一种构建小鼠同种异体皮肤移植模型的方法
阅读说明：本技术 一种构建小鼠同种异体皮肤移植模型的方法 (Method for constructing mouse allogeneic skin transplantation model ) 是由 于济彰 夏家红 吴杰 崔济开 许恒 陈漳 李媛 张曦 张丹 于 2021-07-29 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种构建小鼠同种异体皮肤移植模型的方法,包括以下步骤：S1、供体准备：处死Balb/c小鼠一只,备皮,消毒后去全部背部皮肤,刮除皮下筋膜组织及淋巴结,制备皮片,于冰生理盐水中保存；S2、受体准备：对受体小鼠进行戊巴比妥腹腔麻醉,麻醉状态满意后备皮,用脱毛膏刮除毛发,并用酒精再次消毒,剪除1cm直径圆形皮肤形成移植区；S3、皮肤移植：将皮片剪出同样大小的皮片贴于移植区；S4、固定：使用PU医用透明防水辅料固定皮片并；最后再通过医用胶布和自粘性医用绷带再次固定。通过上述设置,本方法不采用缝合的方法,并且在造模的过程中能够通过PU医用透明防水辅料观察移植状态,因此就有造模块和造模成功率高的优点。(The invention discloses a method for constructing a mouse allogeneic skin transplantation model, which comprises the following steps: s1, donor preparation: killing one Balb/c mouse, preparing skin, removing all back skin after disinfection, scraping subcutaneous fascia tissues and lymph nodes, preparing skin sheets, and storing in ice physiological saline; s2, receptor preparation: carrying out pentobarbital abdominal anesthesia on a receptor mouse, preparing skin after the anesthesia state is satisfied, scraping hair by depilatory cream, disinfecting by alcohol again, and cutting out 1 cm-diameter circular skin to form a transplantation area; s3, skin grafting: cutting the skin into pieces with the same size and sticking the pieces to the transplanting area; s4, fixing: fixing the leather sheets by using PU medical transparent waterproof auxiliary materials; and finally, fixing again through the medical adhesive plaster and the self-adhesive medical bandage. Through the arrangement, the method does not adopt a sewing method, and the transplanting state can be observed through the PU medical transparent waterproof auxiliary material in the molding process, so that the method has the advantages of high molding and molding success rate.)
技术领域
本发明涉及医学动物模型领域，具体为一种构建小鼠同种异体皮肤移植模型的方法。
背景技术
1943年，Medawar第一次构建了小鼠同种异体皮肤移植模型，并且揭示了自体皮肤移植不会发生排斥，而异体皮肤移植将会发生排斥的基本规律。皮肤移植模型的建立，为现代移植学的发展奠定了基础，具有重要意义。近年来，临床手移植、脸移植、腹壁移植和阴茎移植等含有皮肤的移植物迅速推广，但由于皮肤的高免疫原性，患者仍需要较高剂量的免疫抑制剂。小鼠皮肤移植模型建立已接近70年，但皮肤移植排斥的机理仍不完全清楚，因此，合适小鼠同种异体皮肤移植模型对于进一步研究皮肤排斥机理至关重要。
如申请号为2015104871735的发明专利申请中提到一种小鼠血管化皮肤移植模型及其构建方法，以小鼠股动静脉为蒂的腹部皮瓣转移至另一只小鼠的颈部，利用血管套管(cuff)技术将股动脉与颈总动脉连接，将股静脉与颈外静脉连接；本发明的目的在于提供一种操作简便，可重复性好，成功率高的小鼠血管化皮肤移植模型及其构建方法，可用于研究临床血管化皮肤移植排斥机理及诱导免疫耐受机理的动物模型。
然而，上述的构建方法由于操作难度较高，并未得到广泛的应用。当下，小鼠模型的构建一般有两种方法：1.不缝合，加压包扎方法，缺点是成功率较低，新手成功率约50％，熟练后成功率约80％。2.缝合，包扎方法，缺点是造模时间慢，缝合对实验者有一定的技术要求。
针对上述的问题，本申请提出一种构建小鼠同种异体皮肤移植模型的方法。
发明内容
本发明的目的在于提供一种构建小鼠同种异体皮肤移植模型的方法，其不采用缝合的方法，并且在造模的过程中能够通过PU医用透明防水辅料观察移植状态，因此就有造模块和造模成功率高的优点。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种构建小鼠同种异体皮肤移植模型的方法，包括以下步骤：
S1、供体准备：处死Balb/c小鼠一只，备皮，消毒后去全部背部皮肤，刮除皮下筋膜组织及淋巴结，制备皮片，于冰生理盐水中保存；
S2、受体准备：对受体小鼠进行戊巴比妥腹腔麻醉，麻醉状态满意后备皮，用脱毛膏刮除毛发，并用酒精再次消毒，剪除圆形皮肤形成移植区；
S3、皮肤移植：将皮片剪成与移植区同样大小，贴于移植区；
S4、固定：使用PU医用透明防水辅料固定皮片并在肉眼直视的情况下微调皮片的位置，使皮片和移植区处于最佳拟合状态；使用医用胶布固定PU医用透明防水辅料，固定位置应偏离移植区；在不影响小鼠呼吸的情况下，使用自粘性医用绷带再次进行加压固定。
优选的，所述移植区的直径为1cm-3cm。
优选的，所述PU医用透明防水辅料剪切为固定区，所述固定区为圆形或正多变形。
优选的，所述固定区的中心剪切有直径小于所述移植区的中心孔。
优选的，所述固定区的外侧均匀设置剪切而成的固定带。
优选的，所述医用胶布固定设置在所述固定带上。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：
(1)本方法不需要进行缝合因此对于缝合技术要求低，因此能够避免因为缝合问题出现的造模失败的案例，适合进行大面积推广；
(2)采用PU医用透明防水辅料使得移植区和皮片能够在整个造模过程中处于可视的状态，因此一方面能够使得二者在造模开始时的位置处于最佳，另一方面能够在造模过程中及时发现问题，并进行调整；
(3)设置中心孔能够使得皮片与空气接触，产生一定的呼吸作用，有利于提高模型的造模成功率。
附图说明
图1为实施例一中固定区和固定带的连接结构示意图；
图2为实施例二中的存活率对比图；
图3为实施例二中的手术时间对比图；
图4为实施例二中的存活时间对比图；
图5为实施例三中固定区和固定带的连接结构示意图；
图6为实施例四中固定区和固定带的连接结构示意图。
附图说明
：1、皮片；2、移植区；3、固定区；4、中心孔；5、固定带；6、医用胶布；7、自粘性医用绷带。具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
请参阅图1-6，以下为本发明提供的实施例：
实施例一：小鼠同种异体皮肤移植模型，通过以下方法进行构造，包括以下步骤：
S1、供体准备：处死Balb/c小鼠一只，备皮，消毒后去全部背部皮肤，刮除皮下筋膜组织及淋巴结，制备皮片1，于冰生理盐水中保存；
S2、受体准备：对受体小鼠进行戊巴比妥腹腔麻醉，麻醉状态满意后备皮，用脱毛膏刮除毛发，并用酒精再次消毒，剪除圆形皮肤形成移植区2；移植区2的直径一般为1cm-3cm，本实施例中其直径为1cm。
S3、皮肤移植：将皮片1剪成与移植区2同样大小，贴于移植区2；
S4、固定：
S4.1将PU医用透明防水辅料剪切为为圆形或正多变形固定区3，本实施例中为固定区3为圆形，如如图1所示；
S4.2、在固定区3的中心剪切直径小于移植区2的中心孔4；
S4.3、固定区3的外侧均匀设置剪切而成的固定带5，本实施例中，固定带5的数目为8条；
S4.4、保持中心孔4与皮片1的中心重合，并将固定区3与皮片1连接，并在肉眼直视的情况下微调皮片1的位置，使皮片1和移植区2处于最佳拟合状态；
S4.5、在固定带5上使用医用胶布6二次固定。
S4.6、在不影响小鼠呼吸的情况下，使用自粘性医用绷带7再次进行加压固定。
实施例一中，通过对PU医用透明防水辅料进行剪切，进而将固定区3设置成为圆形，并且在圆形的固定区3中心设置中心孔4，通过这种设置，能够使得环状的PU医用透明防水辅料对皮肤移植的连接处起到固定的作用，同时又能够保持尽可能使得皮片1和供体皮肤与空气接触，进而能够保持皮片1和供体皮肤的自主呼吸，有利于成功完成皮肤移植工作。
实施例二、小鼠同种异体皮肤移植模型，参照实施例一种的方法同时对20只小鼠进行造模，并对造模的存活率，手术时间和造模成功率进行统计(该对比仅针对缝合法，由于加压法的各项数据均低于缝合法，故在此不在赘述)，如图2、图3和图4所示。
对图2、图3和图4的内容我们进行分析，可以看出本申请中采用的方法，具有存活率高、手术时间短和造模成功率的优点，因此能够降低造模成本，从而适于大规模推广，有利于对皮肤移植进行深入研究。
实施例三：小鼠同种异体皮肤移植模型，通过以下方法进行构造，包括以下步骤：
S1、供体准备：处死Balb/c小鼠一只，备皮，消毒后去全部背部皮肤，刮除皮下筋膜组织及淋巴结，制备皮片1，于冰生理盐水中保存；
S2、受体准备：对受体小鼠进行戊巴比妥腹腔麻醉，麻醉状态满意后备皮，用脱毛膏刮除毛发，并用酒精再次消毒，剪除圆形皮肤形成移植区2；移植区2的直径一般为1cm-3cm，本实施例中其直径为1cm。
S3、皮肤移植：将皮片1剪成与移植区2同样大小，贴于移植区2；
S4、固定：
S4.1将PU医用透明防水辅料剪切为为圆形或正多变形固定区3，本实施例中为固定区3为正方形，如如图5所示；
S4.2、在固定区3的中心剪切直径小于移植区2的中心孔4；
S4.3、固定区3的外侧均匀设置剪切而成的固定带5，本实施例中，固定带5的数目为4条；
S4.4、保持中心孔4与皮片1的中心重合，并将固定区3与皮片1连接，并在肉眼直视的情况下微调皮片1的位置，使皮片1和移植区2处于最佳拟合状态；
S4.5、在固定带5上使用医用胶布6二次固定。
S4.6、在不影响小鼠呼吸的情况下，使用自粘性医用绷带7再次进行加压固定。
实施例三中，通过对PU医用透明防水辅料进行剪切，进而将固定区3设置成为正方形，并且在正方形的固定区3中心设置中心孔4。该方案是对实施例一中圆形的固定区的补充。通过这种设置，能够使得环状的PU医用透明防水辅料对皮肤移植的连接处起到固定的作用，同时正方形的固定区3的剪切难度低，因此能够快速的完成剪切，有利于提高移植模型的造模效率。实施例四：小鼠同种异体皮肤移植模型，通过以下方法进行构造，包括以下步骤：
S1、供体准备：处死Balb/c小鼠一只，备皮，消毒后去全部背部皮肤，刮除皮下筋膜组织及淋巴结，制备皮片1，于冰生理盐水中保存；
S2、受体准备：对受体小鼠进行戊巴比妥腹腔麻醉，麻醉状态满意后备皮，用脱毛膏刮除毛发，并用酒精再次消毒，剪除圆形皮肤形成移植区2；移植区2的直径一般为1cm-3cm，本实施例中其直径为1cm。
S3、皮肤移植：将皮片1剪成与移植区2同样大小，贴于移植区2；
S4、固定：
S4.1将PU医用透明防水辅料剪切为为圆形或正多变形固定区3，本实施例中为固定区3为正六边形，如如图6所示；
S4.2、在固定区3的中心剪切直径小于移植区2的中心孔4；
S4.3、固定区3的外侧均匀设置剪切而成的固定带5，本实施例中，固定带5的数目为6条；
S4.4、保持中心孔4与皮片1的中心重合，并将固定区3与皮片1连接，并在肉眼直视的情况下微调皮片1的位置，使皮片1和移植区2处于最佳拟合状态；
S4.5、在固定带5上使用医用胶布6二次固定。
S4.6、在不影响小鼠呼吸的情况下，使用自粘性医用绷带7再次进行加压固定。
实施例四中，通过对PU医用透明防水辅料进行剪切，进而将固定区3设置成为正六边形，并且在正六边形的固定区3中心设置中心孔4。该方案是对实施例一、二中圆形和正方形的固定区3的补充。旨在说明，根据具体的需要和固定带6的数量，可以灵活的对固定区3的形状进行具体的选择，从而尽可能的增强皮片1和移植区2的相对固定，有利于提高造模成功率。
综上所述，本发明的有益效果是：(1)本方法不需要进行缝合因此对于缝合技术要求低，因此能够避免因为缝合问题出现的造模失败的案例，适合进行大面积推广；(2)采用PU医用透明防水辅料使得移植区2和皮片1能够在整个造模过程中处于可视的状态，因此一方面能够使得二者在造模开始时的位置处于最佳，另一方面能够在造模过程中及时发现问题，并进行调整；(3)设置中心孔4能够使得皮片1与空气接触，产生一定的呼吸作用，有利于提高模型的造模成功率。
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。不应将权利要求中的任何附图标记视为限制所涉及的权利要求。
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