阅读说明：本技术 局部制剂和方法 (Topical formulations and methods ) 是由 拉斯·埃里克·彼得斯 于 2018-02-07 设计创作，主要内容包括：本发明提供了局部制剂和方法,所述方法包括与用于皮肤和透皮递送的amphipol聚合物复合的带电荷生物活性剂,还任选包含TJ调节肽。(The present invention provides topical formulations and methods comprising a charged bioactive agent complexed with an ampiphol polymer for dermal and transdermal delivery, optionally further comprising a TJ modulating peptide.)

局部制剂和方法

发明领域

本发明提供了生物活性剂(包括带电荷的和/或较高分子量生物分子)的组合物和高效且有效地皮肤和透皮递送的方法以及其药物、化妆品和营养用途。

发明背景

人的皮肤最外层，即角质层(SC)，提供了对感染、脱水、化学品和机械应力的基本保护性生理屏障，因此也对通过皮肤递送药物、化妆品和营养剂构成非常困难的挑战。SC包含嵌入脂质基质中的多层角质层细胞，形成仅允许有效且中度亲脂的小分子经其被动分配并进入更深的皮肤层。SC中的细胞间层状脂双层对较大和/或更亲水的分子如例如蛋白质和核酸通过尤其成问题。

此外，带电荷的多肽和靶向皮下组织较深处位点的多核苷酸的有效透皮递送也面临另一个主要屏障。如上所述，SC中的脂双层形成有效皮肤递送的第一个难以穿透的化学屏障，而在分层表皮组织的较深处，由颗粒状角质形成细胞形成的颗粒层通过紧密的细胞间连接(TJ)网络相互连接，从而阻断较大分子进一步透皮通过的路径。TJ是复杂的配体门控蛋白质结构，并且对脂溶性化学载体如去污剂和常规用于通过亲脂性角质层的溶剂无反应。

在过去30多年中，现有技术几乎全部集中于克服SC屏障，并且已耗费大量资源研究各种化学、物理和机械技术，包括化学渗透增强剂、离子电渗、显微操作针、超声促渗、激光消融、热消融、射频消融、喷射注射器和电致孔。参见例如Prausnitz和Langer，透皮递送系统，Nat Biotechnol。2008年11月；26(11)：1261-8.2。化学方法增强透皮药物递送更为常用，包括使用化学增强剂提高SC的渗透性。尽管使用这些化学增强剂可以提高某些类型的治疗剂的渗透，但是某些增强剂的高水平会引起皮肤刺激和致敏问题。

具体而言，溶剂如乙醇、甲醇、氯仿和丙酮以及去污剂可以提取SC屏障脂质，有助于透化SC。广泛暴露于此类溶剂后人SC的形态变化，除角质细胞中产生缺陷外还包括层状双层的分相和紊乱。表面活性剂如十二烷基(月桂基)硫酸钠(SDS)和媒介物(例如丙二醇)提取脂质，使预先存在的腔隙域广泛扩展。此外，基于溶剂的渗透增强剂如氮酮(azone)、亚砜、尿素和FFA，不仅提取细胞外脂质，还改变SC脂质组织(相行为)，从而增强透皮递送和扩展细胞间结构域。但不幸的是，这些类型的增强剂只能最低程度地有效提高药物渗透皮肤的速率，并且可能引起皮肤损伤、刺激、致敏等。此外，并且重要的是，它们不能递送较高分子量和/或带电荷的生物活性剂。

在现有技术中，例如，离子型去污剂如SDS、十二烷基硫酸钠、脱氧胆酸盐胆汁酸和十六烷基三甲基溴化铵，已经在学术上被用于在两个水相间经脂质间相转移各种大小的蛋白质和多肽(胰岛素、牛血清白蛋白、溶菌酶)。该技术使用离子型去污剂进行带电荷的蛋白质的“疏水离子配对”，使它们在有机溶剂中溶解，此技术最初开发用于在反相HPLC蛋白质上进行HPLC蛋白色谱。尽管其具备透皮递送蛋白质药物的潜力，但该技术具有许多局限和缺点。

首先，离子型去污剂与蛋白质和多肽的结合行为取决于环境的pH值和离子强度，这必然限制药物或药用化妆品载体的可用配方选择。如果这些条件不在窄范围内，离子型去污剂将导致蛋白质的解折叠和变性，而不是表面结合。离子型去污剂的低临界胶束浓度(CMC)也是一个问题，因为它们对能够配制成离子对型疏水复合物的蛋白质量有很大的限制，特别是对于较大的蛋白质。鉴于它们较小的尺寸，通常需要高摩尔过量的去污剂完全包封蛋白质，并且蛋白质越大，所需的去污剂越多。但相应地，能够形成离子对型蛋白质复合物的去污剂最大量受其CMC的限制，因为在等于和大于CMC时，去污剂自缔合形成胶束在热力学上优于离子型去污剂-蛋白质结合。

最后，特别是对透皮递送而言最关键的是，离子型去污剂的溶膜和溶胞特性经常导致皮肤组织降解和炎症反应。因此，除了人工实验系统外，从未成功地证明基于与离子型去污剂离子配对的透皮递送大生物活性化合物的有效制剂。此外，少数公布的反式脂质蛋白转移病例几乎没有提供发生疏水离子配对的蛋白质功能和结构完整性的证据。

因此，本领域仍然需要开发能够通过皮肤屏障递送各种化妆品、药物和营养剂，特别是带电荷的和/或亲水性大分子(例如多肽和多核苷酸)的更安全且更有效的皮肤和透皮递送组合物和方法。

发明内容

本发明通过amphipol聚合物与带电荷的生物活性剂的疏水性离子配对促进它们经SC的扩散，但未使常规去污剂解离并最终破坏洗涤剂的作用，解决了本领域中长期存在且未能满足的需求。提供了能够进行皮肤和透皮递送的局部制剂，其包含通过分子间电荷相互作用与带电荷的生物活性剂非共价结合的amphipol聚合物(即离子配对)，从而提高其亲脂性并作为通过层状脂双层的分子伴侣。

在一个方面，提供了用于皮肤递送的局部制剂，其包含在皮肤病学可接受的媒介物中与至少一种带电荷生物活性剂离子配对的amphipol聚合物，例如洗剂、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、精华、乳液(例如，水包油、油包水、水包硅油、硅油包水、水包油包水、油包水包油、硅油包水包油等)、溶液剂(例如，水性或水-醇溶液)、无水基料(例如，口红或粉末)、面膜、去角质霜、眼霜等。优选的amphipol聚合物包括例如A8-35、PMAL-C8、PMAL-C12和PMAL-C16。在一些实施方案中，皮肤病学可接受的媒介物包含纳米乳剂(通常1至200nm，更优选10至100nm)。在本文示例的优选实施方案中，皮肤病学可接受的媒介物包含油包水纳米乳剂，其中所述amphipol聚合物/生物活性剂复合物分配至纳米乳剂的油相。

在另外的实施方案中，主题组合物还可包含水、保湿剂或润湿剂、表面活性剂、含硅油的化合物、UV剂、螯合剂、精油、皮肤增白剂、防腐剂、增稠剂、结构化剂、维生素、化妆品成分、药物成分、抗氧化剂和/或本说明书确定或本领域已知的其他成分。

在另一方面，本发明提供了一种经SC皮肤递送带电荷生物活性剂(例如化妆品和/或药物成分)的方法，其包括向受试者的皮肤施用局部制剂，该制剂包含在皮肤病学可接受的媒介物中与至少一种带电荷生物活性剂(例如透明质酸、肝素、层粘连蛋白、透明质酸酶抑制剂、RHAMM抑制剂、透明质酸合成酶、***素类似物、基质金属蛋白酶抑制剂、TNF-α拮抗剂、TGF-β超氧化物歧化酶、生长因子、细胞因子和/或马曲金(matrikine))进行离子配对的amphipol聚合物。

在一个具体实施方案中，本发明提供了一种改善有此需要的受试者的皮肤外观的方法，包括向受试者的皮肤施用由皮肤病学可接受的载体中与透明质酸离子配对的美容有效量的amphipol聚合物或片段或其类似物构成的局部制剂，以改善受试者的皮肤状况。在一个实施方案中，化妆品组合物还可包含抗氧化剂，例如虾青素、BHT或生育酚。在一个实施方案中，化妆品组合物还可包含生长因子、细胞因子和/或马曲金。

在另一方面，提供了用于透皮递送的局部制剂，其包括将主题聚合物/药剂复合物以及至少一种TJ调节肽结合在一起，作为进一步的化学载体以促进带电荷生物活性剂通过颗粒层中紧密的细胞间结合部。在一个此类实施方案中，提供了用于透皮递送的局部制剂，其包含在皮肤病学可接受的媒介物中与至少一种带电荷生物活性剂离子配对的amphipol聚合物以及至少一种TJ调节肽，例如洗液、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、精华素、乳液、溶液、无水基料、面膜、去角质霜、眼霜等。

在优选的实施方案中，皮肤病学可接受的媒介物为纳米乳液；还更优选地为油包水纳米乳液，其中amphipol聚合物/生物活性剂复合物分配至纳米乳液的油相，TJ调节肽分配至水相。在另一个优选的实施方案中，使用烷基化的TJ调节肽，它与聚合物-蛋白质复合物一起分配到纳米乳剂的油相中。在又一个优选的实施方案中，使用精氨酸/赖氨酸修饰的或门冬氨酸/谷氨酸修饰的TJ调节肽实现TJ调节肽的amphipol离子配对，与聚合物-蛋白质复合物一起分配到纳米乳剂的油相中。

在另一方面，本发明提供了透皮递送带电荷化妆品、药物和/或营养剂的方法，其包括向有此需要的受试者的皮肤施用局部制剂，该制剂包含在皮肤病学可接受的媒介物中与至少一种带电荷生物活性剂(例如多肽、多核苷酸和包括皮质类固醇、激素(例如人生长激素、***激素等)、化学去神经药(例如神经毒素)、疫苗、细胞因子、TNF-α拮抗剂、TGF-β、抗体、抗真菌剂、麻醉剂、胰岛素、阿片类药物等)在内的其他大分子)离子配对的amphipol聚合物以及至少一种TJ调节肽。

在一个具体实施方案中，本发明提供了改善有此需要的受试者的细纹和皱纹外观的方法，包括向受试者的皮肤局部施用有效量的抗皱组合物以减轻和改善细纹和皱纹的外观，所述抗皱组合物包含在皮肤病学上可接受的载体中与化学去神经剂(例如神经毒素蛋白、肽或肽模拟物)离子配对的amphipol聚合物以及TJ调节肽。

本发明还提供了治疗有此需要的受试者的皮肤疾病的方法，包括向受试者的皮肤施用治疗有效量的治疗组合物，所述治疗组合物包含在皮肤病学可接受的载体中与至少一种带电荷生物活性剂离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽，目的是治疗受试者的皮肤疾病。

还提供了一种提高带电荷的化妆品、药物和/或营养剂皮肤渗透的方法，包括向有此需要的受试者的皮肤施用一种组合物，所述组合物包含在皮肤病学可接受的媒介物中与至少一种带电荷的生物活性剂离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽，其中带电荷的生物活性剂的渗透相对于溶解形式的同一活性剂的渗透增大。

在另一方面，提供了用于皮肤和透皮递送化学去神经剂(例如神经毒素蛋白质、肽或肽模拟物)的局部制剂和方法，其包含在皮肤病学可接受的载体中与至少一种化学去神经剂离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。

在另一方面，提供了用于皮肤和透皮递送生长因子和其他激素(例如人生长激素、***等)的局部制剂和方法，其包括在皮肤病学可接受的载体中与激素离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。

在另一方面，提供了用于皮肤和透皮递送抗真菌剂(例如特比萘芬、伊曲康唑、硝酸咪康唑、噻苯哒唑、托萘酯、克霉唑和灰黄霉素)的局部制剂和方法，其包含在皮肤病学上可接受的载体中与抗真菌剂离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。

在另一方面，提供了用于皮肤和透皮递送疫苗(例如流感疫苗、甲/乙/丙型肝炎疫苗、麻腮风(MMR)疫苗、白喉破伤风疫苗、水痘(水痘)疫苗、肺炎球菌疫苗、脑膜炎球菌结合疫苗等)的局部制剂和方法，其包含在皮肤病学可接受的载体中与疫苗离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。视情况而定，可以共同配制或共同施用其他添加剂成分如佐剂。

在另一方面，提供了用于皮肤和透皮递送生长因子和其他激素如诸如人生长激素、***、***和其他孕激素、抗雄激素、抗***、雄激素和同化激素类、5-α还原酶抑制剂、垂体激素及其活性衍生物或类似物、甲状腺激素、垂体抑制剂、***诱导剂和降血糖药的局部制剂和方法，其包含在皮肤病学上可接受的载体中与至少一种激素离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。可以使用单一激素，或者可以使用激素组合。

在另一方面，提供了用于皮肤和透皮递送治疗性核酸(例如寡核苷酸、miRNA、shRNA、siRNA、DNA、RNA、mRNA、cDNA、双链核酸、单链核酸、反义序列等)的局部制剂和方法，其包含在皮肤病学可接受的载体中与治疗性核酸离子配对的amphipol聚合物，还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。在一些实施方案中，DNA是包含表达构建体的载体，用于表达一种或更多种治疗性多核苷酸或一种或更多种编码治疗性基因产物的多核苷酸。

现在通过引用附图对本发明进行更完整的描述，其中示出了本发明的某些实施方案。实际上，本公开可以以许多不同的形式来实现，并且不应该被理解为限于本文所阐述的实施方案；相反，提供这些实施方案是为了使本公开满足适用的法律要求。

附图说明

结合附图阅读以下详细描述时可最透彻地理解本发明。需要强调的是，根据惯例，附图的各个部件未按比例绘制。相反，各个部件的尺寸可任意放大或缩小，以便更清晰。附图中包含以下数字。

图1示出了在Franz扩散池试验中测量的三种不同制剂的相应透皮通量率图表。每个条顶部的标签显示MCPT-201经皮转移到接受药室的Franz池的速率，单位为mg/h/cm²。每个条上的标签显示指定保温时间期间通过0.64cm²猪皮肤转移的MCPT-201总量。

图2示出了比较在Franz扩散池试验中测量的含5％DMSO的本发明制剂优选实施方案和对照品的透皮通量率图表。

图3示出了源自基于DMSO的制剂的接收室的浓蛋白组分在离体神经支配小鼠膈肌上的相对生物活性。

图4示出了源自基于DMSO的制剂的接收室的浓蛋白组分在离体神经支配小鼠膈肌上的相对生物活性。

图5示出了源自本发明制剂的接收室的浓蛋白组分在离体神经支配小鼠膈肌上的相对生物活性。

图6示出了源自本发明制剂的接收室的浓蛋白组分在离体神经支配小鼠隔膜上的相对生物活性。

具体实施方式

在一个方面，提供了用于有效和高效皮肤递送的局部制剂，其包含在皮肤病学可接受的媒介物中与至少一种带电荷生物活性剂离子配对的amphipol聚合物，例如洗剂、乳膏剂、软膏剂、凝胶剂、精华、乳液(例如，水包油、油包水、水包硅油、硅油包水、水包油包水、油包水包油、硅油包水包油等)、溶液剂(例如，水性或水-醇溶液)、无水基料(例如，口红或粉末)、面膜、去角质霜、眼霜等。在另一方面，本发明制剂适合透皮递送，并且还包含至少一种TJ调节肽，以促进带电荷的生物活性剂通过颗粒层中的紧密连接。

本发明的组合物包含用于主题amphipol聚合物/带电荷的生物活性剂复合物的皮肤病学可接受的媒介物或载体。该组合物还可包含一种或更多种以下附加成分：水、保湿剂或润湿剂、表面活性剂、含硅油的化合物、UV剂、螯合剂、精油、皮肤增白剂、防腐剂、增稠剂、结构化剂、维生素、化妆品成分、药物成分、抗氧化剂和/或本说明书确定或本领域已知的其他成分或此类组分或此类组分混合物的任何组合。

还考虑了包含本发明组合物的药盒。在某些实施方案中，组合物被包含在容器中。容器可以是瓶子、分配器或包装，并且还可以包含适当的使用说明。容器可以分配预定量的组合物，例如每日用量。容器可在其表面上包含标记，该标记可为词语、缩写、图片或符号。

预期本说明书中讨论的任何实施方案均可通过本发明的任何方法或组合物执行，反之亦然。此外，本发明的组合物可用于实现本发明的方法。

还考虑了包含本发明组合物的产品。在非限制性方面，产品可以是化妆品。化妆品可以是本说明书的其他部分中描述的那些产品或本领域技术人员已知的那些产品。产品的非限制性实例包括润湿剂、乳霜、洗剂、皮肤柔软剂、凝胶、洗液、粉底、晚霜、口红、清洁剂、清新剂、爽肤水、防晒霜、面膜、抗衰老产品、除臭剂、止汗剂、香水、古龙水等。

在一些实施方案中，本发明的组合物可以是药学上或美容上雅致的或可以具有令人愉快的触觉性质。“药学上雅致”、“美容上雅致”和/或“令人愉快的触觉性质”描述了具有在皮肤上感到令人愉悦的特定触觉性质的组合物(例如，不太水或油腻的组合物、具有丝般质地的组合物、不粘或粘性的组合物等)。药学上或美容上雅致也可涉及组合物的乳脂性或润滑性，或涉及组合物的保湿性。

定义

如本文所用的“亲脂性”是指在脂肪、油类、脂类和非极性溶剂如有机溶剂中溶解的化合物。亲脂性化合物在水中略溶或不溶。因此，亲脂性化合物通常是疏水的。

如本文所用，“亲水性”是能够分子能够与水(H₂O)形成氢键的物理性质，在水和其他极性溶剂中溶解。术语“亲水的”和“极性的”可互换使用。亲水特性一般源自极性或带电荷的基团的存在，例如碳水化合物、磷酸根、羧酸根、硫酸根、氨基、巯基、硝基、羟基和其他类似基团。

相反，术语“疏水性”是从大量水中排斥的分子的物理性质，可以称为“非极性”或“无极性”，所有这些术语都可以与“疏水性”互换使用。通过纳入无极性基团可以赋予疏水性，所述无极性基团包括但不限于长链饱和和不饱和脂族烃基团和被一个或多个芳族、脂环族或杂环基团取代的此类基团。

术语“基本上”及其变形被定义为在很大程度上但不一定完全是本领域普通技术人员所理解的，并且在一个非限制性实施方案中，基本上是指10％以内、5％以内、1％以内或0.5％以内的范围。

当涉及数值时，术语“约”意指包括与规定量相比有一定变化，在一些实施方案中为+/-50％，在一些实施方案中为+/-20％，在一些实施方案中为+/-10％，在一些实施方案中为+/-5％，在一些实施方案中为+/-1％，在一些实施方案中为+/-0.5％，在一些实施方案中为+/-0.1％，因为此类变化同样适合于实施所公开的方法或采用所公开的组合物。

“局部施用”是指将组合物施用或涂布在皮肤和/或嘴唇的表面上。“局部制剂”包括适合局部施用于皮肤和/或嘴唇的组合物。此类组合物通常是皮肤病学上可接受的，因为将它们施用于嘴唇或皮肤时，没有不适当的毒性、不相容性、不稳定性、过敏反应等。本发明的局部制剂优选具有选定的黏度，以避免施用于皮肤后明显滴落或汇集。

术语“抑制”、“减少”或“减轻”或这些术语的任何变形包括任何可测量的降低或完全抑制以实现期望结果。术语“促进”或“增加”或这些术语的任何变形包括蛋白质或分子(例如，基质蛋白质如纤连蛋白、层粘连蛋白、胶原蛋白或弹性蛋白或大分子如透明质酸)的任何可测量的增加或产生以达到所需结果。

“治疗”或该术语的任何变形包括正在治疗的疾病、病症或症状或与所治疗的疾病、病症或症状相关的任何可测量的改善。

“预防”或该术语的任何变形意味着减缓、停止或逆转结果的进展。预防可以是结果进展的任何减慢。

术语“有效的”(该术语在说明书和/或权利要求书中使用)意指足以实现所需的、期望的或预期的结果。

词语“一个(a)”或“一个(an)”的使用，在权利要求书和/或说明书中结合术语“包含”使用时，可以意指“一个”，但也与“一个或更多个”、“至少一个”和“一个或一个以上”的意思一致。

如本说明书和权利要求书中所使用，词语“包含(comprising)”(和包含的任何形式如“包含(comprise)”和“包含(comprises)”)、“具有(having)”(和具有的任何形式如“具有(have)”和“具有(has)”)、“包括(including)”(和包括的任何形式如“包括(includes)”和“包括(include)”)或“含有(containing)”(和含有的任何形式如“含有(contains)和含有(contain)”)的使用是包括且开放的，不排除附加的、再引用的要素或方法步骤。

组合物及其使用方法可以“包含”、“主要包括(consist essentially of)”或“包括(consist of)”本说明书中公开的任何成分或步骤。

Amphipol

Amphipol是两亲性短聚合物，最初开发用于保持单个膜蛋白在其天然状态下以亲水性小复合物形式的水溶性(见例如Tribet等人，Amphipols:polymers that keepmembrane proteins soluble in aqueous solutions,Proc Natl Acad Sci U S A.93(26):15047-50(1996)；Popot等人，Amphipols:polymeric surfactants for membranebiology research Cell Mol Life Sci.60(8):1559-74(2003)；Chae等人，A new classof amphiphiles bearing rigid hydrophobic groups for solubilization andstabilization of membrane proteins Chemistry 18(31):9485-9490(2012)；Della Pia等人，Functionalized amphipols:a versatile toolbox for applications ofmembrane proteins in synthetic biology J.Membrane Biol.247(9-10):815-816(2014)。设计分子使其以非共价但准不可逆的方式结合膜蛋白的跨膜表面，这最初是通过修饰表面活性剂以携带大量疏水链来实现。迄今为止，除学术合成生物学外从未采用它们。

本发明人已经确定，这类特定的聚合物可有利地用于有效和高效地皮肤和透皮递送带电荷和/或更高分子量的生物分子，包括多肽、多核苷酸和其它疏水性大分子。提供了能够皮肤和透皮递送的局部制剂，其包含通过分子间电荷相互作用与所需生物活性剂非共价结合的amphipol聚合物(即离子配对)，从而增强生物活性剂的亲脂性并充当通过层状脂双层的分子伴侣。不受理论束缚，一旦疏水性聚合物-药剂复合物与SC层下胞外基质中的电解质接触，药剂(例如蛋白质)和聚合物之间的离子配对溶解，然后作为亲水性化合物释放出生物活性剂。

适合本文中使用的Amphipol聚合物为离子聚合物(即包含与亲脂基团或侧链交替的带电荷或可电离基团的聚合物)或者两亲性聚合物(其中所有亲水性基团均为离子基团，参与与蛋白质表面上反电荷的离子配对)。优选地，amphipol聚合物的分子尺寸和柔韧性使它们能够在多个位点与生物活性剂离子配对，确保解吸动力学缓慢并且有利于amphipol聚合物和生物活性剂之间的离子配对。本发明制剂和方法中使用的优选amphipol聚合物包括例如A8-35、PMAL-C8、PMAL-C12和PMAL-C16(可从Anatrace,Inc.Maumee，Ohio)获取，其化学结构如下所述。考虑在本文中使用的还有合适的衍生物和/或其官能团变体(见例如Chae等人和Della Pia等人，上文；也可见WO 1998/027434；WO 2008/058963；和美国专利号8,815,263和8,207,263，其公开内容均通过引用整体并入本文)，无论是目前已知或随后开发用于该目的或任何其他目的。

Amphipol A835：

PMAL-C8：

PMAL-C12：

PMAL-C16：

合适的amphipol聚合物的选择将取决于目标生物活性剂的净表面电荷和表面电荷分布，这是本领域技术人员容易确定的。对于例如具有零净表面电荷但具有正负表面电荷分布的分子，或者对于具有略微负净表面电荷的分子，可以使用两性amphipol聚合物，例如市售的PMAL系列。对于具有净负电荷的分子，可以使用具有净正电荷的amphipol聚合物。或者，只要聚合物/分子复合物的形成是在有利于其阳离子基团优先电离的pH下进行，也可用两性amphipol包封具有负净电荷的大分子。

本发明的amphipol聚合物相对于现有技术中常规使用的简单离子去污剂提供了明显优势，因为它们不具有去污剂的膜分解、溶胞和蛋白质变性特性，这些性质能够破坏表皮并引起炎症。此外，amphipol聚合物不具有典型离子去污剂的CMC限制，这些限制显著限制了能够用于包封蛋白质或其他大分子的去污剂量。

TJ-调节肽

TJ调节肽构成本发明的方法和组合物中的二级透皮载体，以改善生物活性剂的有效透皮通过。不受理论束缚，它们通过与TJ中蛋白质复合物间的蛋白质-蛋白质相互作用的直接竞争，直接竞争TJ中蛋白质复合物之间的蛋白质-蛋白质相互作用(闭锁蛋白和封闭蛋白)，具有瞬时提高细胞间TJ在表皮的颗粒层、棘层和基底层中渗透性的作用。

适合在本发明的方法和组合物中使用的TJ调节肽包括但不限于：透皮肽NH2-ACSSSPSKHCG-COOH(Chen等人，Nat Biotechnol.2006年4月；24(4)：455-60))；闭锁蛋白的第一和第二胞外环的合成仿生肽类似物，例如NH2-SNYYGSGLS-COOH、NH2-DRGYGTSLLGGSVG-COOH；以及封闭蛋白-肌动蛋白肽的合成仿生肽类似物。上文列出的TJ调节肽包含所有L-氨基酸、所有D-氨基酸或混合型L-/D-氨基酸衍生物、烷基-(C8-C14)-氨基酸衍生物、C-或N-末端烷基化或胆固醇改性的衍生物。在一些实施方案中，它们可以与其他非肽衍生的TJ调节剂如胆汁酸和Ca²⁺螯合剂组合进行配制。

生物活性剂

在主题组合物和方法中具有有利用途的生物活性剂，包括多肽、多核苷酸和其他带电荷的和/或疏水性大分子。

对于美容目的而言，带电荷的生物活性剂可有利地包含透明质酸、肝素、层粘连蛋白、透明质酸酶抑制剂(例如McCook等人，Clin Cosmet Investig Dermatol 8:443-8(2015))、RHAMM抑制剂(例如Tolg等人Am.J.Path.181：1250-70(2012)、透明质酸合成酶(例如Siiskonen等人，Front.Immunol.6:43(2015))、***素类似物(例如比马前列素、拉坦前列素等)、基质金属蛋白酶抑制剂(例如美国专利申请号2016/0326530；美国专利申请号2006/0074108)、TNF-α拮抗剂(例如美国专利号5,993,833和WO 2006/113487)、TGF-β(例如Ehrlich等人，Dermatol.Surg.32(5):618-25(2006))、超氧化物歧化酶、生长因子(例如人生长激素)、细胞因子和马曲金(见例如Aldag等人，Clin.Cosmet Investig Dermatol 9:411-19(2016))以及其模拟物、变体和衍生物。

对于药物目的而言，生物活性剂可有利地包含在皮肤病学可接受的媒介物中的皮质类固醇、激素(例如人生长激素、***等)、化学去神经剂(例如神经毒素蛋白、肽或肽模拟物)、疫苗、细胞因子、TNF-α拮抗剂、TGF-β、抗体、抗真菌剂、麻醉剂、胰岛素、阿片样物质等)以及至少一种TJ调节肽。

在一些实施方案中，提供用于皮肤递送透明质酸的局部制剂和方法，其包含在皮肤病学可接受的载体中与透明质酸或其片段或衍生物离子配对的amphipol聚合物。透明质酸是一种普遍存在的天然多糖和真皮的天然成分，它在皮肤的水合作用和弹性中起着重要作用。它是高水溶性的，因此很难通过SC递送。作为皮肤老化中的关键大分子，它的潜在用途和价值已得到非常充分的了解，有效的皮肤递送是一项长期寻求且尚未满足的需求。参见例如Stern and Maibach,Clin.Dermatol.26:106-122(2008)。

如本发明中所述制剂还可包含透明质酸降解抑制剂。术语“透明质酸降解抑制剂”意指能够减少或甚至阻断透明质酸胞外或胞内分解代谢的化合物，优选能够减少或甚至阻断透明质酸胞外分解代谢的化合物，更优选能够抑制皮肤中存在的胞外透明质酸酶的化合物。透明质酸降解抑制剂包括甘草甜素或甘草次酸及其模拟物、衍生物和/或变体以及McCook等人(同上)公开的叶绿素铜钠络合物和叶绿素类似物。类似地，如本发明中所述制剂还可包含一种或多种透明质酸合成酶，包括例如HAS-1、HAS-2和/或HAS-3(参见例如,Siiskonen等人(同上)；Papakonstantinou等人,Dermato-Endocronol 4(3):253-58(2012)。

在一些实施方案中，提供了用于皮肤和透皮递送化学去神经剂(例如神经毒素蛋白质、肽或肽模拟物)的局部制剂和方法，其包含在皮肤病学可接受的载体中与至少一种化学去神经剂离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。适合在本发明中使用的神经毒素蛋白包括例如细菌神经毒素如源自肉毒梭菌、酪酸梭菌或巴氏梭菌的毒素；源自Conus marine snail的芋螺毒素(参见例如美国专利号9,566,227，其公开内容已通过引用明确地并入本文)；源自各种蛇类物种的α-神经毒素(包括α-金环蛇毒)(参见例如WO 2009/05585，其公开内容已通过引用明确地并入本文)和waglerin-1和/或-2(参见例如美国专利号9,550,808，其公开内容已通过引用明确地并入本文)以及其片段、模拟物和/或衍生物。在一个实施方案中，本发明包括在皮肤病学可接受的载体中与至少一种α-神经毒素离子配对的amphipol聚合物以及至少一种TJ调节肽。在一个实施方案中，本发明包括在皮肤病学可接受的载体中与至少一种肉毒毒素(可为A型、B型、C1型、D型、E型、F型或G型肉毒毒素)离子配对的amphipol聚合物以及至少一种TJ调节肽。在另一个实施方案中，本发明包括在皮肤病学可接受的载体中与至少一种α-神经毒素或waglerin-1或其片段或衍生物离子配对的amphipol聚合物以及至少一种TJ调节肽。

在一些实施方案中，提供了用于皮肤和透皮递送抗真菌剂(例如特比萘芬、伊曲康唑、硝酸咪康唑、噻苯哒唑、托萘酯、克霉唑和灰黄霉素)的局部制剂和方法，其包含在皮肤病学上可接受的载体中与抗真菌剂离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。

在一些实施方案中，提供了用于皮肤和透皮递送疫苗(例如流感疫苗、甲/乙/丙型肝炎疫苗、麻腮风(MMR)疫苗、白喉破伤风疫苗、水痘(水痘)疫苗、肺炎球菌疫苗、脑膜炎球菌结合疫苗等)的局部制剂和方法，其包含在皮肤病学可接受的载体中与疫苗离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。视情况而定，可以共同配制或共同施用其他添加剂成分如佐剂。

在一些实施方案中，提供了局部制剂和方法，用于皮肤和透皮递送生长因子和其他激素例如人生长激素、***(例如***、雌三醇、雌酮、炔雌醇、美雌醇、己烯雌酚、双烯雌酚、表雌三醇、雌酮硫酸酯哌嗪和赤霉烯酮)；***和其他孕激素(例如烯丙雌醇、去氢孕酮、炔雌烯醇、甲基炔诺酮、异炔诺酮、炔诺酮、醋酸炔诺酮、孕二烯酮、左炔诺孕酮、甲羟孕酮和甲地孕酮)；抗雄激素(例如醋酸环丙孕酮和达那唑)；抗***例如他莫昔芬和环硫雄醇以及芳香酶抑制剂、依西美坦和4-羟基雄甾烯二酮及其衍生物；雄激素和同化激素类药(例如睾酮、***、醋酸氯司替勃、屈他雄酮、夫拉扎勃、诺龙、氧雄龙、司坦唑醇、醋酸群勃龙、二氢睾酮、17-α-甲基-19-去***和氟***)；5-α还原酶抑制剂如非那雄胺、妥罗雄脲、LY-191704和MK-306；垂体激素及其活性衍生物或类似物，如促肾上腺皮质激素、促甲状腺激素、***(FSH)、促黄体激素(LH)和***释放激素(GnRH)；甲状腺激素(例如降钙素、甲状腺素和碘塞罗宁以及抗甲状腺药物如卡比马唑和丙硫氧嘧啶)；各种药剂如奥曲肽；垂体抑制剂如溴隐亭；***诱导剂克罗米芬以及和降血糖药(例如胰岛素、氯磺丙脲、格列本脲、格列齐特、格列吡嗪、妥拉磺脲、甲苯磺丁脲、二甲双胍、吡格列酮、罗格列酮和曲格列酮)，其包含在皮肤病学可接受的载体中与至少一种激素离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。可以使用单一激素，或者可以使用激素组合。

在一些实施方案中，提供了局部制剂和方法，用于皮肤和透皮递送皮质类固醇(例如倍他米松、戊酸倍他米松、可的松、***、***21-磷酸酯、氟氢可的松、氟米松、醋酸氟轻松、醋酸氟轻松***、氟新诺龙(fluocinolone)、氟轻松(fluocinoloneacetonide)、氟可龙、哈西奈德、卤***、氢化可的松、氢化可的松17-戊酸酯、氢化可的松17-丁酸酯、氢化可的松21-醋酸酯甲泼尼龙、***龙、***龙21-磷酸酯、***、曲安西龙、曲安奈德)，其包含在皮肤病学可接受的载体中与皮质类固醇离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。可以使用单一皮质类固醇，或者可以使用皮质类固醇的组合。

在一些实施方案中，提供了局部制剂和方法，用于皮肤和透皮递送非甾体类抗炎药(NSAID)(例如阿司匹林、双水杨酯、二氟尼柳、布洛芬、酮洛芬、萘丁美酮、吡罗昔康、萘普生、双氯芬酸、吲哚美辛、舒林酸、托美丁、依托度酸、detorolac、奥沙普秦、塞来昔布及其药学上可接受的衍生物)，其包含在皮肤病学可接受的载体中与NSAID离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。可以使用单一NSAID，或者可以使用NSAID组合。

在一些实施方案中，提供了局部制剂和方法，用于皮肤和透皮递送麻醉剂(例如苯佐卡因、利多卡因、丁卡因、布比卡因、***、依替卡因、甲哌卡因、普拉卡因(pramoxine)、丙胺卡因(prilocalne)、普鲁卡因、氯普鲁卡因(cnloroprocaine)、羟普鲁卡因、丙美卡因、罗哌卡因、达克罗宁、地布卡因、丙氧卡因、氯二甲酚、辛***、地昔卡因、二胺卡因、海克卡因、左布比卡因、丙氧卡因、吡咯卡因、利索卡因、罗多卡因及其药学上可接受的衍生物和生物电子等排体，其包含在皮肤病学可接受的载体中与麻醉剂离子配对的amphipol聚合物，并且还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。

在一些实施方案中，提供了局部制剂和方法，用于皮肤和透皮递送治疗性核酸(例如，寡核苷酸、miRNA、shRNA、siRNA、DNA、RNA、mRNA、cDNA、双链核酸、单链核酸、反义序列等)，其包含在皮肤病学可接受的载体中与治疗性核酸离子配对的amphipol聚合物，还任选包含至少一种用于透皮递送的TJ调节肽。在一些实施方案中，DNA是一种载体，包含用于表达一种或更多种治疗性多核苷酸或一种或更多种编码治疗性基因产物的多核苷酸的表达构建体。

本文中考虑递送的还有营养剂例如维生素、矿物质和氨基酸以及草药如印楝、姜黄、檀香等。

此外，局部皮肤病学可接受的载体还可包含通常用于化妆品和皮肤制剂中的其他成分。此类成分的非限制性实例包括胶原蛋白、α羟基酸、α酮酸、聚合羟基酸、润湿剂、海洋提取物和抗氧化剂如抗坏血酸(维生素C)、生育酚(维生素E)、虾青素和视黄醇(维生素A)、超氧化物歧化酶和/或化妆品可接受的盐类、酯类、酰胺类或它们的其他衍生物。本文中考虑使用的还有用于改善皮肤屏障修复的角质层脂质，例如神经酰胺、胆固醇和游离脂肪酸。化妆品成分包括能够改善皮肤中氧气供应的成分，以及植物提取物如马尾提取物、七叶树提取物、玫瑰提取物和薰衣草提取物。合适成分的其他非限制性实例包括视黄醇或视黄醇衍生物或类似物的长链脂肪酸酯，例如其中酯的酰基部分选自肉豆蔻酸、棕榈酸和硬脂酸的那些脂肪酸酯。

合适成分的其他非限制性实例包括防晒剂，例如选自甲氧基肉桂酸辛酯、对氨基苯甲酸、对氨基苯甲酸乙酯、对氨基苯甲酸异丁酯、氨基苯甲酸甘油酯、对二甲氨基苯甲酸、邻氨基苯甲酸甲酯、邻氨基苯甲酸薄荷酯、邻氨基苯甲酸苯酯、邻氨基苯甲酸苄酯、邻氨基苯甲酸苯乙酯、邻氨基苯甲酸芳樟酯、邻氨基苯甲酸松油酯、邻氨基苯甲酸环己烯酯、水杨酸戊酯、水杨酸苯酯、水杨酸苄酯、水杨酸薄荷酯、水杨酸甘油酯、水杨酸二丙二醇酯、肉桂酸甲酯、肉桂酸苄酯、α-苯基肉桂腈、肉桂酰基丙酮酸丁酯、伞形酮、甲基乙酰基伞形酮、七叶亭、甲基七叶亭、瑞香素、七叶甙、瑞香甙、二苯基丁二烯、均二苯代乙烯、二亚苄基丙酮、亚苄基苯乙酮、2-萘酚-3,6-二磺酸钠、2-萘酚-6,8-二磺酸钠、二羟基萘甲酸、二羟基萘甲酸盐、邻羟基联苯二磺酸盐、对羟基联苯基二磺酸盐、7-羟基香豆素、7-甲基香豆素、3-苯基香豆素、2-乙酰基-3-溴吲唑、苯基苯并噁唑、甲基萘并噁唑、芳基苯并噻唑、重硫酸奎宁、硫酸奎宁、盐酸奎宁、油酸奎宁、鞣酸奎宁、8-羟基喹啉盐、2-苯基喹啉、羟基取代的二苯甲酮、甲氧基取代的二苯甲酮、尿酸、紫脲酸、鞣酸、鞣酸六***、氢醌、羟苯甲酮、舒利苯酮、二羟苯甲酮、苯并间苯二酚、2,2',4,4'-四羟基二苯甲酮、2,2'-二羟基-4,4'-二甲氧基二苯甲酮、辛苯酮、4-异丙基二苯甲酰甲烷、丁基甲氧基二苯甲酰甲烷、依托立林和4-异丙基二苯甲酰甲烷。

预期本发明的组合物可包含任何数量的本说明书中所讨论成分。组合物还可包含本说明书中所描述其他成分的任何数量的组合(例如，着色剂或其他化妆品或药物成分)。组合物中任何成分的浓度可以变化。在非限制性实施方案中，例如，组合物可以包含，基本上包括或按其最终形式看包括例如至少约0.0001％、0.0002％、0.0003％、0.0004％、0.0005％、0.0006％、0.0007％、0.0008％、0.0009％、0.0010％、0.0011％、0.0012％、0.0013％、0.0014％、0.0015％、0.0016％、0.0017％、0.0018％、0.0019％、0.0020％、0.0021％、0.0022％、0.0023％、0.0024％、0.0025％、0.0026％、0.0027％、0.0028％、0.0029％、0.0030％、0.0031％、0.0032％、0.0033％、0.0034％、0.0035％、0.0036％、0.0037％、0.0038％、0.0039％、0.0040％、0.0041％、0.0042％、0.0043％、0.0044％、0.0045％、0.0046％、0.0047％、0.0048％、0.0049％、0.0050％、0.0051％、0.0052％、0.0053％、0.0054％、0.0055％、0.0056％、0.0057％、0.0058％、0.0059％、0.0060％、0.0061％、0.0062％、0.0063％、0.0064％、0.0065％、0.0066％、0.0067％、0.0068％、0.0069％、0.0070％、0.0071％、0.0072％、0.0073％、0.0074％、0.0075％、0.0076％、0.0077％、0.0078％、0.0079％、0.0080％、0.0081％、0.0082％、0.0083％、0.0084％、0.0085％、0.0086％、0.0087％、0.0088％、0.0089％、0.0090％、0.0091％、0.0092％、0.0093％、0.0094％、0.0095％、0.0096％、0.0097％、0.0098％、0.0099％、0.0100％、0.0200％、0.0250％、0.0275％、0.0300％、0.0325％、0.0350％、0.0375％、0.0400％、0.0425％、0.0450％、0.0475％、0.0500％、0.0525％、0.0550％、0.0575％、0.0600％、0.0625％、0.0650％、0.0675％、0.0700％、0.0725％、0.0750％、0.0775％、0.0800％、0.0825％、0.0850％、0.0875％、0.0900％、0.0925％、0.0950％、0.0975％、0.1000％、0.1250％、0.1500％、0.1750％、0.2000％、0.2250％、0.2500％、0.2750％、0.3000％、0.3250％、0.3500％、0.3750％、0.4000％、0.4250％、0.4500％、0.4750％、0.5000％、0.5250％、0.0550％、0.5750％、0.6000％、0.6250％、0.6500％、0.6750％、0.7000％、0.7250％、0.7500％、0.7750％、0.8000％、0.8250％、0.8500％、0.8750％、0.9000％、0.9250％、0.9500％、0.9750％、1.0％、1.1％、1.2％、1.3％、1.4％、1.5％、1.6％、1.7％、1.8％、1.9％、2.0％、2.1％、2.2％、2.3％、2.4％、2.5％、2.6％、2.7％、2.8％、2.9％、3.0％、3.1％、3.2％、3.3％、3.4％、3.5％、3.6％、3.7％、3.8％、3.9％、4.0％、4.1％、4.2％、4.3％、4.4％、4.5％、4.6％、4.7％、4.8％、4.9％、5.0％、5.1％、5.2％、5.3％、5.4％、5.5％、5.6％、5.7％、5.8％、5.9％、6.0％、6.1％、6.2％、6.3％、6.4％、6.5％、6.6％、6.7％、6.8％、6.9％、7.0％、7.1％、7.2％、7.3％、7.4％、7.5％、7.6％、7.7％、7.8％、7.9％、8.0％、8.1％、8.2％、8.3％、8.4％、8.5％、8.6％、8.7％、8.8％、8.9％、9.0％、9.1％、9.2％、9.3％、9.4％、9.5％、9.6％、9.7％、9.8％、9.9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％、20％、21％、22％、23％、24％、25％、26％、27％、28％、29％、30％、35％、40％、45％、50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或99％或本文中可得到的任何范围的本说明书和权利要求书中所述的至少一种成分。在非限制性方面，百分比可以按总组合物的重量或体积来计算。本领域普通技术人员将理解，浓度可以随给定组合物中成分的添加、取代和/或减少而变化。

媒介物

本发明的组合物可包括或掺入所有类型的媒介物和载体中。媒介物或载体可以是药学上或皮肤病学上可接受的媒介物或载体。媒介物或载体的非限制性实例包括乳液(例如，油包水、水包油包水、水包油、水包硅油、硅油包水、油包水包油、硅油包水包油乳液)、乳膏、洗液、溶液(水溶液和水-醇)、无水基料(如口红和粉剂)、凝胶、面膜、去死皮剂和软膏。变化和其他适当的媒介物对于技术人员来说是显而易见的，并且在本发明中使用。在某些方面，化合物、成分和试剂的浓度和组合可按一定方式选择，使组合物在化学上相容，并且不会形成从成品中沉淀的复合物。

组合物可以配制成使用期间每天局部皮肤施用至少1、2、3、4、5、6、7次或更多次。在本发明的其他方面，组合物可以为储存稳定的或颜色稳定的或两者兼具。还可以预期，组合物的黏度可以选择以达到所需结果，例如取决于所需组合物的类型，此类组合物的黏度可以为约1cps至远超1Mcps或任何范围或本文中得到的整数(例如，按照25℃下在Brookfield黏度计上用TC转子以2.5rpm测量时为2cps、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900、1000、2000、3000、4000、5000、6000、7000、8000、9000、10000、20000、30000、40000、50000、60000、70000、80000、90000、100000、200000、300000、400000、500000、600000、700000、800000、900000、1000000、2000000、3000000、4000000、5000000、10000000cps等)。

本发明的组合物可以具有UVA和UVB吸收性质。该组合物可以具有2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60或以上或本发明中的任何整数或导数的防晒系数(SPF)。该组合物可以是防晒洗液、喷雾或乳膏。

除发明人公开的特定成分组合外，组合物还可以包含其他成分，例如化妆品成分和药物成分。这些附加成分的非限制性实例在以下小节中描述。

化妆品成分

CTFA《国际化妆品原料字典和手册》(International Cosmetic IngredientDictionary and Handbook)(2004和2008)描述了本发明的上下文中可以使用的各种非限制性化妆品成分。这些成分类别的实例包括：芳香剂(人造和天然；例如葡萄糖酸、苯氧乙醇和三乙醇胺)、着色剂和颜料成分(例如，蓝色1、蓝色1色淀、红色40、二氧化钛、D&C蓝色4号、D&C绿色5号、D&C橙色4号、D&C红色17号、D&C红色33号、D&C紫色2号、D&C黄色10号、D&C黄色11号)、矫味剂/芳香剂(例如，甜菊(甜叶菊)提取物和薄荷醇)、吸附剂、润滑剂、溶剂、润湿剂(包括例如润肤剂、保湿剂、成膜剂、闭塞剂和影响皮肤天然保湿机制的药剂)、拒水剂、UV吸收剂(物理和化学吸收剂，如对氨基苯甲酸(“PABA”)和相应的PABA衍生物、二氧化钛、氧化锌等)、精油、维生素(如A、B、C、D、E和K)、痕量金属(如锌、钙和硒)、抗刺激剂(例如类固醇和非甾体类抗炎药)、植物提取物(如芦荟、洋甘菊、黄瓜提取物、银杏、人参和迷迭香)、抗微生物剂、抗氧化剂(如虾青素、BHT、超氧化物歧化酶和生育酚)、螯合剂(如EDTA二钠和EDTA四钠)、防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、pH值调节剂(例如氢氧化钠和枸橼酸)、吸收剂(例如，淀粉辛烯基琥珀酸铝、高岭土、玉米淀粉、燕麦淀粉、环糊精、滑石和沸石)、皮肤漂白和亮白剂(例如氢醌和烟酰胺乳酸盐)、保湿剂(例如山梨糖醇、尿素、甲基葡萄糖-20、浮游生物提取物和甘露醇)、去角质剂、防水剂(例如，硬脂酸镁/氢氧化铝)、皮肤调理剂(例如，芦荟提取物、尿囊素、红没药醇、神经酰胺、聚二甲基硅氧烷、透明质酸、生物糖胶-1、乙基己基甘油、戊二醇、氢化聚癸烯、辛基十二烷基油酸酯和甘草酸二钾)。在以下小节中提供了这些成分中一些成分的非限制性实例。

UV吸收剂

可与本发明的组合物组合使用的UV吸收剂包括化学和物理防晒剂。可以使用的化学防晒剂的非限制性实例包括对氨基苯甲酸(PABA)、PABA酯(PABA甘油酯、PABA戊酰基二甲酯和PABA辛基二甲酯)、PABA丁酯、PABA乙酯、PABA乙基二羟丙酯、二苯甲酮(羟苯酮、舒利苯酮、二苯甲酮和二苯甲酮1至12)、肉桂酸酯(甲氧基肉桂酸辛酯、对甲氧基肉桂酸异戊酯、甲氧基肉桂酸辛酯、西诺沙酯、甲基肉桂酸二异丙酯、DEA-甲氧基肉桂酸酯、二异丙基肉桂酸乙酯、辛酸二甲氧基肉桂酸甘油酯和甲氧基肉桂酸乙酯)、肉桂酸酯类、水杨酸酯(甲基水杨醇)、水杨酸苄基酯、水杨酸甘油酯、水杨酸异丙基苄基酯等)、邻氨基苯甲酸酯类、尿酸乙酯、胡莫柳酯、辛水杨酯、二苯甲酰甲烷衍生物(例如阿伏苯宗)、奥曲西嗪、辛基三嗪酮、二油酰三油酸酯、氨基苯甲酸甘油酯、二羟基丙酮、乙基己基三嗪酮、二辛基丁酰胺三嗪酮、亚苄基丙二酸酯聚硅氧烷、对苯二甲酰亚胺二樟脑或磺酸、苯基二苯并咪唑二磺酸二钠、苯甲酸二乙基氨基羟基苯甲酰酯、苯甲酸二乙基氨基苯甲酰苯酯、双苯并***基苯基乙基己基三嗪、二苯***三硅氧烷、亚甲基双苯并***基四甲基丁基苯酚、双乙基己氧基苯酚甲氧基苯基三嗪、4-甲基亚苄基樟脑和4-甲氧基肉桂酸异戊酯。物理防晒剂的非限制性实例包括高岭土、滑石、凡士林和金属氧化物(例如，二氧化钛和氧化锌)。

润湿剂

可与本发明组合物一起使用的润湿剂的非限制性实例包括氨基酸、硫酸软骨素、双甘油、赤藓糖醇、果糖、葡萄糖、甘油、甘油聚合物、乙二醇、1,2,6-己三醇、蜂蜜、透明质酸、氢化蜂蜜、氢化淀粉水解物、肌醇、乳糖醇、麦芽糖醇、麦芽糖、甘露醇、天然调湿因子、PEG-15丁二醇、浮游生物提取物、聚甘油山梨糖醇、吡咯烷酮羧酸盐、PCA钾、丙二醇、葡萄糖醛酸钠、PCA钠、山梨糖醇、蔗糖、海藻糖、尿素和木糖醇。

其他实例包括乙酰化羊毛脂、乙酰化羊毛脂醇、丙氨酸、藻类提取物、库拉索芦荟、芦荟提取物、芦荟凝胶、木槿花提取物、杏(Prunus armeniaca)仁油、精氨酸、门冬氨酸精氨酸、山金车提取物、门冬氨酸、鳄梨(Persea gratissima)油、屏障鞘脂、丁醇、蜂蜡、山萮醇、β-谷甾醇、桦树(Betula alba)树皮提取物、琉璃苣(Borago officinalis)提取物、假叶树(Ruscus aculeatus)提取物、丁二醇、金盏花提取物、金盏花油、小烛树(Euphorbiacerifera)蜡、菜籽油、辛酸/癸酸甘油三酯、豆蔻(Elettaria cardamomum)油、巴西棕榈蜡(Copernicia cerifera)蜡、胡萝卜(Daucus carota sativa)油、蓖麻(Ricinus communis)油、神经酰胺、地蜡、鲸蜡硬脂醇聚醚-5、鲸蜡硬脂醇聚醚-12、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、辛酸鲸蜡硬脂酯、鲸蜡醇聚醚-20、鲸蜡醇聚醚-24、十六烷基乙酸酯、十六烷基辛酸酯、十六烷基棕榈酸酯、洋甘菊(Anthemis nobilis)油、胆固醇、胆固醇酯、胆固醇羟基硬脂酸酯、枸橼酸、鼠尾草(Salvia sclarea)油、可可(Theobroma cacao)黄油、椰油醇-辛酸酯/癸酸酯、椰子(Cocos nucifera)油、胶原蛋白、胶原蛋白氨基酸、玉米(Zea mays)油、脂肪酸、油酸癸酯、硅氧聚合体烷、聚二甲基硅氧醇、己二酸二辛酯、琥珀酸二辛酯、二聚季戊四醇六辛酸酯/六癸酸酯、DNA、赤藓糖醇、乙氧基二甘醇、亚油酸乙酯、蓝桉油、月见草(Oenothera biennis)油、脂肪酸、天竺葵油、葡萄糖胺、葡萄糖谷氨酸、谷氨酸、甘油聚醚-26、丙三醇、甘油、二硬脂酸甘油酯、羟基硬脂酸甘油酯、月桂酸甘油酯、亚油酸甘油酯、肉豆蔻酸甘油酯、油酸甘油酯、硬脂酸甘油酯、硬脂酸甘油酯SE、甘氨酸、硬脂酸乙二醇酯、硬脂酸乙二醇酯SE、糖胺聚糖、葡萄(Vitis vinifera)籽油、榛子(Corylus americana)坚果油、榛子(Corylusavellana)坚果油、己二醇、透明质酸、杂红花(Carthamus tinctorius)油、氢化蓖麻油、氢化椰油甘油酯、氢化椰子油、氢化羊毛脂、氢化卵磷脂、氢化棕榈甘油酯、氢化棕榈仁油、氢化大豆油、氢化牛油甘油酯、氢化植物油、水解胶原蛋白、水解弹性蛋白、水解糖胺聚糖、水解角蛋白、水解大豆蛋白、羟基化羊毛脂、羟脯氨酸、硬脂酸异十六烷酯、硬脂酰基硬脂酸异十六烷酯、油酸异癸酯、异硬脂酸异丙酯、羊毛酸异丙酯、肉豆蔻酸异丙酯、棕榈酸异丙酯、硬脂酸异丙酯、异硬脂酰胺DEA、异硬脂酸、异硬脂酰乳酸、异硬脂醇新戊酸酯、茉莉(Jasminum officinale)油、希蒙得木(Buxus chinensis)油、海带、苦葵(Aleuritesmoluccana)坚果油、乳酰胺MEA、羊毛脂醇聚醚-16、羊毛脂醇聚醚-10醋酸酯、羊毛脂、羊毛脂酸、羊毛脂醇、羊毛脂油、羊毛脂蜡、薰衣草(Lavandula angustifolia)油、卵磷脂、柠檬(Citrus medica limonum)油、亚油酸、亚麻酸、澳洲坚果油、麦芽糖醇、母菊(Chamomillarecutita)油、甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯、甲基硅烷醇PCA、矿物油、貂油、黄褐色被孢霉油、肉豆蔻醇乳酸酯、肉豆蔻醇肉豆蔻酸酯、肉豆蔻醇丙酸酯、新戊二醇二辛酸酯/二癸酸酯、辛基十二烷醇、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、辛基十二醇硬脂酰基硬脂酸酯、羟基硬脂酸辛酯、棕榈酸辛酯、水杨酸辛酯、硬脂酸辛酯、油酸、橄榄(Olea europaea)油、橙(Citrus aurantiumdulcis)油、棕榈(Elaeis guineensis)油、棕榈酸、泛硫乙胺、泛醇、泛醇***，石蜡、PCA、桃(Prunus persica)仁油、花生(Arachis hypogaea)油、PEG-8° C12-18酯、PEG-15椰油胺、PEG-150二硬脂酸酯、PEG-60甘油基异硬脂酸酯、PEG-5甘油基硬脂酸酯、PEG-30甘油基硬脂酸酯、PEG-7氢化蓖麻油、PEG-40氢化蓖麻油、PEG-60氢化蓖麻油、PEG-20甲基葡萄糖倍半硬脂酸酯、PEG-40脱水山梨糖醇全油酸酯、PEG-5大豆甾醇、PEG-10大豆甾醇、PEG-2硬脂酸酯、PEG-8硬脂酸酯、PEG-20硬脂酸酯、PEG-32硬脂酸酯、PEG-40硬脂酸酯、PEG-50硬脂酸酯、PEG-100硬脂酸酯、PEG-150硬脂酸酯、十五内酯、薄荷(Mentha piperita)油、凡士林、磷脂、浮游生物提取物、聚氨基糖缩合物、聚甘油-3二异硬脂酸酯、聚季铵盐-24、聚山梨酯20、聚山梨酯40、聚山梨酯60、聚山梨酯80、聚山梨酯85、肉豆蔻酸钾、棕榈酸钾、丙二醇、丙二醇二辛酸酯/二癸酸酯、丙二醇二辛酸酯、丙二醇二壬酸酯、丙二醇月桂酸酯、丙二醇硬脂酸酯、丙二醇硬脂酸酯SE、PVP、吡哆醇二棕榈酸酯、视黄醇、棕榈酸视黄酯、大米(Oryza sativa)糠油、RNA、迷迭香(Rosmarinus officinalis)油、玫瑰油、红花(Carthamus tinctorius)油、鼠尾草(Salvia officinalis)油、檀香(檀香专辑)油、丝氨酸、血清蛋白、芝麻(Sesamumindicum)油、乳木果油(Butyrospermum parkii)、丝粉、硫酸软骨素钠、透明质酸钠、乳酸钠、棕榈酸钠、PCA钠、聚谷氨酸钠、可溶性胶原蛋白、山梨糖醇酐月桂酸酯、脱水山梨糖醇油酸酯、脱水山梨糖醇棕榈酸酯、脱水山梨糖醇倍半油酸酯、脱水山梨糖醇硬脂酸酯、山梨糖醇、大豆(Glycine soja)油、鞘脂、角鲨烷、角鲨烯、硬脂酰胺MEA-硬脂酸酯，硬脂酸，硬脂酰二甲基硅氧烷，硬脂酰三甲基硅烷、硬脂醇、硬脂酰甘草酸酯、庚酸十八醇酯、硬脂酸十八醇酯、葵花(Helianthus annuus)籽油、甜杏仁(Prunus amygdalus dulcis)油、合成蜂蜡、生育酚、生育酚乙酸酯、生育酚亚油酸酯、山萮酸甲酯、新戊酸十三醇酯、硬脂酸十三醇酯、三乙醇胺、硬脂酸甘油酯、尿素、植物油、水、蜡、小麦(Triticum vulgare)胚芽油和依兰(Cananga odorata)油。

抗氧化剂

可与本发明的组合物一起使用的抗氧化剂的非限制性实例包括虾青素、乙酰半胱氨酸、抗坏血酸多肽、抗坏血酸二棕榈酸酯、抗坏血酸甲基硅烷醇果胶酸酯、抗坏血酸棕榈酸酯、抗坏血酸硬脂酸酯、BHA、BHT、叔丁基氢醌、半胱氨酸、盐酸半胱氨酸、二戊基对苯二酚、二叔丁基对苯二酚、二油基生育酚甲基硅烷醇、抗坏血酸硫酸二钠、硫代二丙酸二硬脂酯、硫代二丙酸二十二烷基酯、没食子酸十二烷基酯、异抗坏血酸、抗坏血酸酯、阿魏酸乙酯、阿魏酸、没食子酸酯、对苯二酚、巯基乙酸异辛酯、曲酸、抗坏血酸镁、抗坏血酸磷酸镁、抗坏血酸甲基硅醇、天然植物抗氧化剂如绿茶或葡萄籽提取物、去甲二氢愈创木酸、没食子酸辛酯、苯基硫代乙醇酸、抗坏血酸生育酚磷酸钾、亚硫酸钾、没食子酸丙酯、醌类、迷迭香酸、抗坏血酸钠、亚硫酸氢钠、异抗坏血酸钠、偏亚硫酸氢钠、亚硫酸钠、超氧化物歧化酶、硫代乙醇酸钠、山梨醇糠醛、硫二甘醇、硫代二乙酰胺、硫代二乙醇酸、硫代乙醇酸、硫代乳酸、硫代水杨酸、生育酚聚醚-5、生育酚聚醚-10、生育酚聚醚-12、生育酚聚醚-18、生育酚聚醚-50、生育酚、托可索仑、生育酚乙酸酯、生育酚亚油酸酯、生育酚烟酸酯、生育酚琥珀酸酯和三(壬基苯基)亚磷酸酯。

结构化剂

在其他非限制性方面，本发明的组合物可包含结构化剂。结构化剂在某些方面有助于为组合物提供流变学特性，以便对组合物的稳定性作出贡献。在其他方面，结构化剂也可以作为乳化剂或表面活性剂。结构化剂的非限制性实例包括硬脂酸、棕榈酸、硬脂醇、鲸蜡醇、山萮醇、硬脂酸、平均环氧乙烷单元约1至约21的硬脂醇的聚乙二醇醚、平均环氧乙烷单元约1至约5个的鲸蜡醇的聚乙二醇醚及其混合物。

乳化剂

在本发明的某些方面，组合物不包含乳化剂。但是，在其他方面，组合物可包含一种或更多种乳化剂。乳化剂可降低相间的界面张力，并改善乳液的配方和稳定性。乳化剂可以是非离子型、阳离子型、阴离子型和两性离子型乳化剂(参见McCutcheon's(1986)；美国专利号5,011,681；4,421,769；3,755,560)。非限制性实例包括甘油的酯类、丙二醇的酯类、聚乙二醇的脂肪酸酯类、聚丙二醇的脂肪酸酯类、山梨糖醇的酯类、脱水山梨糖醇酐的酯类、羧酸共聚物、葡萄糖的酯类和醚类、乙氧基化醚类、乙氧基化醇类、磷酸烷基酯类、聚氧乙烯脂肪醚磷酸酯类、脂肪酸酰胺类、酰基乳酸酯类、皂类、TEA硬脂酸酯、DEA油醇聚醚-3磷酸酯、聚乙二醇20脱水山梨糖醇单月桂酸酯(聚山梨酯20)、聚乙二醇5大豆甾醇、硬脂醇聚醚-2、硬脂醇聚醚-20、硬脂醇聚醚-21、鲸蜡硬脂醇聚醚-20、鲸蜡硬脂基葡糖苷、鲸蜡硬脂醇、C12-13链烷醇聚醚-3、PPG-2甲基葡萄糖醚二硬脂酸酯、PPG-5-鲸蜡醇聚醚-20、双-PEG/PPG-20/20聚二甲基硅氧烷、鲸蜡醇聚醚-10、聚山梨酯80、鲸蜡磷酸酯、鲸蜡磷酸酯钠、二乙醇胺鲸蜡磷酸酯、聚山梨酯60、硬脂酸甘油酯、PEG-100硬脂酸酯、花生醇、花生醇葡糖苷及其混合物。

含硅氧烷的化合物

在非限制性方面，含硅氧烷的化合物包括一个聚合产物族的任何成员，该聚合产物的分子骨架由交替的硅和氧原子构成，且侧链与硅原子连接。通过改变--Si--O--链长、侧基和交联，可以将硅氧烷合成各种材料。它们的稠度可以从液体到凝胶到固体变化。

在本发明的上下文中可以使用的含硅氧烷的化合物，包括本说明书中描述的那些化合物，或者本领域普通技术人员已知的那些化合物。非限制性实例包括硅油(例如，挥发性和非挥发性油类)、凝胶和固体。在某些方面，含硅氧烷的化合物包括硅油，例如聚有机硅氧烷。聚有机硅氧烷的非限制性实例包括聚二甲基硅氧烷、环聚二甲基硅氧烷、聚硅氧烷-11、苯基三甲基硅氧烷、三甲基甲硅烷基氨基二甲基硅氧烷、硬脂氧基三甲基硅烷或这些物质与其他有机硅氧烷材料的任何指定比例的混合物，以便根据预期应用获得所需的稠度和应用特性(例如，应用于特定区域例如皮肤、头发或眼睛等)。“挥发性硅油”包括具有低汽化热的硅油，即每克硅油通常小于约50卡。挥发性硅油的非限制性实例包括：环聚二甲基硅氧烷如道康宁344流体、道康宁345流体、道康宁244流体和道康宁245流体、挥发性流体7207(Union Carbide Corp.，Danbury，CT)；低黏度聚二甲基硅氧烷，即黏度为约50cst或更低的二甲聚硅氧烷(例如，聚二甲基硅氧烷，例如道康宁200-0.5cst流体)。道康宁流体可从DowCorning Corporation,Midland,Mich.获得。环聚二甲基硅氧烷和聚二甲基硅氧烷在CTFA《化妆品成分词典》第三版(通过引用并入)中分别被描述为环状二甲基聚硅氧烷化合物和用三甲基甲硅烷氧基单元封端的完全甲基化的线性硅氧烷聚合物的混合物。在本发明的上下文中可以使用的其他非限制性挥发性硅油，包括可从General Electric Co.,SiliconeProducts Div.,Waterford,N.Y.和Stauffer Chemical Co.,Adrian,Mich.的SWSSilicones Div.获取的那些硅油。

精油

精油包括源自草药、花卉、树木和其他植物的油类。此类油通常作为植物细胞之间的微小液滴存在，并且可以通过本领域技术人员已知的几种方法提取(例如，蒸汽蒸馏、吸香法(即使用脂肪提取)、浸软、溶剂提取或机械压榨)。当这些类型的油暴露在空气中时，它们易于蒸发(即挥发油)。因此，很多精油是无色的，但随着时间它们会氧化且颜色变深。精油在水中不溶，在醇、醚、固定油(植物)和其他有机溶剂中溶解。在精油中发现的典型物理特征包括沸点(可在约160℃至240℃间变化)和密度(范围约0.759至约1.096)。

精油通常以发现该油的植物命名。例如，玫瑰油或薄荷油分别来自植物玫瑰或薄荷。在本发明的上下文中可以使用的精油的其他非限制性实例包括芝麻油、澳洲坚果油、茶树油、月见草油、西班牙鼠尾草油、西班牙迷迭香油、芫荽油、百里香油、多香果浆果油、玫瑰油、茴香油、香脂油、佛手油、红木油、雪松油、洋甘菊油、鼠尾草油、香紫苏油、丁香油、柏树油、桉树油、小茴香油、海茴香油、乳香油、天竺葵油、姜油、葡萄柚油、茉莉油、杜松油、薰衣草油、柠檬油、柠檬草油、石灰油、柑橘油、马郁兰油、没药油、橙花油、橙油、广藿香油、胡椒油、黑胡椒油、苦橙叶油、松油、玫瑰花油、迷迭香油、檀香油、留兰香油、甘松油、香根草油、冬青油或依兰依兰油。本领域技术人员已知的其他精油也被认为可在本发明的上下文中使用。

增稠剂

增稠剂(包括增稠剂或胶凝剂)包括可以增大组合物黏度的物质。增稠剂包括可以增大组合物黏度但基本上不会改变组合物内活性成分功效的那些增稠剂。增稠剂还可以增大本发明的组合物的稳定性。在本发明的某些方面，增稠剂包括氢化聚异丁烯、三羟基硬脂精、丙烯酰基二甲基牛磺酸铵/vp共聚物或它们的混合物。

在本发明的上下文中可以使用的其他增稠剂的非限制性实例包括羧酸聚合物、交联聚丙烯酸酯聚合物、聚丙烯酰胺聚合物、多糖和树胶。羧酸聚合物的实例包括含有一种或多种源自丙烯酸及取代丙烯酸的单体、这些丙烯酸及取代丙烯酸的盐类和酯类的交联化合物，其中交联剂含有两个或更多个碳-碳双键，并源自多元醇(参见美国专利号5,087,445；4,509,949；2,798,053；CTFA《国际化妆品成分词典》第四版，1991年，第12和80页)。市售羧酸聚合物的实例包括卡波姆，它们是丙烯酸与蔗糖或季戊四醇的烯丙基醚交联的丙烯酸均聚物(例如，Carbopol.TM.900series from B.F.Goodrich)。

交联聚丙烯酸酯聚合物的非限制性实例包括阳离子和非离子聚合物。实例见美国专利号5,100,660；4,849,484；4,835,206；4,628,078；4,599,379中所述)。

聚丙烯酰胺聚合物(包括非离子聚丙烯酰胺聚合物，包括取代的支链或非支链聚合物)的非限制性实例包括聚丙烯酰胺、异链烷烃和月桂醇聚醚-7、丙烯酰胺和取代丙烯酰胺与丙烯酸和取代丙烯酸的多嵌段共聚物。

多糖的非限制性实例包括纤维素、羧甲基羟乙基纤维素、醋酸丙酸纤维素羧酸酯、羟乙基纤维素、羟乙基乙基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙基甲基纤维素、甲基羟乙基纤维素、微晶纤维素、硫酸纤维素钠以及它们的混合物。另一个例子是烷基取代的纤维素，其中纤维素聚合物的羟基被羟烷基化(优选羟乙基化或羟丙基化)，以形成羟烷基化纤维素，然后通过醚键用C10-C30直链或支链烷基进一步改性。这些聚合物通常为C10-C30直链或支链醇与羟烷基化纤维素的醚类。其他有用的多糖包括硬化葡聚糖，由(1-3)个连接的葡萄糖单元的线性链构成，每隔三个单元具有(1-6)连接的葡萄糖。

可与本发明一起使用的树胶的非限制性实例包括***树胶、琼脂、藻胶、海藻酸、海藻酸铵、支链淀粉、海藻酸钙、角叉菜胶钙、肉碱、角叉菜胶、糊精、明胶、结冷胶、瓜尔胶、瓜尔胶羟丙基三甲基氯化铵、锂蒙脱石、透明质酸、水合二氧化硅、羟丙基壳聚糖、羟丙基瓜尔胶、刺梧桐树胶、海带、豆角胶、纳豆胶、海藻酸钾、角叉菜胶钾、海藻酸丙二醇酯、菌类植物胶、羧甲基葡聚糖钠、角叉菜胶钠、黄蓍胶、黄原胶及其混合物。

防腐剂

在本发明的上下文中可以使用的防腐剂的非限制性实例包括季铵防腐剂，例如聚季铵盐-1和苯扎氯铵(例如，苯扎氯铵(“BAC”)和苯扎溴铵)、对羟基苯甲酸酯(例如对羟基苯甲酸甲酯和对羟基苯甲酸丙酯)、苯氧基乙醇、苯甲醇、氯丁醇、苯酚、山梨酸、硫柳汞或其组合。

药物成分

药物成分也被认为可与本发明的组合物一起使用。药物活性剂的非限制性实例包括抗痤疮剂、用于治疗红斑痤疮的药剂、镇痛药、麻醉剂、***直肠炎、抗组胺药、抗炎药(包括非甾体抗炎药)、抗生素、抗真菌药、抗病毒药、抗微生物药、抗癌症活性物质、杀螨剂、杀螨剂、抗肿瘤药、止汗剂、止痒剂、抗银屑病药、抗脂溢剂、生物活性蛋白和肽、烧伤治疗剂、烧灼剂、脱色剂、脱毛剂、尿布疹治疗剂、酶、头发生长刺激剂(包括***素及其类似物)、毛发生长阻滞剂(包括DFMO及其盐和类似物)、止血剂、溶解剂、溃疡治疗剂、唇疱疹治疗剂、牙齿和牙周治疗剂、光敏活性物质、皮肤保护剂/屏障剂、类固醇(包括激素和皮质类固醇)、晒伤治疗剂、防晒剂、透皮活性物质、鼻用活性物质、***活性物质、疣治疗剂、伤口处理剂、伤口愈合剂等。

因此，在一些实施方案中，本发明组合物包含一种或更多种选自下组的药物成分：雄激素、***、选择性***受体调节剂、芳香酶抑制剂、***、孕酮、孕激素、选择性孕酮受体调节剂、抗孕激素、抗***、GnRH：(受体)激动剂、抗腹泻药、心血管系统药、抗高血压药、钙通道阻滞剂、质子泵抑制剂、抗心律失常药、抗心绞痛药、β-肾上腺素能阻滞剂、强心剂糖苷、肾上腺素能刺激剂、血管扩张药、抗偏头痛药、抗凝药、止血药、镇痛药、退热药、催眠药、抗焦虑药、精神抑制药和抗精神病药、抗抑郁药、CNS系统***如咖啡因、抗阿尔茨海默病药、抗帕金森药、调脂药、抗惊厥药、止吐药、抗癫痫药、非甾体类抗炎药、抗类风湿药、肌肉松弛药、用于治疗痛风和高尿酸血症的药剂、利尿剂、抗利尿剂、产科药物、***素、抗微生物药、抗结核药、抗疟药、抗病毒药、驱虫药、细胞毒药、减食欲药、高钙血症药、镇咳药、祛痰药、减充血剂、支气管痉挛药、抗组胺药、局部麻醉剂、角质层脂质、H2受体拮抗剂、神经肌肉阻滞剂、戒烟药、杀虫剂和其他杀虫剂、皮肤病学药剂、过敏原、营养学活性化合物、角质层分离剂、精神增效剂、抗痤疮药、抗银屑病药、止痒药、抗胆碱能剂及其混合物。

本发明的透皮药物递送系统中可以使用的药物成分，包括与本发明的组合物相容并且可以在组合物的帮助下通过皮肤递送以实现所需作用的任何局部施用的活性剂。示例性实施方案包括止泻药(例如地芬诺酯、洛哌丁胺和莨菪碱)、抗高血压药(例如肼苯哒嗪、米诺地尔、卡托普利、依那普利、可乐定、哌唑嗪、异喹胍、二氮嗪、胍乙炔、甲基多巴、利血平、三甲基***)；钙通道阻滞剂(例如地尔硫卓、非洛地平、氨氯地平、尼群地平、硝苯地平和维拉帕米)；抗心律失常症(例如胺碘酮、氟卡尼、丙吡胺、普鲁卡因胺、美西曲和奎尼丁)；抗心绞痛药(例如甘油三硝酸酯、赤藓糖醇四硝酸酯、季戊四醇四硝酸酯、甘露醇六硝酸酯、哌克昔林、硝酸异山梨酯和尼可地尔)：β-肾上腺素能阻滞剂(例如阿普洛尔、阿替洛尔、布普洛尔、卡替洛尔、拉贝洛尔、美托洛尔、纳多洛尔、萘肟洛尔、氧烯洛尔、吲哚洛尔、***、索他洛尔、噻吗洛尔和马来酸噻吗洛尔)；强心糖苷(例如地高辛和其他强心苷和茶碱衍生物)；肾上腺素***(例如肾上腺素、麻黄碱、非诺特罗、异丙肾上腺素、奥西那林、rimeterol、沙丁胺醇、沙美特罗、特布他林、多巴酚丁胺、去氧肾上腺素、苯丙醇胺、伪麻黄碱和多巴胺)；血管扩张药(例如环扁桃酯、异克舒林、罂粟碱、双嘧达莫、硝酸异山梨酯、酚妥拉明、烟醇、二氢麦角毒碱、烟酸、三***酯、季戊四醇四硝酸酯和占替诺)；抗偏头痛药制剂(例如麦角胺、二氢麦角胺、甲基麦角酰胺、苯噻啶和舒马普坦)；抗凝血剂和溶栓剂(例如华法林、双香豆素、低分子量肝素如依诺肝素；链激酶及其活性衍生物；止血药(例如抑肽酶、氨甲环酸和鱼精蛋白)、镇痛药和退热药包括阿片类药物(例如阿司匹林(乙酰水杨酸)、对乙酰氨基酚、非那嗪、芬太尼、阿芬太尼、舒芬太尼、丁丙诺啡、右旋毒胺、右丙氧芬、氢***酮、***、***、羟考酮、罂粟碱、喷他佐辛、哌替啶、苯哌啶、可待因和二氢可待因)；催眠药和镇静剂如巴比妥酸盐(例如，异戊巴比妥、丁巴比妥和戊巴比妥)和其他催眠药和镇静剂，如合成水合物、氯噻唑、羟嗪和甲丙氨酯；抗焦虑剂(例如苯二氮卓类、阿普***、溴西泮、氯氮卓、氯氮杂、氯氮、***、氟硝西泮、氟西泮、劳拉西泮、硝西泮、奥沙西泮、替马西泮和***仑)；精神抑制药和抗精神病药如吩噻嗪、氯丙嗪、氟奋乃静、哌氰嗪、奋乃静、丙嗪、硫代哌嗪、甲硫哒嗪和三氟拉嗪、丁哌啶酮、氟哌啶醇和氟哌啶醇及其他抗精神病药物如匹莫齐特、硫代噻吩和锂；抗抑郁药(例如三环类抗抑郁药包括阿米替林、氯米帕明、地昔帕明、度硫平、多虑平、丙咪嗪、去甲替林、奥匹哌醇、普罗替林和曲米帕明；四环类抗抑郁药，包括米安色林；单胺氧化酶抑制剂包括异卡波肼、苯乙嗪、反苯环丙胺和吗氯贝胺以及选择性5-羟色胺再摄取抑制剂，包括氟西汀、帕罗西汀、西酞普兰、氟伏沙明和舍曲林)；CNS***(例如咖啡因)；抗阿尔茨海默氏症的药剂(例如他克林)；抗帕金森药(例如金刚烷胺、苄丝肼、卡比多巴、左旋多巴、苯并哌嗪、双哌啶、苯并己醇、丙环唑和多巴胺-2激动剂，如S(-)-2-(N-丙基-N-2-噻吩基乙氨基)-5-羟基四氢萘(N-0923)；抗惊厥药(例如苯妥英、丙戊酸、扑米酮、***、甲基***和卡马西平、乙琥胺、甲基亚砜、苯硫酰亚胺、硫脲和氯硝西泮)；抗癫痫药(例如吩噻嗪、丙氯拉嗪、硫乙拉和5HT-3受体拮抗剂，包括昂丹司琼和格拉司琼等，例如二甲基丙烯酸盐、苯海拉明、甲氧氯普胺、多潘立酮、东莨菪碱、氢溴酸东莨菪碱、盐酸东莨菪碱、氯波必利和brompride)；肌肉松弛剂(例如巴氯芬、***、盐酸环苯扎林、丹曲林、美索巴莫、奥芬那君和奎宁)；抗类风湿剂(例如青霉胺、金硫葡糖、硫代苹果酸钠、甲氨蝶呤和金诺芬)；用于痛风和高尿酸血症的药剂，例如别嘌醇、秋水仙碱、丙磺舒和磺胺吡喃酮。

本文件中还考虑使用的有非甾体抗炎剂，包括其外消旋混合物或各对映体(如果适用)(例如布洛芬、氟比洛芬、酮洛芬、氯芬酸(aclofenac)、双氯芬酸、阿洛西平、阿普生(aproxen)、阿司匹林、二氟尼柳、非诺洛芬、吲哚美辛、甲芬那酸、萘普生、保泰松、吡罗昔康、水杨酰胺、水杨酸、舒林酸、脱氧舒林酸(desoxysulindac)、替诺昔康、曲马多和酮咯酸)。本发明组合物中可配制的其他非甾体抗炎药包括水杨酰胺、水杨酸、氟苯柳、双水杨酯、水杨酸三乙醇胺、氨基比林、安替比林、羟布宗、阿扎丙宗、辛喷他宗、氟芬那酸、氯尼塞利、氯尼辛、甲氯芬那酸、氟尼辛、秋水仙碱、地美可辛、别嘌醇、奥昔嘌醇、盐酸苄达明、二甲法登、吲哚克索、吲四唑、盐酸甲基育亨烷、盐酸帕拉耐林(paranylene hydrochloride)、四氢甲吲胺、benzindopyrine盐酸盐、氟洛芬、异丁芬酸、萘普索、芬布芬、辛可芬、二氟米酮钠、非那莫、氟替阿嗪、美他扎咪、盐酸来替米特、盐酸奈西利定、奥他酰胺、吗啉那唑(molinazole)、新辛可芬、尼马唑(nimazole)、枸橼酸普罗沙唑、替昔康、苄叉异喹酮、托美丁和三氟氨酯。

本文件中还考虑使用的有激素，包括人生长激素、***(例如***、雌三醇、雌酮、乙烯***、美雌醇、己烯雌酚、己二烯雌酚、表雌三醇、雌酮硫酸酯哌嗪和赤霉烯酮)；***和其他孕激素(例如烯丙雌醇、地屈孕酮(dydrgesterone)、炔雌烯醇、甲基炔诺酮、异炔诺酮、炔诺酮、醋酸炔诺酮、孕二烯酮、左炔诺孕酮、甲羟孕酮和甲地孕酮)；抗雄激素(例如醋酸环丙孕酮和达那唑)；抗***如他莫昔芬和表藤糖醇和芳香酶抑制剂、依西美坦和4-羟基雄甾烯二酮及其衍生物；雄激素和合成代谢剂(例如睾酮、甲基睾酮、醋酸氯司替勃、屈他雄酮、夫拉扎勃、诺龙、氧雄龙、司坦唑醇、醋酸群勃龙、二氢睾酮、17-α-甲基-19-去***和氟***)；5-α还原酶抑制剂如非那雄胺、妥罗雄脲、LY-191704和MK-306；垂体激素及其活性衍生物或类似物，如促肾上腺皮质激素、促甲状腺激素、***(FSH)、促黄体激素(LH)和***释放激素(GnRH)；甲状腺激素(例如降钙素、甲状腺素和碘塞罗宁以及抗甲状腺药物如卡比马唑和丙硫氧嘧啶)；其他药物如奥曲肽；垂体抑制剂如溴隐亭；***诱导剂如克罗米芬；以及降血糖药(例如胰岛素、氯磺丙脲、格列本脲、格列齐特、格列吡嗪、妥拉磺脲、甲苯磺丁脲、二甲双胍、吡格列酮、罗格列酮和曲格列酮)。

本文中还考虑使用的有类固醇，包括皮质类固醇(例如倍他米松、戊酸倍他米松、可的松、***、21-磷酸***、氟氢可的松、氟米松、醋酸氟轻松、醋酸氟轻松***、氟新诺龙(fluocinolone)、氟轻松、氟可龙、哈西奈德、卤***、氢化可的松、17-戊酸氢化可的松、17-丁酸氢化可的松、21-醋酸甲泼尼龙氢化可的松、***龙、21-磷酸***龙、***、曲安西龙、曲安奈德)。本发明组合物中使用的甾体抗炎剂的其他实例包括皮质酮、fluoracetonide、氟氢可的松、difluorsone diacetate、氟氢缩松、甲羟松、戊酮缩去炎松、安西非特、倍他米松及其其他酯类、氯***、clorcortelone、地西龙、地萘德、二氯二氧强的松、双氟泼尼酯、氟氯萘德、氟甲松、氟尼缩松、flucortolone、氟米龙、氟培龙、氟泼尼龙、甲***、甲基氟泼尼龙、甲基强的松龙、帕拉米松、醋酸可的松、氢化可的松环戊丙酸酯、可托多松、flucetonide、醋酸氟氢可的松、丙酮缩氟氢羟龙、甲羟松、安西法尔、安西非特、倍他米松、苯甲酸倍他米松、醋酸氯***、醋酸氯可托龙、地西龙丙酮化合物、去羟米松、醋酸二氯松、二氟泼尼酯、氟二氯松、特戊酸二氟美松、醋酸氟尼缩松、醋酸氟培龙、戊酸氟泼尼龙、醋酸对氟米松、泼尼索酯、强的松龙戊酸酯、己曲安奈德、可的伐唑、氟甲酰龙和炔孕吡唑。

本文中还考虑使用的有利尿药(例如噻嗪类、相关利尿药和袢利尿剂、苄氟噻嗪、***、氯噻酮、多巴胺、环戊噻嗪、氢***、吲达帕胺、美夫西特、甲基***、美托拉宗、喹乙宗、布美他尼、乙基丙烯酸和呋塞米以及保钾利尿药、螺内酯、阿米洛利和氨苯蝶啶)；抗利尿剂(例如去氨加压素、赖氨酸加压素和血管加压素，包括其活性衍生物或类似物)；产科药物，包括作用于子宫的药物如麦角新碱、催产素和吉美前列素；***素如前列地尔(PGE1)、前列环素(PGI2)、地诺前列素(***素F2-α)和米索前列醇；抗微生物剂，包括头孢菌素如头孢氨苄、头孢西丁和头孢噻吩；青霉素类(例如阿莫西林、克拉维酸阿莫西林、氨苄西林、巴氨西林、苄星青霉素、苄青霉素、羧苄西林、氯唑西林、甲氧西林、非奈西林、苯氧甲基青霉素、氟氯西林、美洛西林、哌拉西林、替卡西林和阿洛西林)；四环素(例如米诺环素、金霉素、四环素、地美环素、多西环素、甲烯土霉素和土霉素及其他四环素类抗生素)；氨基糖苷类(例如阿米卡星、庆大霉素、卡那霉素、新霉素、奈替米星和妥布霉素)；抗真菌药(例如阿莫罗芬、异康唑、克霉唑、益康唑、咪康唑、制霉菌素、特比萘芬、联苯苄唑、两性霉素、灰黄霉素、酮康唑、氟康唑和氟胞嘧啶、水杨酸、苯噻硫酮、替克拉酮、托萘酯、三醋精、锌、羟基吡啶硫酮和吡啶硫酮钠)；喹诺酮类(例如萘啶酸、西诺沙星、环丙沙星、依诺沙星和诺氟沙星；磺胺类(例如邻苯二甲基噻唑、磺胺多辛、磺胺嘧啶、磺胺甲噻二唑和磺胺甲噁唑)；砜类如氨苯砜；其他各种抗生素如氯霉素、克林霉素、红霉素、红霉素碳酸乙酯、依托红霉素、葡萄糖酸红霉素、乙基琥珀酸红霉素、乳糖酸红霉素、罗红霉素、林可霉素、那他霉素、呋喃妥因、大观霉素、万古霉素、氨曲南、黏菌素IV、甲硝唑、替硝唑、夫西地酸和甲氧苄啶；2-硫代吡啶N-氧化物；卤素化合物，特别是碘和碘化合物如碘-PVP复合物和二碘羟基喹啉；六氯酚；氯己定；氯胺化合物；过氧化苯甲酰)；抗结核药物(例如乙胺丁醇、异烟肼、吡嗪酰胺、利福平和氯法齐明)；抗疟药(例如伯氨喹、乙胺嘧啶、氯喹、羟氯喹、奎宁、甲氟喹和卤泛群)；抗病毒药物(例如阿昔洛韦和阿昔洛韦前药、泛昔洛韦、齐多夫定、去羟肌苷、司他夫定、拉米夫定、扎西他滨、沙奎那韦、茚地那韦、利托那韦、正二十二烷醇、醋胺金刚烷和碘苷)；驱虫药(例如甲苯咪唑、噻苯达唑、氯硝柳胺、吡喹酮、噻吩鎓和乙胺嗪)；细胞毒性剂(例如普利霉素、环磷酰胺、达卡巴嗪、氟尿嘧啶及其前药、甲氨蝶呤、丙卡巴肼、6-巯基嘌呤和霉酚酸)；厌食药和减肥药(例如右芬氟拉明、芬氟拉明、安非拉酮、马吲哚和苯丁胺)；高钙血症中使用的药剂如骨化三醇、二氢甾醇及其活性衍生物或类似物；镇咳药(例如乙基***、右美沙芬和福尔可定)；祛痰药(例如乙酰半胱氨酸、溴己新、吐根、愈疮甘油醚、吐根和皂苷)；减充血剂(例如去氧肾上腺素、苯丙醇胺和伪麻黄碱)；支气管痉挛松弛剂(例如麻黄碱、非诺特罗、奥西那林、利米特罗、沙丁胺醇、色甘酸钠、色甘酸及其前药、特布他林、异丙托溴铵、沙美特罗和茶碱和茶碱衍生物)；抗组胺药(例如氯苯甲嗪、赛克力嗪、氯环利嗪、羟嗪、溴苯那敏、氯苯那敏、赛马斯汀、赛庚啶、右氯苯那敏、苯海拉明、二苯胺、多西拉敏、美海屈林、非尼拉敏、曲普利啶、阿扎他定、二苯拉林、甲地拉嗪、特非那定、阿司咪唑、氯雷他定和西替利嗪)；局部麻醉剂如利多卡因、苯佐卡因、丁卡因、氯普鲁卡因、罗哌卡因、布比卡因、丁卡因、利多卡因、辛***、地布卡因、甲哌卡因、丙胺卡因和依替卡因；肌肉松弛剂(例如巴氯芬、***、盐酸环苯扎林、丹曲林、美索巴莫、奥芬那君和奎宁)；神经肌肉阻滞剂(例如琥珀胆碱、阿库铵、泮库溴铵、阿曲库铵、加拉碘铵、筒箭毒碱和维库溴铵)。

在本文中还考虑使用的有戒烟药如尼古丁、安非他酮和伊波加因；脱敏用过敏原如屋尘螨变应原；营养剂，如维生素、必需氨基酸和必需脂肪；角质层分离剂如α-羟基酸、乙醇酸和水杨酸；抗痤疮药如异维A酸、维A酸和过氧化苯甲酰；抗银屑病药如阿维A酯、环孢菌素和卡泊三醇；抗瘙痒药如辣椒碱及其衍生物如诺香草胺；以及可有效抑制腋汗和用于控制痱子的抗胆碱能药物(例如硝酸甲基阿托品、丙胺太林、东莨菪碱、溴甲东莨菪碱和止汗药(季铵酰氧基甲基铵盐)。

需要理解的是，上述成分列表是出于说明目的，并非提供作为可使用本发明的组合物有益配制或重新配制的所有药物的全部清单。

使用方法

按照本发明的其他实施方案，提供了使用局部组合物治疗皮肤的方法。可用这些组合物和方法治疗的一些疾病包括痤疮、光化损伤、头皮屑、湿疹、细纹、银屑病、疣、炎症、感染和皱纹。所述组合物施用每周约两次至每天约四次。在另一个实施方案中，所述组合物施用每隔一天约一次至每天约三次。在又一个实施方案中，所述组合物每天施用约一次至约每天两次。

达到期望效果后，可将频率和剂量降至维持水平。所述维持水平将根据个体而变化，但在一个实施方案中，是既往剂量和/或频率的约1/10至约1/2。在另一个实施方案中，所述维持水平为既往剂量和/或频率的约1/5至约1/3。此处列出的剂量和频率仅供参考，可以根据各种不同因素变化，包括待治疗的皮肤疾病、可能影响皮肤的其他化合物的局部或全身给药，以及可能影响所给药化合物代谢的其他系统性疾病如肾脏或肝脏疾病。

在某些情况下，特别是在老年人中，这些疾病伴有色素沉着不规律。因此，本发明的某些实施方案包括用于治疗此类不规则色素沉着的皮肤增白剂。为了治疗这些疾病之一，将有效量的局部组合物适用于需要治疗的皮肤，所述组合物包含以上成分中的一种或更多种。

按照本发明的一些实施方案，提供了用于治疗皱纹的组合物和方法，其中使用毒素化合物进行化学去神经而无需注射或其他侵入性渗透。在一个实施方案中，例如，用于治疗因肌肉收缩所致皱纹的局部制剂包含在皮肤病学可接受的媒介物中与化学去神经剂离子配对的amphipol聚合物，以及的至少一种TJ调节肽。化学去神经剂可以是能够暂时去神经或使目标肌肉无力的任何药剂。例如，化学去神经剂可以是肉毒毒素(例如)、α-神经毒素、芋螺毒素等。

本发明的组合物和方法提供了施用化学去神经剂(例如肉毒毒素、α-神经毒素、芋螺毒素等)的新方法，该方法效率高并且没有通常与渗透性注射相关的疼痛和不适。除疼痛和不适外，注射可引起局部肿胀或水肿、毛细血管出血和炎症，使用本发明的组合物时通常可以避免这些问题。

制备方法

本文中描述的本发明局部组合物可用任何合适的方法制备，包括用于制备适合施用于皮肤的美容制品和药物组合物的标准方法。合适方法的非限制性实例包括混合技术(手动和机械混合)、匀化混合和吹扫混合。混合技术可以根据变量如需混合的组分黏度和那些组分的体积以及脂溶性和水溶性成分的相对比例进行选择。amphipol聚合物和带电荷的生物活性剂可以离子配对，然后与递送媒介物中的其他成分混合，如本文中所示例。因此，本发明的主题也是制备如本文所述的组合物的方法。

药盒

药盒也被考虑用于本发明的某些方面。例如，本发明的组合物可以包含在药盒中。药盒可以包括容器。容器可以包括瓶子、金属管、层压管、塑料管、分配器、加压容器、阻隔容器、包装、隔室、口红容器、小型容器、可容纳化妆品组合物的化妆品盘或其他类型的容器如向其中保留分散物或组合物或所需瓶子、分配器或包装的注塑或吹塑塑料容器。药盒和/或容器可以在其表面上包含标记。标记例如可为词语、短语、缩写、图片或符号。

容器可以分配预定量的组合物。在其他实施方案中，容器可被挤压(例如金属、层压材料或塑料管)以分配所需量的组合物。组合物可以作为喷雾、气溶胶、液体、流体或半固体分配。容器可以具有喷雾、泵或挤压机构。药盒还可以包含使用药盒组件的说明以及容器中包含的任何其他组合物的使用。说明书可包含如何施用、使用和维持组合物的说明。

本文中引用的所有专利和专利出版物特此以引用方式整体并入。

包含了以下实施例以展示本发明的实施方案。本领域技术人员将理解，应遵循的实施例中公开的技术代表发明人发现在本发明的实践中运行良好的技术，因此可被视为其实践的优选模式。然而，本领域技术人员将理解，可在不脱离本发明的精神和范围的情况下进行很多改变。

实施例

实施例1：稳定蛋白微乳液的配制

微乳液是作为“油包水”乳液制备，首先从油/表面活性剂混合相的制备开始。每个组分是在天平上按重量加入。每个组分的相对比例是按整个乳液的总重量的重量％表示。正确配制的微乳液是通过混合3种主要成分形成的均匀、目视澄清和透明的液体：

1)油相

2)表面活性剂/助表面活性剂相，含有amphipol聚合物A8-35

3)水相，含有α-神经毒素(MCPT-201)、缓冲剂和任选的TJ调节肽。

在配制过程中，为了增加活性蛋白质目标浓度的灵活性，将油相(1)和表面活性剂/助表面活性剂相(2)合并成一个脂肪相，所述脂肪相可提前大量制备并单独储存。然后，可在稍后时间该脂肪族组分(1+2)加入含有不同量的水溶性活性蛋白的水相(混合)。

或者，也可将脂肪族组分加入不同量(30-35％重量)的水相，以调节微乳液的黏度/流动性。微乳液的黏度/流动性与水相的量(重量％)成正比。脂肪族微乳液成分(1+2)是均匀液体，可以冷冻(以固化蜡的形式)或4℃-12℃和RT储存至少6个月，加入脂溶性抗氧化剂时可能要长很多。因此，含有活性蛋白质药物的水相可以在最适合蛋白质的条件下单独储存，或者临混合最终微乳液前用浓蛋白质贮备液新鲜制备。

脂肪族组分和水相的混合不需要过多的动能。通过手动翻转所述管(5分钟)或以最高速度在涡旋器上简单混合两分钟。即使按8000rpm下离心分离10分钟时，微乳液的水性和亲脂性组分在混合后不会分离。开始分离之前，微乳液有可能耐受甚至更高的离心力。

表1

*amphipol聚合物的量由微乳液中活性蛋白质的量决定。微乳液中的amphipol和蛋白质之间的摩尔比应为约1:1至2:1。每个生物活性化合物的最佳摩尔比取决于其分子量，需在1:1至10:1的范围内凭经验确定。

*需要调节TJ肽浓度，使TDP比MCPT-201摩尔过量5-10倍。对于其他生物活性化合物，制剂中TJ肽的最佳浓度/数量需要在2至20倍摩尔过量的范围内凭经验确定。

表2

配方设计规则和依赖关系

为了提高稳定性，设计了两个制剂，使油相的HLB(亲水性-亲脂性平衡指数)与表面活性剂相的HLB一致。在第一个制剂中，65％/35％油酸/肉豆蔻酸异丙酯(HLB 15.075)混合物与吐温80的HLB 15一致。在第二个制剂中，HLB为13.98的45％/55％油酸/肉豆蔻酸异丙酯混合物与HLB为14的91％/9％吐温80/司盘80表面活性剂混合物一致。

异丙醇或等效共溶剂(戊醇、1,2-戊二醇、1,5-戊二醇)的绝对量，与异丙醇和丙二醇之间的比例一样对微乳液的稳定性和流动性至关重要。异丙醇减少至<11％w/w增大了脂肪相的黏度。进一步降低至<10％w/w使合并的油/表面活性剂/助表面活性剂相在环境温度下逐渐变为半固体蜡。丙二醇量相对于异丙醇量增加，同时保持两种共溶剂的总量(15％)不变，产生相同作用。

优选对水相进行设置，使缓冲液对活性蛋白质的长期稳定性最佳。在初步的Franz池研究中，用pH 6.0的50mM MES-KOH、20mM NaCl、0.1mM EDTA、0.5mM氧化型谷胱甘肽(GSSG)作为水相。应将替代的水性缓冲液调节至相同的pH值，使最高缓冲容量在+/-0.2pH单位范围内。添加氧化型GSSG，以防止MCPT-201蛋白质中的关键二硫键还原和重构。

实施例2：Franz扩散池研究

这些研究的目的是证明利用加受试者的皮肤渗透增强剂配制的微乳液载体，使带正电荷的MCPT-201蛋白质透皮通过的原理证据。比较了三种主要皮肤渗透促进剂，评估了用猪皮安装的Franz池中MCPT-201的透皮通量。然后，在离体的神经支配小鼠膈肌上分析从这些样品中收集的滤液的神经肌肉活性。

材料和方法

体外透皮通量研究用Franz池

Franz池是玻璃装置，由用于供体溶液的上隔室和下接收池构成，二者之间安装扩散屏障(皮肤组织)。皮肤扩散屏障作为上玻璃室和下玻璃室之间的密封垫圈。接收室充满缓冲液并包含磁力搅拌棒。皮肤组织顶部的供体室充满含有蛋白质的微乳液作为供体溶液。在该研究的典型试验中，将加载微乳液和接收缓冲液的的Franz池置培养箱中以37℃、连续培养8至24小时。

为了防止接收室中微生物生长蛋白水解降解，给缓冲液补加抗生素羧苄西林(100ug/ml)、卡那霉素(20ug/ml)和氯霉素(30ug/ml)并补加蛋白酶抑制剂的混合物。

本研究中使用的Franz池，通过降低接收室体积至3至5ml以降低样品稀释，适用于蛋白质透皮通量试验。将供体室的灌装体积限制为1ml。将这些“微型”Franz池的孔口(上下室间经所述孔口发生蛋白质交换)设置为0.5至0.64cm²。

蛋白质样品处理

在没有灵敏、可靠的检测方法用于MCPT-201蛋白质和天然α-眼镜蛇毒素的情况下，使用适当的多肽大小标记物和毒液纯化的α-眼镜蛇毒素作为定量和定性标记物蛋白质，通过PAGE SDS凝胶电泳分析接收室缓冲液中分析物的存在。Franz池接收室的样品太稀，不能直接用于凝胶分析，必须首先进行浓缩。对于第一项研究，这是在两步工艺中完成的。Franz池培养完成后，收集接收室样品并通过0.22um PES注射器式滤器(Whatman)，以便对溶液进行灭菌并除去不溶物。然后，首先经50kDa MWCO孔径的滤膜(MilliporeUFC905008再生纤维素Amicon Ultra离心过滤装置)超滤，对5和3ml接收缓冲液样品(25mM枸橼酸-磷酸盐缓冲液pH 6.0溶液)中的蛋白质和多肽进行分析。通过经3000Da MWCO孔径滤膜的旋转柱(Pall Nanosep；Sigma目录号OD003C33)按13K rpm超滤20至30分钟，将第一个超滤步骤的滤液浓缩至50uL。

在4-20％PA梯度凝胶上，用Tis-Tricine缓冲液运行缓冲液(BioRad；标准肽凝胶345-0064)中分析总浓缩样品体积(15uL)的约1/3。电泳分离后(110V下约1小时；BioRad标准池)，将凝胶在40％甲醇/10％醋酸中固定，并用SYPRO Ruby(BioRad；SYPRO Ruby蛋白质凝胶染色#170-3126)或考马斯蓝染色。按照生产商的试验方案过夜实施凝胶染色。

对于第二项研究，对该方法进行修改，以纳入在HiTrap SP-琼脂糖阳离子交换柱(GE Healthcare)上的色谱富集/纯化步骤。MCPT-201和α-眼镜蛇毒素是高度带正电荷的蛋白质，pI为8.2。它们通常在阳离子交换树脂如SP-琼脂糖上纯化。将Franz池接收室中的样品缓冲液变更为50mM MES-NaOH/20mM NaCl/0.1mM EDTA(pH 6.0)，使样品与SP-琼脂糖阳离子交换色谱法直接相容。

该样品缓冲液是与平衡色谱柱和在SP-Sepharose柱上加载MCPT-201蛋白质供纯化所用相同的缓冲液。完成Franz池的培养后，通过经0.22um PES注射器过滤器过滤，对接收室样品进行灭菌。此外，用50mM MES-NaOH缓冲液将所有样品调节至8ml体积，并以0.5ml/min的低流速加载至1ml HiTrap SP-琼脂糖柱(GE)上。样品加载之前，用5CV的相同缓冲液平衡色谱柱。用5CV的上样(样品)缓冲液洗涤加载样品的色谱柱。在MES-NaOH/300mM NaCl/0.1mM EDTA(pH 6.0)中洗脱带正电荷的蛋白质流分。合并SP-琼脂糖蛋白质洗脱液，经0.22um PES注射器式滤器作除菌过滤，按上文所述浓缩至50uL。如上文所述，用色谱纯化的蛋白质样品进行SDS PAGE分析。

用于Franz池研究的皮肤组织

对于所有试验，将新鲜的未曾冷冻的猪皮样本置干冰上从PEL-Freeze Inc.(尺寸2-1.5cm² x 2mm)上运输，并在收到后24小时内使用。

透皮通量率的计算

通过对比性SDS PAGE分析，半定量地测定经皮递送至接收缓冲液滤液的特定蛋白质(MCPT-201和α-眼镜蛇毒素)量。多肽大小标记物和已知浓度(25ng至2ug)的一系列α-眼镜蛇毒素稀释液在每个凝胶上共迁移，允许通过特定蛋白区带的大小和定量进行正确蛋白质区带的鉴定。透皮通量率是通过下式计算：

“M”是在接收室的缓冲液中检测到的特定蛋白质总量(μg)

“T”是以小时为单位的孵化时间

“A”是以cm²为单位的皮肤区域(Franz池孔口)

测定透皮通量率的这个方法代表终点分析。检测方法的有限灵敏度，不容许通过分析培养期间各时间点采集的样品来测量透皮蛋白质通量的动力学。因此，如果大部分转移发生在试验的第一个小时，当皮肤组织仍然“新鲜”时，可以人为降低通量率。

含DMSO的微乳液

微乳液载体中蛋白质透皮递送的公开研究，报告用DMSO作为有效的化学皮肤渗透促进剂。尽管存在与人类使用相关的众所周知且显著的缺点，但由于DMSO被视为促进小分子药物皮肤渗透的金标准，因此它作为化学皮肤渗透促进剂的有效性提供了适当的比较。

结果和讨论

皮肤渗透促进剂组合的比较

第一项研究的目的是确定用各种化学皮肤渗透促进剂配制的微乳液是否可以促进MCPT-201的透皮通过。三个不同微乳液全部按最终MCPT-201浓度0.6mg/ml乳液进行配制。三个微乳液的基础配方与上述相同。它们的差异在于存在或不存在下列生化皮肤渗透促进剂组合。

E8WPT-1含0.6mg/ml MCPT-201；TJ调节肽+磷脂(DMPC)

E8WPT-2含0.6mg/ml MCPT-201；amphipol聚合物+磷脂(DMPC)

E8WPT-3含0.6mg/ml MCPT-201；仅amphipol聚合物

可在全部三个样品的接收室缓冲液中检测到MCPT-201。各自的透皮通量率，对于E8WPT-1为0.037μg/h/cm²，对于E8WPT-2为0.195μg/h/cm²，对于E8WPT-3为0.117μg/h/cm²。培养8小时后，E8WTP-1、E8WTP-2和E8WTP-3的透皮递送的MCPT-201总收率估计分别为200ng、为1μg和0.6μg。第一项研究的结果见图1，并总结于下文表3中。

表3

与作为阳性对照的DMSO的比较

在第二项研究中，将含DMSO的微乳液与用amphipol聚合物和TJ调节剂配制的微乳液和不含这些附加皮肤渗透促进剂的阴性对照微乳液进行比较。测试了以下三个微乳液配方：

·ME11a 2mg/ml MCPT-201、4mg/ml TJ-调节肽；2mg/ml Amphipol A8-35

·ME11a-NC ME11a，不含MCPT-201蛋白质(阴性对照)

·ME9a 2mg/ml MCPT-201；5％DMSO替代丙二醇

按照上文所示，分析Franz池接收室的样品SDS-PAGE定量，结果见图2和下文表4中所总结。

表4

实施例3：生物活性测定

在体外小鼠隔膜分析法中，测定上文每个样品的接收室流分的生物活性。分析三个样品如下：1)DMSO处理的毒素(对应于ME9a流分)，2)非DMSO毒素(对应于ME11a流分)和3)阴性对照(对应于ME11a-NC流分)。全部用小鼠膈膜神经肌肉接头进行测试。

特别地，向2ml盐水的隔膜中加入60ul DMSO处理的毒素。(图3&4)在池2后再记录另外四个池20分钟，仍有中度响应。然后，将非DMSO毒素(50ul，2ml)加入池6中(图5)。在接下来的一小时内，突触反应继续变小。在池7后再测试另外四个池。(图6)。在单独的隔膜上测试阴性对照，并从5个池记录。正如所料，阴性对照的突触反应持续强反应超过一小时。

与贮备MCPT-201的直接施用相比，在离体的神经支配小鼠膈肌上测定浓蛋白流分的相对生物活性，见下文表5。

表5

结论

在小分子药物以前的透皮递送研究中，已经将肉豆蔻酸异丙酯、油酸、柠檬烯和丙二醇确定为皮肤渗透促进剂。当从微乳液的制剂中删除amphipol聚合物和/或TJ调节肽时，由于在Franz池试验的接收缓冲液流分中未能检测到蛋白质，因此从增强带正电荷的蛋白质MCPT-201的皮肤渗透方面，观察到很小的作用。这些研究明确证明，大(约7kD)亲水性蛋白质的最有效透皮递送是按照本发明与amphipol聚合物复合并与TJ调节肽组合时。

将包含Amphipol聚合物和TJ调节肽的最佳微乳液配方，与包含DMSO作为阳性对照的微乳液比较。用两个配方得到相似的透皮通量率，如图2中所示。但值得注意的是，由于膈肌抑制试验中的发生时间较长，且与非DMSO流分相比DMSO流分的最大抑制较低，因此DMSO似乎对蛋白质活性有不良影响。非DMSO流分与贮备MCPT-201很相似，证明本发明制剂以活性形式和美容有效量递送MCPT-201。

实施例4：比较神经毒素测定

Waglerin-1(Wtx-1)是一种最初从Wagler’s pit viper(竹叶青)的毒液中分离的肽。Utkin Y.N.等人Azemiopsin from Azemiops feae Viper Venom,a NovelPolypeptide Ligand of Nicotinic Acetylcholine Receptor.J.Biol.Chem.2012,Aug3；287(32):27079-86。这种22个氨基酸的肽是肌肉烟碱乙酰胆碱受体的竞争性拮抗剂，并与α-银环蛇毒素竞争。该试验比较了这两种分子的透皮递送。

生物活性的合成全尺寸Waglerin-1和α-银环蛇毒素是从商业来源得到，具有用于透皮实验的FITC标记。分析法是按照上文实施例1-3进行，其中用人尸皮肤组织替代早期试验中采用的猪皮。收集接收室流分并分析荧光，随后进行HPLC和/或质谱研究以定量和确认被转移蛋白质的鉴定。

实施例5：透皮胰岛素递送

胰岛素具有负净电荷，并与本发明的PMAL amphipol聚合物离子配对。重组人胰岛素是从具有FITC标记的商业来源(Sigma-Aldrich目录号I3661-5MG)得到，Franz扩散池分析法是按照前述实施例运行。收集接收室流分并用检测人胰岛素的商业定量荧光ELISA试剂盒(Millipore)分析。

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