阅读说明：本技术 盐酸克林霉素杂质的制备方法 (Preparation method of clindamycin hydrochloride impurity ) 是由 李发光 王倩倩 黄畅 王玉芬 王琳琳 霍翔宏 王�琦 王利春 王晶翼 于 2019-06-04 设计创作，主要内容包括：本发明涉及盐酸克林霉素杂质的制备方法,属于药物领域。本发明所要解决的技术问题是现有技术中缺乏高效制备盐酸克林霉素杂质7-差向林可霉素和7-差向盐酸克林霉素对照品的方法。本发明提供了式Ⅱ所示盐酸克林霉素杂质中间体的制备方法：以式Ⅰ所示化合物和R<Sub>1</Sub>COOH为原料,经Mitsunobu取代反应制备得到,反应液中添加了胺和/或含氮芳香杂环化合物。本发明还进一步提供了7-差向林可霉素和7-差向盐酸克林霉素的完整合成方法：以林可霉素为原料,经过上硅保护基、选择性脱保护、Mitsunobu取代反应、水解反应得7-差向林可霉素,进一步氯代反应制备得到7-差向盐酸克林霉素。<Image he="232" wi="700" file="DDA0002084481160000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The invention relates to a preparation method of clindamycin hydrochloride impurities, belonging to the field of medicines. The invention aims to solve the technical problem that a method for efficiently preparing clindamycin hydrochloride impurity 7-epimembrycin and 7-epimembrycin hydrochloride reference substances is lacked in the prior art. The invention provides a preparation method of a clindamycin hydrochloride impurity intermediate shown as a formula II: a compound of formula I and R 1 COOH is used as a raw material and is prepared through a Mitsunobu substitution reaction, and amine and/or a nitrogen-containing aromatic heterocyclic compound are/is added into reaction liquid. The invention further provides a complete synthesis method of the 7-epimembrycin and the 7-epimembrycin hydrochloride, which comprises the following steps: taking lincomycin as a raw material, carrying out silicon protecting group application, selective deprotection, Mitsunobu substitution reaction and hydrolysis reaction to obtain 7-epime lincomycin, and further carrying out chlorination reaction to prepare 7-epimeAdding clindamycin hydrochloride.)

盐酸克林霉素杂质的制备方法

技术领域

本发明涉及盐酸克林霉素杂质的制备方法，属于药物领域。

背景技术

盐酸克林霉素(Clindamycin Hydrochloride)化学名：6-(1-甲基-反-4-丙基-L-2-吡咯烷甲酰胺基)-1-硫代-7(S)-氯-6,7,8-三脱氧-L-苏式-α-D-半乳辛吡喃糖苷盐酸盐，为林可酰胺类抗生素，是林可霉素的7-脱氧-7-氯的衍生物。克林霉素于1966年由Magerlein等以氯取代林可霉素分子中第7位的羟基首次合成，由美国普强公司最先于70年代初在美国上市，随后在英国等欧洲国家上市。与林可霉素相比，克林霉素的抗菌谱广，抗菌活性强，其抗菌活性是林可霉素的4-8倍，胃肠道吸收更完全而且不受食物的影响，不良反应低。自在中国上市以来，盐酸克林霉素以其疗效确切、质量稳定，获得了市场认可，并已收入中国药典。盐酸克林霉素除口服制剂外，还有注射液上市，其开发前景非常广阔。

7-差向盐酸克林霉素为盐酸克林霉素合成过程中7位氯化SN1反应得到的副产物；7-差向林可霉素是林可霉素残留杂质或以林可霉素为原料合成盐酸克林霉素时，在反应过程中产生的杂质。7-差向盐酸克林霉素以及7-差向林可霉素均可能残留在盐酸克林霉素终产品中，影响产品质量，7-差向克林霉素(游离态)已定入《中国药典》中，标准限度为1.5％。上述两种杂质的结构式如下：

中国专利申请CN101891778A、CN102702279A、CN103172683A均有关于杂质7-差向盐酸克林霉素的报道，但均未披露该杂质的合成方法。另外，盐酸克林霉素原料药中7-差向盐酸克林霉素以及7-差向林可霉素残留量小，通过制备色谱方法获得足够数量及质量的对照品成本很高；因此，提供一种制备高纯度7-差向盐酸克林霉素及7-差向林可霉素的方法，获得杂质对照品，用于对原料药质量进行控制，对于盐酸克林霉素成品质量研究及控制具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于提供盐酸克林霉素杂质—7-差向盐酸克林霉素及7-差向林可霉素的制备方法，以解决现有技术中缺乏高效制备上述杂质对照品的方法的问题。

本发明提供的方法以林可霉素为原料，经过上硅保护基、选择性脱保护、Mitsunobu取代反应、水解反应得到7-差向林可霉素；进一步经过氯代反应等过程，制备得到了7-差向盐酸克林霉素。

Mitsunobu取代反应中，发明人意外发现，由于反应物本身存在的三级胺官能团，与R₁COOH成盐干扰了Mitsunobu取代反应的进行，通过添加胺和/或含氮芳香杂环化合物可提高该步骤的收率，若不加入胺和/或含氮芳香杂环化合物，则无法得到目标产物。

而且，发明人发现，上述Mitsunobu取代反应制备得到的粗产品纯度较高，可直接用于下一步反应，无需中间纯化操作步骤，工艺简便，有利于工业化生产。

本发明包含以下几个方面的内容：

第一方面，本发明提供了式Ⅱ所示盐酸克林霉素杂质中间体的制备方法：

以式Ⅰ所示化合物和R₁COOH为原料，经Mitsunobu取代反应制备得到，反应液中添加了胺和/或含氮芳香杂环化合物：

其中，R₁为任选取代的芳基或烷基；

R₂为其中，R₃、R₄、R₅独立地选自烷基。

本发明所述胺为氨分子中一个或多个氢原子被烃基取代后的产物，包括脂肪胺和芳香胺。在本发明的部分实施方案中，所述胺和/或含氮芳香杂环化合物为三级胺和/或六元环的含氮芳香杂环化合物；

优选地，所述三级胺为三甲基胺、三乙基胺、三乙醇胺、三烯丙基胺、N,N-二异丙基乙胺中一种或两种以上，所述六元环的含氮芳香杂环化合物为吡啶、4-二甲氨基吡啶或其混合物；

优选地，所述胺和/或含氮芳香杂环化合物为三乙基胺、二异丙基乙基胺、吡啶中一种或两种以上。

在本发明的部分实施方案中，R₁为任选取代的5～14元芳基或C₁～C₆烷基，R₃、R₄、R₅独立地选自C₁～C₆烷基；优选地，R₁为任选取代的苯基或C₁～C₄烷基，R₃、R₄、R₅独立地选自C₁～C₄烷基；进一步优选地，R₁为对硝基苯基，R₃、R₄、R₅均为甲基。

在本发明的部分实施方案中，所述制备方法包括如下步骤：将式Ⅰ所示化合物、R₁COOH、膦试剂，以及胺和/或含氮芳香杂环化合物加入到反应溶剂中，再缓慢加入偶氮二羧酸酯，反应液温度控制在30℃以下，反应结束，即得式Ⅱ所示克林霉素杂质中间体。

在本发明的部分实施方案中，所述制备方法满足以下至少一项：

所述膦试剂为三芳基膦；优选地，所述膦试剂为三苯基膦；

所述偶氮二羧酸酯为偶氮二甲酸二异丙酯、偶氮二甲酸二乙酯或其混合物；

所述反应溶剂为甲苯、二氯甲烷、四氢呋喃中一种或两种以上；

加入偶氮二羧酸酯前，反应液温度控制在30℃以下；优选地，反应液温度控制在10～30℃；

式Ⅰ所示化合物在反应溶剂中的浓度(g：ml)为(1:2)～(1:100)；优选的浓度(g：ml)为1:30；

反应试剂式Ⅰ所示化合物：R₁COOH：膦试剂：偶氮二羧酸酯：胺和/或含氮芳香杂环化合物的摩尔配比为1：(1～5)：(1～5)：(1～5)：(1～5)；优选地，反应试剂式Ⅰ所示化合物：R₁COOH：膦试剂：偶氮二羧酸酯：胺和/或含氮芳香杂环化合物的摩尔配比为1:2:2:2:2。

第二方面，本发明提供了式Ⅳ所示盐酸克林霉素杂质的制备方法，包括如下步骤中的一步或两步以上：

a、化合物1的羟基经硅试剂保护，得到化合物2：

R₂为其中，R₃、R₄、R₅独立地选自烷基；

b、化合物2在酸存在下选择性脱除硅保护基，得到式Ⅰ所示化合物：

c、根据所述式Ⅱ所示盐酸克林霉素杂质中间体的制备方法，制备得到式Ⅱ中间体；

d、式Ⅱ中间体经水解反应，即得式Ⅳ所示盐酸克林霉素杂质：

在本发明的部分实施方案中，R₃、R₄、R₅独立地选自C₁～C₆烷基；优选地，R₃、R₄、R₅独立地选自C₁～C₄烷基；最优选地，R₃、R₄、R₅均为甲基。

在本发明的部分实施方案中，步骤b所述酸为甲酸、乙酸、丙酸中一种或两种以上；优选地，步骤b所述酸为乙酸。

第三方面，本发明提供了一种式Ⅲ所示盐酸克林霉素杂质的制备方法，还包括如下步骤：

e、根据所述式Ⅳ所示盐酸克林霉素杂质的制备方法，制备得到式Ⅳ所示盐酸克林霉素杂质；

f、将式Ⅳ所示盐酸克林霉素杂质制成盐酸盐，经氯代反应，即得式Ⅲ所示盐酸克林霉素杂质：

在本发明的部分实施方案中，步骤f所述氯代反应的条件为：将三光气的氯仿溶液加入到氯仿和N,N-二甲基甲酰胺的混合溶剂中，充分反应生成Vilsmeier试剂，再加入式IV的盐酸盐，反应结束，即得。

在本发明的部分实施方案中，步骤a中的硅试剂为三烷基卤硅烷和六烷基二硅氮烷，所述三烷基卤硅烷和六烷基二硅氮烷中的卤素基团选自Cl、Br、或I，优选Cl，所述烷基优选甲基。

在本发明的部分实施方案中，步骤a：上硅保护基，将盐酸林可霉素(化合物1)、三甲基氯硅烷、六甲基二硅氮烷、以及吡啶加到三口瓶中，0-25℃反应8小时，反应液经后处理得化合物2。在本发明的部分实施方案中，步骤b：选择性脱保护，将上述所得化合物2加入反应瓶中，再加入甲醇及乙酸，反应液温度不超过30℃反应18小时，反应液经后处理得式Ⅰ所示化合物。

在本发明的部分实施方案中，步骤c：Mitsunobu取代反应，将步骤b纯化后的化合物Ⅰ及甲苯加入反应瓶中，再加入三苯基膦、对硝基苯甲酸，以及胺和/或含氮芳香杂环化合物、偶氮二甲酸二异丙酯，反应液温度不超过30℃，反应20小时，浓缩反应液得式Ⅱ所示化合物。

在本发明的部分实施方案中，步骤d：水解反应，将步骤c所得化合物Ⅱ溶于甲醇，再加入碳酸钾，反应液温度不超过30℃，搅拌过夜，经后处理得化合物IV，即7-差向林可霉素。

在本发明的部分实施方案中，步骤f优选采用三光气/DMF生成的Vilsmeier试剂为氯化试剂。

在本发明的部分实施方案中，步骤f：氯代反应，将步骤d所得化合物IV制成化合物IV盐酸盐；向反应瓶中加入氯仿、N,N-二甲基甲酰胺、三光气，再加入化合物IV的盐酸盐，0-60℃反应，经后处理得式Ⅲ所示盐酸克林霉素杂质。

进一步优选地，在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质的合成方法，包括如下步骤：

步骤a：在室温条件下，化合物1和吡啶在三口瓶中搅拌至基本溶解，依次加入六甲基二硅氮烷、三甲基氯硅烷，使用冰水浴控制反应液温度在2-10℃；加料完毕后，撤去冰水浴，室温下反应8小时；反应液经萃取、干燥、浓缩、柱层析得化合物2；

步骤b：在室温条件下，化合物2与甲醇搅拌溶解后，加入乙酸溶液，反应液温度不超过30℃,反应18小时，反应液经水洗、干燥、过滤、浓缩得式Ⅰ所示化合物；

步骤c：在室温条件下，向反应瓶中加入式Ⅰ所示化合物、甲苯，然后再依次加入三苯基膦、对硝基苯甲酸、胺和/或含氮芳香杂环化合物、偶氮二甲酸二异丙酯，搅拌均匀，控制反应液温度不超过30℃，搅拌20小时；反应液经碳酸氢钠溶液、纯化水洗涤，有机相浓缩得式Ⅱ所示化合物；

步骤d：在室温条件下，向反应瓶中加入式Ⅱ所示化合物、甲醇、以及碳酸钾，控制反应液温度不超过30℃，搅拌20小时，反应液经水洗、萃取、浓缩、柱层析得化合物IV，即7-差向林可霉素；

步骤f：在室温条件下，将化合物IV制成化合物IV盐酸盐。向反应瓶中加入氯仿、N,N-二甲基甲酰胺，搅拌均匀后，冰水浴降温；然后再向体系中加入三光气的氯仿溶液，反应液温度不超过5℃反应0.5小时；再分批加入化合物IV盐酸盐，反应液温度不超过5℃反应1.5小时；反应体系依次在室温、40℃下各反应0.5小时，最后移至60℃反应20小时，经后处理得式Ⅲ所示盐酸克林霉素杂质。

在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质合成方法中，步骤a中盐酸克林霉素(化合物1)、六甲基二硅氮烷、三甲基氯硅烷的摩尔比为1:1:2～1:5:10，优选摩尔比为1:3:7。

在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质合成方法中，步骤a中后处理具体操作步骤为：反应液倒入二氯甲烷中，有机相经水洗、干燥、浓缩、柱层析洗脱，洗脱后产物经水洗去除吡啶，得化合物2。洗脱剂为正己烷与乙酸乙酯，体积比为5:1-20:1；优选体积比为12:1。

在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质合成方法中，步骤b中，乙酸溶液浓度为36％-98％，优选地，乙酸溶液的浓度为80％。

在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质合成方法中，步骤b中，减压浓缩反应液温度为25-40℃，优选地反应液温度为30℃。

在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质合成方法中，步骤d中，式Ⅱ所示化合物、碳酸钾的摩尔比为1:1-1:5；优选摩尔比为1:1.5。

在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质合成方法中，步骤d中，后处理具体操作步骤为：反应液减压浓缩，经溶剂分层、萃取、干燥、浓缩，经柱层析洗脱得化合物IV；洗脱剂为二氯甲烷与甲醇，体积比为5:1-30:1；优选体积比为15:1。

在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质合成方法中，步骤f中，化合物IV的盐酸盐具体合成方法是：室温下，化合物IV、盐酸乙醇、无水乙醇混合物搅拌10小时，减压浓缩得化合物IV的盐酸盐粗品，其中，盐酸乙醇与乙醇的体积比为1:5-1:20；优选体积比为1:8。

在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质合成方法中，步骤f中，化合物IV的盐酸盐粗品、三光气的摩尔比为1:1-1:5；优选摩尔比为1:2。

在本发明的部分实施方案中，所述盐酸克林霉素杂质合成方法中，步骤f中，后处理具体操作步骤是：将反应液降温于20℃以下，加入氢氧化钠溶液调节pH>11.0，室温搅拌2小时；然后将体系再次降温于10℃以下，加入浓盐酸调节pH<1.0，分层、萃取有机相，调节水相pH>11.0，再经萃取、干燥、浓缩、冷冻保存；最后粗品经柱层析洗脱、成盐、重结晶得化合物Ⅲ，洗脱剂为二氯甲烷与甲醇，体积比为10:1-40:1；优选体积比为20:1。

本发明提供了式Ⅱ所示的盐酸克林霉素杂质中间体或其盐：

R₁为任选取代的芳基或烷基；R₂为其中，R₃、R₄、R₅独立地选自烷基。

在本发明的部分实施方案中，R₁为任选取代的5～14元芳基或C1～C6烷基，R₃、R₄、R₅独立地选自C₁～C₆烷基。

优选地，R₁为任选取代的苯基或C₁～C₄烷基，R₃、R₄、R₅独立地选自C1～C4烷基。

更优选地，R₁为对硝基苯基，R₃、R₄、R₅均为甲基。

本发明还提供了式Ⅱ所示盐酸克林霉素杂质中间体在制备式Ⅲ所示7-差向盐酸克林霉素和/或式Ⅳ所示7-差向林可霉素中的用途。

在本发明说明书的内容中，以下缩写具有下列含义；对未定义的缩写，它们具有一般公认的含义：

DMF＝N,N-二甲基甲酰胺

TMSCl＝三甲基氯硅烷

(TMS)₂NH＝六甲基二硅氮烷

TEA＝三乙基胺

Py＝吡啶

DIPEA＝N,N-二异丙基乙胺

DIAD＝偶氮二甲酸二异丙酯

Ph₃P＝三苯基膦

MeOH＝甲醇

PhMe＝甲苯

AcOH＝乙酸

EtOH-HCl＝盐酸乙醇溶液

本发明所述胺为氨分子中一个或多个氢原子被烃基取代后的产物，包括脂肪胺和芳香胺。

本发明提供了盐酸克林霉素杂质—7-差向盐酸克林霉素的制备方法，主要具有以下有益效果：

1、本发明以林可霉素为原料，经过上硅保护基、选择性脱保护、Mitsunobu取代反应、水解反应和氯代反应，能够以23％的总收率制备得到7-差向盐酸克林霉素。合成高纯度的7-差向盐酸克林霉素可作为盐酸克林霉素成品检测分析中的杂质标准品，从而提高对杂质定性和定量分析的准确性，有利于加强对该杂质的控制，进而提高盐酸克林霉素成品的质量。

2、本发明提供的盐酸克林霉素杂质的合成路线，除能得到7-差向盐酸克林霉素外，还能得到另一杂质7-差向林可霉素，该路线能以较高的收率同时合成这两种杂质，这是现有技术方法无法相比的。

3、本发明采用了三光气/DMF生成的Vilsmeier试剂为氯化试剂，三光气为固态物，在生产、运输和储存等过程中性质稳定；在步骤f的反应中，三光气的反应活性远大于三氯氧磷等氯化试剂，能够使反应进行得更彻底；反应产生的废水比使用三氯氧磷等氯化试剂减少了一半，减轻了三废处理成本，更适合工业化生产。

4、本发明通过采用式II中间体来制备7-差向盐酸克林霉素以及7-差向林可霉素，不仅可以降低生产成本，也提供了高效制备盐酸克林霉素杂质对照品的方法，解决了现有技术制备7-差向盐酸克林霉素收率低、副产物及杂质含量高的问题。

具体实施方式

本发明具体实施方式中使用的原料、设备均为已知产品，通过购买市售产品获得。

以下通过实施例进一步对本发明技术方案进行说明。

在本发明的优选实施方式中，7-差向盐酸克林霉素及7-差向林可霉素的合成路线如下：

实施例1化合物2-A

室温条件下，将50.07g盐酸林可霉素(化合物1)和500ml吡啶加入三口瓶中，搅拌至均匀的半透明溶液；再将三口瓶置于冰水浴中降温，内温控制在2-10℃之间，滴加75.0ml六甲基二硅氮烷，待溶液变白色浑浊，再滴加86.0ml三甲基氯硅烷，使用冰水浴控制內温不超过10℃，加料完毕后撤去冰水浴，体系缓慢升温至室温反应8小时；

反应过程中，采用TLC板检测(二氯甲烷与甲醇的体积比为10:1)，直至没有反应原料，将反应液倒入1500ml二氯甲烷中，搅拌澄清后，用500ml水洗有机相3次，使用75.05g无水硫酸钠干燥有机相，过滤旋干，得到黄色油状物75.91g，采用柱层析(正己烷与乙酸乙酯的体积比为12:1)分离，得到标题化合物2-A(69.31g，收率：89％)。

MS(m/z):695.3[M+1]⁺

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.82(d,J＝8.9Hz,1H),5.17(d,J＝5.6Hz,1H),4.43(d,J＝2.4Hz,1H),4.19(dd,J＝9.4,5.6Hz,1H),4.16-4.07(m,2H),3.96(d,J＝9.3Hz,1H),3.70(dd,J＝9.4,3.3Hz,1H),3.60(s,1H),3.15(q,J＝4.0Hz,1H),2.96(dd,J＝10.7,4.5Hz,1H),2.36(s,3H),2.08(s,2H),2.06-2.03(m,1H),1.97-1.89(m,2H),1.58(d,J＝4.1Hz,3H),1.31-1.20(m,5H),0.89(t,J＝6.9Hz,3H),0.14(s,9H),0.13(s,9H),0.10(s,9H),0.07(s,9H)。

实施例2化合物3

室温条件下，将69.31g化合物2-A和1400ml甲醇混合，搅拌溶解，然后缓慢加入70ml的80％乙酸溶液，内温控制不超过30℃，搅拌反应18小时，经TLC板检测，确认反应完全后，在30℃下旋干反应液，再加入600ml二氯甲烷，用100ml pH为8.0的碳酸氢钠水溶液水洗有机相3次，最后经干燥、过滤、浓缩，即得到标题化合物3(55.52g，收率：90％)。

MS(m/z):623.3[M+1]⁺

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.44(d,J＝9.8Hz,1H),5.22(d,J＝5.6Hz,1H),4.34(td,J＝9.7,5.0Hz,1H),4.17(dd,J＝9.5,5.6Hz,1H),4.14–4.08(m,1H),4.02(d,J＝9.5Hz,1H),3.81(d,J＝2.1Hz,1H),3.60(dd,J＝9.5,2.4Hz,1H),3.23–3.13(m,1H),3.09(s,1H),3.01(dd,J＝10.9,3.8Hz,1H),2.40(s,3H),2.10(s,3H),2.08–1.94(m,3H),1.90–1.80(m,1H),1.38-1.25(m,4H),1.22-1.12(m,3H),0.95-0.82(m,3H),0.19(s,9H),0.17–0.13(m,18H)。

实施例3-1化合物4

室温条件下，将50g化合物3溶解于1500ml甲苯中，分别加入48.45g三苯基膦、26.80g对硝基苯甲酸、27ml三乙胺，搅拌均匀，再缓慢加入32.18g DIAD，将反应液温度控制在30℃以内，搅拌20小时后，经TLC板检测，确认反应完成后，向反应液中加入400ml的pH为8.0的碳酸氢钠水溶液，搅拌0.5小时后静置分层，取有机相；用纯化水洗涤有机相，经干燥，得到黄色粘稠固体，然后直接加入400ml混合溶剂(正己烷与乙酸乙酯的体积比为7:1)中，室温下搅拌2小时，过滤除去滤饼，滤液浓缩后，得标题化合物4(45g，收率72％)。

MS(m/z):772.3[M+1]⁺

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ8.32(d,J＝8.8Hz,2H),8.17(d,J＝8.8Hz,2H),7.68(d,J＝10.7Hz,1H),5.56(q,J＝6.2Hz,1H),5.15(d,J＝5.5Hz,1H),4.53(t,J＝10.2Hz,1H),4.14(dd,J＝9.5,5.5Hz,1H),3.93(d,J＝9.9Hz,1H),3.78(d,J＝2.0Hz,1H),3.54(dd,J＝9.5,2.3Hz,1H),3.26(dd,J＝7.2,4.8Hz,1H),3.05(dd,J＝10.8,3.9Hz,1H),2.42(s,3H),2.20–1.98(m,3H),1.92(d,J＝10.1Hz,1H),1.72(s,3H),1.35–1.32(m,3H),1.31–1.24(m,3H),1.15(d,J＝6.2Hz,1H),0.91(t,J＝6.8Hz,3H),0.20(s,9H),0.12(s,9H),0.10(s,9H)。

实施例3-2化合物4

室温条件下，将0.551g化合物3溶解于30ml二氯甲烷中，分别加入0.475g三苯基膦、0.320g对硝基苯甲酸、0.3ml二异丙基乙基胺，搅拌均匀后；加入0.4ml的DIAD，内温控制在30℃以内，搅拌20小时后，采用实施例3-1的分离方法，得到标题化合物4(收率67％)。

质谱和氢谱数据与实施例3-1基本相同。

实施例3-3化合物4

室温条件下，0.506g化合物3溶解于30ml四氢呋喃中，再分别加入0.433g三苯基膦、0.271g对硝基苯甲酸、0.2ml吡啶后，搅拌均匀后，加入0.3ml的DIAD，内温控制在30℃以内，搅拌20小时后，采用实施例3-1的分离方法，得到标题化合物4(收率60％)。

质谱和氢谱数据与实施例3-1基本相同。

实施例4 7-差向林可霉素(式IV化合物)

室温条件下，将20g化合物4溶解于500ml甲醇中，加入18.43g碳酸钾，内温控制在30℃以内，搅拌20小时后，经TLC板检测，确认原料反应完全后，旋干反应液，得到黄色粘稠固体后，直接加入200ml超纯水和300ml乙酸乙酯，搅拌10分钟，静置分层后，采用2N KOH溶液将水相的pH调至10，再用300ml乙酸乙酯萃取2次后，合并有机相，旋干得到粗品，经柱层析(二氯甲烷与甲醇的体积比为15:1)洗脱，得到标题化合物IV(9.10g，收率86％，HPLC纯度98.4％)。

MS(m/z):407.2[M+1]⁺

¹H NMR(400MHz,CDCl₃)δ7.99(d,J＝8.9Hz,1H),5.35(d,J＝5.5Hz,1H),5.19(s,1H),4.40(q,J＝6.3Hz,1H),4.13(dd,J＝10.0,5.4Hz,1H),4.04(d,J＝10.2Hz,1H),3.84(t,J＝9.5Hz,1H),3.71–3.58(m,2H),3.18(dd,J＝7.1,4.5Hz,1H),3.02(dd,J＝10.4,4.9Hz,1H),2.94–2.56(m,2H),2.38(s,3H),2.14(s,3H),2.10–1.98(m,3H),1.97–1.81(m,2H),1.37–1.23(m,4H),1.19(d,J＝6.4Hz,3H),0.88(t,J＝6.6Hz,3H)。

实施例5 7-差向盐酸克林霉素(式Ⅲ化合物)

室温条件下，将7.81g化合物IV溶于100ml无水乙醇，加入8M盐酸乙醇溶液12ml，搅拌10小时后，旋干得到8.50g化合物IV的盐酸盐；在三口瓶中加入10.0ml氯仿和7.0ml的DMF，搅拌均匀后，冰水浴降温；将10.13g三光气加入到25.0ml氯仿中充分溶解后，缓慢滴加到三口瓶中，内温控制不超过5℃，反应0.5小时后，分批次加入化合物IV的盐酸盐7.40g，保温反应1.5小时；待反应液为黄色澄清溶液后，将反应体系移至室温环境下，反应0.5小时，然后升温至40℃，反应0.5小时，再升温至60℃，反应20小时，再将反应移至冰水浴降温后，控制内温不超过20℃，滴加浓度为50％的氢氧化钠水溶液调节pH>11.0，室温搅拌2小时后，再移至冰水浴降温，加3N浓盐酸调节pH<1.0后，升至室温，静置分层，分去水层，再用50ml的pH＝1.0稀盐酸萃取有机相后，合并水相；将水相调节pH>11.0，用50ml的二氯甲烷萃取水相后，合并有机相，洗涤、干燥、过滤、浓缩后，再经柱层析(二氯甲烷与甲醇的体积比为20:1)洗脱，得到5.02g黄色固体，加入15ml乙醇溶解，8M盐酸乙醇溶液9.5ml，室温下搅拌2小时，经40℃浓缩，得到5.40g黄色固体后，室温条件下溶解、搅拌、静置、过滤得到标题化合物Ⅲ(3.54g，收率47％，HPLC纯度98.7％)。

MS(m/z):425.1[M+1]⁺

¹H NMR(400MHz,DMSO)δ9.78(s,1H),9.08(d,J＝9.6Hz,1H),7.55(s,1H),7.43(s,1H),7.30(s,1H),5.17(d,J＝5.5Hz,1H),4.64(td,J＝9.9,2.4Hz,1H),4.41(dd,J＝6.7,2.6Hz,1H),4.26(s,1H),4.12–3.84(m,2H),3.75(s,1H),3.68–3.56(m,1H),3.40(s,1H),3.30(dd,J＝10.1,2.8Hz,1H),2.84(s,3H),2.29–2.15(m,2H),2.11–1.98(m,4H),1.49–1.35(m,5H),1.27(tt,J＝12.9,6.5Hz,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。

¹³C NMR(101MHz,DMSO)δ167.61,89.27,70.93,69.95,68.09,67.89,67.63,60.65,59.23,53.30,36.04,35.59,34.84,20.93,19.29,14.31,13.66。

化合物ⅢDEPT135图谱，含有4个仲碳，分别为20.46ppm、34.37ppm、35.12ppm和60.18ppm；含有9个叔碳，分别为35.57ppm、52.83ppm、58.76ppm、67.16ppm、67.42ppm、67.62ppm、69.48ppm、70.46ppm和88.80ppm；含有1个季碳，为167.14ppm。

化合物Ⅲ红外图谱，详情见下表：

化合物Ⅲ高分辨质谱，m/z 425.1859[M+H]⁺，m/z 447.1678[M+Na]⁺。

对比例1不添加胺和/或含氮芳香杂环化合物制备化合物4

室温条件下，0.805g化合物3溶解于30ml甲苯中，分别加入0.690g三苯基膦、0.437g对硝基苯甲酸，搅拌均匀后，加入0.51ml的DIAD，内温控制在30℃以内，搅拌20小时后，用TLC板检测发现原料消失，反应很杂乱，无化合物4生成。

由对比例1可知，不加入胺和/或含氮芳香杂环化合物，无法制备得到目标产物；本发明实施例3-1、3-2和3-3分别添加了胺或含氮芳香杂环化合物(例如TEA、DIPEA、吡啶)均可以制备得到化合物4，并且具有较高的收率。

以上已经描述了本发明的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。