阅读说明：本技术 一种中间体、及制备方法和用途 (Intermediate, preparation method and application ) 是由 李世红 何静 蔡飞 闫恒 于 2019-08-14 设计创作，主要内容包括：本发明提供了一种中间体、及制备方法及应用。通过所述中间体可以得到高纯度的<Sup>18</Sup>F-BPA,简化了在<Sup>18</Sup>F标记之后的合成步骤,操作简单、效率高。(The invention provides an intermediate, a preparation method and application thereof. The intermediate can be used to obtain high purity 18 F-BPA, simplified in 18 The synthesis step after the F labeling is simple to operate and high in efficiency.)

一种中间体、及制备方法和用途

技术领域

本发明属涉及医药、化学合成领域，具体地，本发明涉及到一种中间体、及制备方法和用途。

背景技术

恶性肿瘤是严重危害人类健康和生命的重大疾病，目前对恶性肿瘤的治疗主要是通过放射治疗或者化学治疗。硼中子捕获治疗(BoronNeutron Capture Therapy,BNCT)是利用发生在肿瘤细胞内的核反应摧毁癌细胞。利用含硼(¹⁰B)药物对热中子具有高捕获截面的特性，借由¹⁰B(n,α)⁷Li中子捕获及核***反应产生⁴He和⁷Li两个重荷电粒子。两荷电粒子的平均能量约为2.33MeV，具有高线性转移(Linear Energy Transfer,LET)、短射程特征，α粒子的线性能量转移与射程分别为150keV/μm、8μm，而⁷Li重荷粒子则为175keV/μm、5μm，两粒子的总射程约相当于一个细胞大小，因此对于生物体造成的辐射伤害能局限在细胞层级，当含硼药物选择性地聚集在肿瘤细胞中，搭配适当的中子射源，便能在不对正常组织造成太大伤害的前提下，达到局部杀死肿瘤细胞的目的。因硼中子捕获治疗的成效取决于肿瘤细胞位置含硼药物浓度和热中子数量，故又被称为二元放射线癌症治疗(binarycancertherapy)；由此可知，除了中子源的开发，含硼药物的开发在硼中子捕获治疗的研究中占有重要角色。(¹⁰B)二羟硼基-L-苯丙氨酸(4-(¹⁰B)borono-L-phenylalanine，L-¹⁰BPA)是一种用于BNCT治疗癌症的含硼药物，其对于多种恶性肿瘤，如多行性胶质母细胞瘤(glioblastoma multiforme)、黑色素细胞瘤(melanoma)等疾病具有很好的疗效。BNCT治疗方案的制定需要根据¹⁸F-BPA(2-氟-4-二羟硼基-L-苯丙氨酸)的肿瘤靶向结果指导，使用正电子放射性核素¹⁸F标记的BPA结合正电子断层造影法(PET)来对脑瘤以及其它类型的实体瘤进行诊断。

CN105916836A公开了一种2-氟-4-二羟硼基-L-苯丙氨酸的制造方法和2-氟-4-二羟硼基-L-苯丙氨酸的前体。该专利通过¹⁸F离子取代苯环上的离去基团，得到¹⁸F标记的卤素取代的苯丙氨酸化合物后，再通过偶联反应得到¹⁸F-BPA。CN105348309B在苯环上标记¹⁸F后，通过苯环上的醛基与苯基唑啉酮反应，得到¹⁸F-BPA。CN102887913B通过¹⁸F离子取代苯环上的硝基，得到¹⁸F标记的碘取代的苯丙氨酸化合物后，再通过偶联反应得到¹⁸F-BPA。上述方法均是在¹⁸F标记之后再进行硼酸酯的取代反应，反应步骤多，制备时间长。

由于¹⁸F的半衰期大约为110min，标记¹⁸F之后，如何简化制备步骤、缩短制备时间是一项极具意义和挑战的研究，关系到其合成的放化产率和应用限制。因此开发一种满足临床需要的简单高效、反应条件温和、产率高的制备方法对于¹⁸F-BPA的应用极为重要。

发明内容

本发明的目的是提供一种中间体、其制备方法和制备2-氟-4-二羟基硼基-苯丙氨酸(¹⁸F-BPA)的用途。所述的合成¹⁸F-BPA的方法，简化了在¹⁸F标记之后的合成步骤，所述方法简单高效，收率高，产物纯度高，提高了其合成的放化产率。

本发明的第一方面，提供了一种中间体I，所述中间体I具有结构：

其中，R₁、R₂为卤素或R₁、R₂为硼酸基或可水解为硼酸基的取代基；

R₃和R₄各自独立地为氢或氨基的保护基或与氨基共同形成用于保护氨基的亚氨基；

R₅为氢或羧基的保护基。

其中，所述所述中间体I包括两种构型：

在另一优选例中，所述中间体包括中间体I-1和中间体I-2，

所述中间体I-1具有结构：

所述中间体I-2具有结构：

所述化合物I-2包括L构型和D构型

所述X₁、X₂为卤素，优选地，所述X₁、X₂为氯、溴或碘；B表示硼，优选为¹⁰硼；R₁₀和R₂₀为OH或与它们连接的硼原子一起代表可水解为硼酸基的取代基，优选为硼酸频哪醇酯基；R₃和R₄分别为氢、氨基的保护基或与氨基共同形成用于保护氨基的亚氨基；R₅为氢或羧基的保护基。

在另一优选例中，所述R₃、R₄作为氨基的保护基包括烷氧羰基类保护基、酰基类保护基、烷基类保护基。优选地，R₃、R₄作为氨基的保护基还包括选自下组的取代基：苄氧羰基、叔丁氧羰基、笏甲氧羰基、烯丙氧羰基、三甲基硅乙氧羰基、甲(或乙)氧羰基、邻苯二甲酰基、对甲苯磺酰基、三氟乙酰基、邻(对)硝基苯磺酰基、特戊酰基、苯甲酰基、三苯甲基、2,4-二甲氧基苄基、对甲氧基苄基、苄基。

在另一优选例中，R₃和R₄作为氨基的保护基一起与N形成C＝N键；优选地，-NR₃R₄为

在另一优选例中，所述可水解为硼酸基的取代基为硼酸酯基。本申请中硼优选为¹⁰硼。

在另一优选例中，所述羧基的保护基包括：取代或未取代的C1-20烷基。所述取代基包括苯基、卤素、硝基、羟基、甲氧基。优选地，所述羧基的保护基为C1-10烷基、苯基、苄基。优选地，所述羧基的保护基包括：取代或未取代的C1-C20烷基；所述取代基包括苯基、卤素、硝基、羟基、甲氧基；优选为C1-C10烷基、苯基、苄基。优选地，所述羧基的保护基还包括：甲基、乙基、异丙基、叔丁基、二苯甲基、苄基、对硝基苄基、对甲氧基苄基、4-吡啶苄基、三氯乙基、甲基硫代乙基、对甲苯磺酰乙基、对硝基苯基硫代乙基、苯基、苄基。

在另一优选例中，所述中间体I选自下列化合物：

在本发明第二方面，提供了一种制备如本发明第一方面所述的中间体的方法，所述方法包括：

ii)中间体I-1与硼酸或硼酸酯反应得到中间体I-2

其中，

X₁、X₂为卤素，优选地，所述X₁、X₂为氯、溴或碘；

B表示硼，优选为¹⁰硼；

R₁₀和R₂₀为OH或与它们连接的硼原子一起代表可水解为硼酸基的取代基，优选为硼酸频哪醇酯基；

R₃和R₄分别为氢、氨基的保护基或与氨基共同形成用于保护氨基的亚氨基；

R₅为氢或羧基的保护基。

在另一优选例中，所述中间体I-1与硼酸或硼酸酯在氮气保护下反应。

在另一优选例中，所述中间体I-1与硼酸或硼酸酯在20-100℃条件下反应，优选地为50-100℃。

所述钯催化剂没有特别的限制。优选地，所述钯催化剂选自下组：三(二亚苄基丙酮)二钯(Pd₂(dba)₃)、四(三苯基膦)钯(Pd(PPh₃)₄)、醋酸钯、氯化钯、二氯二(三苯基膦)钯、三氟醋酸钯、三苯基膦醋酸钯、[1,1`-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯、双(三邻苯甲基膦)二氯化钯、1,2-二(二苯基膦基)乙烷二氯化钯，或其组合物。

所述的硼酸酯没有特别的限制。优选地，所述硼酸酯选自下组：联硼酸频哪醇酯、联邻苯二酚硼酸酯、联(3,3-二甲基-2,4-戊二醇)硼酸酯、三乙醇胺硼酸酯、硼酸三甲酯、硼酸三异丙酯、硼酸三乙酯、硼酸三丁酯、联硼酸新戊二醇酯，或其组合。

在另一优选例中，所述卤素为氯、溴或碘。

在另一优选例中，所述方法还包括：i)中间体II与中间体III反应得到中间体I-1

其中，X₁、X₂、X₃分别为卤素；优选地，所述X₁、X₂、X₃为碘，或X₁、X₂、X₃为溴；R₃和R₄各自独立地为氢或氨基的保护基或与氨基共同形成用于保护氨基的亚氨基；R₅为氢或羧基的保护基。

在另一优选例中，所述中间体III为

所述中间体I-1为

其中，X₁、X₂为卤素，优选地，所述X₁、X₂为氯、溴或碘；R₅为氢或羧基的保护基。

在另一优选例中，所述方法还包括：在酸性条件下水解从而脱保护所述中间体I-1中的氨基，与Boc₂O在碱性条件下反应，用Boc保护中间体I-1中的氨基得到化合物

后，再与硼酸或硼酸酯反应，所述反应优选在室温下反应，优选的R₅为C1-10的烷基。

在另一优选例中，所述方法还包括：将中间体I-1经手性拆分得到L构型的化合物I-1a和D构型的化合物I-1b，再分别与硼酸或硼酸酯反应

在本发明第三方面，提供了一种如本发明第一方面所述的中间体I的用途，所述中间体I用于制备¹⁸F-BPA，所述¹⁸F-BPA具有结构：

在另一优选例中，所述方法包括：将中间体I-2与¹⁸F离子反应得到¹⁸F取代的化合物

脱保护所述¹⁸F取代的化合物中的保护基，得到所述¹⁸F-BPA

在另一优选例中，所述方法包括使用Cu(OTf)₂Py₄或Cu(OTf)₂的步骤。

在另一优选例中，所述方法包括使用选自下组的溶剂：水、甲醇、DMF、DMA、DMSO、乙腈、正丁醇、乙醇、二氯甲烷，或其任意组合的混合溶液。

应理解，在本发明范围内，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

附图说明

图1为实施例6制备的N,N-二(叔丁氧羰基)-2,4-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-苯丙氨酸叔丁酯的氢谱；

图2为本发明所述¹⁸F-BPA放射性HPLC图谱；

图3为本发明所述¹⁸F-BPA与标准品¹⁹F-BPA混合后放射性HPLC图谱。

具体实施方式

本发明人经过广泛而深入地研究，制备了一种可用于制备¹⁸F-BPA的中间体，所述中间体包括了双硼酸频哪醇酯基取代的苯丙氨酸中间体，通过将丙氨酸基团邻位的硼酸频哪醇酯基取代为¹⁸F，可以得到¹⁸F-BPA。所述方法缩短了在¹⁸F标记后的制备¹⁸F-BPA的步骤，简单高效，收率高，产物纯度高，提高了其合成的放化产率。在此基础上，完成了本发明。

术语

除非另有定义，否则本文所有科技术语具有的涵义与权利要求主题所属领域技术人员通常理解的涵义相同。除非另有说明，本文全文引用的所有专利、专利申请、公开材料通过引用方式整体并入本文。

应理解，上述简述和下文的详述为示例性且仅用于解释，而不对本发明主题作任何限制。在本申请中，除非另有具体说明，否则使用单数时也包括复数。必须注意，除非文中另有清楚的说明，否则在本说明书和权利要求书中所用的单数形式包括所指事物的复数形式。还应注意，除非另有说明，否则所用“或”、“或者”表示“和/或”。此外，所用术语“包括”以及其它形式，例如“包含”、“含”和“含有”并非限制性。

当通过从左向右书写的常规化学式描述取代基时，该取代基也同样包括从右向左书写结构式时所得到的在化学上等同的取代基。举例而言，-CH₂O-等同于-OCH₂-。

本文所用的章节标题仅用于组织文章的目的，而不应被解释为对所述主题的限制。本申请中引用的所有文献或文献部分包括但不限于专利、专利申请、文章、书籍、操作手册和论文，均通过引用方式整体并入本文。

除前述以外，当用于本申请的说明书及权利要求书中时，除非另外特别指明，否则以下术语具有如下所示的含义。

在本申请中，术语“卤素”是指氟、氯、溴、碘。“F”指氟，包括具有放射性和非放射性的氟，如¹⁸F、¹⁹F，优选为¹⁸F。“B”指硼，包括具有放射性和非放射性的硼，优选为¹⁰B。“N”指氮。“硝基”指-NO₂基团。“氨基”指-NH₂基团。“硼酸基”指-B(OH)₂基团。

在本申请中，作为基团或是其它基团的一部分(例如用在卤素取代的烷基等基团中)，术语“烷基”意指仅由碳原子和氢原子组成、不含不饱和键、具有例如1至10个碳原子且通过单键与分子的其余部分连接的直链或支链的烃链基团。烷基的实例包括但不限于甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基等。术语“C1-10烷基”是指具有1-10个碳原子的烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、戊基等。

优选地，所述惰性溶剂选自下组：甲苯、苯、水、甲醇、乙醇、异丙醇、乙二醇、N-甲基吡咯烷酮、二甲基亚砜、四氢呋喃二氯甲烷、三氯甲烷、1,2-二氯乙烷、乙腈、N,N-二甲基甲酰胺、N,N-二甲基乙酰胺、二氧六环，或其组合物；更优选地，所述惰性溶剂为苯和水的混合溶剂。

术语“可水解为硼酸基的取代基”表示该取代基在水解后可以生成硼酸基(-B(OH)₂)，例如硼酸酯基，该取代基包括但不限于下列取代基：

优选地为硼酸频哪醇酯基。

在本发明中，R₃和R₄作为氨基的保护基可以分别为保护基，包括但不限于烷氧羰基类保护基、酰基类保护基、烷基类保护基；R₃和R₄也可以与N形成亚胺(C＝N)来保护氨基，例如

以上两种保护基形式都应当在本发明所述的“氨基的保护基”的理解范围内。其中，所述烷氧羰基类保护基包括但不限于：苄氧羰基(Cbz)、叔丁氧羰基(Boc)、笏甲氧羰基(Fmoc)、烯丙氧羰基(Alloc)、三甲基硅乙氧羰基(Teoc)、甲(或乙)氧羰基。所述酰基类保护基包括但不限于：邻苯二甲酰基(Pht)、对甲苯磺酰基(Tos)、三氟乙酰基(Tfa)、邻(对)硝基苯磺酰基(Ns)、特戊酰基、苯甲酰基。所述烷基类保护基包括但不限于：三苯甲基(Trt)、2,4-二甲氧基苄基(Dmb)、对甲氧基苄基(PMB)、苄基(Bn)。

术语“羧基的保护基”是指与羧基形成酯基、酰胺或酰肼的保护基团，包括但不限于烷基、苯基、烷基取代的氨基。其中，“烷基”优选为具有1-20个碳原子的取代基取代或未取代的直链或含支链的烷基，例如甲基、乙基、异丙基、叔丁基、二苯甲基、苄基、对硝基苄基、对甲氧基苄基、4-吡啶苄基、三氯乙基、甲基硫代乙基、对甲苯磺酰乙基、对硝基苯基硫代乙基等。

在本申请中，“任选的”或“任选地”表示随后描述的事件或状况可能发生也可能不发生，且该描述同时包括该事件或状况发生和不发生的情况。例如，“任选地被取代的芳基”表示芳基被取代或未被取代，且该描述同时包括被取代的芳基与未被取代的芳基。

本发明将涵盖各种立体异构体及其混合物，“立体异构体”是指由相同原子组成，通过相同的键键合，但具有不同三维结构的化合物。本发明的化合物的所有互变异构形式也将包含在本发明的范围内，“互变异构体”是指质子从分子的一个原子转移至相同分子的另一个原子而形成的异构体。

本发明所述的中间体化合物含有手性碳原子，且因此可产生对映异构体、非对映异构体及其它立体异构形式。每个手性碳原子可以基于立体化学而被定义为(R)-或(S)-。本发明旨在包括所有可能的异构体，以及其外消旋体和光学纯形式。本发明的化合物的制备可以选择外消旋体、非对映异构体或对映异构体作为原料或中间体。光学活性的异构体可以使用手性合成子或手性试剂来制备，或者使用常规技术进行拆分，例如采用结晶以及手性色谱等方法。本发明所述的“中间体”具有L型苯丙氨酸结构和D型苯丙氨酸结构两种构型，均在本发明所要保护的范围内。

¹⁸F-BPA的制备方法

本发明所述的一种新的¹⁸F-BPA的制备方法，例如可通过如下示例得到，但并不限于示例方法。在下述反应式中使用的氨基、羧基的保护基团以及硼酸酯基团可以适当变更，并不限于示例方法。

所述方法包括：将中间体I-2与¹⁸F离子反应得到¹⁸F取代的化合物

脱保护所述¹⁸F取代的化合物中的氨基和/或羧基，得到所述¹⁸F-BPA

各步骤的反应，反应温度可因溶剂、起始原料、试剂等适宜选择，反应时间也可因反应温度、溶剂、起始原料、试剂等适宜选择。各步骤反应结束后，目标化合物可按常用方法自反应体系中进行分离、提纯等步骤，如过滤、萃取、重结晶、洗涤、硅胶柱层析等方法。在不影响下一步反应的情况下，目标化合物也可不经过分离、纯化直接进入下一步反应。

在中间体I合成¹⁸F-BPA的步骤中，所使用的¹⁸F离子([¹⁸F]F^-)可以用质子束轰击H₂ ¹⁸O，通过¹⁸O(p,n)反应得到，或者利用本领域已知的方法获得。使¹⁸F离子俘获到离子交换柱上，用K2.2.2/K₂CO₃混合溶液洗脱，经过除水干燥后用于标记反应。将中间体I-2与¹⁸F离子反应，将混合溶液经阳离子柱纯化后，干燥，水解脱去氨基和羧基的保护基团得到所述¹⁸F-BPA。所使用的试剂包括氟化氢、氟化钾。所使用的溶剂包括水、甲醇、DMF、DMA、DMSO、乙腈、正丁醇、乙醇、二氯甲烷等，或其任意的混合溶剂。反应温度优选地为20-150℃，更优选为100-130℃。反应时间优选为5分钟-1小时，更优选为10-30分钟。所述除水干燥可以通过加入干燥的有机溶剂共沸去除水，可以使用的有机溶剂包括但不限于：乙腈、二甲亚砜(DMSO)、二甲基甲酰胺(DMF)、二甲基乙酰胺(DMA)，或其任意的组合溶剂。在优选的实施方案中，中间体I与¹⁸F离子反应可以加入铜催化剂，可以使用的铜催化剂包括但不限于：Cu(OTf)₂Py₄、Cu(OTf)₂，或其组合。

需要注意的是，本发明所述的中间体I以及¹⁸F-BPA均包括其全部的光学异构体，包括具有L构型苯丙氨酸结构的异构体和具有D构型苯丙氨酸结构的异构体。比如，¹⁸F-BPA包括了具有L构型苯丙氨酸结构的¹⁸F-L-BPA或D构型苯丙氨酸结构¹⁸F-D-BPA。在本发明所述的制备方法中，中间体I可以经过手性拆分得到单一构型的化合物参与反应，也可以未经拆分直接参与反应，得到¹⁸F-BPA。

以下结合具体实施例，进一步说明本发明。需理解，以下的描述仅为本发明的最优选实施方式，而不应当被认为是对于本发明保护范围的限制。在充分理解本发明的基础上，下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件，本领域技术人员可以对本发明的技术方案作出非本质的改动，这样的改动应当被视为包括于本发明的保护范围之中的。除非另外说明，否则百分比和份数是重量百分比和重量份数。

实施例1制备N-二苯亚甲基-2,4-二溴苯丙氨酸叔丁酯

将N-二苯亚甲基-甘氨酸叔丁酯(40g,135.42mmol,1eq)、1,4-二溴苄基溴(44.53g,135.42mmol,1eq)、四丁基溴化铵(TBAB,436.55mg,1.35mmol,0.01eq)溶于300mL甲苯，加入80mL氢氧化钾(100.00g,1.78mol,13.16eq)水溶液。在25℃下搅拌12小时至反应完全。反应混合物用100mL乙酸乙酯稀释，然后用400mL(200mL×2)乙酸乙酯萃取，混合有机相，并用600mL(300mL×2)饱和食盐水洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤得到固体物。将粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100:1-20:1)分离，得到15g的产物。

LCMS:MS(M+H⁺)＝544.0

¹HNMR:400MHz,CDCl₃

δ7.56-7.46(m,3H),7.35-7.16(m,7H),7.01(d,J＝8.2Hz,1H),6.59(br d,J＝6.8Hz,2H),4.23(dd,J＝4.2,9.5Hz,1H),3.31(dd,J＝4.0,13.4Hz,1H),3.11(dd,J＝9.6,13.5Hz,1H),1.41-1.28(m,9H)。

实施例2制备N-叔丁氧羰基-2,4-二溴苯丙氨酸叔丁酯

N-二苯亚甲基-2,4-二溴苯丙氨酸叔丁酯(30g,55.22mmol,1eq)溶于THF(70mL)，加入柠檬酸(31.83g,165.66mmol,31.86mL,3eq)的水溶液20mL，25℃下搅拌12h。加入Na₂CO₃(29.26g,276.10mmol,5eq)的水溶液50mL和Boc₂O(13.26g,60.74mmol,13.95mL,1.1eq)，继续搅拌4h。待反应完成后，反应混合物用400mL(200mL×2)乙酸乙酯萃取，混合有机相，并用400mL(200mL×2)饱和食盐水洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤得到固体物。将粗产物通过柱层析(石油醚/乙酸乙酯＝100:1-10:1)分离，得到19.6g的产物，收率73.48％，纯度99.2％。

LCMS:MS(M-155⁺)＝323.9

¹HNMR:400MHz,CDCl₃

δ7.72(d,J＝1.5Hz,1H,7.37(dd,J＝1.8,8.1Hz,1H),7.13(br d,J＝8.1Hz,1H),5.06(br d,J＝8.3Hz,1H),4.59-4.38(m,1H),3.23(dd,J＝5.9,13.9Hz,1H),3.00(br dd,J＝8.6,13.8Hz,1H),1.40(br d,J＝16.6Hz,17H)。

实施例3手性拆分N-叔丁氧羰基-2,4-二溴苯丙氨酸叔丁酯

19.6g的N-叔丁氧羰基-2,4-二溴苯丙氨酸叔丁酯通过SFC分离(色谱柱：DAICELCHIRALPAKAY(250mm*50mm,10um)；流动相:[0.1％NH₃H₂O MEOH])，得到9.1g产物，收率46.84％,纯度97.8％；和9.2g产物，收率48.18％,纯度99.5％。

实施例4

制备N-叔丁氧羰基-2,4-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-苯丙氨酸叔丁酯

N-叔丁氧羰基-2,4-二溴-苯丙氨酸叔丁酯(7.50g,15.6mmol,1.00eq),联硼酸频那醇酯(19.8g,78.2mmol,5.00eq),KOAc(6.14g,62.6mmol,4.00eq),Pd(dppf)Cl₂(1.15g,1.57mmol,0.10eq)和二氧六环(75.0mL)在90℃氮气保护下搅拌1h。待反应完成后，过滤，加入200mL的水，用反应混合物用300mL(100mL×3)乙酸乙酯萃取，混合有机相，并用200mL(100mL×2)饱和食盐水洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤得到固体物。将粗产物通过HPLC纯化，得到6.5g的产物，纯度96.3％。

LCMS:MS(M+H⁺-156)＝418.0

¹HNMR:400MHz,CDCl₃

8.24(s,1H),7.84(d,J＝7.6,1H),7.30(d,J＝7.6,1H),5.90(d,J＝8.4,1H),4.24-4.19(m,1H),3.24-3.19(m,2H),1.47(s,9H),1.39(s,12H),1.34(s,12H),1.32(s,9H).

实施例5

制备N-叔丁氧羰基-2,4-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-苯丙氨酸叔丁酯

O-叔丁氧羰基-2,4-二溴-苯丙氨酸叔丁酯(7.00g,14.6mmol,1.00eq),联硼酸频那醇酯(18.5g,73.0mmol,5.00eq),KOAc(5.73g,58.4mmol,4.00eq),Pd(dppf)Cl₂(5.73g,58.4mmol,4.00eq)和二氧六环(70.0mL)在90℃氮气保护下搅拌3h。待反应完成后，过滤，加入200mL的水，用反应混合物用300mL(100mL×3)乙酸乙酯萃取，混合有机相，并用200mL(100mL×2)饱和食盐水洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤得到固体物。将粗产物通过HPLC纯化，得到5.37g的产物，纯度97.35％。

LCMS:MS(M-100-55+H⁺):418.3

¹HNMR:400MHz,CDCl₃

δ1.31-1.35(m,21H),1.39(s,12H),1.47(s,9H),3.16-3.29(m,2H),4.19-4.26(m,1H),5.89(br d,J＝8.40Hz,1H),7.30(d,J＝8.00Hz,1H),7.84(dd,J＝7.60,1.47Hz,1H),8.24(s,1H)

实施例6

制备N,N-二(叔丁氧羰基)-2,4-二(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂硼烷-2-基)-苯丙氨酸叔丁酯

N-叔丁氧羰基-2,4-二溴-苯丙氨酸叔丁酯(7.00g,14.6mmol,1.00eq),联硼酸频那醇酯(18.5g,73.0mmol,5.00eq),KOAc(5.73g,58.4mmol,4.00eq),Pd(dppf)Cl₂(5.73g,58.4mmol,4.00eq)和二氧六环(70.0mL)在90℃氮气保护下搅拌3h。待反应完成后，过滤，加入200mL的水，用反应混合物用300mL(100mL×3)乙酸乙酯萃取，混合有机相，并用200mL(100mL×2)饱和食盐水洗涤，Na₂SO₄干燥，过滤得到固体物。将粗产物通过HPLC纯化，得到5.37g的产物，纯度97.35％。氢谱参见图1。

实施例7

制备¹⁸F-BPA

对H₂ ¹⁸O照射加速的质子，通过¹⁸O(p,n)反应得到¹⁸F离子，使其俘获到离子交换柱，用K2.2.2/K₂CO₃混合溶液洗脱，经过除水干燥后用于标记反应。将实施例5中得到化合物在DMA溶液中与¹⁸F离子在Cu(OTf)₂Py₄存在下反应15min，待反应完成后，将混合溶液经阳离子柱纯化，干燥。在HCl溶液中110℃下反应10min，加入NaOH溶液中和，水解脱去氨基和羧基的保护基团得到粗产品。将粗产品通过HPLC纯化可以得到纯度高于99％的¹⁸F-BPA。

放射性HPLC谱图参见图2。将产物与少量标准品¹⁹F-BPA混合，共同注射入HPLC中，相同条件下在保留时间(保留时间11min±1min)位置出峰，证明标记产物是¹⁸F-BPA，参见图3。

采用上述相同的制备方法，通过实施例6中得到的化合物制备¹⁸F-BPA，同样可以得到纯度高于99％的¹⁸F-BPA。

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