激活蛋白(FAP)、Fas、FcR1、FEN-1、铁蛋白、FGF、FGF-19、FGF-2、FGF3、FGF-8、FGFR、FGFR-3、Fibrin、FL、FLIP、Flt-3、Flt-4、促卵泡激素、Fractalkine、FZD1、FZD2、FZD3、FZD4、FZD5、FZD6、FZD7、FZD8、FZD9、FZD10、G250、Gas 6、GCP-2、GCSF、GD2、GD3、GDF、GDF-1、GDF-3(Vgr-2)、GDF-5(BMP-14、CDMP-1)、GDF-6(BMP-13、CDMP-2)、GDF-7(BMP-12、CDMP-3)、GDF-8(肌肉生长抑制素(Myostatin))、GDF-9、GDF-15(MIC-1)、GDNF、GDNF、GFAP、GFRa-1、GFR-α1、GFR-α2、GFR-α3、GITR、GLP1、GLP2、胰高血糖素、Glut 4、糖蛋白IIb/IIIa(GP IIb/IIIa)、GM-CSF、gp130、gp72、GRO、GnRH、生长激素释放因子、半抗原(NP-cap或NIP-cap)、HB-EGF、HCC、HCMVgB包膜糖蛋白、HCMV)gH包膜糖蛋白、HCMV UL、造血生长因子(HGF)、Hep B gp120、肝素酶、Her2、Her2/neu(ErbB-2)、Her3(ErbB-3)、Her4(ErbB-4)、单纯疱疹病毒(HSV)gB糖蛋白、HSVgD糖蛋白、HGFA、高分子量黑素瘤相关抗原(HMW-MAA)、HIV gp120、HIV IIIB gp120 V3loop、HLA、HLA-DR、HM1.24、HMFG PEM、HRG、Hrk、心肌肌球蛋白、巨细胞病毒(CMV)、生长激素(GH)、HVEM、1-309、IAP、ICAM、ICAM-1、ICAM-3、ICE、ICOS、IFNg、Ig、IgA受体、IgE、IGF、IGF结合蛋白、IGF-1R、IGFBP、IGF-I、IGF-II、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-18R、IL-21、IL-22、IL-23、IL-25、IL-31、IL-33、白细胞介素受体(e.g.、IL-1R、IL-2R、IL-4R、IL-5R、IL-6R、IL-8R、IL-9R、IL-10R、IL-12R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-21R、IL-22R、IL-23R、IL-25R、IL-31R、IL-33R)、干扰素(INF)-α、INF-β、INF-γ、抑制素、iNOS、胰岛素A-链、胰岛素B-链、胰岛素样生长因子1、整合素α2、整合素α3、整合素α4、整合素α4/β1、整合素α4/β7、整合素α5(αV)、整合素α5/β1、整合素α5/β3、整合素α6、整合素β1、整合素β2、干扰素γ、IP-10、I-TAC、JE、激肽释放酶2(Kallikrein 2)、激肽释放酶5、激肽释放酶6、激肽释放酶11、激肽释放酶12、激肽释放酶14、激肽释放酶15、激肽释放酶L1、激肽释放酶L2、激肽释放酶L3、激肽释放酶L4、KC、KDR、角质细胞生长因子(KGF)、层粘连蛋白5、LAMP、LAP、LAP(TGF-1)、潜在TGF-1、潜在TGF-1bp1、LBP、LDGF、LECT2、Lefty,Lewis-Y抗原、Lewis-Y相关抗原、LFA-1、LFA-3、Lfo、LIF、LIGHT、脂蛋白、LIX、LKN、Lptn、L-选择素、LT-a、LT-b、LTB4、LTBP-1、肺表面活性剂、黄体化激素、淋巴毒素β受体、Mac-1、MAdCAM、MAG、MAP2、MARC、MCAM、MCAM、MCK-2、MCP、M-CSF、MDC、Mer、METALLOPROTEASES、MGDF受体、MGMT、MHC(HLA-DR)、MIF、MIG、MIP、MIP-1-α、MK、MMAC1、MMP、MMP-1、MMP-10、MMP-11、MMP-12、MMP-13、MMP-14、MMP-15、MMP-2、MMP-24、MMP-3、MMP-7、MMP-8、MMP-9、MPIF、Mpo、MSK、MSP、粘液素(Muc1)、MUC18、Muellerian抑制物质、Mug、MuSK、NAIP、NAP、NAV 1.7、NCAD、N-钙粘蛋白、NCA 90、NCAM、NCAM、脑啡肽酶、神经营养因子-3、-4、或-6、Neurturin、神经生长因子(NGF)、NGFR、NGF-β、nNOS、NO、NOS、Npn、NRG-3、NT、NTN、OB、OGG1、OPG、OPN、OSM、OX40L、OX40R、p150、p95、PADPr、甲状旁腺激素、PARC、PARP、PBR、PBSF、PCAD、P-钙粘蛋白、PCNA、PD1、PDL1,PDGF、PDGF、PDK-1、PECAM、PEM、PF4、PGE、PGF、PGI2、PGJ2、PIN、PLA2、胎盘碱性磷酸酶(PLAP)、P1GF、PLP、PP14、胰岛素原、松弛素(Prorelaxin)、蛋白C、PS、PSA、PSCA、前列腺特异性膜抗原(PSMA)、PTEN、PTHrp、Ptk、PTN、R51、RANK、RANKL、RANTES、RANTES、松弛素A-链、松弛素B-链、肾素、呼吸道合胞病毒(RSV)F、RSV Fgp、Ret、类风湿因子、RLIP76、RPA2、RSK、S100、SCF/KL、SDF-1、SERINE、血清白蛋白、sFRP-3、Shh、SIGIRR、SK-1、SLAM、SLPI、SMAC、SMDF、SMOH、SOD、SPARC、Stat、STEAP、STEAP-II、TACE、TACI、TAG-72(肿瘤相关糖蛋白-72)、TARC、TCA-3、T细胞受体(例如，T细胞受体α/β)、TdT、TECK、TEM1、TEM5、TEM7、TEM8、TERT、睾丸PLAP样碱性磷酸酶、TfR、TGF、TGF-α、TGF-β、TGF-βPan Specific、TGF-βR1(ALK-5)、TGF-βR11、TGF-βRIIb、TGF-βRIII、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5、凝血酶、Thymus Ck-1、促甲状腺激素、Tie、TIMP、TIQ、组织因子、TMEFF2、Tmpo、TMPRSS2、TNF、TNF-α、TNF-αβ、TNF-β2、TNFc、TNF-RI、TNF-RII、TNFRSF10A(TRAIL R1Apo-2、DR4)、TNFRSF10B(TRAIL R2DR5、KILLER、TRICK-2A、TRICK-B)、TNFRSF10C(TRAIL R3DcR1、LIT、TRID)、TNFRSF10D(TRAIL R4 DcR2、TRUNDD)、TNFRSF11A(RANK ODF R、TRANCE R)、TNFRSF11B(OPG OCIF、TR1)、TNFRSF12(TWEAK R FN14)、TNFRSF13B(TACI)、TNFRSF13C(BAFF R)、TNFRSF14(HVEM ATAR、HveA、LIGHT R、TR2)、TNFRSF16(NGFR p75NTR)、TNFRSF17(BCMA)、TNFRSF18(GITR AITR)、TNFRSF19(TROY TAJ、TRADE)、TNFRSF19L(RELT)、TNFRSF1A(TNF R1CD120a、p55-60)、TNFRSF1B(TNF RII CD120b、p75-80)、TNFRSF26(TNFRH3)、TNFRSF3(LTbR TNF RIII、TNFC R)、TNFRSF4(OX40 ACT35、TXGP1 R)、TNFRSF5(CD40 p50)、TNFRSF6(Fas Apo-1、APT1、CD95)、TNFRSF6B(DcR3M68、TR6)、TNFRSF7(CD27)、TNFRSF8(CD30)、TNFRSF9(4-1BB CD137、ILA)、TNFRSF21(DR6)、TNFRSF22(DCTRAIL R2 TNFRH2)、TNFRST23(DCTRAIL R1TNFRH1)、TNFRSF25(DR3Apo-3、LARD、TR-3、TRAMP、WSL-1)、TNFSF10(TRAIL Apo-2配体、TL2)、TNFSF11(TRANCE/RANK配体ODF、OPG配体)、TNFSF12(TWEAK Apo-3配体、DR3配体)、TNFSF13(APRIL TALL2)、TNFSF13B(BAFF BLYS、TALL1、THANK、TNFSF20)、TNFSF14(LIGHT HVEM配体、LTg)、TNFSF15(TL1A/VEGI)、TNFSF18(GITR配体AITR配体、TL6)、TNFSF1A(TNF-a Conectin、DIF、TNFSF2)、TNFSF1B(TNF-b LTa、TNFSF1)、TNFSF3(LTb TNFC、p33)、TNFSF4(OX40配体gp34、TXGP1)、TNFSF5(CD40配体CD154、gp39、HIGM1、IMD3、TRAP)、TNFSF6(Fas配体Apo-1配体、APT1配体)、TNFSF7(CD27配体CD70)、TNFSF8(CD30配体CD153)、TNFSF9(4-1BB配体CD137配体)、TP-1、t-PA、Tpo、TRAIL、TRAIL R、TRAIL-R1、TRAIL-R2、TRANCE、转移蛋白(transferringreceptor)、TRF、Trk(例如，TrkA)、TROP-2、TSG、TSLP、肿瘤相关抗原CA125、肿瘤相关抗原表达Lewis Y相关碳水化合物、TWEAK、TXB2、Ung、UPAR、uPAR-1、尿激酶、VCAM、VCAM-1、VECAD、VE-钙粘蛋白、VE-钙粘蛋白-2、VEFGR-1(fit-1)、VEGF、VEGFR、VEGFR-3(flt-4)、VEGI、VIM、病毒抗原、VLA、VLA-1、VLA-4、VNR整合素、von Willebrands因子、WIF-1、WNT1、WNT2、WNT2B/13、WNT3、WNT3A、WNT4、WNT5A、WNT5B、WNT6、WNT7A、WNT7B、WNT8A、WNT8B、WNT9A、WNT9A、WNT9B、WNT10A、WNT10B、WNT11、WNT16、XCL1、XCL2、XCR1、XCR1、XEDAR、XIAP、XPD，以及激素和生长因子的受体。

在一些实施方案中，结合结构域特异性结合至犬中的一种或多种治疗性靶或抗原，例如但不限于：ACE、ACE-2、活化素、活化素A、活化素AB、活化素B、活化素C、活化素RIA、活化素RIAALK-2、活化素RIB ALK-4、活化素RIIA、活化素RIIB、ADAM、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAMS、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、ANG、Ang、血管紧张素1型(AT1)受体、血管紧张素2型(AT2)受体、心房利钠因子、av/b3整合素、b-ECGF、CD19、CD20、CD30、CD34、CD40、CD40L、CD47、COX、CTLA-4、EGFR(ErbB-1)、EPO、促卵泡激素、GDF-8(Myostatin)、GLP1、GLP2、GnRH、生长激素释放因子、IgE、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-18R、IL-21、IL-22、IL-23、IL-25、IL-31、IL-33、白细胞介素受体(例如，IL-1R、IL-2R、IL-4R、IL-5R、IL-6R、IL-8R、IL-9R、IL-10R、IL-12R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-21R、IL-22R、IL-23R、IL-25R、IL-31R、IL-33R)、LAP(TGF-1)、潜在TGF-1、潜在TGF-1bp1、LFA-1、神经生长因子(NGF)、NGFR、NGF-beta、OX40L、OX40R、PD1、PDL1、TGF、TGF-α、TGF-β、TGF-βPan Specific、TGF-βR1(ALK-5)、TGF-βR11、TGF-βRIIb、TGF-βRIII、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5、TNF、TNF-α、TNF-αβ、TNF-β2、TNFc、TNF-RI、TNF-RII、TNFRSF16(NGFR p75NTR)、TNFRSF9(4-1BB CD137、ILA)、VEFGR-1(fit-1)、VEGF、VEGFR、和VEGFR-3(flt-4)。

在一些实施方案中，一种或多种多肽可包含蛋白，其中所述蛋白为治疗性蛋白，例如，EPO、CTLA4、LFA3、VEGFR1/VEGFR3、IL-1R、IL-4R、GLP-1受体激动剂、或血小板生成素结合肽。在一些实施方案中，所述治疗性蛋白为ACE、ACE-2、活化素、活化素A、活化素AB、活化素B、活化素C、活化素RIA、活化素RIA ALK-2、活化素RIB ALK-4、活化素RIIA、活化素RIIB、ADAM、ADAM10、ADAM12、ADAM15、ADAM17/TACE、ADAMS、ADAM9、ADAMTS、ADAMTS4、ADAMTS5、ANG、Ang、血管紧张素1型(AT1)受体、血管紧张素2型(AT2)受体、心房利钠因子、av/b3整合素、b-ECGF、CD19、CD20、CD30、CD34、CD40、CD40L、CD47、COX、CTLA-4、EGFR(ErbB-1)、EPO、促卵泡激素、GDF-8(Myostatin)、GLP1、GLP2、GnRH、生长激素释放因子、IgE、IL、IL-1、IL-1R、IL-2、IL-2R、IL-4、IL-4R、IL-5、IL-5R、IL-6、IL-6R、IL-8、IL-9、IL-10、IL-12、IL-13、IL-15、IL-17、IL-18、IL-18R、IL-21、IL-22、IL-23、IL-25、IL-31、IL-33、白细胞介素受体(例如，IL-1R、IL-2R、IL-4R、IL-5R、IL-6R、IL-8R、IL-9R、IL-10R、IL-12R、IL-13R、IL-15R、IL-17R、IL-18R、IL-21R、IL-22R、IL-23R、IL-25R、IL-31R、IL-33R)、LAP(TGF-1)、潜在TGF-1、潜在TGF-1bp1、LFA-1、神经生长因子(NGF)、NGFR、NGF-beta、OX40L、OX40R、PD1、PDL1、TGF、TGF-α、TGF-β、TGF-βPan Specific、TGF-βR1(ALK-5)、TGF-βR11、TGF-βRIIb、TGF-βRIII、TGF-β1、TGF-β2、TGF-β3、TGF-β4、TGF-β5、TNF、TNF-α、TNF-αβ、TNF-β2、TNFc、TNF-RI、TNF-RII、TNFRSF16(NGFR p75NTR)、TNFRSF9(4-1BB CD137、ILA)、VEFGR-1(fit-1)、VEGF、VEGFR、或VEGFR-3(flt-4)。

在一些实施方案中，所述治疗性蛋白为本文所描述的任何蛋白。在一些实施方案中，所述一种或多种多肽还包括如本文所描述的犬IgG CH2结构域、IgG CH3结构域、或IgGFc区。修饰的犬IgG CH2结构域、IgG CH3结构域、或IgG Fc区可体内增强治疗性蛋白的半衰期。

药物组合物

为了制备本文所述描述的一种或多种多肽的药物组合物或无菌组合物，一种或多种多肽可与药学上可接受的运载体或赋形剂混合。(参见，例如，Remington'sPharmaceutical Sciences and U.S.Pharmacopeia:National Formulary,MackPublishing Company,Easton,Pa.(1984))。

可通过以例如冻干粉末、浆料、水性溶液或悬浮液的形式与可接受的载体、赋形剂、或稳定剂混合来制备治疗剂和诊断剂的制剂(参见，例如，Hardman,等人(2001)Goodmanand Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics,McGraw-Hill,New York,N.Y.；Gennaro(2000)Remington:The Science and Practice of Pharmacy,Lippincott,Williams,and Wilkins,New York,N.Y.；Avis,等人(eds.)(1993)Pharmaceutical DosageForms:Parenteral Medications,Marcel Dekker,NY；Lieberman,等人(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms:Tablets,Marcel Dekker,NY；Lieberman,等人(eds.)(1990)Pharmaceutical Dosage Forms:Disperse Systems,Marcel Dekker,NY；Weiner和Kotkoskie(2000)Excipient Toxicity and Safety,Marcel Dekker,Inc.,New York,N.Y.)。在一个实施方案中，本发明的一种或多种多肽在乙酸钠溶液pH5-6中被稀释至合适的浓度，并添加NaCl或蔗糖用于调节张力(tonicity)。可添加例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80等附加试剂来增强稳定性。

单独施用或与另一试剂组合施用的多肽组合物的毒性和治疗有效性可通过细胞培养物或实验动物中的标准药物过程来确定，例如，用于确定LD₅₀(对种群的50％致死的剂量)和ED₅₀(在种群的50％中治疗有效的剂量)。有毒和治疗有效之间的剂量比为治疗指数(LD₅₀/ED₅₀)。在特定方面，期望表现高治疗指数的一种或多种多肽。获得自这些细胞培养物检验和动物研究的数据可用于配置犬用的剂量范围。此类化合物的剂量优选落入包括具有少的毒性或无毒性的ED₅₀的循环浓度的范围内。取决于采用的剂型和施用途径，剂量可在该范围内变化。

施用模式可变化。合适的施用途径包括口服、直肠、经粘膜、肠、肠胃外；肌内、皮下、皮内、髓内、鞘内、直接心室内、静脉内、腹膜内、鼻内、眼内、吸入、吹入、局部、皮肤、经皮、或动脉内。在一些实施方案中，一种或多种多肽可通过例如注射等侵袭性途径来施用。在进一步的实施方案中，一种或多种多肽为静脉内、皮下、肌内、动脉内、瘤内施用，或通过吸入、气雾剂递送。

本文所公开的药物组合物还可通过输注施用。公知的形成施用药物组合物的移植物和组件的实例包括：美国专利号4,487,603，其公开了以受控速率配药的可移植微输注泵；美国专利号4,447,233，其公开了以精确输注速率递送药物的药物输注泵；美国专利号4,447,224，其公开了用于连续药物递送的变速流可移植输注装置；美国专利号4,439,196，其公开了具有多室隔间的渗透性药物递送系统。本领域技术人员已知许多其它此类移植物、递送系统、和组件。

可选地，可以局部方式而不是以系统方式施用一种或多种多肽，例如，通常以持久的或缓释制剂，通过将抗体直接注射至关节或由免疫病理学表征的病原体诱导的损伤。此外，可在靶向药物递送系统中施用一种或多种多肽，例如，在靶向例如关节或由免疫病理学表征的病原体诱导的损伤等的包被有具有组织特异性抗体的脂质体中。脂质体将靶向受折磨的组织(afflicted tissue)并由所述组织选择性摄取。

施用方案依赖于多个因素，包括但不限于，待治疗的犬的年龄、体重、和身体状况、治疗抗体的血清或组织转换率、症状的水平、一种或多种治疗多肽的免疫原性、和生物基质中靶细胞的可及性(accessibility)。优选地，施用方案递送足够的一种或多种治疗多肽以有效改善靶疾病状态，而同时最小化不期望的副作用。因此，递送的生物的量部分地取决于特定一种或多种治疗多肽和待治疗的病况的严重程度。选择治疗抗体的合适剂量的指导可获得(参见，例如，Wawrzynczak Antibody Therapy,Bios Scientific Pub.Ltd,Oxfordshire,UK(1996)；Milgrom等人New Engl.J.Med.341:1966-1973(1999)；Slamon等人New Engl.J.Med.344:783-792(2001)；Beniaminovitz等人New Engl.J.Med.342:613-619(2000)；Ghosh等人New Engl.J.Med.348:24-32(2003)；Lipsky等人New Engl.J.Med.343:1594-1602(2000))。

本领域技术人员例如使用本领域中已知或疑似影响治疗的参数或因素来进行一种或多种多肽的合适剂量的确定。通常，剂量开始于略小于最优剂量的量，并在其后以小的增量增加直至相对于任何负面影响达到期望的或最优效果。重要的诊断测量包括例如炎症的症状或产生的炎性细胞因子的水平的那些。

核酸、载体、宿主细胞、和制备方法

本公开还包括编码本文所描述的一种或多种多肽的一种或多种核酸、包括一种或多种核酸的一种或多种载体、和包括一种或多种核酸或一种或多种载体的宿主细胞。

本文所描述的一种或多种多肽可在细菌细胞或真核细胞中生产。一些多肽，例如Fab的多肽，可在例如大肠杆菌细胞等细菌细胞中生产。多肽还可在例如转化的细胞系等真核细胞(例如，CHO、293E、COS、293T、Hela)中生产。此外，多肽(例如，scFv的多肽)可在例如毕赤酵母属(Pichia)、汉逊酵母属(Hanseula)、或酵母属(Saccharomyces)等酵母细胞中表达(参见，例如，Powers等人,J Immunol Methods.251:123-35(2001))。为了生产感兴趣的抗体，构建编码一种或多种多肽的一种或多种多核苷酸，引入至一种或多种表达载体，然后在合适的宿主细胞中表达。为了改善表达，可在不改变(或最低程度地改变–例如，去除重链或轻链的C末端残基)氨基酸序列的同时重编码基因的核苷酸序列。用于潜在重编码的区域包括与翻译起始、密码子使用、和可能的非故意的mRNA剪接相关的那些。本领域技术人员可容易地想象到编码本文所描述的Fc区变体的多核苷酸。

标准分子生物技术可用于制备重组表达载体(一种或多种)、转染宿主细胞、选择转化子、培养宿主细胞、和恢复多肽(例如，抗体)。

如果一种或多种多肽将在细菌细胞(例如，大肠杆菌)中表达，表达载体应具有允许载体在细菌细胞中扩增的特征。此外，当例如JM109、DH5α、HB101、或XL1-Blue等大肠杆菌用作宿主时，载体应具有启动子，例如，可允许在大肠杆菌中有效表达的lacZ启动子(Ward等人,341:544-546(1989)、araB启动子(Better等人,Science,240:1041-1043(1988))、或T7启动子。此类载体的实例包括，例如，M13-系列载体、pUC-系列载体、pBR322、pBluescript、pCR-Script、pGEX-5X-1(Pharmacia)、“QIA表达系统”(QIAGEN)、pEGFP、和pET(当使用该表达载体时，宿主优选表达T7 RNA聚合酶的BL21)。表达载体可包含用于抗体分泌的信号序列。为了生产至大肠杆菌的细胞周质，pelB信号序列(Lei等人,J.Bacteriol.,169:4379(1987))可用作用于抗体分泌的信号序列。为了细菌表达，氯化钙法或电穿孔法可用于将表达载体导入至细菌细胞。

如果一种或多种多肽将在例如CHO、COS、和NIH3T3细胞等动物细胞中表达，表达载体包括在这些细胞中表达所必须的启动子，例如，SV40启动子(Mulligan等人,Nature,277:108(1979))(例如，早期猿猴病毒40启动子)、MMLV-LTR启动子、EF1α启动子(Mizushima等人,Nucleic Acids Res.,18:5322(1990))、或CMV启动子(例如，人巨细胞病毒立即早期启动子)。除了编码Fc区变体的核酸序列以外，重组表达载体可携带附加的序列，例如调控宿主细胞中载体的复制的序列(例如，复制的起始)和选择标志基因。选择标记基因促进其中引入载体的宿主细胞的选择(参见，例如，美国专利号4,399,216、4,634,665和5,179,017)。例如，通常选择标记基因赋予其中引入载体的宿主细胞对药物的耐性，例如，G418、潮霉素、或甲氨蝶呤。具有选择标记的载体的实例包括pMAM、pDR2、pBK-RSV、pBK-CMV、pOPRSV、和pOP13。

在一些实施方案中，一种或多种多肽在哺乳动物细胞中生产。用于表达一种或多种多肽的示例性哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)(包括dhfr–CHO细胞，描述于Urlaub和Chasin(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220，与DHFR选择标记一起使用，例如，如Kaufman和Sharp(1982)Mol.Biol.159:601 621)中所述，人胚肾293细胞(例如，293、293E、293T)、COS细胞、NIH3T3细胞、例如NS0骨髓瘤细胞和SP2细胞等淋巴细胞细胞系，和来自例如转基因哺乳动物等转基因动物的细胞。例如，细胞为乳房上皮细胞。

在用于抗体表达的示例性系统中，通过磷酸钙介导的转染将编码抗体的抗体重链和抗体轻链的重组表达载体引入至dhfr–CHO细胞。在重组表达载体中，抗体重链和轻链基因各自可操作地连接至增强子/启动子调控元件(例如，源自SV40、CMV、和腺病毒等，诸如CMV增强子/AdMLP启动子调控元件或SV40增强子/AdMLP启动子调控元件)以驱动基因的高水平转录。重组表达载体还携带DHFR基因，这允许使用甲氨蝶呤选择/扩增选择已转染有载体的CHO细胞。培养选择的转化宿主细胞以允许表达抗体重链和轻链，并且从培养基恢复抗体。

治疗方法

本文所公开的一种或多种多肽可用于治疗或预防有需要的犬中的任何疾病或病症。本发明特别有助于需要重复给药的慢性病况的治疗。由于蛋白药物的增加的半衰期，较少频率的给药和/或减少的剂量水平为可能的。

在一些实施方案中，待治疗或预防的疾病、病症、病况或症状为过敏性疾病、慢性痛、急性痛、炎性疾病、自身免疫性疾病、内分泌疾病、胃肠疾病、骨骼/肌肉骨骼疾病、心血管疾病、神经疾病、肾脏疾病、新陈代谢疾病、免疫疾病、基因/遗传疾病、生育相关病症、传染病或癌症。在某些实施方案中，带治疗或预防的疾病或病况为异位性皮肤炎、过敏性皮肤炎、食物过敏、骨关节炎痛、围手术期痛、牙痛、癌症痛、关节炎、贫血、肥胖、或糖尿病。

抗体不仅可用于治疗或预防疾病，还可调控正常生物功能，例如管理生育或行为。

诊断

本文所公开的一种或多种多肽还可用于各种诊断用途，例如，确定犬是否具有任何特定疾病或病症。在一些实施方案中，一种或多种多肽可包括结合结构域。结合结构域可特异性结合至如本文所描述的蛋白、亚单元、结构域、基序、和/或表位(例如，癌症细胞的标志物)。在一些实施方案中，一种或多种多肽还包括标签基团。通常，标签基团落入各种种类，取决于它们将被检测的检验：a)同位素标签，其可为放射性或重同位素；b)磁性标签(例如，磁性颗粒)；c)氧化还原活性部分；d)光学染料；酶促基团(例如，辣根过氧化物酶、β-半乳糖苷酶、荧光素酶、碱性磷酸酶)；e)生物素化基团；和f)由第二报告子识别的预先确定的多肽表位(例如，亮氨酸拉链成对序列、二抗结合位点、金属结合结构域、标为标签等)。在一些实施方案中，标签基团通过各种长度的间隔臂偶联至抗体以减少潜在空间位阻。本领域已知标记蛋白的各种方法并且可在本发明中进行。

在一些实施方案中，标签基团为探针、染料(例如，荧光染料)、或放射性同位素(例如，³H、¹⁴C、²²Na、³⁶Cl、³⁵S、³³P、或¹²⁵I)。

特定标签还可包括光学染料，包括但不限于，生色团、磷光体和荧光团，后者在许多情况中为特异性的。荧光团可为“小分子”荧光素钠(fluore)、或蛋白荧光素。

荧光标签可为通过其固有荧光性质可检测的任何分子。合适的荧光标签包括，但不限于，荧光素(fluorescein)、罗丹明、四甲基罗丹明、曙红、赤藓红、香豆素、甲基香豆素、芘、Malacite green、芪(stilbene)、Lucifer Yellow、Cascade BlueJ、Texas Red、IAEDANS、EDANS、BODIPY FL、LC Red 640、Cy 5、Cy 5.5、LC Red 705、Oregon green、和Alexa-Fluor染料(Alexa Fluor 350、Alexa Fluor 430、Alexa Fluor 488、Alexa Fluor546、Alexa Fluor 568、Alexa Fluor 594、Alexa Fluor 633、Alexa Fluor 660、AlexaFluor 680)、Cascade Blue、Cascade Yellow和R-phycoerythrin(PE)(Molecular Probes,Eugene,Oreg.)、FITC、Rhodamine、和Texas Red(Pierce,Rockford,Ill.)、Cy5、Cy5.5、Cy7(Amersham Life Science,Pittsburgh,Pa.)。合适的光学染料，包括荧光团，描述于Richard P.Haugland的Molecular Probes Handbook，其以其整体引用结合在此。

合适的蛋白荧光标签还包括但不限于，绿色荧光蛋白，包括海肾(Renilla)、Ptilosarcus、或水母种(Aequorea species)的GFP(Chalfie等人,1994,Science 263:802-805)、EGFP(Clontech Laboratories,Inc.,Genbank Accession Number U55762)，蓝色荧光蛋白(BFP,Quantum Biotechnologies,Inc.1801 de Maisonneuve Blvd.West,8thFloor,Montreal,Quebec,Canada H3H1J9；Stauber,1998,Biotechniques 24:462-471；Heim等人,1996,Curr.Biol.6:178-182)，增强的黄色荧光蛋白(EYFP,ClontechLaboratories,Inc.)，荧光素酶(Ichiki等人,1993,J.Immunol.150:5408-5417)，β半乳糖苷酶(Nolan等人,1988,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.85:2603-2607)和海肾(WO92/15673、WO95/07463、WO98/14605、WO98/26277、WO99/49019、美国专利号5,292,658、5,418,155、5,683,888、5,741,668、5,777,079、5,804,387、5,874,304、5,876,995、5,925,558)。本段落中所有上述引用的参考文献以其整体引用清楚地结合在此。

检验

Fc_γRI结合：

结合至Fc_γRI是抗体介导ADCC的能力的测量。为了对抗体评价该性质，可使用本领域已知的方法进行测量抗体对Fc_γRI的结合的检验。

C1q结合：

结合至补体的第一组件，C1q，是抗体介导补体依赖性细胞毒性(CDC)的能力的测量。为了对抗体评价该性质，可使用本领域已知的方法进行测量性抗体对C1q的结合的检验。

半衰期：

本领域已知测量抗体的半衰期的方法。参见，例如，Booth等人,MAbs,10(7):1098-1110(2018)。作为实例，可通过将抗体注射至动物模型并在一定时间段内测定血清中的抗体水平来测量抗体的半衰期。示例性动物模型包括非人灵长类动物和转基因小鼠模型。转基因小鼠模型(例如，Tg32或Tg276转基因小鼠)对于小鼠FcRnα链可为空(null)并表达人FcRnα转基因(例如，在组成型启动子的控制下)。人FcRnα链可与小鼠β2微球蛋白在体内配对形成功能性嵌合FcRn异质二聚体。

实施例

实施例1：犬IgG.B的CH2和CH3结构域的丙氨酸扫描突变

对CH2结构域中的残基250、251、252、254、256、285、286、307、309、311、315和CH3结构域中的残基378、380、428、430、433、434、435和436进行丙氨酸扫描突变(Morrison和Weiss,Curr.Opin.Chem.Biol.5:302-307(2001))。对于本实验，合成犬IgG.B的CH2和CH3结构域的野生型(wt)序列并用作突变的模板。通过使用编码改变的引物的PCR突变将除了位置254以外的各个特定位置单独地改变为丙氨酸。位置254在野生型序列中为丙氨酸，并将其修饰为丝氨酸。将PCR产物亚克隆至GenScript FASEBA质粒，转化至大肠杆菌并验证序列是否存在变体。CH2结构域的上游是SASA(针对血清白蛋白的单结构域抗体)标签(参见，例如，US 2013/0129727A1)，其具有对白蛋白的pM亲和性。PelB(果胶裂解酶B)信号肽位于N末端以促进Fc至培养基的分泌。通过Lac启动子调控CH2-CH3蛋白的表达。使用表面等离子体共振(SPR)对来自条件培养基的上清液分析在pH 5.5下的对犬FcRn(UniProtKB-E2R0L6[FcRn]和UniProtKB-E2RN10[犬β-2-微球蛋白])的结合。

对于使用Biacore 8K的SPR分析，将牛血清白蛋白(BSA)固定至CM5传感器芯片。通过新鲜混合50mmol/L的N-羟基丁二酰亚胺和200mmol/L的1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐420秒(10μL/分钟)来激活流动池1和2的传感器芯片表面。其后，将在10mM乙酸钠(pH 4.5)中稀释的BSA注射至流动池2以激活缀合，同时将流动池1设定为空白。在丙氨酸偶联反应后，由1mM的乙醇胺盐酸盐的420秒注射阻断芯片表面上的剩余激活偶联位点。用于结合实验的运行缓冲液(running buffer)为HBS-EP(10mM HEPES、500mM NaCl、3mMEDTA、0.05％Tween 20、pH 5.5)并在25℃下运行。将来自丙氨酸变体的上清液注射在芯片表面上并通过SASA标签捕获在固定化的BSA上60秒。注射400nM下的犬FcRn 120秒并由运行缓冲液完成解离120秒。BSA的固定相的流动速率为10μl/分钟，结合和解离相的流动速率为30μl/分钟。使用Biacore8K评价软件版本1.1处理所有的数据。列表数据示于表3，最后一栏包含野生型的平均KD除以变体KD。传感图示于图7A-7U。

表3

实施例2：选定位置处的NNK饱和突变库的产生和单个突变的分析

NNK饱和突变法是在期望位置处产生全部20种可能氨基酸的有效策略(Hogrefe等人,Biotechniques.33:1158-1165(2002))。产生位置250、252、254、309、311、378、380、和434(EU编号)处的单个NNK库。对于本方法，特定位置处的NNK(N＝A/C/G/T，K＝G/T)引物与QuikChange定点突变试剂盒(QuikChange Site-Directed Mutagenesis Kit)(Agilent)一起使用。使用实施例1中所描述的Biacore方法对来自各个库的90个单个转化子的上清液试验在pH5.5下的对犬FcRn的结合。唯一的差异为用于试验的犬FcRn的浓度为200nM至400nM。对于所有NNK库变体的传感图示于图8-15。

对于位置250处的NNK库，无变体在pH 5.5下显示对犬FcRn增加的结合。来自变体T250E和T250Q和野生型Fc的数据示于表4。在竞争性结合试验中，与野生型人IgG2 Fc相比，人IgG2中的变体T250E和T250Q已表明在pH 6.0下更紧密结合至人FcRn(Hinton等人,J.Biol.Chem.279:6213-6216(2004))。

表4

对于位置252处的NNK库，仅变体L252Y和L252M在pH 5.5下具有对犬FcRn明显更高的亲和性(参见下表5)。在90个转化子中，不存在L252F变体，因此未获得该变体的结合数据。

表5

对于位置254处的NNK库，无试验的变体在pH 5.5下具有对犬FcRn明显更高的亲和性。A254T变体的数据示于表6并且人IgG1中相应的变体已被用于YTE变体(M252Y/S254T/T256E)，其在pH 6.0下具有对人FcRn增加的亲和性(Dall’Acqua等人,J.Immunol.169:5171-5180(2002))并且已表明在临床前模型以及人中的增加人IgG的半衰期(Borrok等人,J.Biol.Chem.290:4282-4290(2015)；Robbie等人,Antimicrob.Agents Ch.57:6147-6153(2013))。在90个转化子中，不存在A254H变体，因此未获得该变体的数据。

表6

对于位置309和311处的NNK库，无试验的变体在pH 5.5下具有对犬FcRn明显更高的亲和性。变体G309P和Q311V的数据示于表7和8，人IgG1中相应的人变体(L309P和Q311V)与其它变体的某些组合已显示在pH 6.0下具有对人FcRn更高的亲和性(Dall’Acqua等人,J.Immunol.169:5171-5180(2002)；Booth等人,MAbs,10(7):1098-1110(2018))。在NNK库中未识别到变体G309D、G309K和G311D，因此未对其试验FcRn结合。

表7

表8

对于位置378和380处的NNK库，无试验的变体在pH 5.5下具有对犬FcRn明显更高的亲和性。变体D378V的数据示于表9，与野生型Fc相比，人IgG1中相应的变体已与其它IgG变体组合使用以表明在pH 6.0下对人FcRn更高的亲和性，和延长人IgG在转基因人FcRn小鼠中的半衰期(Monnet等人,MABS.6:422-436(2014)；Booth等人,2018)。此外，变体E380A的数据示于表10并且人IgG1中相应的变体已显示在pH 6.0下具有对人FcRn更高的结合亲和性(Shields等人,J.Biol.Chem.276:6591-6604(2001))。变体D378E、D378I、D378K、和E380F不存在于NNK库并且未对其筛选对犬FcRn的结合。

表9

表10

对于位置434处的NNK库，变体N434Y、N434W、和N434R在pH 5.5下具有对犬FcRn更高的亲和性，示于表11。变体N434S和N434A在低pH下不具有对犬FcRn更高的亲和性，这与相应的人IgG1变体不同(Petkova等人,Int.Immunol.18:1759-1769(2006)；Yeung等人,J.Immunol.182:7663-7671(2009)；Zalevsky等人,Nat.Biotechnol.28:157-159(2010)；Deng等人,Drug Metab.Dispos.38:600-605(2010))。位置434处筛选的NNK库不包括N434F变体，因此未试验该变体对犬FcRn的结合。

表11

实施例3：对L252Y、N434Y、N434W、N434R、N434H和YET(L252Y/A254T/T256E)变体以及野生型Fc的结合动力学

对在pH 5.5下表明对犬FcRn更高亲和性的几种犬IgG.B进一步评价对犬FcRn的结合动力学。在该研究中，评价变体(L252Y、N434Y、N434W、N434R、N434H)、YTE变体(L252Y/A254T/T256E)和野生型犬Fc在pH 5.5和pH 7.4下对犬FcRn的结合。对于pH 5.5条件的Biacore法与实施例1中所描述的相同，除了试验了产生更精确结合动力学的4个浓度FcRn(100nM、200nM、400nM、800nM)。对于pH 7.4下的Biacore条件，使用的运行缓冲液为10mMHEPES、500mM NaCl、3mM EDTA、0.05％Tween 20、pH 7.4，试验的犬FcRn的浓度为200nM。包括YTE的所有变体和野生型在pH 7.4下不结合至犬FcRn。pH 5.5下的结合动力学示于表12并且传感图示于图16A-16E。与野生型Fc相比，试验的变体在pH 5.5下显示对犬FcRn增加的亲和性。

表12

其它实施方案

尽管已结合详细说明描述了本发明，前述描述旨在说明而不旨在限制本发明的范围，本发明的范围由所附权利要求的范围限定。其它方面、优点、和修饰在所附权利要求的范围内。

权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种多肽，其包含犬IgG Fc区变体、或其犬FcRn结合区，其中所述多肽包含在选自由以下组成的组的位置处的至少一种氨基酸取代：

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置250的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置251的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置252的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置254的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置256的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置285的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置286的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置307的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置308的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置309的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置311的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置315的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置378的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置380的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置428的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置430的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置433的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置434的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置435的氨基酸位置、和

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置436的氨基酸位置，

其中所述氨基酸位置基于EU编号，和其中与所述野生型犬IgG的Fc结构域相比，所述多肽具有增加的与犬FcRn的结合。

2.根据权利要求1所述的多肽，其中所述多肽包含与选自由SEQ ID NOs:1至12组成的组的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列。

3.根据权利要求1所述的多肽，其中所述野生型犬IgG为犬IgG.A，和所述犬IgG Fc区变体或其犬FcRn结合区包含与SEQ ID NO:9具有至少80％同一性的氨基酸序列。

4.根据权利要求1所述的多肽，其中所述野生型犬IgG为犬IgG.B，和所述犬IgG Fc区变体或其犬FcRn结合区包含与SEQ ID NO:10具有至少80％同一性的氨基酸序列。

5.根据权利要求1所述的多肽，其中所述野生型犬IgG为犬IgG.C，和所述犬IgG Fc区变体或其犬FcRn结合区包含与SEQ ID NO:11具有至少80％同一性的氨基酸序列。

6.根据权利要求1所述的多肽，其中所述野生型犬IgG为犬IgG.D，和所述犬IgG Fc区变体或其犬FcRn结合区包含与SEQ ID NO:12具有至少80％同一性的氨基酸序列。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽，其中所述多肽包含以下的至少一者：

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置250的氨基酸位置处的Glu或Gln、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置251的氨基酸位置处的Asp或Glu、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置252的氨基酸位置处的Tyr或Met、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置254的氨基酸位置处的Thr或Ser、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置256的氨基酸位置处的Asp、Glu或Phe、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置285的氨基酸位置处的Asn或Asp、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置286的氨基酸位置处的Asp、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置307的氨基酸位置处的Arg、Gln或Ala、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置308的氨基酸位置处的Pro、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置309的氨基酸位置处的Pro、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置311的氨基酸位置处的Val、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置315的氨基酸位置处的Asp、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置378的氨基酸位置处的Val、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置380的氨基酸位置处的Ala、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置428的氨基酸位置处的Leu、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置430的氨基酸位置处的Ala或Lys、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置433的氨基酸位置处的Lys、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置434的氨基酸位置处的Trp、Tyr、Arg、His、Ser、Ala或Phe、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置435的氨基酸位置处的Tyr、或

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置436的氨基酸位置处的His。

8.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽，其中所述至少一种氨基酸取代位于选自由以下组成的组的位置：

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置250的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置252的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置254的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置256的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置285的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置307的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置309的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置311的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置315的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置433的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置434的氨基酸位置、和

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置436的氨基酸位置。

9.根据权利要求8所述的多肽，其中所述多肽包含以下的至少一者：

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置250的氨基酸位置处的Glu或Gln、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置252的氨基酸位置处的Tyr或Met、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置254的氨基酸位置处的Thr或Ser、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置256的氨基酸位置处的Asp、Glu或Phe、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置285的氨基酸位置处的Asn或Asp、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置307的氨基酸位置处的Arg、Gln或Ala、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置309的氨基酸位置处的Pro、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置311的氨基酸位置处的Val、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置315的氨基酸位置处的Asp、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置433的氨基酸位置处的Lys、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置434的氨基酸位置处的Trp、Tyr、Arg、His、Ser、Ala或Phe、或

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置436的氨基酸位置处的His。

10.根据权利要求1至6中任一项所述的多肽，其中所述至少一种氨基酸取代位于选自由以下组成的组的位置：

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置252的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置254的氨基酸位置、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置256的氨基酸位置、和

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置434的氨基酸位置。

11.根据权利要求10所述的多肽，其中所述多肽包含以下的至少一者：

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置252的氨基酸位置处的Tyr或Met、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置254的氨基酸位置处的Thr或Ser、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置256的氨基酸位置处的Asp、Glu或Phe、或

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置434的氨基酸位置处的Trp、Tyr、Arg、His、Ser、Ala或Phe。

12.根据权利要求11所述的多肽，其中所述多肽包含以下的至少一者：

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置252的氨基酸位置处的Tyr、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置254的氨基酸位置处的Thr、

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置256的氨基酸位置处的Glu、或

对应于野生型犬IgG的氨基酸位置434的氨基酸位置处的Trp、Tyr、Arg、或His。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的多肽，其中所述多肽还包括结合结构域。

14.根据权利要求13所述的多肽，其中所述结合结构域包括(i)免疫球蛋白分子的六个互补决定区(CDR)；(ii)犬受体蛋白的配体结合结构域；(iii)纳米抗体；或(iv)犬受体蛋白的胞外结构域。

15.根据权利要求13或权利要求14所述的多肽，其中所述结合结构域特异性结合至选自由以下组成的组的抗原：NGF、TrKA、ADAMTS、IL-1、IL-2、IL-4、IL-4R、血管紧张素1型(AT1)受体、血管紧张素2型(AT2)受体、IL-5、IL-12、IL-13、IL-31、IL-33、CD3、CD20、CD47、CD52、和补体系统复合物。

16.根据权利要求1至12中任一项所述的多肽，其还包括选自由以下组成的组的蛋白：EPO、CTLA4、LFA3、VEGFR1/VEGFR3、IL-1R、IL-4R、GLP-1受体激动剂、和血小板生成素结合肽。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的多肽，其中所述多肽在酸性pH下比在中性pH下以更高水平结合至犬FcRn。

18.一种药物组合物，其包含(i)根据权利要求1至17中任一项所述的多肽，和(ii)药学上可接受的赋形剂。

19.一种或多种核酸，其编码根据权利要求1至17中任一项所述的多肽。

20.一种或多种表达载体，其包含根据权利要求19所述的一种或多种核酸。

21.一种宿主细胞，其包含根据权利要求19所述的一种或多种核酸或根据权利要求20所述的一种或多种表达载体。

22.一种制备多肽的方法，所述方法包括：

(a)提供根据权利要求19所述的一种或多种核酸；

(b)在宿主细胞培养物中表达所述一种或多种核酸，从而产生所述多肽；和

(c)从所述宿主细胞培养物收集(b)中产生的所述多肽。

23.根据权利要求22所述的方法，其还包括将所述多肽配制成药物制剂。

24.一种治疗有需要的犬中的犬疾病或病症的方法，所述方法包括向所述犬施用有效量的包括根据权利要求18所述的药物组合物的组合物。

25.一种预防有需要的犬中的犬疾病或病症的方法，所述方法包括向所述犬施用有效量的包括根据权利要求18所述的药物组合物的组合物。

26.根据权利要求24或权利要求25所述的方法，其中所述犬疾病或病症为过敏性疾病、慢性痛、急性痛、炎性疾病、自身免疫性疾病、内分泌疾病、胃肠疾病、心血管疾病、肾脏疾病、生育相关病症、传染病、或癌症。

27.根据权利要求24或权利要求25所述的方法，其中所述犬疾病或病症为异位性皮肤炎、过敏性皮肤炎、骨关节炎痛、关节炎、贫血、或肥胖。