阅读说明：本技术 一种降低林可霉素b组分含量的纯化工艺 (Purification process for reducing content of lincomycin B component ) 是由 吴海波 周永正 梁新建 于 2018-07-10 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种降低林可霉素B组分含量的纯化工艺。该工艺以溶媒提取液的反萃液或林可霉素粗品的水溶液为纯化对象,将溶液用NaOH调pH后在硅胶基质填料的色谱柱上进行吸附,以纯水进行洗涤,再用丁醇或丙酮进行解析,之后用盐酸调酸、结晶。本纯化工艺使用了高效制备液相色谱技术,具有分离收率高,分离周期短,工艺稳定性好,自动化程度高的优势。相对其它纯化工艺,该工艺设备占地少,环境污染小,生产可控性强,有利于工业规模应用。(The invention discloses a purification process for reducing the content of a lincomycin B component. The process uses a back extraction solution of a solvent extraction solution or an aqueous solution of a lincomycin crude product as a purification object, adjusts the pH of the solution by NaOH, then adsorbs the solution on a chromatographic column filled with silica gel matrix, washes the solution by pure water, then resolves the solution by butanol or acetone, and then adjusts the acid by hydrochloric acid and crystallizes the solution. The purification process uses a high performance preparative liquid chromatography technology, and has the advantages of high separation yield, short separation period, good process stability and high automation degree. Compared with other purification processes, the process equipment occupies less land, has little environmental pollution and strong production controllability, and is beneficial to industrial scale application.)

一种降低林可霉素B组分含量的纯化工艺

技术领域

本发明属于医药化工技术领域，特别涉及一种降低林可霉素B组分含量的纯化工艺。

背景技术

林可霉素在发酵过程中会产生一定量的林可霉素B。由于B组分抗菌活性较低，毒性较大，林可霉素及其衍生产品克林霉素、克林霉素磷酸酯等，对B组分的要求越来越严格。目前降低B组分含量的手段主要有：1、高碳醇提取后，采用碱水洗涤B组分。该方法可控性差，收率损失大，废水量多。2、盐酸反萃液或粗品水溶液经树脂分离除B组分。该方法周期长、效率低，解析单位不集中，树脂经酸碱再生会产生大量废水。因此，目前有必要开发更加高效的纯化工艺降低林可霉素B组分含量。

发明内容

为克服传统纯化工艺的一些缺点，本发明开发了一种高效的降低林可霉素B组分含量的纯化工艺。

本发明技术方案如下：

一种降低林可霉素B组分含量的纯化工艺，其特征在于：以溶媒提取液的反萃液或林可霉素粗品的水溶液为纯化对象，将溶液用NaOH调pH后在硅胶基质填料的色谱柱上进行吸附，以纯水进行洗涤，再用丁醇或丙酮进行解析，之后用盐酸调酸、结晶。

本发明中的分离柱根据填料粒径大小可装填成高压色谱柱或中低压柱。同时，也可以用发酵滤液或回收粗品的水溶液代替反萃液或粗品水溶液进行纯化分离。

本发明所述降低林可霉素B组分含量的纯化工艺，其特征在于：将溶液用NaOH调pH在7.5-8.5之间，然后在硅胶基质填料的色谱柱上进行吸附；控制林可霉素上样质量占填料质量的7％-13％。

本发明所述降低林可霉素B组分含量的纯化工艺，步骤与操作如下：

①将溶媒提取液的反萃液或林可霉素粗品的水溶液用NaOH调pH在7.5-8.5之间，得碱化液；

②将上述碱化液泵入装有硅胶基质填料的色谱柱，控制林可霉素上样质量占填料质量的7％-13％；

③用0.5-2BV纯水洗涤柱子；水洗馏分分段收集，HPLC检测后根据B组分含量考虑馏分是否进行套用；

④用1.5-6BV含水0-10％的丙酮或含水0-20％的丁醇解析；

⑤解析液加盐酸调pH至2以下，丙酮解析液可直接结晶；丁醇解析液经浓缩结晶或酸水反萃后用丙酮结晶；

⑥柱子用2-5BV纯水平衡后，可重复①至⑤过程。

本发明以高效制备液相色谱技术作为纯化手段，具有分离收率高，分离周期短，工艺稳定性好，自动化程度高的优势。相对其它纯化工艺，该工艺设备占地少，环境污染小，生产可控性强，有利于工业规模应用。

附图说明

图1实施例1紫外监测谱图(210nm)；

图2实施例2紫外监测谱图(210nm)；

图3实施例3紫外监测谱图(210nm)；

图4实施例3纯化前料液的色谱检测图；

图5实施例3所得产品的色谱检测图；

图6实施例4紫外监测谱图(210nm)；

图7实施例5紫外监测谱图(210nm)；

图8实施例6紫外监测谱图(210nm)；

图9实施例7紫外监测谱图(210nm)；

图10实施例8紫外监测谱图(210nm)。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明一种高效的林可霉素纯化工艺作具体说明。

实施例1

取溶媒提取液的盐酸反萃液(pH～2.9，正常结晶品中B组分含量3.0％)，加20％NaOH调pH＝8.2，过0.45μm滤膜，测效价～25万(外标定量～275mg/mL)。取330g 30μm填料LK-1装填动态轴向压缩柱(50-DAC，内径50mm，装填高度～250mm)。上样120mL(样品质量占填料质量10.0％)，上样后水洗300mL(～0.9BV)，丙酮解析1560mL(～4.7BV)。上样、洗脱程序如下：

表1

A相开始为上样液，后为纯水；B相为丙酮

收集丙酮解析馏分16-38min，其中林可霉素A收率100％，加HCl酸化，结晶，得产品30.0g(结晶收率90.9％)，HPLC检测其中B组分含量为1.2％。

实施例2

取溶媒提取液的盐酸反萃液(pH～2.9，正常结晶品中B组分含量3.0％)，加20％NaOH调pH＝8.2，过0.45μm滤膜，测效价～25万(外标定量～275mg/mL)。取330g 30μm填料LK-1装填动态轴向压缩柱(50-DAC，内径50mm，装填高度～250mm)。上样120mL(样品质量占填料质量10.0％)，上样后水洗450mL(～1.4BV)，丙酮解析1400mL(～4.2BV)。上样、洗脱程序如下：

表2

A相开始为上样液，后为纯水；B相为丙酮

收集丙酮解析馏分19-38min，其中林可霉素A收率95.07％，加HCl酸化，结晶，得产品28.1g(结晶收率89.8％)，HPLC检测其中B组分含量为0.565％。

实施例3

取溶媒提取液的盐酸反萃液(pH～2.9，正常结晶品中B组分含量3.0％)，加20％NaOH调pH＝8.1，过0.45μm滤膜，测效价～20万(外标定量～214mg/mL)。取330g 30μm填料LK-1装填动态轴向压缩柱(50-DAC，内径50mm，装填高度～250mm)。上样160mL(样品质量占填料质量10.4％)，上样后水洗300mL(～0.9BV)，丙酮解析1420mL(～4.3BV)。上样、洗脱程序如下：

表3

A相开始为上样液，后为纯水；B相为丙酮

收集丙酮解析馏分17-36.5min，其中林可霉素A收率94.24％，加HCl酸化，结晶，得产品27.5g(结晶收率88.5％)，HPLC检测其中B组分含量为0.361％。

实施例4

取溶媒提取液的盐酸反萃液(pH～2.9，正常结晶品中B组分含量2.8％)，加20％NaOH调pH＝8.0，过0.45μm滤膜，测效价～20万(外标定量～214mg/mL)。取320g 30μm填料LK-1装填动态轴向压缩柱(50-DAC，内径50mm，装填高度～250mm)。上样170mL(样品质量占填料质量11.4％)，上样后水洗450mL(～1.4BV)，丙酮解析1460mL(～4.5BV)。上样、洗脱程序如下：

表4

A相开始为上样液，后为纯水；B相为丙酮

收集丙酮解析馏分19.9-39min，其中林可霉素A收率76.94％，加HCl酸化，结晶，得产品23.2g(结晶收率82.7％)，HPLC检测其中B组分含量为0.329％。

实施例5

取溶媒提取液的盐酸反萃液(pH～2.9，正常结晶品中B组分含量2.8％)，加20％NaOH调pH＝8.0，过0.45μm滤膜，测效价～20万(外标定量～214mg/mL)。取320g 30μm填料LK-1装填动态轴向压缩柱(50-DAC，内径50mm，装填高度～250mm)。上样145mL(样品质量占填料质量9.7％)，上样后水洗450mL(～1.4BV)，丙酮解析1485mL(～4.6BV)。上样、洗脱程序如下：

表5

A相开始为上样液，后为纯水；B相为丙酮

收集丙酮解析馏分19.4-39min，其中林可霉素A收率80.43％，加HCl酸化，结晶，得产品21.3g(结晶收率85.3％)，HPLC检测其中B组分含量为0.333％。

实施例6

取林可霉素粗品(B组分含量3.2％)加水配成浓度230mg/mL的溶液，加20％NaOH调pH＝8.1，过0.45μm滤膜。取600g 60μm填料LK-1装填动态轴向压缩柱(50-DAC，内径50mm，装填高度～500mm)。上样270mL(样品质量占填料质量10.3％)，上样后水洗570mL(～1BV)，丙酮/水(93/7)解析3186mL(～5.3BV)。上样、洗脱程序如下：

表6

A相开始为上样液，后为纯水；B相为丙酮/水(93/7)

收集丙酮解析馏分28-70min，其中林可霉素A收率95.24％，加HCl酸化，结晶，得产品49.8g(结晶收率87.2％)，HPLC检测其中B组分含量为0.461％。

实施例7

取溶媒提取液的盐酸反萃液(pH～2.9，正常结晶品中B组分含量3.0％)，加20％NaOH调pH＝8.10，过0.45μm滤膜，测效价～25万(外标定量～275mg/mL)。取330g 30μm填料LK-1装填动态轴向压缩柱(50-DAC，内径50mm，装填高度～250mm)。上样120mL(样品质量占填料质量10.0％)，上样后水洗450mL(～1.4BV)，丁醇/水(8/2)解析905mL(～2.7BV)。上样、洗脱程序如下：

表7

A相开始为上样液，后换为纯水；B相为丁醇/水(8/2)

收集丁醇解析馏分24.2-44.5min，其中林可霉素A收率81.4％，加HCl酸化，浓缩，结晶，得产品24.2g(结晶收率90.1％)，HPLC检测其中B组分含量为0.661％。

实施例8

取溶媒提取液的盐酸反萃液(pH～2.9，正常结晶品中B组分含量3.0％)，加20％NaOH调pH＝8.10，过0.45μm滤膜，测效价～25万(外标定量～275mg/mL)。取330g 30μm填料LK-1装填动态轴向压缩柱(50-DAC，内径50mm，装填高度～250mm)。上样120mL(样品质量占填料质量10.0％)，上样后水洗150mL(～0.5BV)，丁醇/水(8/2)解析980mL(～3.0BV)。上样、洗脱程序如下：

表8

A相开始为上样液，后换为纯水；B相为丁醇/水(8/2)

收集丁醇解析馏分15.6-41min，其中林可霉素A收率86.2％，加HCl酸化，浓缩，结晶，得产品25.4g(结晶收率89.3％)，HPLC检测其中B组分含量为0.842％。

上述实施例只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人士能够了解本发明的内容并据以实施，并不能以此限制本发明的保护范围。凡根据本发明精神实质所作的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围之内。