对抑郁症及焦虑症具有预防、改善或治疗功效的作为泡菜乳酸菌的沙克乳酸杆菌
阅读说明：本技术 对抑郁症及焦虑症具有预防、改善或治疗功效的作为泡菜乳酸菌的沙克乳酸杆菌 (Lactobacillus sakei as kimchi lactic acid bacteria having effects of preventing, improving or treating depression and anxiety ) 是由 崔鹤钟 金男熙 朴孝敬 李知恩 于 2020-02-20 设计创作，主要内容包括：本发明涉及包含沙克乳酸杆菌作为有效成分的用于预防、改善或治疗抑郁症或焦虑症的组合物。本发明的沙克乳酸杆菌菌株可应用于预防、改善以及治疗如抑郁症或焦虑症等精神障碍。(The present invention relates to a composition for preventing, ameliorating or treating depression or anxiety comprising lactobacillus sakei as an active ingredient. The lactobacillus sakei strain of the present invention can be applied to the prevention, improvement and treatment of mental disorders such as depression or anxiety.)
技术领域
本发明涉及对抑郁症及焦虑症具有预防、改善或治疗功效的沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)。
背景技术
随着社会变得越来越复杂，现代人面临着很大的压力。因此，患上因各种压力引起的如抑郁症、焦虑症、睡眠障碍等精神疾病的人数急剧增加。
如果无法对应这种压力而放任不管，则会导致如抑郁、不安、疲劳、愤怒、情绪变化等心理反应，并导致如血压增高、脉搏加快等生理反应，如果这种反应反复出现，则会出现如抑郁症、焦虑症、睡眠障碍等疾病，并造成个人、家庭和社会损失，降低个人生活质量。
在由压抑引起的疾病中，抑郁症是指以悲伤、绝望及挫折等情绪为特征的情绪低落的心理状态。即，它是指从正常的情绪“郁闷”通过恶劣心境障碍(dysthymic disorder)发展为重性抑郁障碍(major depressive disorder)的状态。主要症状以出现伴随着如下症状中的一部分的日常情绪低落或对大多数活动失去兴趣或乐趣的重性抑郁发作(majordepressive episode)为特征：食欲、体重或睡眠模式的变化、精神运动性激动或迟钝(psychomotor agitation or retardation)、思维能力、注意力或决策能力下降、精力不足和疲劳、无价值感、自责或内疚、经常想到死亡或自杀、有自杀计划或企图。
目前在临床使用的抗抑郁药都是增强单胺类神经递质作用的药物，包括抑制神经细胞的5-羟色胺再摄取、去甲肾上腺素再摄取等的物质(SSRI、SNRI、TCAs系列等)、如单胺氧化酶抑制剂(monoamine oxidase inhibitors)等抑制5-羟色胺或多巴胺等的分解的物质。
然而，目前在韩国抑郁症患者中只有约10-25％才接受抗抑郁治疗，其中，约40％的人因副作用等导致依从性下降而停止治疗，据报道，虽然服用抗抑郁药但没有反应的无反应人群(non-responder)有33％。因此，迫切需要努力研究一种源自天然物的具有抗抑郁效果的组合物。
并且，上述抑郁症还可能伴有其他疾病。例如，神经退行性疾病往往伴随着抑郁症，神经退行性疾病是指随着年龄的增长而发生的退行性疾病中，发生在大脑中的疾病。神经退行性疾病可以根据主要症状和大脑的受影响部位进行分类，典型的例子是阿尔茨海默病和帕金森病。虽然已知神经退行性疾病是因为由衰老引起的神经退行和由遗传及环境因素导致蛋白质聚集而导致神经细胞死亡引起的，但确切原因尚未确定。
帕金森病(Parkinson's disease)是仅次于阿尔茨海默病的第二大神经退行性疾病。据报道，50岁以上的人群中约有1％患有此病。帕金森病的主要症状是震颤、僵硬、行动缓慢及姿势异常等，它是一种由大脑中一种叫做多巴胺(dopamine)的神经递质缺乏引起的慢性疾病。多巴胺由大脑的一种叫黑质的神经细胞生成。黑质的神经细胞错综复杂地与大脑的运动皮层及其他各个部分连接。帕金森病是由多巴胺缺乏引起的，多巴胺是一种为了调节黑质中基底核的功能而分泌的物质。
帕金森病的代表性症状为共济失调症状，主要症状如下：1)运动迟缓(bradykinesia)，2)静止性震颤(tremor-at-rest)，3)肌肉僵硬(muscle rigidity)，4)姿势反射丧失(loss of postural reflexes)，5)非正常弯曲姿势(flexed posture)，6)动作冻结(freezing)等。并且，帕金森病进展过程中可能出现的其他症状不仅包括自主神经障碍、睡眠障碍、嗅觉或温度感觉障碍，而且还可以包括抑郁症和认知障碍。特别是，40-50％的帕金森病患者会出现如抑郁症和焦虑症等精神症状，被指出使生活质量恶化的重要因素。
目前帕金森病的治疗方法包括药物治疗法、手术治疗法、物理治疗法等，在药物治疗中，使用通过补充大脑中普遍缺乏的多巴胺，调整由多巴胺缺乏引起的神经递质失衡来预防或延缓神经细胞的破坏，并调节其他抑郁症等的症状的药物。例如，作为，帕金森病的药物治疗剂，使用如L-DOPA等多巴胺替代药物以及作用于多巴胺受体的药物，但是，这些药物的局限性在于它们仅针对症状的调节，因为死亡的神经细胞难以再生，并且长期施用会导致严重的副作用，例如不自主运动(dyskinesia)、呕吐等。因此，迫切需要开发一种改善症状、确保安全性、具有神经保护作用的药物。
尤其，最近有报道称，帕金森病患者肠道微菌群的变化在病理生理学上与帕金森病的进展有关，特别是，对帕金森病动物模型进行粪便菌群移植(fecal microbiotatransplantation，FMT)的结果发现，通过神经炎症作用产生神经保护作用(非专利文献1)。
在此背景下，最近开始研究利用乳酸菌预防及治疗帕金森病，但是，除便秘外，还没有发现直接影响帕金森病的症状中如共济失调、抑郁症或焦虑症等精神症状的乳酸菌，因此，需要开发能够改善或治疗由帕金森病引起的共济失调、抑郁症或焦虑症的乳酸菌。
现有技术文献
非专利文献
非专利文献1：Xin Fang,Microbial treatment:the potential appl icationfor Parkinson's disease,Neurological Sciences,2018
发明内容
技术问题
本发明提供对抑郁症或焦虑症具有预防、改善或治疗功效的沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)菌株。
解决问题的方案
对此，本发明人努力寻找对抑郁症或焦虑症症状具有改善功效的菌株，结果确认到，若向小鼠模型给药从泡菜中分离的沙克乳酸杆菌(Lactobacillus sakei)菌株，则会改善如小鼠的抑郁症等精神症状，从而完成本发明。
本发明的沙克乳酸杆菌菌株优选为源自泡菜的沙克乳酸杆菌菌株，更优选为源自泡菜的沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakei WIKIM31)菌株。虽然在本发明中使用的沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株为在韩国微生物保藏中心以保藏编号KFCC11654P(国内保藏)和/或KCCM12654P(国际保藏)保藏的菌株，但其获取途径并不限定于此。
在本发明中以上述保藏编号保藏的沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株是指包括以上述保藏编号保藏的菌株以及等同于上述WIKIM31菌株的沙克乳酸杆菌菌株，例如，被解释为包括在基因序列中部分序列上具有差异(变异、取代、插入、缺失等)的沙克乳酸杆菌菌株，优选地，包括与上述WIKIM31菌株的基因序列具有90％以上的同源性的沙克乳酸杆菌菌株，更优选地，包括与上述WIKIM31菌株的基因序列具有95％以上的同源性的沙克乳酸杆菌菌株，最优选地，包括与上述WIKI M31菌株的基因序列具有99％以上的同源性的沙克乳酸杆菌菌株。
可利用分子生物学鉴定及特性分析法(Tenover et al.,J.Clin.M icrobiol.,1995,33(9),2233-2239,1995)、PCR及多种电泳法(Walter et al.,Appl.Environ.Microbiol.,2001,67(6),2578-2585)、RAPD(Randomly AmplifiedPolymorphic DNA)分析法(Cusick et al.,Appl.Environ.Microbiol.,2001,66(5),2227-2231)、利用物种特异性引物的PCR方法(species specific PCR,SS-PCR方法)(Matsuki etal.,Appl.Environ.Microbiol.,1999,65(10),4506-4512)等分析法分析上述沙克乳酸杆菌菌株之间的同源性，已知本领域中有多种分析法。16S、23S rRNA以及16S-23S rRNA之间空间区域作为SS-PCR的主要靶基因而被大量研究，有关它们的碱基序列信息公开在各种基于网络的数据库中(Naimi et al.,Microbiol.,1997,143(6),823-834)。
本发明的沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株为革兰氏阳性菌，是一种在好氧条件和厌氧条件下均可以生长的兼性厌氧菌(facultative anaerob e)，呈杆菌形态。
本发明提供包含沙克乳酸杆菌，其培养物，其破碎物，其发酵物或其提取物的组合物。
根据本发明的优选实例，本发明的沙克乳酸杆菌菌株为沙克乳酸杆菌WIKIM31。
本发明的组合物中包含的沙克乳酸杆菌WIKIM31能够以活菌体或死菌体的状态存在，并且，还能够以干燥或冻干的形态存在。适合包含在各种组合物中的乳酸菌的形态及制剂化方法是本领域技术人员公知的。例如，沙克乳酸杆菌WIKIM31能够以在公知的液体培养基或固体培养基中培养而得的培养物、上述培养物的浓缩液、上述培养物的干燥物、通过将上述菌株和附加成分一起培养来获得的发酵物、用有机溶剂提取的提取物、或者对上述菌株的细胞膜进行溶解、破碎或均质化处理而得的裂解物(或破碎物)等形态制剂化，但并不限定于此。
在本发明中，上述组合物可以为包含以活菌体或死菌体的状态存在的沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株的组合物。
本发明提供包含沙克乳酸杆菌、其培养物、其破碎物、其发酵物或其提取物作为有效成分的用于预防或改善抑郁症或焦虑症的食品组合物。
根据本发明的优选实例，本发明的沙克乳酸杆菌菌株为沙克乳酸杆菌WIKIM31。
在上述食品组合物中，沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株可以源自泡菜，可直接适用如前所述的所有内容。
在本发明中，“抑郁症”是指主要涉及悲伤、无味、情绪丧失、快感缺乏(失去快感)或错觉、妄想等行为的神经精神障碍，它是指导致精神运动迟缓、悲观、绝望、自杀意念和自杀企图的疾病。上述抑郁症伴随着如食欲不振、失眠、便秘、性欲减退或由免疫功能下降导致的疾病易感性增加等各种身体症状。更加具体地，它是指活动减少的症状。并且，“不安障碍”是指出现由不安情绪引起的心率加快、呼吸急促、恐慌障碍、恐惧、出汗等身体或行为症状的神经精神障碍，更加具体地，它是指感到不安，并在封闭空间中向角落移动的倾向，但不限于此。焦虑症的例子包括恐惧障碍、恐慌障碍、广泛性焦虑症、强迫障碍等。
在一个具体例中，上述抑郁症和焦虑症可以为患有神经退行性疾病的受试者中的抑郁症或焦虑症。
上述神经退行性疾病为选自由帕金森病(Parkinson's disease)、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、亨廷顿病(Huntington's disease)、肌萎缩性侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、克雅氏病(Creu tzgeldt-Jacob disease)、脑卒中(stroke)、多发性硬化症(multiple scl erosis)、学习障碍(learning disorder)、认知障碍(cognitive impairme nt)以及记忆障碍组成的组中的一种以上疾病，但并不限定于此。
根据本发明的优选实例，上述发酵物为非泡菜发酵物或大豆发酵物的发酵物。
在本发明中，为了确认沙克乳酸杆菌WIKIM31的给药对抑郁症或焦虑症的预防或改善效果，在正常动物模型中诱导抑郁症后，给药沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株，或者向动物模型给药沙克乳酸杆菌WIKI M31菌株并诱导帕金森病后，进行旷场(open field)分析。可通过结果确认，与对照组相比，在摄取本发明的沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株的实验组中，整体活动(运动量)增加，探索行为和在中心区域(cent er zone)停留的时间增加。通常，考虑到患有抑郁症或焦虑症的个体中出现长时间静止不动的情况，可以从运动量随着沙克乳酸杆菌WIKI M31菌株的给药而增加的结果确认它能够抑制抑郁症或焦虑症。
当本发明的组合物用作食品组合物时，上述食品组合物可包括保健功能食品或调味料、饮料、棒状食品等形态。并且，包含上述菌株作为有效成分的食品组合物可包括发酵乳等饮料。对此，本发明提供由沙克乳酸杆菌WIKIM31或其培养物组成的发酵用乳酸菌发酵剂。
除了上述有效成分之外，还可以使用食品学上合适且生理学上可接受的辅助剂制备本发明的食品组合物，作为上述辅助剂，可使用赋形剂、崩解剂、甜味剂、结合剂、包覆剂、膨胀剂、润滑剂、助流剂或香味剂等。
优选地，除了如上所述的有效成分之外，还可以通过添加一种以上食品学上可接受的载体将上述食品组合物制剂化为用于给药的药剂学组合物。
例如，为了制剂化为片剂或胶囊剂的形态，有效成分可以与如乙醇、甘油、水等口服的、无毒的药剂学上可接受的非活性载体结合。并且，如果需要或必要，也能够以混合物的形式包含合适的结合剂、润滑剂、崩解剂及发色剂。合适的结合剂包括如淀粉、明胶、葡萄糖或β-乳糖等天然糖；如玉米甜味剂、阿拉伯胶、黄芪胶或油酸钠等天然及合成胶；硬脂酸钠；硬脂酸镁；苯甲酸钠；醋酸钠；氯化钠等，但并不限定于此。崩解剂包括淀粉，甲基纤维素，琼脂，膨润土，黄原胶等，但并不限定于此。制剂化为液态溶液的组合物中，作为药剂学上可接受的载体，可通过混合适合灭菌及生物体的生理盐水、无菌水、林格氏液、缓冲生理盐水、白蛋白注射溶液、右旋糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇及这些成分中的一种以上成分来使用，根据需要，可以添加抗氧化剂、缓冲液、抑菌剂等其他常规的添加剂。并且，还可以添加稀释剂、分散剂、表面活性剂、结合剂及润滑剂来制剂化为如水溶液、悬浮液、乳浊液等注射用剂型、丸剂、胶囊、颗粒或片剂。
本发明的食品组合物可添加到各种食品中。可添加本发明的组合物的食品例如有饮料类、维生素复合剂、保健食品类等。
本发明的食品组合物可包含在制备食品时通常添加的成分，例如，包含蛋白质、碳水化合物、脂肪、营养素、调味剂及香味剂。作为上述的碳水化合物，可举例常规的糖以及糖醇，常规的糖包括如葡萄糖，果糖等单糖；如麦芽糖、蔗糖、低聚糖等二糖；以及如糊精，环糊精等多糖，糖醇包括木糖醇、山梨糖醇、赤藓糖醇等。作为香味剂，可使用天然香味剂[索马甜、甜菊糖苷提取物(例如，莱鲍迪苷A、甘草甜素等])以及合成香味剂(糖精、阿斯巴甜等)。例如，当本发明的食品组合物配制成饮用剂和饮料类时，还可以包含柠檬酸、果糖浆、食糖、葡萄糖、醋酸、苹果酸、果汁以及各种植物提取液等。
并且，本发明提供包含沙克乳酸杆菌、其培养物、其破碎物、其发酵物或其提取物作为有效成分的用于预防或治疗抑郁症或焦虑症的药学组合物。
根据本发明的优选实例，本发明的沙克乳酸杆菌菌株为沙克乳酸杆菌WIKIM31。
并且，本发明提供向有需要的受试者给药治疗上有效量的沙克乳酸杆菌、其培养物、其破碎物、其发酵物或其提取物的步骤的抑郁症或焦虑症的治疗方法。
根据本发明的优选实例，上述发酵物为非泡菜发酵物或大豆发酵物的发酵物。
在这里使用的“受试者(subject)”是指作为治疗、观察或实验受试者的哺乳动物，优选地，它可以为需要预防和/或治疗抑郁症或焦虑症的人类或动物。
在一个具体例中，上述受试者可以为在患有神经退行性疾病的个体中表现出抑郁症或焦虑症症状的个体。
并且，在这里使用的“神经退行性疾病”可以为选自由帕金森病(Parkinson'sdisease)、阿尔茨海默病(Alzheimer's disease)、亨廷顿病(Huntington's disease)、肌萎缩性侧索硬化症(amyotrophic lateral sclerosis)、克雅氏病(Creutzgeldt-Jacobdisease)、脑卒中(stroke)、多发性硬化症(multiple sclerosis)、学习障碍(learningdisorder)、认知障碍(cognitive impairment)以及记忆障碍组成的组中的一种以上疾病，但并不限定于此。
在一个具体例中，上述神经退行性疾病可以为帕金森病。
在下述实施例中，在沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株的给药组中诱导帕金森病，可通过结果确认，与阴性对照组(PBS摄取组)相比，整体运动量增加，探索行为和在中心区域(center zone)停留的时间增加。即，确认到通过上述沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株改善神经退行性疾病小鼠模型的抑郁症或焦虑症，从而确认到本发明可用于抑郁症或焦虑症的预防、改善或治疗中。
本发明的药学组合物可通过口服、静脉内、动脉内、腹腔内、肌肉内或胸骨内等途径以提常规的方式给药。
本发明的药学组合物可包含药学上可接受的载体。本发明中的术语“药学上可接受的载体”是指不显著刺激生物体并且不阻碍给药成分的生物学活性或特性的载体或稀释剂。本发明中的药学上可接受的载体可通过混合生理盐水、无菌水、林格氏液、缓冲生理盐水、右旋糖溶液、麦芽糊精溶液、甘油、乙醇及这些成分中的一种成分或一种以上成分来使用，根据需要，可以通过添加抗氧化剂、缓冲液及抑菌剂等其他常规的添加剂来剂型化为适合注入组织或器官的注射剂的形态。并且，还可以通过添加等渗无菌溶液或者根据情况添加无菌水或生理盐水来剂型化为可配制为可注射的溶液的干燥制剂(尤其，冻干制剂)。并且，为了对靶器官产生特异性作用，将靶器官特异性抗体或其他配体与上述载体结合来使用。作为本技术领域公知的合适的制剂，可使用文献(Remington's PharmaceuticalScience，Mack Publishing C ompany，Easton PA)中公开的制剂。
并且，优选地，本发明的组合物还可以包含填充剂、赋形剂、崩解剂、结合剂及助流剂等。并且，可使用本领域公知的方法对本发明的组合物进行剂型化，使得活性成分在给药到哺乳动物后可提供立即、持续或延迟的释放。
在本发明中，“给药”是指以任何适当的方法向患者导入本发明的组合物的方式，只要能够到达靶组织，本发明的组合物的给药途径可以为口服或肠胃外等多种途径。给药途径可以为腹腔内给药、静脉内给药、肌肉内给药、皮下给药、皮内给药、口服给药、局部给药、鼻腔内给药、肺内给药、直肠内给药，但并不限定于此。
例如，当本发明的组合物用于临床给药时，可通过肌肉静脉或腹腔注射给药。
优选地，为了注射，该组合物可剂型化为如汉克氏(Hank)液、林格氏(Ringer)液或生理盐水缓冲液等药理学上可接受的缓冲液。为了经粘膜给药，使用适合渗透到屏障中的非渗透剂。但是，非渗透剂是本领域公知的。
用于肠胃外给药的制剂包括灭菌水溶液、非水性溶剂、混悬剂、乳剂等。作为非水性溶剂、混悬剂，可使用丙二醇(propylene glycol)、聚乙二醇、如橄榄油等植物油、如油酸乙酯等可注射的酯等。
在本说明书中，“有效量”是指延迟或完全停止需要治疗的特定疾病的发作或进展所需的量，本发明的药学组合物中包含的沙克乳酸杆菌WIKIM31的有效量是指产生抑郁症或焦虑症的预防或治疗效果所需要的量。因此，上述有效量可根据多种因素进行调节，包括疾病的类型、疾病的严重程度、组合物中包含的其他成分的类型及含量、以及患者的年龄、体重、一般健康状况、性别及饮食、给药时间、给药途径、治疗期、同时使用的药物。对本领域技术人员显而易见的是，合适的每日总剂量可以由开处方的医师在正确的医学判断范围内确定。
对于本发明的目的，优选地，对于特定患者的具体治疗有效量根据多种因素和医药领域公知的类似因素而不同，包括要实现的反应的类型和程度、在某些情况下是否可以使用其他制剂的具体组合物、患者的年龄、体重、一般健康状况、性别和饮食、给药时间、给药途径以及组合物的排泄率、治疗期、与具体组合物一起使用或同时使用的药物。
在本说明书中，“治疗”是指为了获得有益或理想的临床结果的方法。出于本发明的目的，有益的或理想的临床结果包括但不限于症状的缓解、疾病程度的减轻、疾病状态的稳定(即，没有恶化)、疾病的延迟或降低进展、疾病状态的改善或暂时缓解以及减轻(部分或全部)，可检测或不可检测。并且，“治疗”可能意味着与未接受治疗时的预期存活率相比延长存活率。“治疗”是指治疗性治疗及预防性预防措施方法。上述治疗不仅包括被预防的障碍，而且还包括已经发生的障碍所需的治疗。疾病的“缓解”是指与未给予治疗时相比减轻疾病状态的程度和/或不良临床症状的程度和/或减缓或延长疾病进展的时间进程(time course)。
本发明的食品或药学组合物中包含的沙克乳酸杆菌菌株的单次剂量可以为约102CFU/ml至1015CFU/ml，优选地，可以为106CFU/ml至1012CFU/ml，更优选地，可以为107CFU/ml至1011CFU/ml，最优选地，可以为108CFU/ml至1010CFU/ml。当给药菌株时，能够以活菌或死菌状态给药，并且可以在摄取之前被杀死或以减毒(attenuation)状态给药。并且，在使用培养上清液等制备的情况下，可以进一步进行通过热处理过程的灭菌过程。达到最小功效所需的菌株量及每日摄取程度可能因摄取者的身体或健康状况而异，但通常为约102CFU/ml至1015CFU/ml。
当按照每周3次以上的次数向受试者(subject)给药本发明的食品或药学组合物时，优选地，当按照每周5次以上的次数给药时，可预防或改善抑郁症或焦虑症。
参照详细后述的实施例，可以明确理解本发明的优点、特征以及实现这些优点及特征的方法。但是，本发明不限于以下公开的实施例，而是能够以多种不同的实施方式实现，这些实施例仅为了使本发明的公开得以完整且向本发明所属技术领域的普通技术人员充分地告知本发明的范畴而提供，本发明仅由发明要求保护范围定义。
发明的效果
本发明的沙克乳酸杆菌菌株可应用于预防、改善以及治疗包括抑郁症和焦虑症在内的多种精神障碍。
附图说明
图1示出对患有帕金森病的小鼠模型进行旷场试验(open filed t est)的结果(棕色(brown)：小鼠的一般运动(由X、Y远红外线传感器检测到的运动)；蓝色(blue)：小鼠的探索行为(由X、Y、Z1轴的远红外线传感器检测到的运动)；Naive：无处理组；MPTP：阴性对照组(摄取PBS后诱导帕金森病)；WIKIM31：WIKIM31摄取组(摄取WIKIM31后诱导帕金森病))。
图2示出对患有帕金森病的小鼠模型进行旷场试验的结果，(a)部分通过小鼠在塑料笼内部中移动的距离示出的整体运动量，(b)部分示出在中心区域停留的时间，(c)部分示出小鼠进行以后脚为中心站立的行为的时间。
图3示出在一般抑郁症和/或焦虑症大鼠模型中分析作为应激激素的血液皮质酮(corticosterone)的结果。
图4示出利用一般抑郁症和/或焦虑症大鼠模型进行旷场试验的结果。
图5示出利用一般抑郁症和/或焦虑症大鼠模型进行强迫游泳试验的结果。
具体实施方式
以下，通过实施例详细说明本发明。下述实施例仅例示本发明，本发明的范围不限于下述实施例。
[实施例]
实施例1：沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株培养液的准备
在实验中使用了源自泡菜的以保藏编号KFCC11654P(国内保藏)及KCCM12654P(国际保藏)保藏在韩国微生物保藏中心的沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakeiWIKIM31)菌株。在30℃的温度下，在MRS培养基中培养沙克乳酸杆菌WIKIM31菌株24小时后，以8000rpm的速度离心分离5分钟，用PBS冲洗去除残留的培养基成分。利用PBS以1×1010CFU/mL的细菌数量进行定量，每周5次向实验动物口服给药0.2mL(1×109CFU)，向阴性和阳性对照组给药无菌PBS。
实施例2：在动物模型中的抑郁症及焦虑症症状预防或改善效果的确认
使8周龄的雄性小鼠(C57BL/6)在饲养室适应一周后，口服给药沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakei WIKIM31，KFCC11654P)30天。之后，通过腹腔内注射MPTP(1-methyl-4-phenyl-1,2,3,6-te trahydropyridine)诱导帕金森病后，确认了沙克乳酸杆菌WIKIM31的效果，如图1及图2所示。此时，在图1及图2中，Naive为正常小鼠模型，MPTP为口服给药PBS后诱导帕金森病的小鼠模型，WIKIM31为口服给药沙克乳酸杆菌WIKIM31后诱导帕金森病的小鼠模型。
为了评价患有帕金森病的动物模型的焦虑症状，进行了旷场(ope n field)分析。进行旷场分析的目的在于，将实验动物暴露在无法逃脱或躲藏的宽敞的新的空间后，观察探索行为，并以此为基础检查实验动物的不安水平。旷场分析中所使用的四边形塑料笼(宽45cm、长45cm、高40cm)分为3×3个区域。可通过进行小鼠位于旷场内的区域分析、小鼠的移动距离等活动性分析以及以后脚为中心站立进行探索行为的时间(饲养(rearing))分析来确认实验动物的不安程度。此时，使用TSE多条件系统(TSE Multi Conditioning system)(TSE syste ms，美国)Actimot视频跟踪系统监测动物的行为。摄像机安装在离底部100cm的天花板中央，以便拍摄每个旷场试验用塑料笼(宽45cm、长45cm、高40cm)。利用ActiMot框架(TSE Systems，美国)的远红外线传感器自动分析动物在旷场内的位置。使小鼠在塑料笼中适应1分钟后，记录其行为10分钟。将塑料笼的中心区域(center zone)指定为宽15cm、长15cm。
通过旷场分析结果确认，与处理PBS的阴性对照组相比，在沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakei WIKIM31)的摄取组中，整体运动量增加(图1及图2的(a)部分)，在中心区域停留的时间增加(图2的(b)部分)。并且，与阴性对照组相比，探索行为时间显著增加(图2的(c)部分)。由此可确认，通过摄取沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakeiWIKIM31)显著改善由MPTP药物引起的抑郁症和不安障碍症状(P＜0.05)。
实施例3：在正常动物模型中的抑郁症及焦虑症症状预防或改善效果的确认
3-1.在正常动物模型中的抑郁症诱导
使6周龄的雄性大鼠(Rat，Sprague Dawley)在饲养室适应一周后，从7周龄开始施加慢性应激，每天以非规律性方法对实验动物随机施加断水或饲料、提供空水瓶、昼夜循环的逆转、闪烁的灯光、周期性的噪音、提供湿被褥、倾斜笼子、提供束缚应激等。总诱导期为6周，每天施加不同的应激，在前两周，在不摄取沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillussakei WIKIM31)的情况下仅施加应激来诱导抑郁症，在之后的四周，在施加应激的同时摄取沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lact obacillus sakei WIKIM31，KCCM12654P)后，测定了抑郁症是否得到改善。
3-2.血液皮质酮(corticosterone)分析
为了在诱导应激后评价所给药的药物的抗抑郁效果，测量了血液皮质酮(corticosterone)的浓度。使用ELISA试剂盒(ELISA kit)(Corticosterone Assay，Ca：KGE009，RND systems，美国)并通过采血来分析血液皮质酮(corticosterone)的浓度。通过颈静脉采集分析用血液，一次采集300μL的全血后，利用离心分离机以4500rpm的速度离心分离10分钟来分离血清，将其用于分析。
通过血液皮质酮(corticosterone)分析结果确认，与处理PBS的阴性对照组相比，在沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakei WIKIM31)的摄取组中，应激激素减少(图3)。由此可确认，通过摄取沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakei WIKIM31)改善由反复应激引起的抑郁症和不安障碍的症状。
3-3.旷场试验
为了评价抑郁焦虑症状，对诱导抑郁症的大鼠模型进行了旷场(open field)分析。进行旷场分析的目的在于，将实验动物暴露在无法逃脱或躲藏的宽敞的新的空间后，观察行为，并以此为基础检查实验动物的抑郁不安水平。每个个体在50cm×50cm×50cm的笼子中进行15分钟的测定，以总移动距离为基础，将中心25cm×25cm的大小设定为中心区域(center zone)来分析中心区域移动距离。可以说，中心区域移动距离占总移动距离的比例越低，越接近抑郁症。此时，利用视频跟踪系统(SMART 3.0，panlab，美国)分析动物的行为。
通过旷场分析结果确认，与处理PBS的阴性对照组相比，在沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakei WIKIM31)的摄取组中，在中心区域停留的时间增加(图4)。由此可确认，通过摄取沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakei WIKIM31)改善由反复应激引起的抑郁症和不安障碍的症状。
3-4.强迫游泳试验
在直径12cm、高40cm的透明亚克力圆柱体中注入水至30cm高后，使动物进行强迫游泳10分钟。将实验结束的动物置于红外线灯下30分钟晾干后，放回原来的笼子中。在10分钟的本实验中，动物的行为被测定为不动时间(immobility time)，并利用图像分析设备(Smart 3.0，panlab，美国)进行分析。
通过强迫游泳试验分析结果确认，与处理PBS的阴性对照组相比，在沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakei WIKIM31)的摄取组中，强迫游泳时间减少(图5)。由此可确认，通过摄取沙克乳酸杆菌WIKIM31(Lactobacillus sakei WIKIM31)改善由反复应激引起的抑郁症和不安障碍的症状。
保藏编号
保藏机构名称：韩国微生物保藏中心(国内)
保藏编号：KFCC11654P
保藏日期：2016年03月04日
保藏机构名称：韩国微生物保藏中心(国际)
保藏编号：KCCM12654P
保藏日期：2020年01月14日
国际承认用于专利程序的微生物保藏布达佩斯条约国际格式
对于原保藏的保藏证书
保藏人：韩国食品研究院
地址：韩国全罗北道完州郡伊西面农生命路245号
在本文件的底部，根据关于国际保藏机构原保藏的规则7.1受理原保藏。
根据规则6.4(d)，上述日期为以国际保藏机构的身份受理的日期。
格式BP/4(单页)。