阅读说明：本技术 一种复合纳米纤维在线微固相萃取柱及其制备方法 (Composite nanofiber online micro solid-phase extraction column and preparation method thereof ) 是由 徐晖 陈丹 田馨梦 胡嘉嘉 陈延妍 于 2019-09-29 设计创作，主要内容包括：本发明属于固相萃取领域,具体涉及一种PS/SiO<Sub>2</Sub>@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱及其制备方法。所述在线微固相萃取柱包括预柱柱套、填充有吸附剂材料的预柱柱芯和手动六通阀,所述吸附剂材料为PS/SiO<Sub>2</Sub>@PDA复合纳米纤维,所述PS/SiO<Sub>2</Sub>@PDA复合纳米纤维是通过制备PS/SiO<Sub>2</Sub>静电纺丝材料,并将PS/SiO<Sub>2</Sub>静电纺丝材料置于多巴胺盐溶液中使多巴胺在PS/SiO<Sub>2</Sub>静电纺丝材料表面自聚合形成PS/SiO<Sub>2</Sub>@PDA复合纳米纤维。本发明将PS/SiO<Sub>2</Sub>@PDA复合纳米纤维微固相萃取柱与在线萃取技术联用,自动化程度高,操作简便,误差来源少,灵敏度高,适用于复杂基质中的痕量分析物的样品前处理。(The invention belongs to the field of solid phase extraction, and particularly relates to PS/SiO 2 An on-line micro solid phase extraction column of @ PDA composite nanofiber and a preparation method thereof. The on-line micro solid phase extraction column comprises a pre-column sleeve, a pre-column core filled with adsorbent material and a manual six-way valve, wherein the adsorbent material is PS/SiO 2 @ PDA composite nanofiber, the PS/SiO 2 The @ PDA composite nano-fiber is prepared by preparing PS/SiO 2 Electrospinning the material and mixing the PS/SiO 2 Placing the electrostatic spinning material in dopamine salt solution to make dopamine in PS/SiO 2 Surface self-polymerization of electrostatic spinning material to form PS/SiO 2 @ PDA composite nanofiber. The invention uses PS/SiO 2 The @ PDA composite nanofiber micro solid-phase extraction column is combined with an online extraction technology, so that the automation degree is high, the operation is simple and convenient, the error source is few, the sensitivity is high, and the method is suitable for sample pretreatment of trace analytes in complex matrixes.)

一种复合纳米纤维在线微固相萃取柱及其制备方法

技术领域

本发明属于固相萃取领域，具体涉及一种PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱及其制备方法。

背景技术

固相萃取(Solid Phase Extraction，SPE)技术于20世纪70年代被提出，是目前最常用的样品前处理技术。SPE是以液相柱色谱分离为基础，固相吸附剂作为固定相，当液体样品溶液流经通过时，分析物被固相吸附剂保留，再选择合适的溶剂对分析物进行洗脱，从而达到净化、分离和富集的目的。该技术可与仪器实现在线联用，并且能在不同的复杂基体样品中绿色、高效、快速地处理特定的痕量物质。因此，SPE被广泛应用于临床、制药、食品和环境科学等不同领域。

微固相萃取(μ-SPE)技术于2006年开发，是将非常少量的吸附剂(通常低于500mg)封装在毛细管柱或微型小柱中，组装成μ-SPE装置。与传统的固相萃取相比，μ-SPE所需的吸附剂用量更少、富集效率高、溶剂消耗更低。μ-SPE技术与在线技术联用，发展了一系列快速、方便、经济的分析方法。

微固相萃取技术的核心为萃取柱中吸附剂的选择，吸附剂的制备和选取影响萃取选择性，萃取效果，使用寿命，检测的灵敏度、重现性和应用范围等。

目前商品化的固相吸附剂通常为氧化铝、活性炭、二氧化硅、C8和C18等材料。然而商品化的固相萃取柱存在以下问题：商品化的固相吸附剂种类有限，萃取选择性差，萃取效率偏低等缺点，而且多为一次性使用，价格昂贵。这些不足之处限制了微固相萃取技术的进一步发展与应用，因而急需开发制备新型吸附剂材料。

聚苯乙烯是静电纺丝常用的高聚物，易形成超细纤维疏水性聚合物，静电纺丝材料具有高度交联的三维网状结构，比表面积高。二氧化硅(SiO₂)是一种无机氧化物，具有结构稳定，孔径大，生物相容性等特性。多巴胺是受海洋贻贝生物黏附行为启发而研究的物质，在碱性有氧环境下易自聚合形成聚多巴胺，经聚多巴胺涂覆的材料在水溶液中具有良好的亲水性，良好的生物相容性和生物降解性。

发明内容

本发明针对现有技术的不足，目的在于提供一种PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱及其制备方法。

为实现上述发明目的，本发明所采用的技术方案为：

一种PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱，包括预柱柱套、填充有吸附剂材料的预柱柱芯和手动六通阀，所述吸附剂材料为PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维，所述PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维是通过制备PS/SiO₂静电纺丝材料，并将PS/SiO₂静电纺丝材料置于多巴胺盐溶液中使多巴胺在PS/SiO₂静电纺丝材料表面自聚合形成PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维。

上述方案中，所述PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维呈现出核壳型溜溜球状，具有三维网状结构，内层PS纳米纤维的平均直径为0.8微米，修饰PDA后复合纳米纤维呈现出核壳结构，外层PDA层的厚度为0.03～0.04微米，二氧化硅颗粒的粒径为5～8微米，被PS纳米纤维缠结成溜溜球状。

上述方案中，所述预柱柱芯的直径为4.6～5毫米，长度为10～12毫米，所述吸附剂材料的填充量为4～8毫克。

上述PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱的制备方法，包括如下步骤：

(1)PS/SiO₂纳米纤维的制备：将二氧化硅(SiO₂)颗粒添加到N，N-二甲基甲酰胺溶剂(DMF)中，超声分散后得到分散溶液；然后将聚苯乙烯加入到分散溶液中，搅拌混合均匀后得到静电纺丝溶液，将静电纺丝溶液加入到注射器中进行静电纺丝，所得PS/SiO₂纳米纤维膜置于烘箱干燥；

(2)PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维的制备：将步骤(1)所得PS/SiO₂纳米纤维膜完全浸没在多巴胺盐酸盐溶液中，室温下多巴胺在PS/SiO₂纳米纤维膜的表面进行自聚合，得到PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维，用超纯水清洗、真空干燥；

(3)预柱柱芯的预处理：将预柱柱芯依次用甲醇和超纯水超声清洗洁净，并干燥；

(4)在线微固相萃取柱的组装：将PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维填入经步骤(3)预处理后的预柱柱芯中，利用不锈钢筛板、柱顶部的Teflon密封件与预柱柱芯进行组装，然后装入到配套的预柱套中，组装得到微固相萃取柱；在液相色谱柱和自动进样器之间安装一个六通阀，以所述微固相萃取柱替换六通阀的定量环，构建完成在线微固相萃取柱。

上述方案中，步骤(1)中所述二氧化硅：聚苯乙烯的质量比为74：1～76：1；所述静电纺丝溶液中二氧化硅的浓度为1.5～2.5毫克/毫升，聚苯乙烯的浓度为1.4～1.6克/毫升

上述方案中，步骤(1)中所述静电纺丝的具体操作为：将静电纺丝溶液转移到塑料注射器中，并固定在恒流注射泵上，以滤纸包裹的铝箔作为静电纺丝收集器，施加直流电压18～20千伏，在不锈钢针尖连接正极，静电纺丝收集器连接负极，正极与负极之间的距离为15～20厘米，恒流注射泵的流速为0.8～1毫升/小时，静电纺丝持续时间为4～8小时。

上述方案中，步骤(2)所述多巴胺盐酸盐溶液是以Tris缓冲液与甲醇的混合溶剂配置而成、多巴胺浓度为2～3毫克/毫升的溶液。

上述方案中，所述Tris缓冲液的浓度为10mM、pH值为8.5，所述Tris缓冲液与甲醇的体积比为1：1～1：1.2。

本发明中，所述PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱的使用方法为：首先是萃取过程，在Loading位置，取一定体积的样品溶液以一定的流速进行萃取；萃取完成后，取一定体积的去离子水快速淋洗在线微固相萃取柱，去除残留的样品溶液；淋洗结束后，将六通阀的阀门快速转向Injection位置进行解吸过程，液相色谱中的流动相开始进行动态反向解吸，目标物解吸的流速为液相色谱的流动相流速，解吸时间与液相色谱方法的运行时间一致，解吸下来的目标物全部引入色谱柱进入后续的检测器进行分析检测。

本发明的有益效果：

(1)本发明提供了一种微固相萃取柱，该萃取柱用内层疏水，外层亲水的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维作为微固相萃取吸附剂，该吸附剂材料具有三维网状结构，孔隙率高，比表面积大，物理化学稳定性好，与单纯的PS/SiO₂静电纺丝材料比较，本发明所述吸附剂材料PS/SiO₂@PDA的富集效果更高，抗基质干扰能力更强，生物相容性好，且制备成本低，经济环保；

(2)本发明将PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维微固相萃取柱与在线萃取技术联用，自动化程度高，操作简便，减少检测的误差来源，增大仪器的灵敏度，适用于复杂基质中的痕量分析物的样品前处理；

(3)利用本发明所述在线微固相萃取柱进行分析检测，不仅检出限低、重现性好，且与已有的一次性使用的商业化固相萃取柱相比，成本低，使用寿命长。

附图说明

图1是PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维制备流程图。

图2是PS/SiO₂@PDA微固相萃取柱与液相-质谱在线联用的实验流程图。

图3是材料的形貌图：图3A,3B分别为PS，PS/SiO₂放大8000倍的扫描电镜图；图3C和内插图3C-1分别为PS/SiO₂@PDA纤维放大5000倍和15,000倍的扫描电镜图；图3D为PS/SiO₂@PDA放大20,000倍的透射电镜图；图3E，3F和3G分别为PS，PS/SiO₂和PS/SiO₂@PDA材料的接触角图。

图4是PS/SiO₂@PDA在线微固相萃取柱的使用寿命。

图5A是PS/SiO₂@PDA萃取柱与自制PS/SiO₂萃取柱的富集效果对比图；图5B是三种不同检测模式(自动进样，离线模式和在线模式)的富集效果对比图。

具体实施方式

为了更好地理解本发明，下面结合实施例进一步阐明本发明的内容，但本发明的内容不仅仅局限于下面的实施例。

实施例1 PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱装置的制备

本发明通过静电纺丝技术制备PS/SiO₂纺丝材料，再通过多巴胺的自聚合作用制备所述PS/SiO₂@PDA在线微固相萃取柱，制备流程如图1和图2，具体包括以下步骤：

(1)PS/SiO₂纳米纤维的制备：将20毫克的二氧化硅(SiO₂)颗粒添加到10毫升N，N-二甲基甲酰胺溶剂(DMF)中，超声分散1小时，得到分散溶液；然后，将1.5克聚苯乙烯(PS)加入到分散的溶液中，室温下搅拌混合溶液48小时，得到均匀的静电纺丝溶液；接着，将上述粘性的静电纺丝溶液转移到50毫升塑料注射器中，并固定在恒流注射泵上，注射器的喷头为内径0.41毫米的不锈钢针，以滤纸包裹的铝箔作为静电纺丝收集器，施加18千伏的直流电压，不锈钢针尖连接正极，静电纺丝收集器连接负极，进行静电纺丝；其中，针尖与收集器之间的距离为20厘米，恒流注射泵的流速为0.8毫升/小时，纺丝持续时间为4小时；将静电纺丝制备得到的PS/SiO₂纳米纤维膜在60摄氏度真空烘箱中干燥1小时，除去残余的DMF；

(2)PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维的制备：将步骤(1)所述的50毫克PS/SiO₂纳米纤维膜完全浸没在100毫升的多巴胺盐酸盐溶液中，室温下多巴胺在其表面进行自聚合。其中所述多巴胺盐酸盐溶液是以Tris缓冲液(10毫摩尔，pH＝8.5)与甲醇(1:1，v/v)为混合溶剂配置而成的2毫克/毫升的多巴胺盐酸盐溶液；自聚合反应结束后，用超纯水清洗PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维数次，真空干燥箱中70摄氏度干燥1小时；

(3)预柱柱芯的预处理：预柱柱芯掏空后依次经甲醇和超纯水分别超声5分钟清洗洁净，并干燥；

(4)在线微固相萃取柱装置的组装：将4毫克的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维填入干净的微固相萃取(μ-SPE)预柱柱芯中，利用不锈钢筛板和柱顶部的Teflon密封件与μ-SPE预柱柱芯进行组装，然后装入到配套的预柱套中；之后，将填充有吸附剂的μ-SPE萃取柱分别用水和甲醇中冲洗5分钟，在自动进样器和液相色谱柱之间安装一个六通阀，以μ-SPE萃取柱替换六通阀的定量环，构建在线μ-SPE装置，其中，1/16英寸聚醚醚酮(PEEK)管和螺母被用来连接整个系统的流路。

在线微固相萃取柱的使用操作步骤：初次使用前，PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱分别用甲醇和水以0.2毫升/分钟的流速活化5分钟；萃取过程，在Loading位置，取2毫升的样品溶液以1毫升/分钟的流速进行萃取；萃取完成后，取500微升的去离子水快速淋洗在线微固相萃取柱，去除残留的样品溶液；淋洗结束后，将六通阀的阀门快速转向至Injection位置进行解吸过程，液相色谱中的流动相开始进行动态反向解吸，解吸下来的目标物全部引入色谱柱进入后续的检测器进行分析检测。

图3是材料的形貌图：图3A，3B分别为PS，PS/SiO₂放大8000倍的扫描电镜图；从图中可以观察到PS纳米纤维具有三维网状结构，纤维表面光滑，形态均匀，且二氧化硅颗粒被PS纳米纤维缠结，但没有改变PS纳米纤维的三维网状结构，纤维平均直径是0.8微米。图3C和内插图3C-1分别为PS/SiO₂@PDA纤维放大5000倍和15,000倍的扫描电镜图，显示出了纳米纤维表面上呈现出不光滑的皱纹；图3D为PS/SiO₂@PDA放大20,000倍的透射电镜图，进一步显示纤维具有非常明显的核鞘结构；图3E，3F和3G分别为PS，PS/SiO₂和PS/SiO₂@PDA材料的接触角图。以上SEM和TEM图像都表明PDA已成功包裹在PS/SiO2纳米纤维表面，而且可以推测PS/[email protected]的亲水性PDA表面涂层可以促进水样与萃取吸附剂之间的充分接触，加速分析物从水溶液到吸附剂内层纳米纤维的传质速率。

实施例2 PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱的使用寿命考察

测定本发明实施例1制得的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱对羟基化多环芳烃(1-羟基芘、2-萘酚和3-羟基菲)的萃取使用寿命。将本发明实施例1制得的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱连续进行羟基化多环芳烃(1-羟基芘、2-萘酚和3-羟基菲)的萃取富集实验，在不同实验次数(12次、35次、52次和70次)下分析比较三种目标物的峰面积，从而考察在线固相萃取柱对的使用寿命。

所述吸附剂PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维的用量为4毫克，萃取流速为1毫升/分钟，上样体积为2毫升；色谱柱：沃特世C₈色谱柱(150毫米×2.1毫米，粒径3.5微米)；色谱分离条件为：流动相A为25％超纯水，流动相B为75％甲醇；等度洗脱，洗脱时间为10分钟，流动相流速为0.2毫升/分钟，柱温为40摄氏度；质谱离子源为“Z-spray”电喷雾离子源；质谱扫描模式为负离子SIR扫描模式；质谱主要参数：离子源温度为120摄氏度，去溶剂温度：350摄氏度，去溶剂气流量：550升/小时，锥孔气流量：50升/小时；目标物的质荷比(m/z)分别为：1-羟基芘为217.11，2-萘酚为143.09，3-羟基菲为193.11；目标物的锥孔电压分别为：1-羟基芘为70伏，2-萘酚为52伏，3-羟基菲为56伏。

实验结果如图4所示，结果表明本发明制备的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱的在使用70次后，峰信号响应强度并没有发生明显降低，表明该萃取柱具有良好的使用寿命。

实施例3 PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱与自制的PS/SiO₂纺丝材料在线微固相萃取柱对羟基化多环芳烃的富集能力比较

测定本发明实施例1制得的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱与自制的PS/SiO₂纺丝材料在线微固相萃取柱对羟基化多环芳烃(1-羟基芘、2-萘酚和3-羟基菲)的富集能力：将本发明实施例1制得的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱与自制的PS/SiO₂纺丝材料在线微固相萃取柱，在Loading位置时，分别萃取1-羟基芘(1-hydroxypyrene)、2-萘酚(2-naphthol)和3-羟基菲(3-hydroxyphenanthrene)的2毫升混合标准水溶液；萃取完毕后，用500微升的去离子水淋洗萃取柱，然后立即将六通阀的阀门转向至Injection位置，在线固相萃取柱在液相色谱-质谱(LC-MS)流动相中进行动态反向解吸，分析比较各物质的峰面积，从而比较不同的在线固相萃取柱对三种分析物的富集效果。

实验结果如图5A所示，结果表明本发明制备的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱的富集能力高于PS/SiO₂纺丝材料在线微固相萃取柱，这表明PDA修饰的固相吸附剂可以更好地提高萃取柱的吸附效果。

实施例4 PS/[email protected]复合纳米纤维微固相萃取柱在三种检测模式(离线模式，在线模式以及液相色谱-质谱直接进样模式)的富集效果比较

测定本发明实施例1制得的PS/SiO₂@PDA微固相萃取柱，在三种检测模式(在线模式，离线模式以及直接进样模式)对羟基化多环芳烃(1-羟基芘、2-萘酚和3-羟基菲)的响应信号强度：将本发明实施例1制得的PS/SiO₂@PDA微固相萃取柱在在线模式、离线模式下分别萃取1-羟基芘、2-萘酚和3-羟基菲的混合标准水溶液，萃取完毕后，将解吸下来的解吸液以及未经过萃取的直接进样模式下的标准溶液引入LC-MS中进行检测，分析比较各物质的峰面积，从而比较不同模式下对不同分析物的信号响应强度。

结果如图5B所示，结果显示PS/SiO₂@PDA在线模式的信号响应强度远高于离线模式及直接进样模式，这表明在线模式可以更好地提高分析的灵敏度，该方法更适用于痕量物质的分析。

实施例5 PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱的萃取选择性考察

测定本发明实施例1制得的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维在线微固相萃取柱对大分子物质(牛血清白蛋白，β-葡糖醛酸糖苷酶/芳基硫酸酯酶)和小分析物质(1-羟基芘)的萃取选择能力：将本发明实施例1制得的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维微固相萃取柱在离线模式下，在1毫升/分钟的流速下分别萃取2毫升、200纳克/毫升的牛血清白蛋白，β-葡糖醛酸糖苷酶/芳基硫酸酯酶和1-羟基芘的标准水溶液；萃取完毕后，收集其流出液，利用紫外分光光度计分别对其流出液和原标准溶液进行紫外强度分析，计算其萃取效率，从而考察所述在线固相萃取柱的萃取选择性。

结果如表1所示，从结果显示可以看出，所述在线固相萃取柱对小分析物质的萃取效率远高于大分子物质，这表明PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维微固相萃取柱具有一定的萃取选择性，具有一定的抗基质效应，适用于萃取和富集复杂基质中的小分子目标物。

表1制得的PS/SiO₂@PDA复合纳米纤维微固相萃取柱的萃取选择性

实施例6在线微固相萃取柱在羟基化多环芳烃的标准水样品中的分析检测

本发明使用实施例1制备得到的PS/SiO₂@PDA在线微固相萃取柱与LC-MS建立μ-SPE-LC-MS方法。具体地说，用在线微固相萃取柱萃取一系列不同浓度的1-羟基芘、2-萘酚和3-羟基菲混合标准水溶液，再经LC-MS解吸以及分析，每一个条件平行测试5组，将得到的一系列峰面积与对应的浓度作图，得出所制在线固相萃取柱对不同分析物的标准曲线。

所述一系列不同浓度的1-羟基芘、2-萘酚和3-羟基菲混合标准水溶液的配制为：

S1.利用移液枪分别移取4毫升浓度均为10毫克/升的1-羟基芘、2-萘酚和3-羟基菲标准溶液于40毫升样品瓶中，加入28毫升去离子水振荡混匀，制备得到1毫克/升的1-羟基芘、2-萘酚和3-羟基菲的混合标准储备液A；

S2.取S1所述的储备液A2毫升，加入38毫升去离子水，制备得到50微克/升的混合标准储备液B；

S3.取S2所述的储备液B12毫升，加入28毫升去离子水，制备得到15微克/升的混合标准液C；取S2所述的储备液B 20毫升，加入20毫升去离子水，制备得混合标准液①；取混合标准液①8毫升，加入32毫升去离子水，制备得混合标准液②；取混合标准液C 6毫升，加入24毫升去离子水，制备得混合标准液③；取混合标准液②8毫升，加入32毫升去离子水，制备得混合标准液④；取混合标准液②3毫升，加入27毫升去离子水，制备得混合标准液⑤；取混合标准液③3毫升，加入27毫升去离子水，制备得混合标准液⑥；取混合标准液⑤2毫升，加入18毫升去离子水，制备得混合标准液⑦；取混合标准液⑥3毫升，加入27毫升去离子水，制备得混合标准液⑧；混合标准液①～⑧为制备标准曲线所用的溶液。

检测结果如表2所示，结果表明：该方法的线性范围较宽，在0.03至25微克每升之间，线性相关系数在0.9957～0.9980之间，检出限(S/N＝3)为0.002～0.015微克每升，定量限(S/N＝10)为0.007～0.051微克每升，宽的线性范围和低的检测限说明该材料适合用于这些羟基化多环芳烃的检测。

本发明选取低、中、高三个浓度的加标水溶液各平行测定5次，考察了所述的在线固相萃取柱的日内和日间相对标准偏差(RSD％)。如表3所示，获得的RSD较小(低于12.4％)，说明该方法有很好的重现性。

表2建立的μ-SPE-LC-MS方法的标准曲线、线性范围、检出限、定量限

表3建立的μ-SPE-LC-MS方法在加标水溶液中的重现性

实施例7在线微固相萃取柱在尿液基质中的应用

本发明使用实施例1制备得到的PS/SiO₂@PDA在线微固相萃取柱在来自恩施地区的加标尿液样本中进行富集和萃取。所述加标物质为1-羟基芘，2-萘酚和3-羟基菲。

本发明分别在来自恩施地区空白尿液样品加入低、中、高三个浓度的农药，各平行测定3次，考察了该方法在实际基质中的回收率。结果如表4所示，结果表明，所述在线固相萃取柱在尿液样品中的回收率在79.1％和108.4％，说明该方法具备一定的抗基质干扰能力。

表4建立的μ-SPE-LC-MS方法在加标基质中的回收率

显然，上述实施例仅仅是为清楚地说明所作的实例，而并非对实施方式的限制。对于所属领域的普通技术人员来说，在上述说明的基础上还可以做出其它不同形式的变化或变动。这里无需也无法对所有的实施方式予以穷举。而因此所引申的显而易见的变化或变动仍处于本发明创造的保护范围之内。