阅读说明：本技术 一种咔唑类化合物及其制备方法与在抗hiv药物中的应用 (Carbazole compound, preparation method thereof and application thereof in anti-HIV (human immunodeficiency virus) medicines ) 是由 汪云松 汪欣怡 扬靖华 卢溶 白逸欣 于 2019-10-15 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种咔唑类化合物及其制备方法与在抗HIV药物中的应用,属于药物技术领域。本发明咔唑类化合物的化学结构式为<Image he="274" wi="537" file="DDA0002233550340000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>命名为咔唑类化合物Clauolenzoles A。本发明咔唑类化合物Clauolenzoles A对HIV具有抑制活性,EC<Sub>50</Sub>值为2.4μg/mL；咔唑类化合物Clauolenzoles A与药用载体和/或赋形剂可制成抗HIV药物组合物,抗HIV药物组合物的剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、溶液、悬浮剂或乳剂。(The invention discloses a carbazole compound, a preparation method thereof and application thereof in anti-HIV drugs, belonging to the technical field of drugs. The carbazole compound has the chemical structural formula Named as carbazole compound Clauolenzoles A. The carbazole compound Clauolenzoles A has the inhibitory activity on HIV, EC 50 The value was 2.4. mu.g/mL; the carbazole compound Clauolenzoles A and a medicinal carrier and/or an excipient can be prepared into an anti-HIV medicinal composition, and the anti-HIV medicinal composition is in the dosage form of injection, tablets, pills, capsules, solution, suspending agent or emulsion.)

一种咔唑类化合物及其制备方法与在抗HIV药物中的应用

技术领域

本发明涉及一种咔唑类化合物及其制备方法与在抗HIV药物中的应用，属于药物技术领域。

背景技术

目前的艾滋病治疗方案依赖于一系列药物，被称为联合抗逆转录病毒疗法(cART)，它可以提高HIV阳性患者的生活质量(Trends in Pharmacological Sciences2011,32(12),715.)；另一种是开发能够与多个目标同时相互作用的分子(DrugDiscov.Today，2004，9，641.；Med.Chem.，2014，22，4658.)；然而，由于越来越多的耐药性和目前药物的副作用，需要不断发现新的抗HIV药物分子(Clin.Trials，2005，6,5.；BMBRep.2015,48,121.)；因此寻找和开发高效低毒的抗HIV药物已成为世界医药界最重大的研究课题之一。

发明内容

针对现有技术中抗HIV药物的毒副作用问题，提供了一种咔唑类化合物及其制备方法与在抗HIV药物中的应用，咔唑类化合物Clauolenzoles A从细叶黄皮(Clausenaanisum-olens Merr.)中提取分离，对HIV具有抑制活性，EC₅₀值为2.4μg/mL，可用于制备抗HIV药物组合物。

一种咔唑类化合物，具有以下化学结构式

命名为咔唑类化合物Clauolenzoles A。

一种抗HIV药物组合物，含有药用载体和/或赋形剂，以及所述咔唑类化合物Clauolenzoles A。

所述抗HIV药物组合物的剂型为注射剂、片剂、丸剂、胶囊剂、溶液、悬浮剂或乳剂。

所述咔唑类化合物的提取方法，具体步骤如下：

(1)采用乙醇渗漉提取细叶黄皮Clausena anisum-olens Merr.干粉得到提取液，减压浓缩得到粗浸膏；

(2)将步骤(1)的粗浸膏混悬于水中得到混悬液，采用石油醚萃取混悬液得到石油醚萃取液和石油醚萃余水相，石油醚萃取液浓缩得到石油醚提取浸膏，再采用乙酸乙酯萃取石油醚萃余水相得到乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏；

(3)将步骤(2)乙酸乙酯提取浸膏进行硅胶柱层析，依次采用石油醚/乙酸乙脂混合液体系和二氯甲烷/甲醇混合液体系进行梯度洗脱，根据薄层色谱法检视合并相似流份得到8个组分即A、B、C、D、E、F、G和H；

(4)将步骤(3)B组分进行凝胶柱层析，采用二氯甲烷洗脱，根据薄层色谱法检视合并相似流份得到6个组分即a、b、c、d、e和f；

(5)步骤(4)c组分进行硅胶柱层析，采用采用二氯甲烷/甲醇混合液洗脱纯化得到咔唑类化合物Clauolenzoles A。

进一步地，所述步骤(3)梯度洗脱用石油醚/乙酸乙脂混合液中的石油醚与乙酸乙脂的体积比依次为8:2、2:1、5:5、4:6和0:1，B组分为石油醚与乙酸乙脂的体积比2:1的洗脱部分。

进一步地，所述步骤(3)梯度洗脱用二氯甲烷/甲醇混合液中的二氯甲烷与甲醇的体积比依次为8:2、7:3、6:4、1:1和0:1。

进一步地，所述步骤(5)中二氯甲烷/甲醇混合液中二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1。

进一步地，所述咔唑类化合物Clauolenzoles A在细叶黄皮提取物中的质量百分含量为0.05％；

药用载体和/或赋形剂对人体和动物均无毒，并且为惰性；

药用载体为固体稀释剂、半固体稀释剂、液体稀释剂、填料、药物制品辅剂的一种或多种；

药物组合物以单位体重服用量的形式使用；

药物可经注射(静注、肌注)、口服或皮肤给药。

本发明的有益效果：

(1)本发明咔唑类化合物Clauolenzoles A对HIV具有抑制活性，EC₅₀值为2.4μg/mL；咔唑类化合物Clauolenzoles A与药用载体和/或赋形剂可制成抗HIV药物组合物；

(2)本发明咔唑类化合物Clauolenzoles A来自于可以食用的天然植物成分，其制成的抗HIV药物组合物无毒或低毒。

具体实施方式

下面结合具体实施方式对本发明作进一步详细说明，但本发明的保护范围并不限于所述内容。

实施例1：咔唑类化合物的提取方法，具体步骤如下：

(1)采用乙醇渗漉提取细叶黄皮Clausena anisum-olens Merr.干粉得到提取液，减压浓缩得到粗浸膏；

(2)将步骤(1)的粗浸膏混悬于水中得到混悬液，采用石油醚萃取混悬液得到石油醚萃取液和石油醚萃余水相，石油醚萃取液浓缩得到石油醚提取浸膏，再采用乙酸乙酯萃取石油醚萃余水相得到乙酸乙酯萃取液，乙酸乙酯萃取液浓缩得到乙酸乙酯提取浸膏；

(3)将步骤(2)乙酸乙酯提取浸膏进行硅胶柱层析，依次采用石油醚/乙酸乙脂混合液体系和二氯甲烷/甲醇混合液体系进行梯度洗脱，根据薄层色谱法检视合并相似流份得到8个组分即A、B、C、D、E、F、G和H；其中梯度洗脱用石油醚/乙酸乙脂混合液中的石油醚与乙酸乙脂的体积比依次为8:2、2:1、5:5、4:6和0:1，梯度洗脱用二氯甲烷/甲醇混合液中的二氯甲烷与甲醇的体积比依次为8:2、7:3、6:4、1:1和0:1；B组分为石油醚与乙酸乙脂的体积比2:1的洗脱部分；

(4)将步骤(3)B组分进行Sephadex LH-20凝胶柱层析，采用二氯甲烷洗脱，根据薄层色谱法检视合并相似流份得到6个组分即a、b、c、d、e和f；其中凝胶柱的直径为3cm，长度为160cm，Sephadex LH-20凝胶干重为150g；

(5)步骤(4)c组分进行硅胶柱层析，采用采用二氯甲烷/甲醇混合液洗脱纯化得到咔唑类化合物Clauolenzoles A，其中二氯甲烷/甲醇混合液中二氯甲烷和甲醇的体积比为50:1；

本实施例的咔唑类化合物，具有以下化学结构式

命名为咔唑类化合物Clauolenzoles A；

本实施例咔唑类化合物的¹H-NMR数据(600MHz)(δin ppm,J in Hz)和¹³C NMR数据(δin ppm,J in Hz)见表1，

表1咔唑类化合物的¹H-NMR数据和¹³C NMR数据

咔唑类化合物Clauolenzoles A为白色固体,分子式为C₁₅H₁₃NO₂，高分辨质谱HRESIMS262.0839[M+Na]⁺(calcd.262.0838)。

实施例2：实施例1的咔唑类化合物Clauolenzoles A的体外抗HIV活性试验；

咔唑类化合物Clauolenzoles A的抗HIV-1活性，96孔板中的MT4细胞(1×10⁵cells/mL)在各种浓度的各试验化合物存在下以50TCID₅₀/孔的剂量被HIV-1NL4-3Nonoluc-sec感染；在感染后第3天，收集上清液并使用Nano-Glo荧光素酶测定系统(Promega)测定荧光素酶活性；抗病毒效力定义为将荧光素酶活性降低50％的化合物浓度(EC₅₀)；

抑制活性测试结果为：EC₅₀(μg/mL)值为：2.4±0.53，CC₅₀(μg/mL)值为：17±2.5；

通过分子生物学试验，可以看出咔唑类化合物Clauolenzoles A显示了抗HIV活性，能够与HIV发生作用，因此，咔唑类化合物Clauolenzoles A可用于制备抗HIV药物，可与其他药物制成抗HIV药物组合物；

以咔唑类化合物Clauolenzoles A为原料，加入药用载体和/或赋形剂即可得到含咔唑类化合物Clauolenzoles A的药物组合物；

本发明咔唑类化合物Clauolenzoles A来自于可以食用的天然植物成分，其制成的抗HIV药物组合物无毒或低毒；

药用载体和/或赋形剂对人体和动物均无毒，并且为惰性；

药用载体为固体稀释剂、半固体稀释剂、液体稀释剂、填料、药物制品辅剂的一种或多种；

药物组合物以单位体重服用量的形式使用；

药物可经注射(静注、肌注)、口服或皮肤给药。

以上，对本发明的实施方式进行了说明。但是，本发明不限定于上述实施方式。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。