阅读说明：本技术 金雀花提取物的应用 (Application of gorse extract ) 是由 宋肖洁 姜丹 姚期凤 王越 蒋耀权 吴越 章漳 于 2018-06-29 设计创作，主要内容包括：本发明属于植物提取及日化领域,具体涉及金雀花提取物的应用,所述金雀花提取物作为皮肤外用剂中的抗衰老活性成分,具体为皮肤修复活性成分、和/或皮肤结构稳固活性成分、和/或皮肤弹性活性成分,具有提高细胞修复/增殖、稳固基底膜结构和功能、促进细胞外基质分泌、保持皮肤弹性的效果。本发明金雀花提取物活性高,在含量极低的情况下即产生显著效果,天然、安全且有效,不刺激皮肤。(The invention belongs to the field of plant extraction and daily chemicals, and particularly relates to an application of a gorse extract, wherein the gorse extract is used as an anti-aging active ingredient in a skin external preparation, particularly a skin repair active ingredient, and/or a skin structure stabilizing active ingredient, and/or a skin elasticity active ingredient, and has the effects of improving cell repair/proliferation, stabilizing a basement membrane structure and function, promoting extracellular matrix secretion, and keeping skin elasticity. The broom extract has high activity, can generate obvious effect under the condition of extremely low content, is natural, safe and effective, and does not irritate the skin.)

金雀花提取物的应用

技术领域

本发明属于植物提取及日化领域，具体涉及金雀花提取物的应用。

背景技术

皮肤覆盖于整个人体表面，与外界环境直接接触，除了保护机体免受外界各种因素的伤害外，又是反应机体健康状态的一面镜子。皮肤由表皮、真皮、皮下组织构成，并含有皮肤附属器、丰富的神经、血管、***及肌肉。真皮和表皮的连接区域称为基底膜带，基底膜是上皮细胞的支撑垫，在上皮细胞组织与***之间，具有支持和连接作用，亦是物质通透的半透膜，便于物质交换。基底膜不仅作为一层结构模型，支撑表皮细胞，还作为细胞的选择性通过屏障，阻止***细胞与基底膜上的上皮细胞接触，但允许淋巴细胞、巨噬细胞和神经元突触穿越通过；细胞形态、细胞极性、细胞代谢、质膜上蛋白质分布、细胞存活、细胞增殖分化、细胞迁移等许多生命现象，均与基底膜有着非常密切的关系。

真皮由细胞和细胞外基质共同构成，成纤维细胞是真皮的主要细胞，其正常的增殖、分化维系着皮肤真皮结构，组成正常的结构和生理功能；细胞外基质是由细胞合成并分泌，围绕细胞相互作用的一类大分子物质，细胞的增殖分化、细胞迁移等许多生命现象，均与细胞外基质有着非常密切的关系。细胞外基质主要由四大类分子组成：胶原、弹性蛋白、糖蛋白及蛋白多糖。细胞外基质通过其分子间不同的精细巧妙缠结交织，构成各种各样的精美三维立体结构，赋予肌肤弹性、抗张强度，使肌肤看起来饱满、充满活力。

长寿基因是能够长时间保持活跃的基因，能大大提高生物体的健康，延长生物体寿命。当人遭遇严寒、酷热或者水和食物匮乏的环境时，这些基因会调动人体内的自我防御系统，让细胞修复能力变得强大。

SIRT1(sirtuin 1)：著名的长寿基因之一。SIRT1是一类高度保守的蛋白去乙酰化酶，参与调节由能量限制引发的长寿作用，被称为“长寿基因”，SIRT1生理作用复杂，参与调节糖脂代谢、炎症、氧化应激、细胞衰老与凋亡等。

HBEGF(heparin binding EGF like growth factor)基因编码合成的肝素结合性表皮生长因子，是结合并激活EGF受体的EGF家族成员。hbegf在病理、生理过程中起关键作用，包括癌症。在人体皮肤部分厚度损伤后，产生表皮生长因子，促进细胞(包括角质细胞、真皮细胞和基底膜细胞)增殖和归巢，促进皮肤伤口愈合。此基因表达上调有助于促进皮肤的修复，延缓皮肤衰老。

col4α1(collagen type IV alpha 1 chain)基因编码合成IV型胶原蛋白α1链，IV型胶原蛋白是构成基底膜的主要成分，此基因表达上调能够促进基底膜(也称真皮表皮连接，DEJ)的完整性，延缓皮肤衰老。

IGF1(insulin like growth factor 1)基因编码合成***1，该蛋白质在功能和结构上与胰岛素相似，是参与调节生长和发育的蛋白质家族成员。***1促进角质细胞迁移，促进创面再上皮化。

ELN(elastin)基因编码合成的弹力蛋白，是弹性纤维(elastic fibers)的主要成分，其富含疏水性氨基酸，例如甘氨酸和脯氨酸，弹性蛋白分子间通过赖氨酸残基间的共价键相互交联，形成的交联网络可通过构型的变化产生弹性。在皮肤中弹性蛋白是重要的细胞外基质，与真皮衰老密切相关，而真皮衰老是导致皮肤衰老尤为重要的一环。弹性蛋白在肌肤中扮演橡皮筋的角色，让肌肤有伸展和褶合的能力，其功用就如床垫中的弹簧，负责维持与支撑肌肤的弹性。因此，弹性蛋白在维持肌肤弹性方面担当着重要的角色。

因此，研究如何提高皮肤关键部位及功能相关的基因表达，对于提高皮肤修复能力，保持结构稳定性，延缓皮肤衰老具有重要意义。

金雀花(拉丁文名：Parochetus communis)又名：紫雀花，为豆科、紫雀花属匍匐草本，高10-20厘米，被稀疏柔毛。根茎丝状，节上生根，有根瘤。瓣端稍尖，旁分两瓣，势如飞雀，色金黄，故名"金雀花"。生于林缘草地、山坡、路旁荒地，海拔2000-3000米。产四川、云南、西藏。印度、尼泊尔、不丹、斯里兰卡、缅甸、泰国、马来西亚和非洲东部也有分布。

喜光，常生于山坡向阳处。根系发达，具根瘤，抗旱耐瘠，能在山石缝隙处生长。忌湿涝。萌芽力、萌孽力均强，能自然播种繁殖。在深厚肥沃湿润的砂质壤土中生长更佳。

金雀花性微温、味甜，入肝、脾二经；具有滋阴，和血，健脾的功效；主治劳热咳嗽，头晕腰酸，妇女气虚白带，小儿疳积，乳痈，跌扑损伤。根：滋补强壮，活血调经，祛风利湿。用于高血压病，头昏头晕，耳鸣眼花，体弱乏力，***，白带，乳汁不足，风湿关节痛，跌打损伤。花：祛风活血，止咳化痰。用于头晕耳鸣，肺虚咳嗽，小儿消化不良。

金雀花含有蛋白质、脂肪、碳水化合物、多种维生素、多种矿物质等成分金雀花。野菜金雀花性味微温甜，具有滋阴、和血、健脾的功效。治劳热咳嗽、头晕腰酸、妇女气喘白带、小儿疳积、乳痈、跌打损伤等。《植物各实图考》载“滋阴，补阳”。《上海常用中草药》载“活血祛风，止咳，强壮。治头晕头痛、耳鸣眼花、肺虚久咳、小儿疳积”。性味归经酸、涩，温。

本发明首次证实金雀花提取物可提高细胞修复相关基因、基底膜稳固相关基因和抗衰老相关基因的表达力，提高细胞修复活性，稳固基底膜结构和功能，促进细胞外基质分泌，延缓皮肤衰老，适用于制备皮肤外用剂。

发明内容

本发明旨在提供一种金雀花提取物的应用。

金雀花提取物可提高皮肤修复活性，稳固皮肤结构，促进细胞外基质分泌，保持皮肤弹性，延缓皮肤衰老，适用于制备皮肤外用剂。

金雀花提取物通过提高细胞修复/增殖相关基因的表达增强细胞修复活性进而提高皮肤修复活性，延缓皮肤衰老；金雀花提取物通过提高基底膜稳固相关基因的表达增强基底膜结构和功能进而稳固皮肤结构，延缓皮肤衰老；金雀花通过提高抗衰老相关基因的表达增强细胞修复和/或增殖活性、和/或基底膜结构和功能、和/或细胞外基质分泌、和/或维持皮肤弹性，延缓皮肤衰老。

本发明金雀花提取物可用于制备皮肤外用剂，作为皮肤外用剂中抗衰老活性成分，尤其是作为皮肤修复活性成分、和/或皮肤结构稳固活性成分、和/或维持皮肤弹性活性成分实现抗衰老效果。

所述金雀花提取物作为促进细胞修复和/或增殖活性成分，通过促进细胞尤其是真皮细胞或表皮细胞的增殖和修复，增强皮肤修复活性，实现皮肤修复功能，延缓皮肤衰老。

所述金雀花提取物作为基底膜结构和功能稳固活性成分，稳固皮肤结构，延缓皮肤衰老。

所述金雀花提取物作为细胞外基质分泌活性成分维持或增强皮肤弹性，延缓皮肤衰老。

所述金雀花提取物作为提高细胞修复和/或增殖相关基因表达的活性成分，和/或提高基底膜相关基因表达的活性成分，和/或提高皮肤弹性相关基因表达的活性成分。优选的，所述的细胞修复和/或增殖相关基因为SIRT1基因、HBEGF基因或IGF1基因，所述基底膜相关基因为col4α1基因，所述皮肤弹性相关基因为ELN基因。

所述金雀花提取物通过提高SIRT1基因的表达以促进合成组蛋白去乙酰化酶、通过提高HBEGF基因的表达以促进合成肝素结合性表皮生长因子、通过提高IGF1基因的表达以促进合成或***1，从而增强细胞修复和/或增殖活性。

所述金雀花提取物提高col4α1基因表达促进IV型胶原蛋白α1链合成，增强基底膜结构和功能。

所述金雀花提取物通过提高ELN基因表达促进弹性蛋白合成，从而促进细胞外基质分泌、保持皮肤弹性。

所述金雀花提取物指以任何合理的方式提取得到的含有效成分的提取物。

所述金雀花提取物的制备方法为：以金雀花为原料，溶剂提取后，取滤液。提取溶剂包括水、醇类或者醇水液，优选为60％～85％(体积比)乙醇，进一步优选为70％乙醇。

提取1～3次，优选为2次；每次提取时间为20～80分钟，优选为30分钟。

提取方法为超声法、浸提法、超临界法、渗漉法、回流法或者蒸馏法等提取方法，其中，超声法、浸提法、渗漉法在室温下进行。提取方法优选为超声提取。

每次提取时，金雀花与溶剂的用量比为1kg/5～20L，优选的用量比为1kg/10L。

滤液可进一步浓缩或者浓缩干燥。

浓缩的方式为减压浓缩。

浓缩干燥的方式为真空干燥或者冷冻干燥。

金雀花提取前进行粉碎处理，粉碎为粒径20～300目的颗粒，更优选为50～200目。优选的，金雀花干燥至含水量低于10wt％。

所述金雀花指金雀花的花、全草、根及根茎或者其混合物，优选为金雀花的花。

本发明的一个优选实施方式中，金雀花提取物的制备方法为，将粉碎的金雀花和70％乙醇(体积浓度)按1kg/10L混合后，室温超声提取2次，每次30分钟；合并滤液后去除溶剂并干燥。

金雀花提取物可用于制备皮肤外用剂，所述金雀花提取物在皮肤外用剂中用作抗衰老活性成分，尤其是修复皮肤的活性成分、稳固皮肤结构的活性成分或维持皮肤弹性的活性成分。

所述金雀花提取物可用于制备增强SIRT1基因的表达、促进合成组蛋白去乙酰化酶的皮肤外用剂，制备增强HBEGF基因的表达、促进合成肝素结合性表皮生长因子的皮肤外用剂，制备增强IGF1基因的表达、促进合成或***1的皮肤外用剂，可增强细胞修复和/或增殖活性。

所述金雀花提取物可用于制备增强col4α1基因表达、促进IV型胶原蛋白α1链合成的皮肤外用剂，可增强基底膜结构和功能。

所述金雀花提取物可用于制备增强ELN基因表达、促进弹性蛋白合成皮肤外用剂，可促进细胞外基质分泌、保持皮肤弹性。

金雀花提取物通过提高细胞修复相关基因的表达，促进皮肤修复，延缓皮肤衰老。

金雀花提取物通过增强基底膜相关基因(如col4α1基因)的表达，一方面稳固基底膜结构、增强真表皮连接，从而稳固皮肤结构实现抗衰老；另一方面促进细胞外基质的生成和分泌，增强和维持皮肤弹性，从而延缓皮肤衰老。

一种皮肤外用剂，具有皮肤抗衰老活性，尤其是具有修复皮肤的活性、和/或稳固皮肤功能活性、和/或皮肤弹性活性，含有金雀花提取物。其中，金雀花提取物的含量为0.0001wt％～10wt％，优选为0.0005wt％～10wt％；更优选为0.001wt％～5wt％。

更进一步，用于提高SIRT1基因、HBEGF基因或col4α1基因的表达时，金雀花提取物的含量为0.0005wt％～10wt％，优选为0.001wt％～5wt％；用于提高IGF1基因或ELN基因表达时，金雀花提取物的含量为0.005wt％～10wt％，优选为0.01wt％～5wt％。

皮肤外用剂指以涂抹、喷洒或者其它类似方法，散布于人体表面的任何部位，以达到清洁、保养、美容、修饰和改变外观，或者修正人体气味，保持良好状态的产品。皮肤外用剂可以是起到清洁、护理、美化或保养等作用的基础化妆品、面部化妆品、头部护理品、身体护理品。

皮肤外用剂的剂型无特殊限制，可根据使用情况而定，如洁面霜、精华液、乳液、霜膏、化妆水(如柔肤水、爽肤水)、面膜、卸妆水、啫喱、气雾或者喷雾等。

含有金雀花提取物的皮肤外用剂还可以含有其它活性成分，包括补水活性成分、美白活性成分、保湿活性成分、抗氧化活性成分、抗皱活性成分、祛斑活性成分、消痘活性成分、防晒活性成分、祛粉刺/痤疮活性成分、祛头屑活性成分、抗过敏活性成分或者皮脂腺抑制活性成分中的一种或者多种。

皮肤外用剂中还含有增稠剂、增溶剂、助溶剂、防腐剂、表面活性剂、稳定剂、柔顺剂、气雾剂溶剂、芳香剂、调色剂、促渗剂、控释剂、缓释剂、保湿剂、乳化剂、塑形剂或者珠光剂中的一种或者多种。

相对于现有技术，本发明具有以下优点：

(1)本发明金雀花提取物能够提高细胞修复和增殖相关基因、基底膜稳固相关基因和皮肤弹性相关基因的表达，具有提高细胞修复/增殖活性、稳固基底膜结构和功能、促进细胞外基质分泌、保持皮肤弹性等效果，可以修复皮肤功能、稳固皮肤结构、增强和维持皮肤弹性，从而延缓皮肤衰老。金雀花提取物具有抗衰老的效果，在皮肤外用剂应用前景广阔，尤其是在化妆品方面的应用。

(2)本发明金雀花提取物的制备工艺简单，工艺条件易于控制，制备成本低。

(3)本发明金雀花提取物活性高，在含量极低的情况下即产生显著效果，天然、安全且有效，不刺激皮肤。

附图说明

图1是空白对照(NT)和金雀花提取物促进SIRT1基因表达结果。

图2是空白对照(NT)和金雀花提取物促进HBEGF基因表达结果。

图3是空白对照(NT)和金雀花提取物促进col4α1基因表达结果。

图4是空白对照(NT)和金雀花提取物促进IGF1基因表达结果。

图5为空白对照(NT)和金雀花提取物促进ELN基因表达结果。

具体实施方式

实施例1金雀花提取物的制备

取粉碎至50～200目、干燥至含水量低于5％的金雀花(花朵)10g置于70％乙醇中，500W超声提取2次，每次加入100mL 70％乙醇并提取30min。

合并两次提取滤液，滤液旋转蒸发至干，得到金雀花提取物约0.8g。

实施例2金雀花提取物功效验证

1.皮肤模型的制备

从皮肤组织中分别提取人原代成纤维细胞(NHDF)及人原代角质细胞(NHEK)。将人原代成纤维细胞复苏，培养消化后与胶原混合进行真皮阶段培养3～4天，然后将使用饲养层培养的人原代角质细胞消化接种到真皮阶段的皮肤模型表面，依次经过表皮浸没培养及气液相培养阶段，培养至18天得到可用于检测的3D皮肤模型。

在人原代角质细胞接种到真皮阶段的皮肤模型表面培养至形成3D皮肤模型的第3天至第18天的过程中，根据所使用培养基的不同进行分组，形成空白对照(NT)组、金雀花提取物(10μg/mL，约0.001wt％)组和金雀花提取物(100μg/mL，约0.01wt％)组。

其中，金雀花提取物(10μg/mL)，指所得金雀花提取物在单位体积(mL)培养基中的量为10μg，以金雀花提取物干重计，约0.001wt％。

金雀花提取物(100μg/mL)，指所得金雀花提取物在单位体积(mL)培养基中的量为100μg，以金雀花提取物干重计，约0.01wt％。

2.RNA的提取

剪取3D皮肤模型组织约2*3mm，放入2mL EP管中；加入1mL Trizol，加入2颗钢珠，用组织破碎仪匀浆，50Hz超声5min后；9000rpm、4℃条件下离心1min，将上清液转移到新的1.5mL EP管中；加入200μL氯仿，轻轻颠倒数次混匀，室温放置5分钟；9000rpm、4℃条件下离心15min；转上层水相(约400μL)于新1.5mL EP管中，加入等体积的异丙醇，混匀，室温静置10min；9000rpm、4℃条件下离心10min；弃上清，沉淀用预冷的70％无水乙醇洗1次，8000rpm、4℃条件下离心5min；弃上清，沉淀于空气干燥5-10分钟，溶于30μL DEPC(焦炭酸二乙酯)水中；分光光度计测定RNA浓度。

3.基因表达分析

根据QuantiGene R 2.0Plex Assay试剂盒进行RNA的纯化和基因定量分析，使用luminex平台对基因表达进行分析。

由基因表达测试结果可知，相对于空白对照组(NT)，添加本发明金雀花提取物后，SIRT1、HB-EGF、col4α1、IGF1和ELN基因的表达显著升高。SIRT1基因编码合成的组蛋白去乙酰化酶可提高细胞修复活性，增强细胞抵御能力，延缓皮肤衰老；HB-EGF基因编码合成的肝素结合性表皮生长因子可诱导细胞增殖，促进创伤修复，延缓皮肤衰老；col4α1基因编码合成的IV型胶原蛋白α1链可稳固基底膜结构和功能，延缓皮肤衰老；IGF1基因编码合成的***1促进细胞的增殖和生长，保持细胞活性，延缓皮肤衰老；ELN基因编码合成的弹力蛋白促进细胞外基质生成，维持皮肤弹性，延缓皮肤衰老。由此，本发明金雀花提取物可提高皮肤修复活性、稳固皮肤结构、促进细胞外基质分泌和延缓皮肤衰老。

(1)提高细胞修复/增殖相关基因(SIRT1基因、HB-EGF基因和IGF1基因)的表达

由图1可知，相较于空白对照组(NT)，添加金雀花提取物(10μg/mL)后，与组蛋白去乙酰化酶合成相关的SIRT1基因的表达上调66％。该基因编码合成的组蛋白去乙酰化酶，能与多种蛋白相互作用，在抵抗外界不良环境的应激过程中，增强细胞活性，提高细胞自我修复活性，尤其是创伤修复活性，改善细胞存活力。本发明金雀花提取物增强SIRT1基因表达，增强皮肤抵御抵抗能力和活性，提高皮肤修复活性，延缓皮肤衰老。

由图2可知，相较于空白对照组(NT)，添加金雀花提取物(10μg/mL)后，与肝素结合性表皮生长因子合成相关的HB-EGF基因的表达上调187％。该基因编码合成的肝素结合性表皮生长因子与表皮生长因子受体结合后，诱导细胞增殖，促进创伤修复愈合。本发明金雀花提取物增强HB-EGF基因表达，增强皮肤修复活性，延缓皮肤衰老。

由图4可知，相较于空白对照组(NT)，添加金雀花提取物(100μg/mL)后，与***1合成相关的IGF1基因的表达上调53％。该基因编码合成的***1促进细胞的增殖和生长，保持细胞活性，延缓皮肤衰老。本发明金雀花提取物增强IGF1基因表达，有助于延缓皮肤衰老。

(2)提高基底膜相关基因(col4α1基因)的表达

由图3可知，相较于空白对照组(NT)，添加金雀花提取物(10μg/mL)后，与IV型胶原蛋白α1链合成相关的col4α1基因的表达上调44％。该基因编码合成的IV型胶原蛋白α1链是基底膜的主要结构成分，保证基底膜结构的稳固性，维持基底膜功能的完整性。本发明金雀花提取物增强col4α1基因表达，稳固基底膜结构和功能，延缓皮肤衰老。

(3)提高维持皮肤弹性相关基因(ELN基因)的表达

由图5可知，相较于空白对照组(NT)，添加金雀花提取物(100μg/mL)后，与弹性蛋白合成相关的ELN基因的表达上调62％。该基因编码合成的弹力蛋白是细胞外基质的重要组成成分，促进细胞外基质生成，维持皮肤弹性。本发明金雀花提取物提高ELN基因表达，有助于增强和维持皮肤弹性，延缓皮肤衰老。