一种低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法
阅读说明：本技术 一种低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法 (Preparation method of low-free-flavone and low-acid ginkgo leaf extract ) 是由 王允达 于 2018-06-25 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法,包括以下步骤：粉碎、过筛、提取、浓缩、除杂、富集纯化、干燥、粉碎,采用的优化比例的大孔吸附树脂和无机吸附剂为层析柱填料,所得到的银杏叶提取物游离黄酮、银杏酸低,同时该制备方法现有设备即能满足要求,非常适合工业化生产,本发明设计合理,可大规模推广。(The invention relates to a preparation method of a ginkgo leaf extract with low free flavone and low acid, which comprises the following steps: the preparation method comprises the following steps of crushing, sieving, extracting, concentrating, impurity removing, enriching and purifying, drying and crushing, macroporous adsorption resin and inorganic adsorbent in optimized proportion are adopted as chromatographic column packing, the obtained ginkgo leaf extract has low free flavone and ginkgolic acid content, and meanwhile, the existing equipment of the preparation method can meet the requirements, so that the preparation method is very suitable for industrial production, and the preparation method is reasonable in design and can be popularized in a large scale.)
技术领域
本发明涉及银杏叶提取物领域，尤其涉及一种低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法。
背景技术
银杏就是我们通常所说的白果树，是一种在我国比较常见的落叶乔木，它是目前为我们所知的世界上最长寿的物种之一，现如今最长寿的银杏位于我国贵州，它的树龄达到五六千年之久。银杏是在5亿多年前石炭纪出现的，第四纪冰川运动的出现，使地球的环境突然变的寒冷，越来越不适合大多数植物的生存，在这一时期大部分银杏类的植物都己经消失，在世界范围内就只有中国部分地区因为自然环境的因素才幸存下来。银杏是裸子植物银杏纲现存的唯一物种，和它同纲的它物种都己消失在历史的长河中，正因为如此，银杏才被称为植物界的＂活化石＂。
银杏叶是近年来国内外研究开发的热点之一，其提取物(Ginkgobilobaextracts， GBE) 被广泛用于心脑血管疾病，大量研究表明，银杏叶提取物对心脑血管疾病的防治作用与其抗氧化活性密关。GBE中主要的生理活性成分是黄酮类化合物和银杏萜内酯类，其中银杏黄酮具有清除自由基、抗氧化、改善心脑血管循环、抗疲劳、降血脂、抑菌等多种功能，银杏叶中黄酮类化合物的纯度对其应用起着决定作用，即由银杏叶提取物制成用于防治心脑血管疾病的药物要求总黄酮纯度为 24％以上 ( 通常把德国W.Svhwabe 公司生产的 EGB761 作为银杏叶的标准化提取物，这种提取物中含有 24％的黄酮化合物 )，银杏黄酮也可以作为食品添加剂的成分，制作成抗疲劳、抗衰老的保健食品。银杏叶中黄酮类化合物的提取早在70年代德国和法国就申请了银杏叶提取物的专利，从常用的醇、酮等有机溶剂浸提法到近年来的超临界流体萃取法，高纯度和高收率且环保的提取方法一直是人们所追求的。
目前的提取方法提取出来的是高游离黄酮、高酸的银杏叶提取物不能满足欧美市场高端客户要求，现对提取制备方法进行改进。
发明内容
对上述现有技术的现状，本发明所要解决的技术问题在于提供一种能满足欧美市场高端客户要求的低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法。
本发明解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法，包括以下步骤：粉碎、过筛、提取、浓缩、除杂、富集纯化、干燥、粉碎。
进一步地，具体包括以下步骤：
（1）银杏叶粉碎过20~30目筛；
（2）向银杏叶中加入银杏叶重量6-12倍、浓度为55-75%的乙醇提取2-3次，提取温度为60-80℃，每次提取60-90分钟，过滤，合并提取液；
（3）制备的提取液浓缩至密度为1.05-1.15，向浓缩液中加入1-2倍体积的纯化水稀释，搅拌，室温下静置过夜，取过滤液；
（4）取过滤液至层析柱饱和，所述层析柱填料为大孔吸附树脂和无机吸附剂的重量比为(1-5)：1；
（5）以水、乙醇或醇水混合物为洗脱剂，控制洗脱剂的流速为1-3BV/h的流速洗脱，洗脱的顺序依次为水、乙醇浓度15-25%、乙醇浓度60-80%，洗脱剂体积分别为2-3BV、3-5BV、2-4BV，收集乙醇浓度60-80%的洗脱液，浓缩，干燥，粉碎，得低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明采用的优化比例的大孔吸附树脂和无机吸附剂为层析柱填料，所得到的银杏叶提取物游离黄酮、银杏酸低，同时该制备方法现有设备即能满足要求，非常适合工业化生产，本发明设计合理，可大规模推广。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，下面通过具体实施例对本发明进行进一步详细说明。
实施1 一种低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法
1、取银杏叶150kg粉碎至20目。将加热至65℃的55%乙醇900升，开启提取罐搅拌，并开启蒸汽阀门，保持溶剂65℃，提取60分钟，停止搅拌，将提取液过滤，转移至储罐，二次提取加入55%的乙醇900升，提取30分钟，过滤，转移至储罐，合并提取液；2、将上述提取液浓缩至密度1.05的浓缩液，加入1倍量浓缩液体积的纯化水，搅拌，室温放置过夜，过滤；3、采用质量比为1:1的大孔吸附树脂与无机吸附剂为填料的层析柱，将过滤液以1.5BV/h的流速上柱，静置1小时，然后进行洗脱，首先以2.0BV的水以1.5BV/h的流速洗脱，然后以3.5BV的15%的乙醇以2.0BV/h的流速洗脱，最后以2.5BV的60%的乙醇以1.5BV/h的流速洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物3.53Kg银杏叶提取物。
实施2 一种低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法
1、取银杏叶150kg粉碎至30目。将加热至70℃的65%乙醇1200升，开启提取罐搅拌，并开启蒸汽阀门，保持溶剂70℃，提取60分钟，停止搅拌，将提取液过滤，转移至储罐，二次提取加入55%的乙醇600升，提取60分钟，过滤，转移至储罐，合并提取液；2、将上述提取液浓缩至密度1.10的浓缩液，加入1.5倍量浓缩液体积的纯化水，搅拌，室温放置过夜，过滤；3、采用质量比为3:1的大孔吸附树脂与无机吸附剂为填料的层析柱，将过滤液以2.5BV/h的流速上柱，静置1小时，然后进行洗脱，首先以3.0BV的水以2.5BV/h的流速洗脱，然后以4.5BV的15%的乙醇以3.0BV/h的流速洗脱，最后以3.5BV的60%的乙醇以3.0BV/h的流速洗脱，收集60%乙醇洗脱液，减压浓缩，干燥，粉碎，得到低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物3.78Kg银杏叶提取物。
对比1 一种低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法
具体操作同实施1，区别仅在于步骤3中层析柱填料单独选用大孔吸附树脂。
对比2 一种低游离黄酮、低酸的银杏叶提取物的制备方法
具体操作同实施2，区别仅在于步骤3中层析柱填料单独选用大孔吸附树脂。
实施1、2和对比1、2的数据如表1所示。
表1:实施1、2和对比1、2的数据
名称
收率%
黄酮醇苷%
萜类内酯%
芦丁%
游离槲皮素mg/g
游离山奈素mg/g
游离异鼠李素mg/g
银杏酸ppm
实施1
2.35
25.67
7.01
1.53
0.54
0.23
0.14
0.9
实施2
2.52
26.12
7.21
1.47
0.63
0.32
0.18
0.6
对比1
2.45
25.11
7.11
2.87
6.3
4.5
1.8
8.5
对比2
2.61
25.89
7.32
3.11
7.4
5.2
1.5
6.8
由表1结果得出，实施1、2与对比1、2相比，虽然所得银杏叶提取物的收率和含量相差不大；实施1、2与对比1、2，优化比例的大孔树脂和无机吸附剂为层析柱填料，对银杏叶提取物的富集纯化有较大的影响，限度指标实施1、2明显低于比对1、2组。
表1中各数据的计算和测定方法如下：
1、收率=（银杏叶提取物的质量/银杏叶的质量）×100%；
2、黄酮醇苷、萜类内酯含量的测定方法 依据《中国药典》2015版银杏叶提取物的检验方法测定；
3、游离槲皮素、游离山奈素、游离异鼠李素含量的测定方法 依据银杏叶提取物补充检验方法测定；
4、芦丁含量的测定方法 依据《美国药典》银杏叶提取物的检验方法测定；
5、银杏酸含量的测定方法 依据《欧洲药典》银杏叶提取物的检验方法测定。
与现有技术相比，本发明的优点在于：本发明采用的优化比例的大孔吸附树脂和无机吸附剂为层析柱填料，在收率和含量相差不大，但对限度成分，具有显著的降低，所得到的银杏叶提取物游离黄酮、银杏酸低，同时该制备方法现有设备即能满足要求，非常适合工业化生产，本发明设计合理，可大规模推广。