用于多靶标扩增的避免二聚体的多重聚合酶链式反应

文档序号:1602376 发布日期:2020-01-07 浏览:27次 >En<

阅读说明:本技术 用于多靶标扩增的避免二聚体的多重聚合酶链式反应 (Multiplex polymerase chain reaction avoiding dimers for multi-target amplification ) 是由 潘文京 米兰达·伯恩-斯蒂尔 侯晓红 布里塔尼·布朗 韩建 于 2018-03-09 设计创作,主要内容包括:本公开涉及用于扩增核酸的方法,所述方法避免与引物-二聚体形成相关的问题。本方法在本文中称为避免二聚体的多重聚合酶链式反应(dam-PCR)。本文公开的所述方法通常包括以下步骤:反转录DNA(例如来自RNA样品的cDNA)的至少一个第一条链,其中DNA的每个第一条链掺入反向共用引物结合位点;选择DNA的每个第一条链;从DNA的至少一个第一条链中的每个中合成DNA的至少一个第二条链,其中DNA的每个第二条链掺入正向共用引物结合位点;选择cDNA的每个第二条链;以及使用共用引物扩增DNA链。或者,所述方法可以使用gDNA模板进行。由于在扩增前DNA链的选择和未使用的引物的去除,本文所述的方法避免引物-二聚体形成,并与常规的多重PCR方法相比,允许更高的灵敏度和效率。(The present disclosure relates to methods for amplifying nucleic acids that avoid the problems associated with primer-dimer formation. This method is referred to herein as multiplex polymerase chain reaction (dam-PCR) to avoid dimers. The methods disclosed herein generally include the steps of: reverse transcribing at least one first strand of DNA (e.g., cDNA from an RNA sample), wherein each first strand of DNA incorporates a reverse common primer binding site; selecting each first strand of DNA; synthesizing at least one second strand of DNA from each of the at least one first strand of DNA, wherein each second strand of DNA incorporates a forward common primer binding site; selecting each second strand of the cDNA; and amplifying the DNA strand using the common primer. Alternatively, the method may be performed using a gDNA template. Due to the selection of DNA strands and the removal of unused primers prior to amplification, the methods described herein avoid primer-dimer formation and allow for greater sensitivity and efficiency compared to conventional multiplex PCR methods.)

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