一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法
阅读说明：本技术 一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法 (Purification method of high-purity lincomycin hydrochloride ) 是由 李佩陶 吴丹 张赪 刘琼 寇晓康 于 2020-12-24 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法,首先采用反相层析的方法对林可霉素粗品进行纯化,再经过脱盐、转盐,干燥后得到高纯度盐酸林可霉素。此方法能快速有效去除杂质,符合法规、市场对盐酸林可霉素原料药的要求。本发明方法操作简单、成本低,获得产品纯度高、收率高、杂质去除完全,适于工业化推广应用。(The invention discloses a purification method of high-purity lincomycin hydrochloride, which comprises the steps of purifying a lincomycin crude product by adopting a reverse phase chromatography method, desalting, transferring salt, and drying to obtain the high-purity lincomycin hydrochloride. The method can quickly and effectively remove impurities, and meets the requirements of laws and regulations and markets on lincomycin hydrochloride raw material medicines. The method has the advantages of simple operation, low cost, high purity of the obtained product, high yield, complete impurity removal and suitability for industrial popularization and application.)
技术领域
本发明属于化学药物分离纯化领域，具体地，涉及一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，具体是通过反相层析纯化林可霉素粗品，再经过脱盐、转盐、干燥得到高纯度盐酸林可霉素粉末。
背景技术
盐酸林可霉素(Lincomycin Hydrochloride)是一种林可胺类抗生素，其化学名为6-(1-甲基-反-4-丙基-L-2-吡咯烷甲酰氨基)-1-硫代-6,8-二脱氧-D-赤式-α-D-半乳辛吡喃糖苷盐酸盐—水合物，其分子式为C18H34N2O6S·HCl·H2O，分子量为461.02，其结构式如下所示：
林可霉素分子中因取代基团的不同而分为A、B、C、D、K、S六种组份，在发酵过程中有不同程度的表达，其中A组份占90％以上；B组份占5～10％，B组份的临床疗效仅为A组份的20％，且其毒性较大；其余4种组份的总量不超过1％。
组分名称
取代基团1
取代基团2
取代基团3
A
CH<sub>3</sub>
C<sub>3</sub>H<sub>7</sub>
CH<sub>3</sub>
B
CH<sub>3</sub>
C<sub>2</sub>H<sub>5</sub>
CH<sub>3</sub>
C
CH<sub>3</sub>
C<sub>3</sub>H<sub>7</sub>
C<sub>2</sub>H<sub>5</sub>
D
H
C<sub>3</sub>H<sub>7</sub>
CH<sub>3</sub>
K
H
C<sub>3</sub>H<sub>7</sub>
C<sub>2</sub>H<sub>5</sub>
S
C<sub>2</sub>H<sub>5</sub>
C<sub>3</sub>H<sub>7</sub>
C<sub>2</sub>H<sub>5</sub>
表1林可霉素各组份取代基
目前盐酸林可霉素的生产一般为采用链霉菌在一定条件下进行发酵，发酵液经酸化处理后过滤，滤液用NaOH调整pH，再经过丁醇萃取，减压浓缩后，加入盐酸反应生成盐酸林可霉素粗结晶，粗结晶溶解后进行活性炭吸附、二次结晶、干燥，得到含量为90％以上的盐酸林可霉素粗品。
公开报道的林可霉素的纯化方法主要通过多次萃取和大孔树脂柱层析得到林可霉素粗品，再进行多次结晶得到高纯度盐酸林可霉素。如中国专利CN103724380B公开了一种林可霉素的纯化方法，该专利采用是陶瓷超滤膜、萃取、反萃取等工艺纯化林可霉素，该工艺较复杂并且萃取液、反萃取液易残留，得到的林可霉素含量低、杂质极多，无法达到欧洲和美国药典的标准。又如CN104356179A公开了一种盐酸林可霉素提纯工艺，该专利通过吸附步骤、水洗步骤、解析步骤、浓缩、结晶步骤，干燥后得到成品。该工艺使用大孔树脂对林可霉素进行纯化，去除林可霉素B组分，针对林可霉素粗品中的其他杂质，纯化效果差、杂质含量高，要使用丙酮多次重结晶才能得到高纯度的盐酸林可霉素。而且纯化周期长，回收率低、载量低、自动化程度低，工业化过程批次之间的稳定性差也无法达到欧洲和美国药典的标准要求。为此，开发一种符合欧洲和美国法规要求，经济、高效的盐酸林可霉素的纯化方法是必要的。
发明内容
本发明公开了一种高纯度盐酸林可霉素的纯化方法，首先采用反相层析的方法对林可霉素粗品进行纯化，再经过脱盐、转盐、浓缩、干燥后得到高纯度盐酸林可霉素。该过程主要是利用林可霉素在酸性条件下是离子态的，在碱性条件下是分子态这一特点，利用分子态下的林可霉素与反相层析填料之间的疏水作用力进行分离。此方法能有效去除杂质，达到欧洲和美国法规要求的标准。
为达到上述目的，本发明采用如下方案：
步骤一、采用反相层析的方法，对林可霉素粗品进行纯化得到林可霉素纯化液；
步骤二、采用大孔树脂脱盐得到林可霉素脱盐溶液；
步骤三、经过转盐、浓缩、干燥得到盐酸林可霉素。
更具体地，步骤一中的反相层析按照如下步骤进行：
(1)装柱：用聚合物反相填料作为色谱柱的固定相，加1-3CV 0-100％(V/V)含量的有机溶剂-水溶液匀浆，湿法装柱，柱高不低于25cm，装柱压力0-10Mpa；
(2)柱平衡：使用2-6CV缓冲盐水溶液平衡色谱柱，过程线流速不高于10cm/min；
(3)上样：将林可霉素粗品溶解于缓冲盐水溶液，得到原液浓度200-300g/L，上样至色谱柱，载量20-100g/L，过程线流速不高于10cm/min；
(4)洗杂：使用5-10CV含量为5-15％(V/V)的有机溶剂-缓冲盐水溶液对色谱柱进行洗杂，洗杂过程线流速不高于10cm/min；
(5)洗脱：使用6-14CV含量为15-40％(V/V)的有机溶剂-缓冲盐水溶液对吸附在色谱柱上林可霉素进行洗脱，洗脱过程线流速不高于10cm/min，收集洗脱液组分为林可霉素纯化液；
(6)再生：使用6-10CV含量为80-100％(V/V)有机溶剂-水溶液对色谱柱进行再生，再生过程线流速不高于10cm/min；再生结束后进入下一周期纯化过程的平衡步骤。
步骤二中的大孔树脂脱盐按照如下步骤进行：
(A)浓缩：将反相层析步骤一收集的林可霉素纯化液进行浓缩，降低有机溶剂含量至1-10％(V/V)，加碱调整至pH10-12；
(B)上样：将浓缩液上样至装有大孔树脂柱，载量20-150g/L，线流速不高于5cm/min；
(C)冲洗：分别使用2-6BV pH10-12的碱溶液、纯水冲洗大孔树脂柱，线流速不高于5cm/min；
(D)洗脱：用2-6BV含量为50-100％(V/V)有机溶剂-水溶液对林可霉素进行洗脱，线流速不高于5cm/min，收集洗脱液即为林可霉素脱盐溶液；
(E)柱平衡：使用2-6BV纯水对大孔树脂柱进行再平衡，线流速不高于5cm/min，待进入下一周期脱盐。
步骤三中的转盐干燥按照如下步骤进行
(a)转盐：将步骤二中的林可霉素脱盐溶液加入浓度为0.1-4mol/L的盐酸溶液，调整至pH3.5-4.5，其中反应温度不超过20℃；
(b)浓缩：使用纳滤、蒸馏或减压蒸馏方式将收集液浓缩1-20倍；
(c)干燥：进行真空干燥，得到粉末状的盐酸林可霉素。
更进一步地，步骤一中的反相填料是聚苯乙烯-二乙烯苯构成的聚合物微球，交联度范围为80-99％(W/W)。聚合物微球粒径范围为30-150μm，孔径范围为比表面积范围为800-1500m2/g，包括但不限于西安蓝晓科技新材料股份有限公司(简称蓝晓科技)生产的型号为LX-161系列反相聚合物层析填料；
所述有机溶剂是指和水能够任意比例互溶的溶剂，包括但不限于甲醇、乙醇、乙腈、异丙醇、丙酮中的一种或者几种的混合物；
所述缓冲盐溶液：配制浓度范围0.5-5.0％的磷酸缓冲液，再用氨水或者氢氧化钠调至pH5-9；
所述碱是指带有碱性的有机碱、无机碱和在水溶液中显碱性的有机、无机盐，包括但不限于甲胺、吡啶、乙二胺、三乙胺、四甲基铵、四乙基铵、氢氧化钠、氢氧化钾、磷酸钠、磷酸铵、醋酸钠、醋酸铵的一种或几种的混合物；
所述大孔树脂是指聚乙烯苯-二乙烯苯构成的聚合物小球。聚合物小球粒径范围为0.1-1.5mm，孔径范围为比表面积不低于100m2/g，交联度范围为15-80％(W/W)，包括但不限于西安蓝晓科技新材料股份有限公司生产的型号为LX-20树脂；
所述盐酸溶液浓度为0.1-4mol/L。
相对现有技术，本发明具有以下优点：
本发明的方法以反相层析介质作为色谱柱填料，并以适合的洗脱条件，使盐酸林可霉素产品纯度达到99.6％以上，收率达到88％以上，并且纯化周期短，操作简单、成本低，适于工业化推广应用。
附图说明
图1为盐酸林可霉素的纯化工艺流程图。
具体实施方式
下面结合具体实施方式的实施例对本发明作进一步详细说明。但本发明不仅局限于以下具体实施例。下述实施例中，反相层析步骤中使用10*600mm不锈钢色谱柱(装填蓝晓科技反相层析填料LX-161系列，西安蓝晓科技新材料股份有限公司生产，交联度为80-99％(W/W)，聚合物微球平均粒径为30-150μm，孔径为比表面积为800-1500m2/g)，聚合物反相层析填料的用量是60g，使用100-300mL 40-70％乙醇水溶液(V/V)匀浆，在压力5Mbar下进行湿法装柱；大孔树脂脱盐步骤中，使用10*600mm玻璃柱(装填蓝晓科技大孔树脂LX-20，西安蓝晓科技新材料股份有限公司生产，聚合物小球粒径为0.1-1.5mm，孔径为比表面积不低于100m2/g，交联度为30-70％(W/W))，45mL大孔树脂，用100mL纯水混匀，常压装填。
实施例1
溶液按照下述方式配制：
流动相A：34g磷酸用900ml水稀释，用氨水调至pH＝7后定容到1L；
流动相B：950mL流动相A加入50mL乙醇，混匀配成5％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
流动相C：750mL流动相A加入250mL乙醇，混匀配成25％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
用流动相A液将2.35g林可霉素粗品溶解成粗品溶液，定容到10ml，用0.45um滤膜过滤，滤后浓度235g/L，体积10mL。
使用LX-161S(聚合物微球平均粒径为30-50um)作为聚合物反相填料，整个层析纯化过程流速4.7ml/min，首先使用流动相A平衡色谱柱，平衡40min；将10mL过滤后林可霉素粗品溶液泵入上述色谱柱内，载量为50g/L(林可霉素纯品质量/聚合物反相填料柱体积)，先用流动相B洗杂80min，后使用流动相C洗脱120min，收集洗脱液564ml；用80％乙醇水溶液再生60min；收集到的洗脱液在45℃、100mbar条件下旋转蒸发浓缩至20mL；
整个大孔树脂脱盐化过程流速0.75ml/min，纯水平衡120min，将上步得到的浓缩液，用NaOH调至pH10.5；经过0.45um滤膜过滤后，得到20ml浓度为110.2g/L的林可霉素浓缩液。泵入大孔树脂柱，载量47g/L，用pH10.5的氢氧化钠溶液，洗杂3BV，然后水洗4BV，然后用80％(V/V)乙醇水溶液洗脱2BV，收集含有林可霉素的洗脱液90mL；用1mol/L的HCl调至pH4.5；最后在45℃、100mbar条件下旋转蒸缩制得白色粉末状的盐酸林可霉素2.05g。经液相色谱检测计算，该盐酸林可霉素产品纯度达到99.74％，工艺总收率达到90.6％。
实施例2
溶液按照下述方式配制：
流动相A：34g磷酸用900ml水稀释，用氨水调至pH7后定容到1L；
流动相B：940mL流动相A加入60mL乙醇，混匀配成6％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
流动相C：750mL流动相A加入250mL乙醇，混匀配成25％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
用流动相A液将2.35g林可霉素粗品溶解成粗品溶液，定容到10mL，用0.45um滤膜过滤，滤后浓度235g/L，体积10mL。
使用LX-161(聚合物微球平均粒径为50-75um)作为聚合物反相填料，整个层析纯化过程流速4.7ml/min，首先使用流动相A平衡色谱柱，平衡40min；将10mL过滤后林可霉素粗品溶液泵入上述色谱柱内，载量为50g/L(林可霉素纯品质量/聚合物反相填料柱体积)，先用流动相B洗杂80min，后使用流动相C洗脱120min，收集洗脱液；用80％乙醇水溶液再生60min；收集到的564mL洗脱液在45℃，100mbar条件下旋转蒸发浓缩至25mL；
整个大孔树脂脱盐化过程流速0.75ml/min，纯化水平衡120min，将上步得到的浓缩液，用NaOH调至pH10.5；经过0.45um滤膜过滤后，得到25ml浓度为85.1g/L的林可霉素浓缩液。泵入大孔树脂柱，载量80mg/ml，用pH10.5的氢氧化钠溶液，洗杂3BV，然后水洗4BV，然后用80％(V/V)乙醇水溶液洗脱2BV，收集含有林可霉素的洗脱液90mL；用1mol/L的HCl调至pH4.5；最后在45℃、100mbar条件下旋转蒸缩制得白色粉末状的盐酸林可霉素2.04g。该盐酸林可霉素产品纯度达到99.68％，工艺总收率达到89.6％。
实施例3
溶液按照下述方式配制：
流动相A：34g磷酸用900ml水稀释，用氨水调pH＝7后定容到1L；
流动相B：950mL流动相A加入50mL乙醇，混匀配成5％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
流动相C：750mL流动相A加入250mL乙醇，混匀配成25％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
用流动相A液将2.2g林可霉素粗品溶解成粗品溶液，定容到10mL，用0.45um滤膜过滤，滤后浓度220g/L，体积10mL。
使用LX-161S作为聚合物反相填料，整个层析纯化过程流速4.7ml/min，首先使用流动相A平衡色谱柱，平衡40min；将10mL过滤后林可霉素粗品溶液泵入上述色谱柱内，载量为45g/L(林可霉素纯品质量/聚合物反相填料柱体积)，先用流动相B洗杂80min，后使用流动相C洗脱140min，收集洗脱液；用80％乙醇水溶液再生60min；收集到的658mL洗脱液在45℃，100mbar条件下旋转蒸发浓缩至30mL；
整个大孔树脂脱盐化过程流速0.75ml/min，纯化水平衡120min，将上步得到的浓缩液，用NaOH调至pH10.5；经过0.45um滤膜过滤后，得到30mL浓度为64.9g/L的林可霉素浓缩液。泵入大孔树脂柱，载量80mg/ml，用pH10.5的氢氧化钠溶液，洗杂3BV，然后水洗4BV，然后用80％(V/V)乙醇水溶液洗脱2BV，收集含有林可霉素的洗脱液90mL；用1mol/L的HCl调至pH4.5；最后在45℃，100mbar条件下旋转蒸缩制得白色粉末状的盐酸林可霉素1.94g。该盐酸林可霉素产品纯度达到99.81％，工艺总收率达到91.2％。
实施例4
溶液按照下述方式配制：
流动相A：34g磷酸用900ml水稀释，用氨水调pH＝7后定容到1L；
流动相B：930mL流动相A加入70mL乙醇，混匀配成7％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
流动相C：850mL流动相A加入150mL乙醇，混匀配成15％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
用流动相A液将2.2g林可霉素粗品溶解成粗品溶液，定容到10mL，用0.45um滤膜过滤，滤后浓度220g/L，体积10mL。
使用LX-161S作为聚合物反相填料，整个层析纯化过程流速4.7ml/min，首先使用流动相A平衡色谱柱，平衡40min；将10mL过滤后林可霉素粗品溶液泵入上述色谱柱内，载量为45g/L(林可霉素纯品质量/聚合物反相填料柱体积)，先用流动相B洗杂80min，后使用流动相C洗脱160min，收集洗脱液；用80％乙醇水溶液再生60min；收集到的752mL洗脱液在45℃，100mbar条件下旋转蒸发浓缩至32mL；
整个大孔树脂脱盐化过程流速0.75ml/min，纯化水平衡120min，将上步得到的浓缩液，用NaOH调至pH10.5；经过0.45um滤膜过滤后，得到32mL浓度为60.5g/L的林可霉素浓缩液。泵入大孔树脂吸附柱，载量80mg/ml，用pH10.5的氢氧化钠溶液，洗杂3BV，然后水洗4BV，然后用80％(V/V)乙醇水溶液洗脱2BV，收集含有林可霉素的洗脱液90mL；用1mol/L的HCl调至pH4.5；最后在45℃，100mbar条件下旋转蒸缩制得白色粉末状的盐酸林可霉素1.96g。该盐酸林可霉素产品纯度达到99.64％，工艺总收率达到91.8％。
实施例5
溶液按照下述方式配制：
流动相A：34g磷酸用900ml水稀释，用氨水调pH＝7后定容到1L；
流动相B：950mL流动相A加入50mL乙醇，混匀配成5％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
流动相C：750mL流动相A加入250mL乙醇，混匀配成25％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
用流动相A液将3.9g林可霉素粗品溶解成粗品溶液，定容到10mL，用0.45um滤膜过滤，滤后浓度260g/L，体积15mL。
使用LX-161M(聚合物微球平均粒径为75-100um)作为聚合物反相填料，整个层析纯化过程流速4.7ml/min，首先使用流动相A平衡色谱柱，平衡40min；将15mL过滤后林可霉素粗品溶液泵入上述色谱柱内，载量为80g/L(林可霉素纯品质量/聚合物反相填料柱体积)，先用流动相B洗杂80min，，后使用流动相C洗脱140min，收集洗脱液；用80％乙醇水溶液再生60min；收集到的658mL洗脱液在45℃，100mbar条件下旋转蒸发浓缩至35mL；
整个大孔树脂脱盐化过程流速0.75ml/min，纯化水平衡120min，将上步得到的浓缩液，用NaOH调至pH10.5；经过0.45um滤膜过滤后，得到35mL浓度为95.4g/L的林可霉素浓缩液。泵入大孔树脂吸附柱，载量80mg/ml，用pH10.5的氢氧化钠溶液，洗杂3BV，然后水洗4BV，然后用80％(V/V)乙醇水溶液洗脱2BV，收集含有林可霉素的洗脱液90mL；用1mol/L的HCl调至pH4.5；最后在45℃，100mbar条件下旋转蒸缩制得白色粉末状的盐酸林可霉素3.31g。该盐酸林可霉素产品纯度达到99.31％，工艺总收率达到86.3％。
实施例6
溶液按照下述方式配制：
流动相A：34g磷酸用900ml水稀释，用氨水调pH＝7后定容到1L；
流动相B：950mL流动相A加入50mL乙醇，混匀配成5％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
流动相C：750mL流动相A加入250mL乙醇，混匀配成25％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
用流动相A液将3.9g林可霉素粗品溶解成粗品溶液，定容到10mL，用0.45um滤膜过滤，滤后浓度260g/L，体积15mL。
使用LX-161S作为聚合物反相填料，整个层析纯化过程流速4.7ml/min，首先使用流动相A平衡色谱柱，平衡40min；将15mL过滤后林可霉素粗品溶液泵入上述色谱柱内，载量为80g/L(林可霉素纯品质量/聚合物反相填料柱体积)，先用流动相B洗杂80min，后使用流动相C洗脱140min，收集洗脱液；用80％乙醇水溶液再生60min；收集到的658mL洗脱液在45℃，100mbar条件下旋转蒸发浓缩至35mL；
整个大孔树脂脱盐化过程流速0.75ml/min，纯化水平衡120min，将上步得到的浓缩液，用NaOH调至pH10.5；经过0.45um滤膜过滤后，得到35mL浓度为95.4g/L的林可霉素浓缩液。泵入大孔树脂吸附柱，载量80mg/ml，用pH10.5的氢氧化钠溶液，洗杂3BV，然后水洗4BV，然后用80％(V/V)乙醇水溶液洗脱2BV，收集含有林可霉素的洗脱液90mL；用1mol/L的HCl调至pH4.5；最后在45℃，100mbar条件下旋转蒸缩制得白色粉末状的盐酸林可霉素3.33g。该盐酸林可霉素产品纯度达到99.62％，工艺总收率达到88.2％。
实施例7
溶液按照下述方式配制：
流动相A：34g磷酸用900ml水稀释，用氨水调pH＝7后定容到1L；
流动相B：950mL流动相A加入50mL乙醇，混匀配成5％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
流动相C：750mL流动相A加入150mL乙醇，混匀配成15％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为1L；
用流动相A液将3.9g林可霉素粗品溶解成粗品溶液，定容到10mL，用0.45um滤膜过滤，滤后浓度260g/L，体积15mL。
使用LX-161S作为聚合物反相填料，整个层析纯化过程流速4.7ml/min，首先使用流动相A平衡色谱柱，平衡40min；将15mL过滤后林可霉素粗品溶液泵入上述色谱柱内，载量为80g/L(林可霉素纯品质量/聚合物反相填料柱体积)，先用流动相B洗杂80min，后使用流动相C洗脱160min，收集洗脱液；用80％乙醇水溶液再生60min；收集到的752mL洗脱液在45℃，100mbar条件下旋转蒸发浓缩至35mL；
整个大孔树脂脱盐化过程流速0.75ml/min，纯化水平衡120min，将上步得到的浓缩液，用NaOH调至pH10.5；经过0.45um滤膜过滤后，得到35mL浓度为95.4g/L的林可霉素浓缩液。泵入大孔树脂吸附柱，载量80mg/ml，用pH10.5的氢氧化钠溶液，洗杂3BV，然后水洗4BV，然后用80％(V/V)乙醇水溶液洗脱2BV，收集含有林可霉素的洗脱液90mL；用1mol/L的HCl调至pH4.5；最后在45℃，100mbar条件下旋转蒸缩制得白色粉末状的盐酸林可霉素3.52g。该盐酸林可霉素产品纯度达到99.55％，工艺总收率达到90.2％。
实施例8
反相层析步骤中使用DAC 100*1500mm动态轴向压缩柱(装填蓝晓科技反相层析填料LX-161S，西安蓝晓科技新材料股份有限公司生产，交联度为80-99％(W/W)，聚合物微球平均粒径为30-50μm)，聚合物反相层析填料的用量是10kg，使用5L 50％乙醇水溶液(V/V)匀浆，在压力5Mbar下进行湿法装柱；大孔树脂脱盐步骤中，使用100*1000mm玻璃柱(装填蓝晓科技大孔树脂LX-20，西安蓝晓科技新材料股份有限公司生产，聚合物小球粒径为0.1-1.5mm，孔径为比表面积不低于100m2/g，交联度为15-80％(W/W))，7.5L大孔树脂，用15L纯水混匀，常压装填。
溶液按照下述方式配制：
流动相A：6.8kg磷酸用180L水稀释，用氨水调pH＝7后定容到200L；
流动相B：190L流动相A加入10L乙醇，混匀配成5％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为200L；
流动相C：170L流动相A加入30L乙醇，混匀配成15％(V/V)的磷酸盐-乙醇溶液，定容为200L；
用流动相A液将374.5g林可霉素粗品溶解成粗品溶液，定容到1.7L，用0.45um滤膜过滤，滤后浓度220g/L，体积1.7L。
使用LX-161S作为聚合物反相填料，整个层析纯化过程流速479mL/min，首先使用流动相A平衡色谱柱，平衡40min；将1.7L过滤后林可霉素粗品溶液泵入上述色谱柱内，载量为45g/L(林可霉素纯品质量/聚合物反相填料柱体积)，先用流动相B洗杂80min，后使用流动相C洗脱140min，收集洗脱液；用80％乙醇水溶液再生60min；收集到的67L洗脱液在45℃，100mbar条件下旋转蒸发浓缩至3L；
整个大孔树脂脱盐化过程流速125ml/min，纯化水平衡120min，将上步得到的浓缩液，用NaOH调至pH10.5；经过0.45um滤膜过滤后，得到3L浓度为65.0g/L的林可霉素浓缩液。泵入大孔树脂柱，载量80mg/ml，用pH10.5的氢氧化钠溶液，洗杂3BV，然后水洗4BV，然后用80％(V/V)乙醇水溶液洗脱2BV，收集含有林可霉素的洗脱液15L；用1mol/L的HCl调至pH4.5；最后在45℃，100mbar条件下旋转蒸缩制得白色粉末状的盐酸林可霉素332g。该盐酸林可霉素产品纯度达到99.83％，工艺总收率达到92.2％。
实施例9---实施例14
根据实施例1至例8的实验方法，采用LX-161S作为反相填料(粒度为30-50μm)，LX-20作为大孔吸附树脂，调整不同的载量、洗脱浓度等参数，其余参数参照实施例8中的参数，结果如下表(表中溶液浓度均为体积百分比浓度)：
实施例15---实施例17
根据实施例1至例8的实验方法，采用LX-161作为反相填料(粒度为50-75μm)，LX-20作为大孔吸附树脂，调整不同的载量、洗脱浓度等参数，其余参数参照实施例8中的参数，结果如下表(表中溶液浓度均为体积百分比浓度)：
实施例18---实施例20
根据实施例1至例8的实验方法，采用LX-161M作为反相填料(粒度为75-100μm)，LX-20作为大孔吸附树脂，调整不同的载量、洗脱浓度等参数，其余参数参照实施例8中的参数，结果如下表(表中溶液浓度均为体积百分比浓度)：
- 上一篇：一种医用注射器针头装配设备
- 下一篇：一种红景天苷的提取工艺