阅读说明：本技术 噻吩类化合物的制备方法和用途 (Preparation method and application of thiophene compound ) 是由 刘亚婧 赵燕芳 廖伟科 韩雨霏 齐银良 宫平 于 2019-10-25 设计创作，主要内容包括：本发明属于药物化学技术领域,涉及通式Ⅰ所示的噻吩类化合物及药学上可接受的盐、溶剂化物或前药及其制备方法。其中取代基L、Ar、R具有在说明书中给出的含义。本发明还涉及通式Ⅰ的化合物强的抑制PI3K的作用,并且还涉及该类化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药在制备治疗和/或预防由于PI3K异常高表达所引起疾病的药物中的用途,特别是在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。<Image he="502" wi="689" file="DDA0002247296940000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention belongs to the technical field of pharmaceutical chemistry, and relates to a thiophene compound shown as a general formula I, a pharmaceutically acceptable salt, a solvate or a prodrug and a preparation method thereof. Wherein the substituents L, Ar and R have the meanings given in the specification. The invention also relates to a compound with a general formula I, which has a strong effect of inhibiting PI3K, and also relates to application of the compound and pharmaceutically acceptable salts, solvates or prodrugs thereof in preparing medicaments for treating and/or preventing diseases caused by abnormal high expression of PI3K, in particular to application in preparing medicaments for treating and/or preventing cancers.)

噻吩类化合物的制备方法和用途

技术领域

本发明属于药物化学技术领域，涉及新的噻吩类化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，它们的制备方法以及含有所述化合物的药物组合物。本发明还涉及该类化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药在制备治疗和/或预防由于PI3K异常高表达所引起疾病的药物中的用途，特别是在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

背景技术

恶性肿瘤是由控制细胞生长增殖机制失常而引起的疾病。随着全球人口的不断增加、人口老龄化以及环境污染等外界因素，恶性肿瘤已经成为发病率仅次于心脑血管疾病的、威胁人类健康的第二大“杀手”，而其死亡率甚至超过心脑血管疾病，居于所有疾病的首位。

磷酯酰肌醇-3-激酶(Phosphoinositide 3-kinase,PI3K)是由一个p85调节亚基和一个p110催化亚基组成的异二聚体，具有丝氨酸/苏氨酸(Ser/Thr)激酶活性与磷脂酰肌醇激酶活性。根据PI3K催化亚基p110的结构特点和底物分子可将其分为三大类：I型、II型、III型。PI3K作为***的靶点引人注目，是因为它位于众多重要信号通路的关键性的信号位置。当PI3K接受来自酪氨酸激酶和G蛋白偶联受体的信号时，活化的pl10亚基可以通过将底物磷脂酰肌醇-4,5-二磷酸酯(PIP2)的3位羟基磷酸化，转化生成磷脂酰肌醇-3,4,5-三磷酸酯(PIP3)，PIP3是细胞内重要的第二信使，它们能激活下游多种蛋白激酶如Akt/PKB(蛋白激酶B)等，从而活化多种下游通路。

PTEN(Phosphatase and tensin homology deleted on chromosome ten)基因是近年来发现的一种新的肿瘤抑制基因，其产物PTEN蛋白可特异性地催化PIP3的3位去磷酸化生成PIP2，负性调节PI3K信号通路，阻断Akt转移到细胞膜上，进而影响Akt的磷酸化，抑制Akt介导的下游通路。PTEN与PI3K的协调作用，可以使细胞内PIP3的浓度处于适当水平，保持Akt适中的活性。PTEN的丢失使细胞内PIP3积聚，PTEN-PI3K/Akt信号转导通路失衡，Akt持续活化，从而使细胞抗凋亡。PTEN的过表达则可抑制Akt活化从而促进细胞凋亡，因此转染PTEN可诱导凋亡。

PI3K-Akt信号通路广泛参与细胞生命活动，包括生存、增殖、凋亡、侵袭等，在几乎所有的人类肿瘤中该通路都过度激活。PI3K-Akt信号通路活化后可以抑制细胞凋亡，增强细胞对缺氧和营养缺乏的耐受，促进细胞存活、增殖并参与血管形成，辅助肿瘤生长，促进肿瘤转移，以及与其它致癌因素共同影响肿瘤的发生、发展。因此，近年来已经有多个作用于PI3K-Alt信号通路的小分子抑制剂进入临床阶段。

本发明人在参考文献的基础上，设计并合成了一系列噻吩类衍生物，经过药理活性筛选，表明本发明涉及的化合物具有良好的抗肿瘤活性以及对PI3K具有显著的抑制活性，同时对多种人源肿瘤细胞具有显著抑制作用。

发明内容

本发明涉及通式I的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，

其中：

R选自氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基中的一个或多个；

L为

Ar为C₆-C₁₀芳基或5-10元杂芳基，其中，所述杂芳基含有1-3个选自N、O或S的杂原子，并且Ar任选1-3个相同或不同的R₁取代；

R₁为氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C₁-C₆烷基、C₂-C₆烯基、C₂-C₆炔基、C₁-C₆烷氧基、C₁-C₆烷基硫基、任选被羟基、氨基或卤代的C₁-C₆烷基或C₁-C₆烷氧基、被单或二C₁-C₆烷基取代的氨基、C₁-C₆烷基酰氨基、游离的、成盐的、酯化的和酰胺化的羧基、C₁-C₆烷基亚磺酰基、C₁-C₆烷基磺酰基、C₁-C₆烷基酰基、氨基甲酰基、被单或二C₁-C₆烷基取代的氨基甲酰基。

本发明还优选涉及定义如下的通式I的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中，

R为氢。

本发明还优选涉及定义如下的通式I的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中，

R为氢；

L为

Ar为苯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻唑基、咪唑基、三氮唑基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、异喹啉基、吲哚基、咪唑基、三氮唑基、萘基、1,3-苯并二噁唑；并且Ar任选1-3个相同或不同的R₁取代；

R₁为氢、羟基、卤素、硝基、氨基、氰基、C₁-C₄烷基、C₂-C₃烯基、C₂-C₃炔基、C₁-C₃烷氧基、C₁-C₃烷基硫基、C₁-C₃烷基磺酰基、任选被羟基、氨基或卤代的C₁-C₄烷基或C₁-C₃烷氧基、被单或二C₁-C₃烷基取代的氨基。

本发明还优选涉及定义如下的通式I的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药，其中，

R为氢；

L为

Ar为苯基、吡啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、萘基、1,3-苯并二噁唑，并且Ar任选1-3个相同或不同的R₁取代；

R₁为氢、羟基、氟、氯、溴、氰基、甲基、叔丁基、甲氧基、三氟甲基、三氟甲氧基、二甲氨基、甲基亚磺酰基、C₁-C₆烷基磺酰基。

本发明通式I的化合物及其药学上可接受的盐、溶剂化物或前药优选以下化合物，但这些化合物并不意味着对本发明的任何限制，

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-[2,5-双(三氟甲基)苯基]脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3-甲氧基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氟-5-甲基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氯-5-三氟甲基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3,5-二氟苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(4-三氟甲氧基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2,5–二甲基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氯-6-甲基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(4-氟苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氟苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3-氯-4-氟苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-溴-4-氟苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(4-氯苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(4-甲基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3,4-二氟苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2,6-二甲基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-甲氧基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3-溴苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氯苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3-三氟甲基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-三氟甲氧基苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2,4-二氯苯基)脲

1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3-三氟甲基-4-氯苯基)脲

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-羟基-3-甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(2,4-二氯苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(2,5-二甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(1,3-苯并二噁唑-5-基)亚甲基)]肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-羟基-3,5-二溴苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-羟基-3,5-二叔丁基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-甲磺酰基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,5-二甲基-4-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(3-羟基萘-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(噻吩-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(吡啶-3-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(2-氯-4-氟苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(2,4-二羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,5-二甲氧基-4-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,4-二羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-氰基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-三氟甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-甲氧基-4-羟基-5-溴苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-三氟甲基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-溴-4-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(1H-吡咯-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-氟-4-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(呋喃-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(2,4,6-三甲基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(2-氟苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-溴苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-二甲氨基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(2,6-二氯苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-苯亚甲基肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,4,5-三甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(5-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺

而且，按照本发明所属领域的一些通常方法，本发明的通式Ⅰ的噻吩类衍生物可以与酸生成它的药学上可接受的盐。酸可以包括无机酸或有机酸，与下列酸形成的盐是特别优选的：盐酸、氢溴酸、硫酸、磷酸、甲磺酸、乙磺酸、甲苯磺酸、苯磺酸、萘二磺酸、乙酸、丙酸、乳酸、三氟乙酸、马来酸、柠檬酸、富马酸、洒石酸、苯磺酸、苯甲酸或对甲苯磺酸等。

此外，本发明还包括本发明化合物的前药。依据本发明，前药是通式Ⅰ化合物的衍生物，它们自身可能具有较弱的活性或甚至没有活性，但是在给药后，在生理条件下(例如通过代谢、溶剂分解或另外的方式)被转化成相应的生物活性形式。

除非另外指出，本发明所用的术语“卤代”是指氟代、氯代、溴代或碘代；“烷基”是指直链或支链的烷基；“烯基”是指直链或支链的烯基；“炔基”是指直链或支链的炔基；“芳基”是指除去芳烃中的一个氢原子而得的有机基团，如苯基、萘基；5-10元杂芳基包括含有一个或多个选自N、O和S的杂原子，其中每个杂芳基的环状体系可以是单环或多环的，环状体系是芳香性的，一共含有5-10个原子，可以举出例如咪唑基、吡啶基、嘧啶基、吡唑基、(1,2,3)-和(1,2,4)-***基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、异噁唑基、噁唑基、吡唑基、吡咯基、噻唑基、苯并噻吩基、苯并呋喃基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、吲哚基、喹啉基等；5-10元杂环基包括含有一个或多个选自N、O和S的杂原子，其中每个杂芳基的环状体系可以是单环或多环的，但是是非芳香性的，环状体系一共含有5-10个原子，可以任选包括1或2个碳碳双键或碳碳叁键，可以举出例如吡咯烷基、吗啉基、哌嗪基、哌啶基、噻唑啉基等。

本发明还涉及通式Ⅰ的化合物较强的抑制PI3K的作用，并且还涉及该类化合物及其药学上可接受的盐、水合物、溶剂化物或前药在制备治疗和/或预防由于PI3K异常高表达所引起疾病的药物中的用途，特别是在制备治疗和/或预防癌症的药物中的用途。

下面合成路线A-C描述了本发明的通式Ⅰ化合物的制备，所有的原料都是通过这些路线中描述的方法、通过有机化学领域普通技术人员熟知的方法制备的或者可商购。本发明的全部最终化合物都是通过这些路线中描述的方法或通过与其类似的方法制备的，这些方法是有机化学领域普通技术人员熟知的。这些路线中应用的全部可变因数如下文的定义或如权利要求中的定义。

按照本发明的式Ⅰ化合物，中间体1的制备方法如路线A，其他取代基如权利要求中所定义。

路线A中间体1的合成

按照本发明的式Ⅰ化合物，化合物Ⅰ-i(即化合物I)的制备方法如路线B，其他取代基如权利要求中所定义。

路线B化合物I-i的合成

按照本发明的式Ⅰ化合物，化合物Ⅰ-ii的制备方法如路线C，其他取代基如权利要求中所定义。

路线C化合物I-ii的合成

具体实施方式

：

在以下的实施例中，描绘了制备部分所述化合物的方法。应了解，以下方法及所属领域的普通技术人员已知的其他方法均可以适用于本发明所述的所有化合物的制备。实施例旨在阐述而不是限制本发明的范围。

实施例1 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氟苯基)脲的制备

1.1 3-(4-氨基苯基)-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-4-腈(中间体1)的制备

1.1.1 2-[二(甲硫基)亚甲基]丙二腈(1a)的制备

室温下，将7.5g(113.7mmol)丙二腈、17.3g(125.0mmol)碳酸钾加入到75mL DMSO中，冷却至0℃，逐渐滴加7.5mL(125mmol)二硫化碳，滴毕，20℃搅拌2h。将反应液冷却至0℃，逐渐滴加14.1mL(227.3mmol)碘甲烷，滴毕，20℃反应12h。反应完毕，将反应液倒入75mL冰水中，有黄色固体析出，抽滤，水洗，干燥，得到18.2g黄色固体，收率93.9％。

1.1.2 3-氨基-4-氰基-5-(甲硫基)噻吩-2-羧酸乙酯(1b)的制备

室温下，将15.0g(88.2mmol)中间体1a、9.8mL(88.2mmol)巯基乙酸乙酯加入到75mL乙醇中，冷却至0℃，逐渐滴加12.2mL(88.2mmol)三乙胺，滴毕，20℃反应12h。反应完毕，抽滤，滤饼用少许乙醇洗涤，干燥，得到15.5g类白色固体，收率72.6％。

1.1.3 4-氰基-3-碘-5-(甲硫基)噻吩-2-羧酸乙酯(1c)的制备

室温下，将6.0(62.0mmol)碘单质加入到含7.5g(31.1mmol)中间体1b的乙腈(75mL)溶液中，升温至70℃，逐渐滴加6.3mL(62.0mmol)亚硝酸异戊酯，滴毕，20℃反应12h。反应完毕，冷却至0℃，继续搅拌0.5h，抽滤，滤饼用少许冷的乙腈洗涤，干燥，得到6.9g黄色固体，收率63.0％。

1.1.4 4-氰基-3-碘-5-[甲基亚硫酰基(亚磺酰)]噻吩-2-羧酸乙酯(1d)的制备

室温下，将0.3g(1.1mmol)钨酸钠加入到含3.8g(10.7mmol)中间体1c的冰醋酸(75mL)溶液中，逐渐滴加30％的过氧化氢溶液37.5mL，滴毕，60℃反应2h。反应完毕冷却至室温，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得到3.9g米白色固体，收率99.2％。

1.1.5 4-氰基-3-碘-5-吗啉代噻吩-2-羧酸乙酯(1e)的制备

室温下，将3.9g(10.7mmol)中间体1d、60mL四氢呋喃加入到100mL的三颈瓶中，冰浴下逐渐滴加4.8mL(55.1mmol)吗啉，控制温度<10℃，滴毕，25℃反应8h。反应完毕，反应液倒入30mL冰水中，析出白色固体，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得到3.2g白色固体，收率75.5％。

1.1.6 3-[4-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯基]-4-氰基-5-吗啉代噻吩-2-羧酸乙酯(1f)的制备

室温下，将2.6g(6.6mmol)中间体1e、3.0g(6.6mmol)4-氨基Boc-苯硼酸频哪醇酯和3.0g(19.8mmol)氟化铯加入到二氧六环(25mL)和水(5mL)的混合溶液中，N₂保护下加入0.2g(0.3mmol)双三苯基膦二氯化钯的甲苯(5mL)溶液，95℃反应15h。反应完毕冷却至室温，浓缩反应液，加入10mL水，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得到2.4g白色固体，收率78.9％。

1.1.7 3-[4-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯基]-4-氰基-5-吗啉代噻吩-2-羧酸(1g)的制备

室温下，将6.0g(13.2mmol)中间体1f、60mL四氢呋喃和30mL甲醇加入到250mL的茄形瓶中，加入5.1g(212.6mmol)氢氧化锂的饱和水溶液，25℃反应7h。反应完毕，减压浓缩，将残余物加入至30mL水中，用2N盐酸溶液调pH值至5，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得到4.4g白色固体，收率71.44％。

1.1.8[4-(2-甲酰胺基-4-氰基-5-吗啉代噻吩-3-基)苯基]氨基甲酸叔-丁基酯(1h)的制备

室温下，将5.4g(12.6mmol)中间体1g、2.4mL三乙胺加入到120mL四氢呋喃中，冰浴下逐渐滴加1.8g(18.9mmol)氯甲酸甲酯，滴毕，室温反应2h。冰浴下，逐渐滴加氨水27mL，滴毕，室温反应2h。反应完毕，减压浓缩，将残余物加入到50mL水中，抽滤，水洗滤饼，干燥，得到4.7g黄色固体，收率86.1％。

1.1.9(Z)-[4-[4-氰基-2-[[(二甲氨基)亚甲基]氨基甲酰]-5-吗啉代噻吩-3-基]苯基]氨基甲酸叔-丁基酯(1i)的制备

室温下，将5.4g(12.6mmol)中间体1h、3.0g(25.2mmol)DMF-DMA加入到120mL DMF，110℃反应2h。反应完毕冷却至室温，减压浓缩，将残余物加入到30mL水中，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得到4.4g淡黄色固体，收率71.4％。

1.1.10 3-[4-[(叔-丁氧羰基)氨基]苯基]]-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-4-腈(1j)的制备

室温下，将3.0g(6.2mmol)中间体1i加入到30mL冰醋酸中，逐渐滴加80％的水合肼15mL，滴毕，60℃反应2h。反应完毕冷却至室温，减压浓缩，将残余物加入到30mL水中，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得到2.4g类色固体，收率85.5％。

1.1.11 3-(4-氨基苯基)-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-4-腈(1)的制备

室温下，将3.0g(6.6mmol)中间体1j加入到60mL二氯甲烷中，将反应体系将至0℃，逐渐滴加3.1mL(22.0mmol)三氟乙酸，滴毕，25℃反应3h，减压浓缩，将残余物加入30mL水中，用三乙胺调pH值至8，抽滤，滤饼用水洗涤，干燥，得到1.7g白色固体，收率80.0％。

1.2 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氟苯基)脲的制备

室温下，将中间体1(9.3mmol)，2-氟苯基异氰酸酯(14.0mmol)加入到40mL二氯甲烷中，25℃反应12h，抽滤，干燥，得到白色固体。

收率58.7％。m.p.:217.8～219.3℃；MS(ESI)m/z(％):488.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ14.04(s,1H),9.65(s,1H),8.80(s,1H),8.46(s,1H),8.16(t,J＝7.7Hz,1H),7.49(d,J＝8.0Hz,2H),7.30(d,J＝7.9Hz,2H),7.27–7.18(m,1H),7.14(t,J＝7.6Hz,1H),7.08–6.95(m,1H),3.79(s,4H),3.51(s,4H).

实施例2 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(4-氟苯基)脲的制备

以4-氟苯基异氰酸酯为原料，按照实施例1中1.2的合成方法制得1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(4-氟苯基)脲，收率65.9％。m.p.:231.4～232.3℃；MS(ESI)m/z(％):488.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),9.17(s,1H),9.07(s,1H),8.46(s,1H),7.58(d,J＝8.9Hz,2H),7.48(d,J＝8.3Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,4H),3.84–3.76(m,4H),3.51(d,J＝4.3Hz,4H).

实施例3 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氯苯基)脲的制备

以2-氯苯基异氰酸酯为原料，按照实施例1中1.2的合成方法制得1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氯苯基)脲，收率77.1％。m.p.:222.3～223.9℃；MS(ESI)m/z(％):528.2[M+Na]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ14.03(s,1H),9.84(s,1H),8.49(s,1H),8.46(s,1H),8.17(d,J＝8.2Hz,1H),7.51(d,J＝8.3Hz,2H),7.46(d,J＝8.0Hz,1H),7.32(s,1H),7.29(d,J＝7.0Hz,2H),7.03(t,J＝7.6Hz,1H),3.79(s,4H),3.51(s,4H).

实施例4 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3-溴苯基)脲的制备

以3-溴苯基异氰酸酯为原料，按照实施例1中1.2的合成方法制得1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3-溴苯基)脲，收率72.5％。m.p.:198.7～200.3℃；MS(ESI)m/z(％):548.2[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),9.14(s,1H),9.06(s,1H),8.46(s,1H),7.87(s,1H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(d,J＝8.7Hz,1H),7.30(d,J＝8.3Hz,2H),7.24(t,J＝8.0Hz,1H),7.15(d,J＝7.9Hz,1H),3.79(s,4H),3.51(s,4H).

实施例5 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(4-甲基苯基)脲的制备

以4-甲基苯基异氰酸酯为原料，按照实施例1中1.2的合成方法制得1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(4-甲基苯基)脲，收率67.8％。m.p.:228.5～230.1℃；MS(ESI)m/z(％):484.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),8.95(s,1H),8.81(s,1H),8.46(s,1H),7.46(d,J＝8.3Hz,2H),7.35(d,J＝8.3Hz,2H),7.28(d,J＝8.3Hz,2H),7.09(d,J＝8.2Hz,2H),3.79(s,4H),3.51(s,4H),2.24(s,3H).

实施例6 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-甲氧基苯基)脲的制备

以2-甲氧基苯基异氰酸酯为原料，按照实施例1中1.2的合成方法制得1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-甲氧基苯基)脲，收率66.2％。m.p.:208.8～210.1℃；MS(ESI)m/z(％):500.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.98(s,1H,),9.46(s,1H),8.46(s,1H),8.29(s,1H),8.15(d,J＝7.8Hz,1H),7.47(d,J＝8.3Hz,2H),7.29(d,J＝8.1Hz,2H),7.03(d,J＝7.4Hz,1H),6.98–6.93(m,1H),6.90(t,J＝7.7Hz,1H),3.89(s,3H),3.79(s,4H),3.51(s,4H).

实施例7 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2,6-二甲基苯基)脲的制备

以2,6-二甲基苯基异氰酸酯为原料，按照实施例1中1.2的合成方法制得1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2,6-二甲基苯基)脲，收率65.2％。m.p.:244.5～245.8℃；MS(ESI)m/z(％):522.3[M+Na]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),9.25(s,1H),8.45(s,1H),8.08(s,1H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.25(d,J＝8.0Hz,2H),7.11–7.00(m,3H),3.79(s,4H),3.51(s,4H),2.22(s,6H).

实施例8 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氯-5-三氟甲基苯基)脲的制备

以2-氯-5-三氟甲基苯基异氰酸酯为原料，按照实施例1中1.2的合成方法制得1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(2-氯-5-三氟甲基苯基)脲，收率59.4％。m.p.:244.5～245.7℃；MS(ESI)m/z(％):572.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),9.78(s,1H),8.46(s,3H),7.94(d,J＝8.3Hz,1H),7.62(d,J＝8.2Hz,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.32(d,J＝8.1Hz,2H),3.79(s,4H),3.51(s,4H).

实施例9 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3,5-二氟苯基)脲的制备

以3,5-氟苯基异氰酸酯为原料，按照实施例1中1.2的合成方法制得1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3,5-二氟苯基)脲，收率81.2％。m.p.:223.2～225.0℃；MS(ESI)m/z(％):506.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ14.00(s,1H),9.89(s,1H),8.76(s,1H),8.65(s,1H),8.46(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.51(d,J＝8.4Hz,2H),7.38(d,J＝8.2Hz,1H),7.32(d,J＝8.0Hz,2H),3.80(s,4H),3.51(s,4H).

实施例10 1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3-氯-4-氟苯基)脲的制备

以3-氯-4-氟苯基异氰酸酯为原料，按照实施例1中1.2的合成方法制得1-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-3-(3-氯-4-氟苯基)脲，收率72.1％。m.p.:238.7～240.4℃；MS(ESI)m/z(％):522.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ14.02(s,1H),9.57(s,1H),9.41(s,1H),8.46(s,1H),7.81(d,J＝7.5Hz,1H),7.47(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(s,1H),7.31(d,J＝8.6Hz,2H),7.28(s,1H),3.79(s,4H),3.51(s,4H).

实施例11(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-苯亚甲基肼-1-甲酰胺的制备

11.1 N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]肼甲酰胺(中间体1l)的制备

11.1.1[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]氨基甲酸苯酯(1k)的制备

室温下，将4.2g(12.0mmol)中间体1加入到80mL丙酮中，逐渐滴加2.3mL(18.0mmol)氯甲酸苯酯，滴毕，室温反应3h。反应完毕，减压浓缩，向残余物加入到50mL水，用二氯甲烷萃取(3x 10mL)，合并有机层，依次用水(2x 10mL)、饱和食盐水洗涤有机层(2x10mL)，干燥，蒸干二氯甲烷，得4.1g白色固体，收率73.2％。

11.1.2 N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]肼甲酰胺(1l)的制备

室温下，将2.8g(6.0mmol)中间体1l加入到50mL1,4-二氧六环中，逐渐滴加1.0mL(12.0mmol)80％水合肼，滴毕，100℃反应2h。反应完毕，抽滤，干燥，得到2.1g白色固体，收率85.3％。

11.2(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-苯亚甲基肼-1-甲酰胺的制备

室温下，将中间体1l(5.0mmol)，1.0mL冰醋酸和苯甲醛.6.0mmol)加入到10mL乙醇中，80℃反应5h。反应完毕，抽滤，干燥，得到白色固体。

收率64.5％。m.p.:241.8～243.6℃；MS(ESI)m/z(％):521.3[M+Na]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ14.00(s,1H),10.80(s,1H),9.03(s,1H),8.46(s,1H),7.97(s,1H),7.86(d,J＝6.9Hz,2H),7.68(d,J＝8.3Hz,2H),7.47–7.36(m,3H),7.32(d,J＝8.1Hz,2H),3.80(s,4H),3.52(s,4H).

实施例12(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-氟苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以4-氟苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-氟苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率74.2％。m.p.:239.1～240.7℃；MS(ESI)m/z(％):515.4[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),10.90(s,1H),9.08(s,1H),8.47(s,1H),8.02(s,1H),7.99(s,2H),7.66(d,J＝8.3Hz,2H),7.41(d,J＝8.3Hz,2H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),3.80(s,4H),3.52(s,4H).

实施例13(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-溴苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以3-溴苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-溴苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率75.2％。m.p.:240.1～241.5℃；MS(ESI)m/z(％):575.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),10.91(s,1H),9.14(s,1H),8.45(s,1H),8.18(s,1H),7.93(s,1H),7.78(d,J＝7.8Hz,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.56(d,J＝8.0Hz,1H),7.38(t,J＝7.8Hz,1H),7.31(d,J＝8.3Hz,2H),3.82–3.77(m,4H),3.54–3.49(m,4H).

实施例14(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以3-羟基苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率61.5％。m.p.:241.7～242.5℃；MS(ESI)m/z(％):513.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),10.72(s,1H),9.54(s,1H),8.98(s,1H),8.46(s,1H),7.88(s,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.31(d,J＝8.4Hz,2H),7.27–7.19(m,3H),6.81(d,J＝7.4Hz,1H),3.80(s,4H),3.51(s,4H).

实施例15(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以4-甲氧基苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率77.3％。m.p.:255.6～257.7℃；MS(ESI)m/z(％):527.4[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ14.00(s,1H),10.67(s,1H),8.98(s,1H),8.47(s,1H),7.92(s,1H),7.80(d,J＝8.7Hz,2H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.32(d,J＝8.5Hz,2H),6.99(d,J＝8.8Hz,2H),3.81(s,4H),3.79(s,3H),3.52(s,4H).

实施例16(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,4-二羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以3,4-二羟基苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,4-二羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率77.2％。m.p.:246.8～248.5℃；MS(ESI)m/z(％):529.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.96(s,1H),10.52(s,1H),8.90(s,1H),8.43(s,1H),7.79(s,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.30(d,J＝8.5Hz,2H),7.26(d,J＝1.6Hz,1H),7.05(dd,J＝8.2,1.7Hz,1H),6.77(d,J＝8.1Hz,1H),3.80(s,4H),3.51(s,4H).

实施例17(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以3-甲氧基-4-羟基苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3-甲氧基-4-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率78.9％。m.p.:254.6～256.3℃；MS(ESI)m/z(％):543.2[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ14.01(s,1H),10.62(s,1H),9.43(s,1H),8.98(s,1H),8.47(s,1H),7.86(s,1H),7.67(d,J＝8.3Hz,2H),7.49(d,J＝1.3Hz,1H),7.31(d,J＝8.2Hz,2H),7.13(dd,J＝8.1,1.6Hz,1H),6.81(d,J＝8.1Hz,1H),3.86(s,3H),3.80(s,4H),3.51(s,4H).

实施例18(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-三氟甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以4-三氟甲氧基苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-三氟甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率85.5％。m.p.:269.7～271.4℃；MS(ESI)m/z(％):581.2[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),10.90(s,1H),9.08(s,1H),8.46(s,1H),8.01(d,J＝8.8Hz,2H),7.99(s,1H),7.67(d,J＝8.5Hz,2H),7.41(d,J＝8.3Hz,2H),7.32(d,J＝8.3Hz,2H),3.83–3.76(m,4H),3.55–3.49(m,4H).

实施例19(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(2,6-二氯苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以2,6-二氯苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(2,6-二氯苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率76.5％。m.p.:258.7～260.1℃；MS(ESI)m/z(％):589.8[M+Na]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.98(s,1H),11.16(s,1H),8.79(s,1H),8.45(s,1H),8.19(s,1H),7.59(t,J＝8.1Hz,4H),7.43(t,J＝8.1Hz,1H),7.29(d,J＝8.2Hz,2H),3.79(s,4H),3.51(s,4H).

实施例20(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-羟基-3,5-二叔丁基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以4-羟基-3,5-二叔丁基苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(4-羟基-3,5-二叔丁基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率90.2％。m.p.:274.0～275.9℃；MS(ESI)m/z(％):649.5[M+Na]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.98(s,1H),10.56(s,1H),8.93(s,1H),8.46(s,1H),7.89(s,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.49(s,2H),7.32(s,1H),7.30(s,2H),3.80(s,4H),3.51(s,4H),1.42(s,18H).

实施例21(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,5-二甲基-4-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以3,5-二甲基-4-羟基苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,5-二甲基-4-羟基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率82.4％。m.p.:258.1～259.9℃；MS(ESI)m/z(％):565.5[M+Na]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),10.55(s,1H),8.90(s,0H),8.63(s,1H),8.47(s,1H),7.81(s,1H),7.68(d,J＝8.5Hz,2H),7.41(s,2H),7.31(d,J＝8.5Hz,2H),3.80(s,4H),3.51(s,4H),2.20(s,6H).

实施例22(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,4,5-三甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺的制备

以3,4,5-三甲氧基苯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-(3,4,5-三甲氧基苯亚甲基)肼-1-甲酰胺，收率77.9％。m.p.:247.4～249.1℃；MS(ESI)m/z(％):587.4[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ10.81(s,1H),9.04(s,1H),8.47(s,1H),7.89(s,1H),7.66(d,J＝8.5Hz,2H),7.32(d,J＝8.5Hz,2H),7.15(s,2H),3.86(s,6H),3.80(s,4H),3.70(s,3H),3.51(s,4H).

实施例23(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(1H-吡咯-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺的制备

以2-吡咯甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(1H-吡咯-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺，收率59.2％。m.p.:245.8～247.2℃；MS(ESI)m/z(％):486.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ14.00(s,1H),11.51(s,1H),10.56(s,1H),9.03(s,1H),8.47(s,1H),7.76(s,1H),7.63(d,J＝8.4Hz,2H),7.33(d,J＝8.4Hz,2H),7.01(s,1H),6.38(s,1H),6.12(dd,J＝5.4,2.4Hz,1H),3.80(s,4H),3.52(s,4H).

实施例24(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(呋喃-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺的制备

以2-呋喃甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(呋喃-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺，收率66.8％。m.p.:246.7～248.3℃；MS(ESI)m/z(％):511.2[M+Na]⁺。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ14.01(s,1H),10.76(s,1H),8.81(s,1H),8.46(s,1H),8.18(s,1H),7.63(d,J＝5.0Hz,1H),7.61(d,J＝8.2Hz,2H),7.44(d,J＝3.1Hz,1H),7.30(d,J＝7.7Hz,2H),7.12(dd,J＝4.9,3.7Hz,1H),3.83–3.76(m,4H),3.54–3.48(m,4H).

实施例25(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(吡啶-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺的制备

以2-吡啶甲醛为原料，按照实施例11中11.2的合成方法制得(E)-N-[4-[4-氰基-5-吗啉代-2-(1H-1,2,4-三氮唑-3-基)噻吩-3-基]苯基]-2-[(吡啶-2-基)亚甲基]肼-1-甲酰胺，收率73.5％。m.p.:271.7～272.3℃；MS(ESI)m/z(％):498.3[M-H]^-。

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ13.99(s,1H),10.97(s,1H),9.10(s,1H),9.01(s,1H),8.57(d,J＝3.8Hz,1H),8.47(s,1H),8.32(d,J＝7.9Hz,1H),7.99(s,1H),7.67(d,J＝8.4Hz,2H),7.45(dd,J＝7.8,4.8Hz,1H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),3.80(s,4H),3.52(s,4H).

体外抗肿瘤细胞活性

对按照本发明的上式Ⅰ的噻吩类衍生物进行了体外抑制人胃癌细胞MKN-45、结肠癌细胞HT-29和肺癌细胞H460活性筛选。

(1)细胞复苏并传代2-3次稳定后，用胰蛋白酶溶液(0.25％)使其从培养瓶底部消化下来。将细胞消化液倒入离心管中后，之后加入培养液以终止消化。将离心管在800r/min下离心10min，弃去上清液后加入5mL培养液，吹打混匀细胞，吸取10μL细胞混悬液加入细胞计数板中计数，调整细胞浓度为10⁴个/孔。96孔板中除A1孔为空白孔不加细胞外，其余皆加入100μL细胞混悬液。将96孔板放入培养箱中培养24h。

(2)用50μL二甲基亚砜溶解受试样品，然后加入适量培养液，使样品溶解成2mg/mL药液，然后在24孔板中将样品稀释为20,4,0.8,0.16,0.032μg/mL。

每个浓度加入3孔，其中周围两行两列细胞长势受环境影响较大，只和为空白细胞孔使用。将96孔板放入培养箱中培养72h。

(3)将96孔板中带药培养液弃去，用磷酸缓冲溶液(PBS)将细胞冲洗两遍，在每孔中加入MTT(四氮唑)(0.5mg/mL)100μL放入培养箱中4h后，弃去MTT溶液，加入二甲基亚砜100μL。在磁力振荡器上振荡使存活细胞与MTT反应产物甲臜充分溶解，放入酶标仪中测定结果。通过Bliss法可求出药物IC₅₀值。

化合物的抑制人胃癌细胞MKN-45、结肠癌细胞HT-29和肺癌细胞H460的活性结果，以PF-4989216为阳性对照(见表一)。

表一

PI3Kα酶活性试验

由于PI3K可以磷酸化PIP2，并将其转化为PIP3，所以PI3K的抑制活性通常用竞争性的荧光偏振激酶活性筛选方法进行确定。具体的操作是，PI3K反应在50mM HEPES(pH7.5),3mM MgCl₂,1mM EGTA,100mM NaCl,0.03％CHAPS和25μM ATP的体系中进行，以PIP2为底物，最终的反应体系体积为10μL。在测定实施例化合物时，在10μL的反应液中加入2.5μL对应的PI3K酶和50μM的底物，以及浓度介于0.16μM到10μM之间的实施例化合物。在室温下温育1小时后，反应用螯合剂淬灭。然后在反应体系中加入磷酸肌醇结合的蛋白，混合均匀后再加入荧光团标记的磷酸肌醇显光剂。样品被至于384孔的黑板中平衡一小时。最后用适当的滤光片通过红色荧光得到偏振值，所得数据用于计算IC₅₀。

实施例化合物及阳性对照品(PF-4989216及PI103)对PI3K的抑制数据(见表二)。

表二：

从上述试验结果可以清楚地看出，本发明所要保护的通式Ⅰ的化合物具有良好的体外抗肿瘤活性，相当或优于对照药PF-4989216。

尽管已经通过特定实施方案描述了本发明，但修改和等价变化对于精通此领域的技术人员而言是显见的，且它们都包含在本发明范围之内。