阅读说明：本技术 一种正定型血型检测试剂条、试剂条制备方法及试剂卡 (Reagent strip for detecting orthostereotyped blood types, preparation method of reagent strip and reagent card ) 是由 曹大烨 张捷李 雷洋 白佳委 胡啸 黄认训 于 2019-11-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种正定型血型检测试剂条、试剂条制备方法及试剂卡,所述试剂条包括渗滤层和吸水层,所述渗滤层设于所述吸水层的上方并覆盖加样孔的对应区域,其特征在于,所述渗滤层从上到下依次包括：抗体垫、第一玻纤垫、第二玻纤垫,所述吸水层设于所述第二玻纤垫之下,所述抗体垫是采用玻纤垫包被对应血型的抗体总成液制成；试剂卡与试剂条的结构相匹配；不仅检测结果更准确,而且结构更紧凑,布局更合理。(The invention discloses a reagent strip for detecting orthostereotyped blood types, a preparation method of the reagent strip and a reagent card, wherein the reagent strip comprises a percolation layer and a water absorption layer, the percolation layer is arranged above the water absorption layer and covers the corresponding area of a sample adding hole, and the reagent strip is characterized in that the percolation layer sequentially comprises the following components from top to bottom: the water absorption layer is arranged below the second glass fiber pad, and the antibody pad is prepared by coating antibody assembly liquid of a corresponding blood type by the glass fiber pad; the structure of the reagent card is matched with that of the reagent strip; not only the testing result is more accurate, and the structure is compacter moreover, and the overall arrangement is more reasonable.)

一种正定型血型检测试剂条、试剂条制备方法及试剂卡

技术领域

本发明涉及一种正定型血型检测试剂条、试剂条制备方法及试剂卡。

背景技术

ABO血型检测主要用于：临床输血、在皮肤、肾移植等器官移植的时候选择ABO血型相符的供体、***症和新生儿溶血症病因的分析、亲子鉴定等。血型不仅在输血上有重要意义，而且在人种学、遗传学、法医学、移植免疫、疾病抵抗力(或易感性)等方面都有应用价值，在输血前，一定要检查病人(受血者)和输血人(供血者)的血型，并且要进行交叉配血试验。在临床医学中，除输血、移植免疫外，对新生儿溶血病、自身免疫性溶血性贫血特异性抗体的检查，也都需要血型知识和有关技术。

目前市面上主流的检测血型抗原的检测试剂主要包括：血型检测试剂、微柱凝胶检测试剂、血型固相层析法检测几个类型；其中，血型检测试剂和微柱凝胶检测试剂都需要繁琐的操作，且对操作人员有一定资质的要求，反应时还需要离心设备，很容易造成血型鉴定失误，甚至出现严重的输血事故；传统的血型固相层析法需要根据检测线(T线)和质控线(C线)来评估检测结果，不仅操作较复杂，而且经常出现检测线模糊或者试纸无效的时候，检测结果的准确性和稳定性较差。

发明内容

本发明为解决上述问题，提供了一种正定型血型检测试剂条、试剂条制备方法及试剂卡，不仅结构更紧凑，而且准确性更高。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案为：

本发明的目的之一在于：提供一种正定型血型检测试剂条，包括渗滤层和吸水层，所述渗滤层设于所述吸水层的上方并覆盖加样孔的对应区域，所述渗滤层从上到下依次包括：抗体垫、第一玻纤垫、第二玻纤垫，所述吸水层设于所述第二玻纤垫之下，所述抗体垫是采用玻纤垫包被对应血型的抗体总成液制成。

优选的，所述吸水层包括第一吸水层和第二吸水层，所述第一吸水层设于所述渗滤层的两侧，所述第二吸水层粘接固定于所述第二玻纤垫之下；并且，所述第一吸水层设于所述第二吸水层的上方。

优选的，所述抗体垫、所述第一玻纤垫及所述第二玻纤垫的长度相同，所述抗体垫与所述吸水层之间通过固定层连接固定；其中，所述固定层采用透明胶布，所述吸水层采用吸水纸；所述固定层包括两个并分别设于所述抗体垫的两侧，所述固定层的一端与所述抗体垫连接，另一端与所述第二吸水层连接；所述第一吸水层与所述渗滤层沿着所述第二吸水层的长度方向间隔设置。

优选的，所述抗体垫、所述第一玻纤垫及所述第二玻纤垫的尺寸分别为长7mm、宽5mm；所述固定层的尺寸为长12mm、宽5mm；所述第一吸水层的尺寸为长19mm、宽5mm；所述第二吸水层的尺寸为长50mm、宽5mm。

本发明的目的之二在于：提供上述任一项所述的正定型血型检测试剂条的制备方法，其包括以下步骤：

将对应血型抗体与抗体保存液进行混合，配制得到抗体总成液；

将玻纤垫平铺包被抗体总成液，并烘干，得到抗体垫；

将第二玻纤垫固定于第二吸水层之上，并在第二玻纤垫上依次放上第一玻纤垫和抗体垫；

将抗体垫的两侧边缘与第二吸水层相固定，得到正定型血型检测试剂条。

优选的，所述血型抗体与所述抗体保存液以体积比1:5的方式进行混合；所述抗体垫的烘干温度为37℃，烘干时间为4-5小时。

优选的，所述抗体保存液配方包括：超纯水1000ml，Tris 2ml-4ml，BSA6g，蔗糖5g-15g，PVP0.5g，HCl 1.34ml，Na2HPO4 2.2g-2.6g，NaCl 0.65g-0.9g，酪蛋白3.6g-4.2g，防腐剂K 0.1％。

本发明的目的之三在于：提供一种试剂卡，包括上述任一项所述的正定型血型检测试剂条，所述试剂条采用上述任一项所述的制备方法制成。

优选的，所述试剂卡包括上盖和底座，所述上盖设有加样孔，所述底座设有用于装接所述试剂条的卡槽，所述加样孔对应试剂条的抗体垫的中部位置；所述上盖设有固定柱或固定套的二者之一，所述底座对应位置设有固定柱或固定套的二者之另一，所述上盖和所述底座通过所述固定柱和所述固定套进行插接固定。

优选的，所述卡槽沿试剂条长度方向延伸的定位槽、沿试剂条长度方向延伸的定位筋、对应定位槽两端的端部支撑架、对应定位槽中部的中部支撑架，其中，所述定位筋位于所述定位槽之内，所述端部支撑架和所述中部支撑架位于所述定位槽之外；并且，所述上盖内侧对应抗体垫的位置设有对所述抗体垫进行定位的定位条，对应抗体垫两侧的第一吸水层的位置对所述第一吸水层进行定位的定位柱。

本发明的有益效果是：

(1)、本发明的试剂条的渗滤层采用一层抗体垫和两层玻纤垫纵向依次层叠组成，不仅检测结果更准确，而且结构更紧凑，布局更合理；

(2)、本发明在渗滤层的底部和两侧分别设有吸水层，吸水性能更好；

(3)、本发明不仅将第二玻纤垫与第二吸水层进行粘接固定，而且通过固定层将抗体垫与第二吸水层进行粘接固定，结构更可靠；

(4)、本发明在结合试剂条的结构的基础上进行制备试剂条，工艺更简化，性能更稳定；

(5)、本发明的抗体保存液的配方，能够显著提高所保存蛋白的活性，提高蛋白于玻纤垫上包被后的稳定性，并且提供蛋白在常温环境下的保存效期

(6)、本发明的试剂卡的结构，定位更可靠，与试剂条的结构相匹配效果更好。

附图说明

此处所说明的附图用来提供对本发明的进一步理解，构成本发明的一部分，本发明的示意性实施例及其说明用于解释本发明，并不构成对本发明的不当限定。在附图中：

图1为本发明一种正定型血型检测试剂条的俯视结构示意图；

图2为本发明一种正定型血型检测试剂条的分解结构示意图；

图3为本发明一种正定型血型检测试剂条的堆叠方式示意图；

图4为本发明一实施例的正定型血型检测试剂卡的立体结构示意图；

图5为本发明一实施例的正定型血型检测试剂卡的上盖结构示意图；

图6为本发明一实施例的正定型血型检测试剂卡的底座结构示意图；

图7为本发明另一实施例的正定型血型检测试剂卡的立体结构示意图；

图8为本发明另一实施例的正定型血型检测试剂卡的上盖结构示意图；

图9为本发明另一实施例的正定型血型检测试剂卡的底座结构示意图；

图中：

A、渗滤层；A1、抗体垫；A2、第一玻纤垫；A3、第二玻纤垫；L-A、渗滤层长度；

B、固定层(透明胶布)；L-B、固定层长度；

C、第一吸水层(两侧吸水纸)；L-C、第一吸水层长度；

D、第二吸水层(底部吸水纸)；L-D、第二吸水层长度；

10、上盖；11、加样孔；12、固定柱；13、定位条；14、定位柱；

20、底座；21、固定套；22、端部支撑架(C形或类C形)；23、第一中部支撑架(T形)；24、第二中部支撑架(一形)；25、定位筋；26、定位槽。

具体实施方式

为了使本发明所要解决的技术问题、技术方案及有益效果更加清楚、明白，以下结合附图和实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

人红细胞表面含有血型抗原物质，而血清中则含有特异性抗体。当含有血型抗原的红细胞遇到与它相对应的抗体时，就会发生使红细胞凝结成团块的反应，简言之，即抗原—抗体反应。ABO血型可分为A、B、AB和O型四种血型。其中A血型的人，红细胞表面含有A抗原；而B血型的人，红细胞上含有B抗原；AB型的人红细胞上存在有A和B两种抗原；O型血的人红细胞表面上两种抗原都没有。

本发明将上述的抗原抗体免疫反应与固相渗滤法相结合，整合得到一种针对性运用于血型正定型检测与RhD定型检测的综合检测方法，不仅检测结果更准确可靠，而且检测试剂条及试剂卡的结构更简化。

第一实施例(试剂条结构)

本实施例的试剂条是一种建立在针对固相渗滤法基础上，适应于血型正定型检测灵敏度要求与特异性要求的设计，该设计包括了试剂卡各个部件的相对物理位置布置与试剂卡的各个部件的搭建顺序，具体如下：

如图1至图3所示，本发明提供一种正定型血型检测试剂条，包括渗滤层A和吸水层，所述渗滤层A设于所述吸水层的上方并覆盖加样孔11的对应区域，所述渗滤层A从上到下依次包括：抗体垫A1、第一玻纤垫A2、第二玻纤垫A3，所述吸水层设于所述第二玻纤垫A3之下，所述抗体垫A1是采用玻纤垫包被对应血型的抗体总成液制成。

本实施例中，所述吸水层包括第一吸水层C和第二吸水层D，所述第一吸水层C设于所述渗滤层A的两侧，所述第二吸水层D粘接固定于所述第二玻纤垫A3之下，优选的，所述第二吸水层D与所述第二玻纤垫A3之间采用双面胶进行粘接固定；并且，所述第一吸水层C设于所述第二吸水层D的上方，所述第一吸水层C与所述第二吸水层D之间可直接堆叠，也可通过双面胶固定，或者通过试剂卡的壳体进行压紧。

所述抗体垫A1、所述第一玻纤垫A2及所述第二玻纤垫A3的长度相同，所述抗体垫A1与所述吸水层之间通过固定层B连接固定；其中，所述固定层B采用透明胶布，所述吸水层采用吸水纸；所述固定层B包括两个并分别设于所述抗体垫A1的两侧，所述固定层B的一端与所述抗体垫A1连接，另一端与所述第二吸水层D连接；所述第一吸水层C与所述渗滤层A沿着所述第二吸水层D的长度方向间隔设置。

具体的，所述抗体垫A1、所述第一玻纤垫A2及所述第二玻纤垫A3的尺寸分别为长(L-A)7mm、宽5mm；所述固定层B的尺寸为长(L-B)12mm、宽5mm；所述第一吸水层C的尺寸为长(L-C)19mm、宽5mm；所述第二吸水层D的尺寸为长(L-D)50mm、宽5mm；所述固定层B以边缘2mm的宽度覆盖所述抗体垫A1的两边边缘进行粘贴固定组合。上述各个尺寸可根据试剂条长度和宽度的改变而对应改变，所述第一吸水层C和所述第二吸水层D的尺寸可根据吸水性能的要求的不同而对应改变。

其中，所述抗体垫与第一玻纤垫A2采用厦门博昂生物出品的1200-15，第二玻纤垫A3采用上海金标出品的DL-42；所述固定层B采用透明胶布，所述第一吸水层C采用上海金标CH-37吸水纸，所述第二吸水层D采用上海金标，SX-42或奥格XJ-420，XJ-440，XJ-520中的任一种吸水纸；所述抗体垫A1是采用上海金标8975玻纤垫包被对应血型的抗体总成液制成；所述血型抗体是购买自millipore的对应血型抗体。

第二实施例(试剂条的制备方法)

本实施例提供第一实施例的任一项所述的正定型血型检测试剂条的制备方法，其包括以下步骤：

(1)将对应血型抗体与抗体保存液进行混合，配制得到抗体总成液；

(2)将玻纤垫平铺包被抗体总成液，并烘干，得到抗体垫A1；

其中，所述抗体垫A1的烘干温度为37℃，烘干时间为4-5小时。

(3)将第二玻纤垫A3固定于第二吸水层D之上，并在第二玻纤垫A3上依次放上第一玻纤垫A2和抗体垫A1；

(4)将抗体垫A1的两侧边缘与第二吸水层D相固定，得到正定型血型检测试剂条。

其中，所述抗体保存液配方包括：超纯水1000ml，Tris 2ml-4ml，BSA6g，蔗糖5g-15g，PVP0.5g，HCl 1.34ml，Na2HPO4 2.2g-2.6g，NaCl 0.65g-0.9g，酪蛋白3.6g-4.2g，防腐剂K 0.1％。所述血型抗体与所述抗体保存液以体积比1:5的方式进行混合。

所述抗体保存液的优选配方之一为：超纯水1000ml，Tris 2ml，BSA6g，蔗糖5g，PVP0.5g，HCl 1.34ml，Na2HPO4 2.2g，NaCl 0.65g，酪蛋白3.6g，防腐剂K 0.1％；

所述抗体保存液的优选配方之二为：超纯水1000ml，Tris 2.8ml，BSA6g，蔗糖8g，PVP0.5g，HCl 1.34ml，Na2HPO4 2.3g，NaCl 0.75g，酪蛋白3.8g，防腐剂K 0.1％；

所述抗体保存液的优选配方之三为：超纯水1000ml，Tris3.2ml，BSA6g，蔗糖10g，PVP0.5g，HCl 1.34ml，Na2HPO4 2.4g，NaCl 0.85g，酪蛋白4g，防腐剂K 0.1％；

所述抗体保存液的优选配方之四为：超纯水1000ml，Tris 4ml，BSA6g，蔗糖15g，PVP0.5g，HCl 1.34ml，Na2HPO4 2.6g，NaCl 0.9g，酪蛋白4.2g，防腐剂K 0.1％。

采用上述配方的抗体保存液，能够显著提高所保存蛋白的活性，提高蛋白于玻纤垫上包被后的稳定性，并且提供蛋白在常温环境下的保存效期。

第三实施例(单孔式试剂卡结构)

本实施例提供一种试剂卡，包括第一实施例的任一项所述的正定型血型检测试剂条，所述试剂条采用第二实施例的任一项所述的制备方法制成。

如图4至图6所示，本实施例中，所述试剂卡包括上盖10和底座20，所述上盖10设有加样孔11，所述底座20设有用于装接所述试剂条的卡槽，所述加样孔11对应试剂条的抗体垫A1的中部位置；所述试剂条放在试剂卡的所述底座20的卡槽中，在第二吸水层D的两端边缘分别覆盖上第一吸水层C，之后盖上所述上盖10，组成试剂卡。

其中，所述上盖10设有固定柱12或固定套21的二者之一，所述底座20对应位置设有固定柱12或固定套21的二者之另一，所述上盖10和所述底座20通过所述固定柱12和所述固定套21进行插接固定。本实施例采用在上盖10的外周边缘设置固定柱12，在底座20的对应位置设置固定套21。

所述卡槽沿试剂条长度方向延伸的定位槽26、沿试剂条长度方向延伸的定位筋25、对应定位槽26两端的端部支撑架22、对应定位槽26中部的中部支撑架，其中，所述定位筋25位于所述定位槽26之内，所述端部支撑架22和所述中部支撑架位于所述定位槽26之外；并且，所述上盖10内侧对应抗体垫A1的位置设有对所述抗体垫A1进行定位的定位条13，对应抗体垫A1两侧的第一吸水层C的位置对所述第一吸水层C进行定位的定位柱14；所述中部支撑架进一步包括一个以上的第一中部支撑架23和一个以上的第二中部支撑架24，可根据试剂卡的长度进行设置；所述第一中部支撑架23和所述第二中部支撑架24可采用一形或T形，并对称设置在所述定位槽26的左右两侧；所述端部支撑架22优选的采用C形或类C形设计。

本实施例的试剂卡的使用过程简述如下：

首先，取全血样本10ul加入加样孔11，等待1分钟内，加入生理盐水冲洗液150ul(4滴)，之后观察检测结果，检测孔为红色，则表明拥有对应的血型抗原。其中A血型的人，红细胞表面含有A抗原；而B血型的人，红细胞上含有B抗原；AB型的人红细胞上存在有A和B两种抗原；O型血的人红细胞表面上两种抗原都没有；RhD抗原为阳性的情况为，RhD阳性标本，反之则为RhD阴性标本。

第四实施例(多孔式试剂卡结构)

如图7至图9所示，本实施例与第三实施例的主要区别在于：所述加样孔11可设置两个以上，所述卡槽可对应设置两个以上；本实施例中包括三个加样孔11和三个卡槽；即，包括三组的定位槽26、定位筋25、端部支撑架22、中部支撑架、定位条13、定位柱14。本实施例的其余结构及使用过程与第三实施例基本相似，只是可适用于同时对A、B、O、RhD血型进行正定型检测。

上述说明示出并描述了本发明的优选实施例，如前所述，应当理解本发明并非局限于本文所披露的形式，不应看作是对其他实施例的排除，而可用于各种其他组合、修改和环境，并能够在本文所述发明构想范围内，通过上述教导或相关领域的技术或知识进行改动。而本领域人员所进行的改动和变化不脱离本发明的精神和范围，则都应在本发明所附权利要求的保护范围内。