阅读说明：本技术 一种银杏黄酮的纯化方法 (Purification method of ginkgo flavone ) 是由 王晓军 刘伶文 刘茜倩 胡世义 于 2019-09-23 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种银杏黄酮的纯化方法,具体按照以下步骤实施：步骤1、银杏黄酮粗提液的制备；步骤2、将银杏黄酮粗提液在乙醇-硫酸铵双水相法萃取并干燥处理得银杏黄酮粉末。本发明的有益效果是：采用乙醇-硫酸铵双水相体系萃取银杏黄酮,由于盐析作用,蛋白质等杂质溶解在盐相中,提高了有机相中的黄酮纯度；提取的有机溶剂选择乙醇,无毒无害无污染,并且成本较低,符合未来工业化朝着绿色可持续发展方向的要求；使用超声辅助提纯银杏黄酮粗提液,利用了超声波所产生的强烈机械振动及空化作用等效果,破碎细胞结构,便于溶剂进入细胞及黄酮的流出,从而达到缩短提取时间,提高提取效率的目的。(The invention discloses a method for purifying ginkgetin, which is implemented according to the following steps: step 1, preparing a crude extract of ginkgo flavone; and 2, extracting the crude extract of the ginkgetin in an ethanol-ammonium sulfate two-aqueous phase method, and drying to obtain ginkgetin powder. The invention has the beneficial effects that: the ethanol-ammonium sulfate aqueous two-phase system is adopted to extract the ginkgetin, and due to salting-out, impurities such as protein and the like are dissolved in a salt phase, so that the purity of the ginkgetin in an organic phase is improved; the extracted organic solvent is ethanol, so that the method is non-toxic, harmless and pollution-free, has low cost and meets the requirement of future industrialization on green sustainable development; the crude extract of ginkgo flavone is purified by the aid of ultrasound, the cell structure is broken by the aid of strong mechanical vibration and cavitation generated by the ultrasound, and a solvent can enter cells conveniently and the flavone flows out conveniently, so that the aims of shortening extraction time and improving extraction efficiency are fulfilled.)

一种银杏黄酮的纯化方法

技术领域

本发明属于植物功能成分提取技术领域，具体涉及一种银杏黄酮的纯化方法。

背景技术

银杏黄酮是银杏叶提取物中一类重要的活性成分，它能够增加脑血管流量，改善脑血管循环功能，保护脑细胞，扩张冠状动脉，防止心绞痛及心肌梗塞，防止血栓形成，提高机体免疫能力。对冠心病、心绞痛、脑动脉硬化、老年性痴呆、高血压病人均十分有益。

银杏黄酮的药用价值较高，引起诸多学者对它进行相关研究。现阶段，银杏黄酮的提取与纯化方法有机溶剂萃取、热水提取法、超临界流体萃取、传统双水相萃取、树脂纯化等方法。由于有机溶剂提取法工艺中步骤多、周期长、黄酮的提取率比较高，但最终产品中残留的有机溶剂越来越受到消费者的排斥；热水提取法，由于黄酮类化合物在水中的溶解度相对在乙醇中低，因此提取率比较低，并且由于水溶性的蛋白等杂质含量高，导致下一步的分离纯化较难；双水相萃取法，利用待分离样中各组分在两相中溶解度的差异将待分离样进行分离，以达到快速分离纯化的目的，双水相萃取具有分离效率高、仪器简单等优点。

发明内容

本发明的目的是提供一种银杏黄酮的纯化方法，解决了现有技术中存在的分离效率低的问题。

本发明所采用的技术方案是，一种银杏黄酮的纯化方法，具体按照以下步骤实施：

步骤1、银杏黄酮粗提液的制备；

步骤2、将银杏黄酮粗提液用乙醇-硫酸铵双水相法萃取并干燥处理得银杏黄酮粉末。

本发明的特点还在于：

步骤1具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、银杏叶处理

将银杏叶烘干至恒重，粉碎，过筛得银杏叶粉末；

步骤1.2、乙醇水溶液浸提

将银杏叶粉末与乙醇水溶液进行混合得混合液A，浸提得混合液B；

步骤1.3、超声处理

将混合液B超声处理后过滤，得混合液C；

步骤1.4、将混合液C浓缩处理得银杏黄酮粗提液。

步骤2具体按照以下步骤实施：

步骤2.1配置乙醇-硫酸铵双水相混合液：将硫酸铵水溶液与无水乙醇按比例混合得乙醇-硫酸铵双水相混合液；

步骤2.2萃取：将银杏黄酮粗提液与乙醇-硫酸铵双水相混合液按比例混合，萃取得银杏黄酮萃取液；

步骤2.3干燥处理：将银杏黄酮萃取液进行蒸发并干燥处理得银杏黄酮粉末。

步骤1.3中将银杏叶粉末与乙醇水溶液按照质量比1：5～8进行混合得混合液A，其中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为70-90％，将混合液A在50～80℃下浸提15～20min得混合液B。

步骤1.3中将混合液B在功率为150～250KW下进行超声处理30～60min。

步骤1.4中将混合液C置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.07～0.09MPa，转速为60～90r/min，温度为55～70℃，得到银杏黄酮粗提液。

步骤2.1具体步骤如下：

将浓度为1.8～2.4mol·L^-1的硫酸铵水溶液与无水乙醇按照体积比为0.4～1.3的比例混合得乙醇-硫酸铵双水相混合液。

步骤2.2具体步骤如下：

将银杏黄酮粗提液与乙醇-硫酸铵双水相混合液按照体积比0.045～0.14的比例，在乙醇-硫酸铵双水相混合液中加入银杏叶浓缩液，萃取得银杏黄酮萃取液。

步骤2.3具体步骤如下：

将银杏黄酮萃取液置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.05～0.10MPa，转速为60～100r/min，温度为50～70℃，将旋转蒸发所得固体进行干燥得银杏黄酮粉末。

本发明的有益效果是：采用乙醇-硫酸铵双水相体系萃取银杏黄酮，由于盐析作用，蛋白质等杂质溶解在盐相中，提高了有机相中的黄酮纯度；提取的有机溶剂选择乙醇，无毒无害无污染，并且成本较低，符合未来工业化朝着绿色可持续发展方向的要求；使用超声辅助提纯银杏黄酮粗提液，利用了超声波所产生的强烈机械振动及空化作用等效果，破碎细胞结构，便于溶剂进入细胞及黄酮的流出，从而达到缩短提取时间，提高提取效率的目的。

具体实施方式

下面结合体实施方式对本发明进行详细说明。

本发明一种银杏黄酮的纯化方法，具体按照以下步骤实施：

步骤1、银杏黄酮粗提液的制备，具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、银杏叶处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶于60～80℃烘干至恒重，粉碎，过200目筛得银杏叶粉末；

步骤1.2、乙醇水溶液浸提，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶粉末与乙醇水溶液按照质量比1：5～8进行混合得混合液A，其中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为70-90％，将混合液A在50～80℃下浸提15～20min得混合液B；

步骤1.3、超声处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液B在功率为150～250KW下进行超声处理30～60min后过滤，得到混合液C；

步骤1.4、蒸发处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液C置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.07～0.09MPa，转速为60～90r/min，温度为55～70℃，得到银杏黄酮粗提液。

步骤2、将银杏黄酮粗提液在乙醇-硫酸铵双水相法萃取并干燥得银杏黄酮粉末，具体按照以下步骤实施：

步骤2.1配置乙醇-硫酸铵双水相混合液，具体按照以下步骤实施：

称取25-35g的硫酸铵溶于80～130mL的水中，与100～180mL的无水乙醇混合得乙醇-硫酸铵双水相混合液；

步骤2.2萃取，具体按照以下步骤实施：

在乙醇-硫酸铵双水相混合液中加入15-25mL银杏黄酮粗提液，萃取得银杏黄酮萃取液；

步骤2.3干燥处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏黄酮萃取液置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.05～0.10MPa，转速为60～100r/min，温度为50～70℃，将旋转蒸发所得固体进行干燥得银杏黄酮粉末。

实施例1

一种银杏黄酮的纯化方法，包括以下步骤：

步骤1、银杏黄酮粗提液的制备，具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、银杏叶处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶于60℃烘干至恒重，粉碎，过200目筛得银杏叶粉末；

步骤1.2、乙醇水溶液浸提，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶粉末与乙醇水溶液按照质量比1：6.2进行混合得混合液A，其中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为70％，将混合液A在50℃下浸提15min得混合液B；

步骤1.3、超声处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液B在功率为150KW下进行超声处理60min后过滤，得到混合液C；

步骤1.4、蒸发处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液C置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.07MPa，转速为90r/min，温度为70℃，得到银杏黄酮粗提液。

步骤2、将银杏黄酮粗提液在乙醇-硫酸铵双水相法萃取并干燥得得银杏黄酮粉末，具体按照以下步骤实施：

步骤2.1配置乙醇-硫酸铵双水相混合液，具体按照以下步骤实施：

称取25g的硫酸铵溶于100mL的水中，与100mL的无水乙醇混合得乙醇-硫酸铵双水相混合液；

步骤2.2萃取，具体按照以下步骤实施：

在乙醇-硫酸铵双水相混合液中加入15ml银杏黄酮粗提液，萃取得银杏黄酮萃取液；

步骤2.3干燥处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏黄酮萃取液置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.085MPa，转速为80r/min，温度为60℃，将旋转蒸发所得固体进行干燥得银杏黄酮粉末。

本实施例中，银杏黄酮萃取率达到92.95％。

实施例2

一种银杏黄酮的纯化方法，包括以下步骤：

步骤1、银杏黄酮粗提液的制备，具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、银杏叶处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶于65℃烘干至恒重，粉碎，过200目筛得银杏叶粉末；

步骤1.2、乙醇水溶液浸提，具体按照以下步骤实施；

将银杏叶粉末与乙醇水溶液按照质量比1：7进行混合得混合液A，其中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为70％，将混合液A在55℃下浸提15min得混合液B；

步骤1.3、超声处理，具体按照以下步骤实施；

将混合液B在功率为250KW下进行超声处理30min后过滤，得到混合液C；

步骤1.4、蒸发处理，具体按照以下步骤实施；

将混合液C置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为.09MPa，转速为60r/min，温度为55℃，得到银杏黄酮粗提液。

步骤2、将银杏黄酮粗提液在乙醇-硫酸铵双水相法萃取并干燥得得银杏黄酮粉末，具体按照以下步骤实施：

步骤2.1配置乙醇-硫酸铵双水相混合液，具体按照以下步骤实施；

称取30g的硫酸铵溶于80mL的水中，与100mL的无水乙醇混合得乙醇-硫酸铵双水相混合液；

步骤2.2萃取，具体按照以下步骤实施：

在乙醇-硫酸铵双水相混合液中加入20mL银杏黄酮粗提液，萃取得银杏黄酮萃取液；

步骤2.3干燥处理，具体按照以下步骤实施；

将银杏黄酮萃取液置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.085MPa，转速为75r/min，温度为65℃，将旋转蒸发所得固体进行干燥得银杏黄酮粉末。

本实施例中，银杏黄酮萃取率达到94.60％。

实施例3

一种银杏黄酮的纯化方法，包括以下步骤：

步骤1、银杏黄酮粗提液的制备，具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、银杏叶处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶于70℃烘干至恒重，粉碎，过200目筛得银杏叶粉末；

步骤1.2、乙醇水溶液浸提，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶粉末与乙醇水溶液按照质量比1：7.3进行混合得混合液A，其中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为75％，将混合液A在60℃下浸提20min得混合液B；

步骤1.3、超声处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液B在功率为170KW下进行超声处理35min后过滤，得到混合液C；

步骤1.4、蒸发处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液C置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.075MPa，转速为65r/min，温度为55℃，得到银杏黄酮粗提液。

步骤2、将银杏黄酮粗提液在乙醇-硫酸铵双水相法萃取并干燥得得银杏黄酮粉末，具体按照以下步骤实施：

步骤2.1配置乙醇-硫酸铵双水相混合液，具体按照以下步骤实施：

称取35g的硫酸铵溶于100mL的水中，与100mL的无水乙醇混合得乙醇-硫酸铵双水相混合液；

步骤2.2萃取，具体按照以下步骤实施：

在乙醇-硫酸铵双水相混合液中加入20mL银杏黄酮粗提液，萃取得银杏黄酮萃取液；

步骤2.3干燥处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏黄酮萃取液置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.080MPa，转速为70r/min，温度为60℃，将旋转蒸发所得固体进行干燥得银杏黄酮粉末。

本实施例中，银杏黄酮萃取率达到93.07％。

实施例4

一种银杏黄酮的纯化方法，包括以下步骤：

步骤1、银杏黄酮粗提液的制备，具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、银杏叶处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶于75℃烘干至恒重，粉碎，过200目筛得银杏叶粉末；

步骤1.2、乙醇水溶液浸提，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶粉末与乙醇水溶液按照质量比1：7进行混合得混合液A，其中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为80％，将混合液A在65℃下浸提18min得混合液B；

步骤1.3、超声处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液B在功率为190KW下进行超声处理40min后过滤，得到混合液C；

步骤1.4、蒸发处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液C置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.070MPa，转速为90r/min，温度为70℃，得到银杏黄酮粗提液。

步骤2、将银杏黄酮粗提液在乙醇-硫酸铵双水相法萃取并干燥得得银杏黄酮粉末，具体按照以下步骤实施：

步骤2.1配置乙醇-硫酸铵双水相混合液，具体按照以下步骤实施：

称取35g的硫酸铵溶于130mL的水中，与130mL的无水乙醇混合得乙醇-硫酸铵双水相混合液；

步骤2.2萃取，具体按照以下步骤实施：

在乙醇-硫酸铵双水相混合液中加入20mL银杏黄酮粗提液，萃取得银杏黄酮萃取液；

步骤2.3干燥处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏黄酮萃取液置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.085MPa，转速为75r/min，温度为65℃，将旋转蒸发所得固体进行干燥得银杏黄酮粉末。

本实施例中，银杏黄酮萃取率达到96.57％。

实施例5

一种银杏黄酮的纯化方法，包括以下步骤：

步骤1、银杏黄酮粗提液的制备，具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、银杏叶处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶于80℃烘干至恒重，粉碎，过200目筛得银杏叶粉末；

步骤1.2、乙醇水溶液浸提，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶粉末与乙醇水溶液按照质量比1：5进行混合得混合液A，其中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为90％，将混合液A在70℃下浸提16min得混合液B；

步骤1.3、超声处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液B在功率为210KW下进行超声处理45min后过滤，得到混合液C；

步骤1.4、蒸发处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液C置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.085MPa，转速为75r/min，温度为65℃，得到银杏黄酮粗提液。

步骤2、将银杏黄酮粗提液在乙醇-硫酸铵双水相法萃取并干燥得杏黄酮粉末，具体按照以下步骤实施：

步骤2.1配置乙醇-硫酸铵双水相混合液，具体按照以下步骤实施：

称取35g的硫酸铵溶于130mL的水中，与170mL的无水乙醇混合得乙醇-硫酸铵双水相混合液；

步骤2.2萃取，具体按照以下步骤实施；

在乙醇-硫酸铵双水相混合液中加入20mL银杏黄酮粗提液，萃取得银杏黄酮萃取液；

步骤2.3干燥处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏黄酮萃取液置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.085MPa，转速为80r/min，温度为60℃，将旋转蒸发所得固体进行干燥得银杏黄酮粉末。

本实施例中，银杏黄酮萃取率达到97.79％。

实施例6

一种银杏黄酮的纯化方法，包括以下步骤：

步骤1、银杏黄酮粗提液的制备，具体按照以下步骤实施：

步骤1.1、银杏叶处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶于80℃烘干至恒重，粉碎，过200目筛得银杏叶粉末；

步骤1.2、乙醇水溶液浸提，具体按照以下步骤实施：

将银杏叶粉末与乙醇水溶液按照质量比1：8进行混合得混合液A，其中乙醇水溶液中乙醇的体积分数为85％，将混合液A在60℃下浸提20min得混合液B；

步骤1.3、超声处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液B在功率为230KW下进行超声处理50min后过滤，得到混合液C；

步骤1.4、蒸发处理，具体按照以下步骤实施：

将混合液C置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.085MPa，转速为80r/min，温度为60℃，得到银杏黄酮粗提液。

步骤2、将银杏黄酮粗提液在乙醇-硫酸铵双水相法萃取并干燥得得杏黄酮粉末，具体按照以下步骤实施：

步骤2.1配置乙醇-硫酸铵双水相混合液，具体按照以下步骤实施：

称取35g的硫酸铵溶于130mL的水中，与180mL的无水乙醇混合得乙醇-硫酸铵双水相混合液；

步骤2.2萃取，具体按照以下步骤实施：

在乙醇-硫酸铵双水相混合液中加入25mL银杏黄酮粗提液，萃取得银杏黄酮萃取液；

步骤2.3干燥处理，具体按照以下步骤实施：

将银杏黄酮萃取液置于旋转蒸发仪中进行处理，其中旋转蒸发仪的压力为0.085MPa，转速为75r/min，温度为65℃，将旋转蒸发所得固体进行干燥得银杏黄酮粉末。

本实施例中，银杏黄酮萃取率达到97.63％。

以上实施例中提取剂体积分数为70-90％的乙醇水溶液，提取温度50-80℃，因为发明人通过研究发现，较高的醇浓度有利于黄酮类等物质的溶出，增加细胞膜的通透性，此温度下有利于乙醇适时地蒸出，温度太低，耗时较长，且不利于黄酮类物质的溶解，温度太高，乙醇蒸出过快，同样不利于目标物质的溶解，且对一些热敏性物质容易造成破坏。同时进行超声辅助处理，处理时间30-60min，超声处理时间过短，不利于黄酮类物质的富集，处理时间过长，会增加能耗，也可能会破坏目标物质结构。银杏叶粗提物中仍有较多非目标成分，为了有选择性和针对性的对银杏叶总黄酮进行提取，银杏叶萃取纯化将在双水相体系中进行，银杏黄酮萃取率可达97.79％。