阅读说明：本技术 抗cldn-5抗体及含有该抗体的药物 (anti-CLDN-5 antibody and medicine containing the same ) 是由 近藤昌夫 八木清仁 土井健史 冈田欣晃 桥本洋佑 泽崎达也 竹田浩之 远藤幸喜 田村 于 2018-04-26 设计创作，主要内容包括：本发明通过特异性识别Claudin-5蛋白的胞外区的三维结构或一级结构的抗体,解决提供一种CLDN-5特异性高、识别CLDN-5的胞外区的分子这一技术问题。(The invention solves the technical problem of providing a molecule which has high CLDN-5 specificity and can recognize the extracellular region of CLDN-5 through an antibody which can specifically recognize the three-dimensional structure or the primary structure of the extracellular region of the Claudin-5 protein.)

抗CLDN-5抗体及含有该抗体的药物

技术领域

本发明涉及抗CLDN-5抗体及含有该抗体的药物。更详细而言，涉及识别CLDN-5胞外区的抗体、血脑屏障调控用药物等。

背景技术

血脑屏障为限制血液与脑之间的物质交换的机构，发挥着保护脑免受异物入侵的重要作用。另一方面，由于血脑屏障妨碍静脉内给药的药物向脑的传递，因此成为了脑部疾病治疗药物开发的较大阻碍。该血脑屏障的功能由形成在脑毛细血管内皮细胞间的高度的紧密连接产生，与允许物质透过的其他脏器的毛细血管内皮细胞间的间隙大有不同。迄今为止，作为调控限制该物质输送的紧密连接、经由细胞间隙输送药物的理论方法，提出了一种通过颈动脉给药甘露醇高渗溶液的方法。然而，由于该方法涉及细胞脱水导致的物理性的细胞形态的变化、紧密连接的破坏，因此副作用也较大。因此，谋求开发一种仅特异性调控紧密连接的新技术。

在形成存在于上皮细胞或血管内皮细胞的细胞间的紧密连接时，CLDN家族分子起着重要的作用。CLDN家族由27种四次跨膜蛋白的成员组成，在细胞外具有2个环(loop)(N端侧的第一、第二胞外环)，这些细胞间的相互作用有助于紧密连接的形成。在各组织中表达的CLDN家族分子的种类(构成比率)或量不同，这些不同产生了组织特异性紧密连接、屏障功能。特别是在脑血管内皮细胞间的紧密连接中，CLDN-5高表达，对血脑屏障的功能造成较大影响。事实上，CLDN-5缺陷小鼠的血脑屏障的功能受损，允许分子量为1000以下的物质透过。此外，也有报告指出，在对小鼠静脉内给予CLDN-5siRNA的实验中，脑血管内皮细胞的CLDN-5的表达下降，导致诱导分子量为1000以下的物质传递至脑内，且无严重的副作用(非专利文献1)。根据这些见解，期待CLDN-5的功能调控成为经由细胞间隙的新型的脑内药物传递策略。

迄今为止，以抑制基于CLDN-5的屏障功能为目的，制作了多个CLDN-5相互作用分子。例如有报告指出，使用来自CLDN-1的第一胞外环的部分序列的肽(约20个氨基酸)，通过抑制CLDN-1及CLDN-5的相互作用，能够调控小鼠脑毛细血管内皮细胞的屏障(非专利文献2)。此外报告有将CLDN-3与CLDN-4结合，在作为具有高屏障调控活性的分子而为人所知的产气荚膜梭菌肠毒素(Clostridium perfringens enterotoxin)的C端导入突变，创制CLDN-5结合分子的例子(非专利文献3)。然而，这些分子存在对CLDN-5的结合特异性低、会与其他CLDN分子结合的问题，因此认为从增强屏障调控活性、降低副作用的角度出发，使用这些分子的血脑屏障调控技术的开发非常困难。作为其他例子，有涉及调节CLDN家族分子的细胞粘附的肽类及抗体的报告，但在该报告中，未公开涉及抗CLDN-5抗体调控血脑屏障的得到证实的数据(专利文献1)。如此，与CLDN-5特异性地相互作用而调控其功能的分子尚不存在。

现有技术文献

非专利文献

非专利文献1：Matthew Campbell,Anna-Sophia Kiang,Paul F.Kenna,ChristianKerskens,Christoph Blau,Laurence O’Dwyer,Amanda Tivnan,Julie Anne Kelly,Brenda Brankin,Gwyneth-Jane Farrar,Peter Humphries.RNAi-mediated reversibleopening of the blood-brain barrier.The journal of gene medicine 10(2008)930-947.

非专利文献2：Christian Staat,Caroline Coisne,Sebastian Dabrowski,Svetlana M.Stamatovic,Anuska V.Andjelkovic,Hartwig Wolburg,Britta Engelhardt,Ingolf E.Blasig.Mode of action of claudin peptidomimetics in the transientopening of cellular tight junction barriers.Biomaterials 54(2015)9-20.

非专利文献3：Jonas Protze,Miriam Eichner,Anna Piontek,Stefan Dinter,JanRossa,Kinga Grazyna Blecharz,Peter Vajkoczy,Joerg Piontek,GerdKrause.Directed structural modification of Clostridium perfringensenterotoxin to enhance binding to claudin-5.Cellular and Molecular LifeSciences 72(2015)1417-1432.

专利文献

专利文献1：日本特表2003-524384号公报

发明内容

本发明要解决的技术问题

本发明的技术问题在于提供一种CLDN-5特异性高、且对CLDN-5的胞外区进行识别的新型分子。进一步，本发明的技术问题在于提供使用了所述分子的CLDN-5表达细胞的检测技术及血脑屏障调控技术。

解决技术问题的技术手段

尚不存在制作对CLDN-5的特异性高的结合分子，并证实其有用的活性、优选为调控血脑屏障的屏障的活性的例子。作为一个原因，可列举出由于CLDN-5为膜蛋白，因此从溶解度或凝集性的角度出发，难以纯化，作为用于噬菌体展示法的筛选材料或免疫原，无法获得充分的品质及量。鉴于上述技术问题，本申请的发明人进行了认真研究，结果成功制成了识别CLDN-5蛋白的胞外区内的区域的抗体(在本说明书中，也记作“本发明的抗体”、“CLDN-5胞外区抗体”等)。且意外发现，本发明的抗体具有打开脑内血管内皮细胞之间的连接的作用，即具有血脑屏障调控活性。本申请的发明人基于该见解进一步进行研究，结果完成了本发明。

作为一个实施方式，本发明包含下述的方式。

项1.

一种抗体，其特异性识别Claudin-5蛋白(紧密连接蛋白-5蛋白)的胞外区的三维结构或一级结构。

项2.

根据项1所述的抗体，其与Claudin-1蛋白、Claudin-2蛋白、Claudin-3蛋白、Claudin-4蛋白、Claudin-6蛋白以及Claudin-7蛋白的胞外区均不结合。

项3.

根据项1或2所述的抗体，其特异性识别由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第80位氨基酸(丙氨酸)的区域。

项4.

根据项1～3中任一项所述的抗体，其与由序列号45所表示的氨基酸序列形成的蛋白质1-1-5的结合性为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下，所述蛋白质1-1-5中，人Claudin-5蛋白的第一胞外环被替换为人Claudin-1蛋白的第一环。

项5.

根据项4所述的抗体，其与由序列号41所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白点突变体D68E的结合性，为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下。

项6.

根据项1或2所述的抗体，其特异性识别由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域。

项7.

根据项1、2及6所述的抗体，其与由序列号48所表示的氨基酸序列形成的蛋白质5-5-1的结合性为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下，所述蛋白质5-5-1中，人Claudin-5蛋白的第二胞外环被替换为人Claudin-1蛋白的第二环。

项8.

根据项7所述的抗体，其与由序列号43所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白点突变体S151T的结合性，为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下。

项9.

根据项1或2所述的抗体，其特异性识别由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第80位氨基酸(丙氨酸)的区域及N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域所形成的三维结构。

项10.

根据项1、2及9所述的抗体，其与由序列号44所表示的氨基酸序列形成的突变体TM的结合性为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下，所述突变体TM中，人Claudin-5蛋白的胞外区以外的区域被替换为小鼠Claudin-5蛋白。

项11.

根据权利要求1～10中任一项所述的抗体，其为选自由下述抗体组成的组中的任一种抗体：

(I)抗体I，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号106所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号108所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号110所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号197所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号199所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号201所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(E)抗体E，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号78所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号80所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号82所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号169所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号171所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号173所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(B)抗体B，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号57所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号59所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号61所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号148所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号150所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号152所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(F)抗体F，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号85所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号87所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号89所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号176所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号178所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号180所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(C)抗体C，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号64所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号66所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号68所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号155所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号157所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号159所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(A)抗体A，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号50所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号52所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号54所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号141所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号143所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号145所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(K)抗体K，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号120所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号122所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号124所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号211所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号213所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号215所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(D)抗体D，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号71所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号73所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号75所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号162所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号164所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号166所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(G)抗体G，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号92所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号94所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号96所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号183所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号185所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号187所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(H)抗体H，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号99所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号101所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号103所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号190所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号192所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号194所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(J)抗体J，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号113所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号115所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号117所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号204所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号206所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号208所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(L)抗体L，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号127所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号129所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号131所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号218所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号220所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号222所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；以及

(M)抗体M，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号134所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号136所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号138所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号225所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号227所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号229所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

项12.

根据项1～11中任一项所述的抗体，其中，所述抗体的可变区VH的序列为序列号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23或25的序列、或者为相对于这些氨基酸序列中的任一种具有90％以上同一性的氨基酸序列，且VL的序列为序列号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26的序列、或者为相对于这些氨基酸序列中的任一种具有90％以上同一性的氨基酸序列。

项13.

一种细胞，其含有编码项1～12中任一项所述的抗体的多核苷酸。

进一步，作为另一实施方式，本发明还包含下述的方式：

项1A.

一种抗体，其特异性识别Claudin-5蛋白的胞外区的三维结构或一级结构。

项2A.

根据项1A所述的抗体，其与Claudin-1蛋白、Claudin-2蛋白、Claudin-3蛋白、Claudin-4蛋白、Claudin-6蛋白以及Claudin-7蛋白的胞外区均不结合。

项3A.

根据项1A或2A所述的抗体，其特异性识别由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第80位氨基酸(丙氨酸)的区域。

项4A.

根据项1A～3A中任一项所述的抗体，其与由序列号45所表示的氨基酸序列形成的蛋白质1-1-5的结合性为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下，所述蛋白质1-1-5中，人Claudin-5蛋白的第一胞外环被替换为人Claudin-1蛋白的第一环。

项5A.

根据项4A所述的抗体，其与由序列号41所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白点突变体D68E的结合性，为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下。

项6A.

根据项1A或2A所述的抗体，其特异性识别由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域。

项7A.

根据项1A、2A及6A所述的抗体，其与由序列号48所表示的氨基酸序列形成的蛋白质5-5-1的结合性为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下，所述蛋白质5-5-中，人Claudin-5蛋白的第二胞外环被替换为人Claudin-1蛋白的第二环。

项8A.

根据项7A所述的抗体，其与由序列号43所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白点突变体S151T的结合性，为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下。

项9A.

根据项1A或2A所述的抗体，其特异性识别由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第80位氨基酸(丙氨酸)的区域及N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域所形成的三维结构。

项10A.

根据项1A、2A及9A所述的抗体，其与由序列号44所表示的氨基酸序列形成的突变体TM的结合性为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人Claudin-5蛋白的结合性的1/5以下，所述突变体TM中，人Claudin-5蛋白的胞外区以外被替换为小鼠Claudin-5蛋白。

项11A.

根据项1A～10A中任一项所述的抗体，其选自由下述任一种抗体A～M组成的组：

(A)抗体A，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号50所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号52所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号54所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号141所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号143所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号145所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(B)抗体B，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号57所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号59所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号61所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号148所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号150所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号152所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(C)抗体C，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号64所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号66所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号68所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号155所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号157所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号159所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(D)抗体D，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号71所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号73所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号75所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号162所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号164所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号166所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(E)抗体E，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号78所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号80所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号82所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号169所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号171所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号173所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(F)抗体F，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号85所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号87所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号89所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号176所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号178所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号180所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(G)抗体G，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号92所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号94所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号96所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号183所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号185所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号187所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(H)抗体H，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号99所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号101所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号103所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号190所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号192所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号194所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(I)抗体I，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号106所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号108所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号110所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号197所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号199所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号201所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(J)抗体J，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号113所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号115所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号117所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号204所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号206所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号208所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(K)抗体K，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号120所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号122所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号124所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号211所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号213所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号215所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；

(L)抗体L，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号127所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号129所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号131所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号218所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号220所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号222所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3；以及

(M)抗体M，其包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号134所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号136所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号138所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号225所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号227所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号229所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

项12A.

根据项1A～11A中任一项所述的抗体，其中，抗体的可变区VH的序列为序列号1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23或25的序列、或者为相对于这些氨基酸序列中的任一种具有90％以上同一性的氨基酸序列，且VL的序列为序列号2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24或26的序列、或者为相对于这些氨基酸序列中的任一种具有90％以上同一性的氨基酸序列。

项13A.

具有项11A或12A所述的抗体的可变区的人IgG1嵌合抗体、人IgG4嵌合抗体、人IgG1突变体嵌合抗体或人IgG4突变体嵌合抗体或者这些抗体的修饰型嵌合抗体。

项14A.

一种人源化抗体或修饰型人源化抗体，其具有项11A或12A所述的抗体的互补决定区。

项15A.

具有项11A或12A所述的抗体的可变区的Fab片段、F(ab’)2片段、Fv片段、微抗体(minibody)、scFv-Fc、scFv、双链抗体、三链抗体或四链抗体。

项16A.

一种细胞，其含有编码项1A～15A中任一项所述的抗体或片段的多核苷酸。

项17A.

一种杂交瘤细胞，其含有编码项1A～15A中任一项所述的抗体或片段的多核苷酸。

项18A.

一种复合体，其为项1A～15A中任一项所述的抗体或片段与药物的复合体。

项19A.

一种试剂，其含有选自由项1A～15A中任一项所述的抗体或其片段、及项18所述的复合体组成的组中的至少一种。

项20A.

一种药物，其含有选自由项1A～15A中任一项所述的抗体或其片段、及项18所述的复合体组成的组中的至少一种。

项21A.

根据项20A所述的药物，其用于血脑屏障调控。

项22A.

根据项20A所述的药物，其用于Claudin-5蛋白的定位变化。

发明效果

通过本发明获得的识别CLDN-5的胞外区的单克隆抗体与已有的结合在CLDN-5的胞外区的分子不同，具有高CLDN-5特异性。因此，能够不进行细胞的固定及透过性处理，检测及分离表达CLDN-5的细胞群中的小细胞。此外，通过本发明获得的抗体还能够进行学术利用。虽已知含有脑内血管内皮细胞的血管内皮细胞为异种细胞集团，但若使用在本发明中获得的抗体，则能够制成可通过CLDN-5的表达量的不同对这些细胞进行分组并分析等、用于理解血脑屏障的机制或疾病衰竭的关键线索的有用的试剂。

本发明中开发的抗体具有充分的、对由脑内血管内皮细胞产生的紧密连接形成的屏障进行调控的活性，因此例如通过与药物联合给药，或通过给予药物与抗体的复合体，能够促进药物通过血脑屏障，可进一步提高该药物对中枢神经疾病等疾病的预防或治疗效果。

根据本发明，能够提供一种作为新型抗体的针对CLDN-5胞外区的抗体，进一步有助于涉及CLDN-5、血脑屏障等的研究。

附图说明

图1表示实施例3-1)中得到的抗CLDN-5抗体的CLDN特异性的结果。纵轴为用各抗体与各CLDN表达细胞进行反应时的平均荧光强度除以溶剂与各CLDN表达细胞进行反应时得到的平均荧光强度而得到的值；横轴表示各抗体，柱表示使各CLDN或mock(mock为不表达CLDN蛋白的细胞)表达细胞与抗体进行了反应；图1A表示对人CLDN的结合性，图1B表示对小鼠CLDN的结合性。

图2为表示实施例3-2)中得到的抗CLDN-5抗体对各动物种类CLDN-5的结合性的FACS直方图。在直方图的最上方示出使用逆转录病毒在细胞中表达的各动物种类CLDN-5名称(h表示人的简写，c表示食蟹猕猴的简写，m表示小鼠的简写，mock表示不表达CLDN蛋白的逆转录病毒感染细胞)；在直方图的最左侧示出作为第一抗体而使用的抗体；在各直方图中，横轴表示荧光信号，纵轴表示细胞数，Vehicle表示不使第一抗体发挥作用的情况。

图3为暗示实施例3-4)中得到的抗CLDN-5抗体与CLDN-5的第一或第二胞外区中的哪一个结合的FACS直方图；在直方图的最上方示出将使用逆转录病毒在细胞中表达的CLDN-5的胞外区替换为CLDN-1的胞外区的CLDN-5突变体名称，在其上部示出该CLDN-5突变体的概要；在直方图的最左侧示出作为第一抗体而使用的抗体；在各直方图中，横轴表示荧光信号，纵轴表示细胞数；Vehicle表示不使第一抗体发挥作用的情况。

图4为暗示在CLDN-5的识别中，实施例3-5)中得到的抗CLDN-5抗体的哪个部位为必要的FACS直方图。在直方图的最上方示出将使用逆转录病毒在细胞中表达的CLDN-5的胞外区替换为CLDN-1的胞外区的CLDN-5突变体名称，在其上部示出该CLDN-5突变体的概要；在直方图的最左侧示出作为第一抗体而使用的抗体；在各直方图中，横轴表示荧光信号，纵轴表示细胞数；Vehicle表示不使第一抗体发挥作用的情况。

图5为表示实施例3-6)中得到的抗CLDN-5抗体对CLDN-5的一级结构的识别性的蛋白质印迹照片；在照片的最上方示出使用的第一抗体，在其下方示出使用的细胞；在照片左侧示出条带所表示的蛋白质名称。

图6表示在实施例4-2)中得到的MDCKII中，用逆转录病毒使各动物种类CLDN-5进行强制表达而制成的细胞的TEER的每日变化的结果。纵轴表示TEER，横轴表示从细胞汇合的那一天开始的天数。

图7表示在实施例4-3)中得到的MDCKII中，用抗CLDN-5抗体处理用逆转录病毒使各动物种类CLDN-5进行强制表达而制成的细胞时的TEER的经时变化的结果；横轴表示从添加被检测物质后开始的时间，纵轴表示用各时间测定的TEER值除以试验开始时的TEER值并记为百分率而得到的值；图表内示出的浓度表示各被检测物质在培养基中的浓度，Vehicle表示添加了用于稀释抗体的溶液的情况；各点(plot)为平均值(n＝3)，误差棒表示标准偏差；图7A中表示MDCKII/mock的结果，图7B中表示MDCKII/hCLDN-5的结果，图7C中表示MDCKII/cCLDN-5的结果，图7D中表示MDCKII/mCLDN-5的结果，左侧示出用小鼠抗体进行处理时的结果，右侧示出用大鼠抗体进行处理时的结果；此外，左侧与右侧的图表的Vehicle处理组和C-CPEmt处理组的结果为共通的值。

图8表示在实施例4-3)中得到的MDCKII中，用抗CLDN-5抗体处理用逆转录病毒使各动物种类CLDN-5进行强制表达而制成的细胞，经过12小时后更换培养基，进一步在培养24小时后测定TEER的结果；纵轴表示用各时间测定的TEER值除以试验开始时的TEER值并记为百分率而得到的值；横轴表示各被检测物质的名称及浓度，柱分别表示试验开始时、更换培养基前、从更换培养基开始24小时后的TEER的测定结果；Vehicle表示添加了用于稀释抗体的溶液的情况；各值为平均值(n＝3)，误差棒表示标准偏差；图8A表示MDCKII/mock的结果，图8B表示MDCKII/hCLDN-5的结果，图8C表示MDCKII/cCLDN-5的结果，图8D表示MDCKII/mCLDN-5的结果，左侧示出用小鼠抗体进行处理时的结果，右侧示出用大鼠抗体进行处理时的结果；此外，左侧与右侧的图表的Vehicle处理组和C-CPEmt处理组的结果为共通的值。

图9表示在实施例4-4)中得到的MDCKII中，用抗CLDN-5抗体处理用逆转录病毒使各动物种类CLDN-5进行强制表达而制成的细胞，经过12小时后对荧光素钠的透过性进行评价的结果；纵轴表示表观渗透系数，横轴表示各被检测物质的名称及浓度；Vehicle表示添加了用于稀释抗体的溶液的情况；各值为平均值(n＝3)，误差棒表示标准偏差；图表的第1行表示MDCKII/mock的结果，第2行表示MDCKII/hCLDN-5的结果，第3行表示MDCKII/cCLDN-5的结果，第4行表示MDCKII/mCLDN-5的结果，左侧示出用小鼠抗体进行处理时的结果，右侧示出用大鼠抗体进行处理时的结果；此外，同一行的左侧与右侧的图表的Vehicle处理组和C-CPEmt处理组的结果为共通的值。

图10表示在实施例4-4)中得到的MDCKII中，用抗CLDN-5抗体用逆转录病毒使各动物种类CLDN-5进行强制表达而制成的细胞，经过12小时后对4kDa FITC标记葡聚糖的透过性进行评价的结果；纵轴表示表观渗透系数，横轴表示各被检测物质的名称及浓度；Vehicle表示添加了用于稀释抗体的溶液的情况；各值为平均值(n＝3)，误差棒表示标准偏差；图表的第1行表示MDCKII/mock的结果，第2行表示MDCKII/hCLDN-5的结果，第3行表示MDCKII/cCLDN-5的结果，第4行表示MDCKII/mCLDN-5的结果，左侧示出用小鼠抗体进行处理时的结果，右侧示出用大鼠抗体进行处理时的结果；此外，同一行的左侧与右侧的图表的Vehicle处理组和C-CPEmt处理组的结果为共通的值。

图11表示用抗CLDN-5抗体处理在实施例5-1)中得到的血脑屏障模拟系统时的TEER的经时变化的结果；横轴表示从添加被检测物质后开始的时间，纵轴表示用各时间测定的TEER值除以试验开始时的TEER值并记为百分率而得到的值；图表内示出的浓度表示各被检测物质在培养基中的浓度，Vehicle表示添加了用于稀释抗体的溶液的情况；各点为平均值(n＝3)，误差棒表示标准偏差；左侧示出用小鼠抗体进行处理时的结果，右侧示出用大鼠抗体进行处理时的结果；此外，左侧与右侧的图表的Vehicle处理组和C-CPEmt处理组的结果为共通的值。

图12表示用抗CLDN-5抗体处理在实施例5-2)中得到的血脑屏障模拟系统，经过12小时后对荧光素钠的透过性进行评价的结果；纵轴表示表观渗透系数，横轴表示各被检测物质的名称及浓度；Vehicle表示添加了用于稀释抗体的溶液的情况；各值为平均值(n＝3)，误差棒表示标准偏差；左侧示出用小鼠抗体进行处理时的结果，右侧示出用大鼠抗体进行处理时的结果；此外，左侧与右侧的图表的Vehicle处理组和C-CPEmt处理组的结果为共通的值。

图13表示用抗CLDN-5抗体处理在实施例5-2)中得到的血脑屏障模拟系统，经过12小时后对4kDa FITC标记葡聚糖的透过性进行评价的结果；纵轴表示表观渗透系数，横轴表示各被检测物质的名称及浓度；Vehicle表示添加了用于稀释抗体的溶液的情况；各值为平均值(n＝3)，误差棒表示标准偏差；左侧示出用小鼠抗体进行处理时的结果，右侧示出用大鼠抗体进行处理时的结果；此外，左侧与右侧的图表的Vehicle处理组和C-CPEmt处理组的结果为共通的值。

图14表示用抗CLDN-5抗体处理在实施例5-3)中得到的血脑屏障模拟系统，经过12小时后通过免疫染色对ZO-1及CLDN-5的定位进行评价的结果；在图像的最上部示出使用的第一抗体，在左侧示出ZO-1的染色图像，右侧示出CLDN-5的染色图像；在各图像的左侧上部示出经过处理的被检测物质的名称；Vehicle表示添加了用于稀释抗体的溶液的情况。

具体实施方式

1.定义

在本说明书中，诸如“含有”及“包含”的表述包括“含有”、“包含”、“实质上由…形成”及“仅由…形成”的概念。

氨基酸序列的“同一性”是指2个以上能够对比的氨基酸序列相对于彼此的氨基酸序列的一致程度。因此，某两个氨基酸序列的一致性越高，则这两个序列的同一性或相似性越高。氨基酸序列的同一性的等级例如可使用作为序列分析用工具的FASTA，并使用缺省参数(default parameter)确定。或者可使用Karlin及Altschul的算法BLAST(KarlinS,Altschul SF.“Methods for assessing the statistical significance of molecularsequence features by using general scoringschemes”Proc Natl Acad Sci USA.87:2264-2268(1990)、KarlinS,Altschul SF.“Applications and statistics for multiplehigh-scoring segments in molecular sequences.”Proc Natl Acad Sci USA.90:5873-7(1993))确定。开发出了基于所述BLAST算法的被称为BLASTX的程序。这些分析方法的具体手法为公知，参照National Center of Biotechnology Information(NCBI)的网站(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/)即可。此外，碱基序列的“同一性”也以上述为准进行定义。

在本说明书中，“保守性替换”是指氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基替换。例如，在赖氨酸、精氨酸、组氨酸这些具有碱性侧链的氨基酸残基之间进行的替换相当于保守性替换。除此之外，天冬氨酸、谷氨酸这些具有酸性侧链的氨基酸残基；甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸这些具有不带电的极性侧链的氨基酸残基；丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、甲硫氨酸、色氨酸这些具有非极性侧链的氨基酸残基；苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸这些具有β-分支侧链的氨基酸残基；酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸这些具有芳香族侧链的氨基酸残基之间的替换也同样相当于保守性替换。.

在本说明书中，“CDR”为Complementarity Determining Region的缩写，也称作互补决定区。CDR是指存在于免疫球蛋白的可变区的区域，其为深度参与抗体所具有的对抗原的特异性结合的区域。并且，“轻链CDR”是指存在于免疫球蛋白的轻链的可变区的CDR，“重链CDR”是指存在于免疫球蛋白的重链的可变区的CDR。

在本说明书中，“可变区”是指包含CDR1～CDR3(以下，简写作“CDRs1-3”)的区域。这些CDRs1-3的排列顺序没有特别限定，优选是指在从N端侧至C端侧的方向上，以CDR1、CDR2及CDR3的顺序或与之相反的顺序，连续或经由后文所述的被称作框架区(FR)的其他氨基酸序列排列的区域。并且，“重链可变区”为排列有上述重链CDRs1-3的区域，“轻链可变区”为排列有上述轻链CDRs1-3的区域。

如上所述，各可变区的除上述CDR1-3以外的区域被称为框架区(FR)。特别是将可变区的N端与上述CDR1之间的区域定义为FR1，将CDR1与CDR2之间的区域定义为FR2，将CDR2与CDR3之间的区域定义为FR3，将CDR3与可变区的C端之间的区域定义为FR4。

FR作为上述抗原识别序列，还兼具作为特别重要的连接CDRs1-3的linker序列的功能，其为有助于可变区整体的三维结构形成的区域。

在本说明书中，有时也将各种Claudin蛋白记作“X CLDN-Y”或“X CLDN-Y蛋白”。X表示来源的生物种类(h：人、c：食蟹猕猴、m：小鼠)，Y表示Claudin蛋白的编号。例如，人Claudin-5蛋白记作“hCLDN-5”或“hCLDN-5蛋白”。

2.抗体

作为一个实施方式，本发明涉及一种特异性识别CLDN-5蛋白的胞外区的三维结构或一级结构的抗体(在本说明书中，有时也记作“本发明的抗体”、“CLDN-5胞外区抗体”或简写作“抗CLDN-5抗体”等)。

以下对其进行说明。

Claudin-5蛋白为Claudin-5(有时也称作CLDN-5、Cldn-5、CLDN5、Cldn5等)基因的表达产物，是一种在生物内表达的CLDN-5蛋白。作为CLDN-5蛋白的来源的生物种类没有特别限制，可列举出动物，例如人、猴、小鼠、大鼠、狗、猫、兔、猪、马、牛、绵羊、山羊、鹿等各种哺乳类动物。其中，优选人、猴(特别是食蟹猕猴)等。

来自各种生物种类的CLDN-5蛋白的氨基酸序列为公知。具体而言，例如作为人CLDN-5蛋白，可列举出由序列号27所示的氨基酸序列形成的蛋白质等，作为食蟹猕猴CLDN-5蛋白，可列举出由序列号28所示的氨基酸序列形成的蛋白质等，作为小鼠CLDN-5蛋白，可列举出由序列号29所示的氨基酸序列形成的蛋白质等。

CLDN-5蛋白只要保持其本来的活性且CLDN-5蛋白质检能够经由其胞外环进行相互作用而形成紧密连接，则可具有替换、缺失、添加、***等氨基酸突变。从更不易损害活性的角度出发，突变优选为替换，可更优选地列举出保守性替换。

作为CLDN-5蛋白的优选具体例，可列举出选自由下述(a)中记载的蛋白质及下述(b)中记载的蛋白质组成的组中的至少一种：

(a)由序列号27、28及29中的任一种所表示的氨基酸序列形成的蛋白质、及

(b)由与序列号27、28及29中的任一种所表示的氨基酸序列具有85％以上同一性的氨基酸序列形成，且具有紧密连接形成能力的蛋白质。

在上述(a)及(b)中，氨基酸序列优选为序列号27及28。

在上述(b)中，同一性更优选为90％以上，进一步优选为95％以上，更进一步优选为98％以上。

作为上述(b)中记载的蛋白质的一个例子，例如可列举出(b’)由序列号27、28及29中的任一种所表示的氨基酸序列中的1个或多个氨基酸被替换、缺失、添加或***的氨基酸序列形成，且具有肌醇磷酸键水解活性的蛋白质。在上述(b’)中，多个例如为2～20个，优选为2～10个，更优选为2～5个，更进一步优选为2或3个。

在CLDN-5蛋白在细胞膜(优选为内皮细胞膜，优选为血管内皮细胞膜，更优选为脑毛细血管内皮细胞膜)上跨膜4次而排列的状态下，CLDN-5蛋白的胞外区为露出在细胞外的区域，若如此则没有特别限制。此外，CLDN-5蛋白的胞外区由存在于N端侧的第一胞外环与存在于C端侧的第二胞外环形成。各CLDN-5蛋白的胞外区、以及第一胞外环及第二胞外环已为公知，或能够使用各种跨膜区预测工具(例如，SOSUI：http://harrier.nagahama-i-bio.ac.jp/sosui/等)等而容易地确定。

作为胞外区的具体例，例如可列举出由序列号27所示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第80位氨基酸(丙氨酸)的区域(第一胞外环)及N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域(第二胞外环)。作为其他CLDN-5蛋白中的胞外区的具体例，可列举出与上述区域对应的区域。此处，在本说明书中，“对应的区域”例如为使用序列分析用工具(FASTA、BLAST等)对人CLDN-5蛋白的氨基酸序列与其他CLDN-5氨基酸序列进行比对时所对应的区域。

本发明的抗体特异性识别CLDN-5蛋白的胞外区的三维结构或一级结构。换言之，本发明的抗体与CLDN-5蛋白的胞外区的三维结构或一级结构结合或具有结合性。

当本发明的抗体的识别区为一级结构时，识别区为连续的氨基酸序列。此外，当本发明的抗体的识别区为三维结构时，识别区可以为连续的氨基酸序列，也可以为多个互不连续的氨基酸序列。

构成本发明的抗体的识别区的氨基酸残基的数量没有特别限制，例如为40以下、35以下、6～30、6～25、6～20、6～15或6～10。

作为本发明的抗体的识别区的优选具体例，可列举出第一胞外环内的区域(一级结构或三维结构)、第二胞外环内的区域(一级结构或三维结构)、由第一胞外环和/或第二胞外环形成的三维结构等，作为更优选的具体例，可列举出第二胞外环内的区域(一级结构或三维结构)。

作为本发明的抗体的识别区的优选具体例的第一胞外环内的区域，例如可列举出由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第80位氨基酸(丙氨酸)的区域，可优选列举出含有N端第68位氨基酸(天冬氨酸)的区域。作为其他CLDN-5蛋白的具体例，也可列举出与其对应的区域。

作为本发明的抗体的识别区的优选具体例的第二胞外环内的区域，例如可列举出由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域，可优选列举出含有N端第151位氨基酸(丝氨酸)的区域。作为其他CLDN-5蛋白的具体例，也可列举出与其对应的区域。

当本发明的抗体的识别区为第一胞外环内的区域时，作为优选的一个实施方式，若为针对人CLDN-5蛋白的抗体，则可列举出如下抗体：该抗体与由序列号45所表示的氨基酸序列形成的蛋白质(1-1-5：实施例3-4)的结合性为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白的结合性的1/5以下、1/20以下、1/100以下、1/500以下、1/2000以下或1/10000以下，所述蛋白质(1-1-5：实施例3-4)中，人CLDN-5蛋白的第一胞外环被替换为人CLDN-1蛋白的序列。

当本发明的抗体的识别区为第一胞外环内的区域时，作为优选的一个实施方式，若为针对人CLDN-5蛋白的抗体，则可列举出如下抗体：该抗体与由序列号41所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白点突变体D68E(实施例3-5)的结合性，为其与由序列号27所示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白的结合性的1/5以下、1/20以下、1/100以下、1/500以下、1/2000以下或1/10000以下。

当本发明的抗体为将第一胞外环内的区域作为识别区的、针对人CLDN-5蛋白的抗体时，作为优选的一个实施方式，可列举出与由序列号48所表示的氨基酸序列形成的蛋白质(5-5-1：实施例3-4)具有结合性的抗体，所述蛋白质(5-5-1：实施例3-4)中，人CLDN-5蛋白的第二胞外环被替换为人CLDN-1蛋白的序列。

当本发明的抗体的识别区为第二胞外环内的区域时，作为优选的一个实施方式，若为针对人CLDN-5蛋白的抗体，则可列举出如下抗体：该抗体与由序列号48所表示的氨基酸序列形成的蛋白质(5-5-1：实施例3-4)的结合性为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白的结合性的1/5以下、1/20以下、1/100以下、1/500以下、1/2000以下或1/10000以下，所述蛋白质(5-5-1：实施例3-4)中，人CLDN-5蛋白的第二胞外环被替换为人CLDN-1蛋白的序列。

当本发明的抗体的识别区为第二胞外环内的区域时，作为优选的一个实施方式，若为针对人CLDN-5蛋白的抗体，则可列举出如下抗体：该抗体与由序列号43所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白点突变体S151T(实施例3-5)的结合性，为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白的结合性的1/5以下、1/20以下、1/100以下、1/500以下、1/2000以下或1/10000以下。

当本发明的抗体为将第二胞外环内的区域作为识别区的、针对人CLDN-5蛋白的抗体时，作为优选的一个实施方式，可列举出与由序列号45所表示的氨基酸序列形成的蛋白质(1-1-5：实施例3-4)具有结合性的抗体，所述蛋白质(1-1-5：实施例3-4)中，人CLDN-5蛋白的第一胞外环被替换为人CLDN-1蛋白的序列。

另外，被检测抗体与目标CLDN蛋白的结合性与实施例1-4相同，可通过使用被检测抗体(或用于稀释该抗体的溶液)对表达目标CLDN蛋白的细胞进行荧光染色，对荧光染色细胞进行FACS分析而检测。可将细胞的荧光信号的总和看做被检测抗体与目标CLDN蛋白的结合性。当使用被检测抗体时的荧光信号的总和为使用该抗体稀释液时(Vehicle)的荧光信号的总和的1.5倍、2倍、5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、200倍、500倍、1000倍、5000倍或10000倍以上时，可判定为被检测抗体与目标蛋白质“具有结合性”。对于结合性，在以下也相同。

作为本发明的抗体的识别区的优选具体例的由第一胞外环和/或第二胞外环形成的三维结构，例如可列举出由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白中的、N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第80位氨基酸(丙氨酸)的区域及N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域所形成的三维结构，可优选列举出由N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第67位氨基酸(酪氨酸)的区域及N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域形成的三维结构，可更优选地列举出由N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第55位氨基酸(缬氨酸)的区域及N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域形成的三维结构，可进一步优选地列举出由N端第28位氨基酸(脯氨酸)～第48位氨基酸(赖氨酸)的区域及N端第147位氨基酸(苯丙氨酸)～第163位氨基酸(丙氨酸)的区域形成的三维结构。作为其他CLDN-5蛋白的具体例，也可列举出与其对应的区域。

当本发明的抗体的识别区为由第一胞外环和/或第二胞外环形成的三维结构时，作为优选的一个实施方式，若为针对人CLDN-5蛋白的抗体，则可列举出如下抗体：该抗体与由序列号44所表示的氨基酸序列形成的突变体(TM：实施例3-5)的结合性为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白的结合性的1/5以下、1/20以下、1/100以下、1/500以下、1/2000以下、1/10000以下，所述突变体(TM：实施例3-5)中，在人CLDN-5蛋白的跨膜区域中导入了小鼠CLDN-5的氨基酸。

当本发明的抗体为将由第一胞外环和/或第二胞外环形成的三维结构作为识别区的、针对人CLDN-5蛋白的抗体时，作为优选的一个实施方式，可列举出如下抗体：该抗体与由序列号46及47所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白突变体(1-5-5及5-1-5：实施例3-4)的结合性，为其与由序列号27所表示的氨基酸序列形成的人CLDN-5蛋白的结合性的1/5以下、1/20以下、1/100以下、1/500以下、1/2000以下、1/10000以下。

优选本发明的抗体对CLDN-5蛋白的特异性更高。由此，能够进一步降低由打开除血脑屏障以外的紧密连接而造成的副作用。从该角度出发，作为本发明的抗体，可优选列举出与除CLDN-5蛋白以外的CLDN家族蛋白的结合性为与CLDN-5蛋白的结合性的1/5以下的抗体。

作为用于判定该结合性的比较对象的“除CLDN-5蛋白以外的CLDN家族蛋白”，例如在为人时，可列举出CLDN-1、CLDN-2、CLDN-3、CLDN-4、CLDN-6、CLDN-7等，在为小鼠时，可列举出CLDN-1、CLDN-2、CLDN-3、CLDN-4等。在判定上述结合性时，作为比较对象的CLDN家族蛋白可以仅为一种，也可以任意组合两种以上，还可以为全部种类。

从对CLDN-5蛋白的特异性的角度出发，优选本发明的抗体与人及小鼠CLDN-1蛋白、人及小鼠CLDN-2蛋白、人及小鼠CLDN-3蛋白、人及小鼠CLDN-4蛋白、人CLDN-6蛋白、以及人CLDN-7蛋白的胞外区均不结合。

本发明的抗体的解离常数(Kd)没有特别限制。Kd例如为1×10^-7(M)以下，优选为3×10^-8(M)以下，更优选为1×10^-8(M)以下，进一步优选为5×10^-9(M)以下。

从与CLDN-5蛋白的结合性、血脑屏障调控活性等角度出发，作为本发明的抗体，可优选列举出下述抗体A～M。并且，作为抗体A～M，可更优选地列举出小鼠抗CLDN-5抗体5克隆、大鼠抗CLDN-5抗体8克隆。抗体根据各自的杂交瘤细胞的克隆名，命名为M3、M11、M23、M29、M48、R2、R3、R8、R9、R11、R14、R20、R28。其中，优选M48及R9。以下，对抗体A～M进行说明。

(抗体A)

抗体A包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号50所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号52所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号54所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号141所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号143所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号145所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体A中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表2及4中记载的抗体M3的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体A，更具体而言，可列举出抗体M3。

(M3)

小鼠抗CLDN-5抗体M3的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而得到的序列)的序列为序列号1所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而得到的序列)的序列为序列号2所表示的氨基酸序列。推测本抗体识别第二胞外环的三维结构。此外，推测本抗体识别hCLDN-5的跨膜区域所产生的三维结构。

(抗体B)

抗体B包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号57所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号59所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号61所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号148所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号150所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号152所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体B中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表2及4中记载的抗体M11的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体B，更具体而言，可列举出抗体M11。

(M11)

小鼠抗CLDN-5抗体M11的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号3所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号4所表示的氨基酸序列。推测本抗体识别第一胞外环的三维结构。

(抗体C)

抗体C包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号64所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号66所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号68所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号155所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号157所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号159所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体C中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表2及4中记载的抗体M23的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体C，更具体而言，可列举出抗体M23。

(M23)

小鼠抗CLDN-5抗体M23的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号5所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号6所表示的氨基酸序列。推测本抗体识别第二胞外环的三维结构。

(抗体D)

抗体D包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号71所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号73所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号75所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号162所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号164所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号166所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体D中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表2及4中记载的抗体M29的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体D，更具体而言，可列举出抗体M29。

(M29)

小鼠抗CLDN-5抗体M29的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号7所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号8所表示的氨基酸序列。推测本抗体识别第二胞外环。

(抗体E)

抗体E包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号78所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号80所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号82所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号169所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号171所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号173所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体E中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表2及4中记载的抗体M48的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体E，更具体而言，可列举出抗体M48。

(M48)

小鼠抗CLDN-5抗体M48的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号9所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号10所表示的氨基酸序列。推测本抗体识别第二胞外环的三维结构。

(抗体F)

抗体F包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号85所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号87所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号89所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号176所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号178所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号180所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体F中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表2及4中记载的抗体R2的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体F，更具体而言，可列举出抗体R2。

(R2)

大鼠抗CLDN-5抗体R2的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号11所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号12所表示的氨基酸序列。推测本抗体识别第一胞外环的三维结构。

(抗体G)

抗体G包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号92所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号94所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号96所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号183所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号185所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号187所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体G中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表2及4中记载的抗体R3的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体G，更具体而言，可列举出抗体R3。

(R3)

大鼠抗CLDN-5抗体R3的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号13所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号14所表示的氨基酸序列。推测本抗体识别第二胞外环的三维结构。

(抗体H)

抗体H包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号99所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号101所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号103所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号190所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号192所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号194所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体H中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表3及5中记载的抗体R8的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体H，更具体而言，可列举出抗体R8。

(R8)

大鼠抗CLDN-5抗体R8的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号15所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号16所表示的氨基酸序列。

(抗体I)

抗体I包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号106所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号108所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号110所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号197所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号199所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号201所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体I中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表3及5中记载的抗体R9的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体I，更具体而言，可列举出抗体R9。

(R9)

大鼠抗CLDN-5抗体R9的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号17所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号18所表示的氨基酸序列。推测本抗体识别第二胞外环的一级结构。

(抗体J)

抗体J包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号113所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号115所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号117所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号204所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号206所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号208所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体J中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表3及5中记载的抗体R11的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体J，更具体而言，可列举出抗体R11。

(R11)

大鼠抗CLDN-5抗体R11的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号19所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号20所表示的氨基酸序列。

(抗体K)

抗体K包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号120所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号122所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号124所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号211所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号213所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号215所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体K中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表3及5中记载的抗体R14的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体K，更具体而言，可列举出抗体R14。

(R14)

大鼠抗CLDN-5抗体R14的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号21所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号22所表示的氨基酸序列。推测本抗体识别第二胞外环的一级结构及三维结构。此外，推测本抗体识别hCLDN-5的跨膜区域所产生的三维结构。

(抗体L)

抗体L包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号127所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号129所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号131所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号218所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号220所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号222所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体L中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表3及5中记载的抗体R20的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体L，更具体而言，可列举出抗体R20。

(R20)

大鼠抗CLDN-5抗体R20的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号23所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号24所表示的氨基酸序列。

(抗体M)

抗体M包括重链可变区和/或轻链可变区，

该重链可变区包含：

含有序列号134所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR1、

含有序列号136所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR2、及

含有序列号138所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的重链CDR3，

该轻链可变区包含：

含有序列号225所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR1、

含有序列号227所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR2、及

含有序列号229所表示的氨基酸序列或相对于该氨基酸序列具有95％以上同一性的氨基酸序列的轻链CDR3。

在抗体M中，只要至少含有上述重链及轻链的CDR1～3即可，也可进一步含有重链可变区及轻链可变区的FR。作为重链可变区的FR1～FR4的序列、轻链可变区的FR1～FR4的序列、重链可变区整体的序列、轻链可变区整体的序列，可列举出表3及5中记载的抗体R28的各序列或相对于该序列具有95％以上同一性的氨基酸序列。作为抗体M，更具体而言，可列举出抗体R28。

(R28)

大鼠抗CLDN-5抗体R28的重链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号25所表示的氨基酸序列，轻链可变区整体(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)的序列为序列号26所表示的氨基酸序列。

在抗体M3、M11、M23、M29、M48、R2、R3、R8、R9、R11、R14、R20、R28的重链可变区整体的序列、及轻链可变区整体的序列的上述优选例(序列号1～26)中，其氨基酸序列也可以发生突变。例如，能够采用相对于上述优选例(序列号1～26)优选具有90％以上同一性、更优选具有95％以上同一性、进一步优选具有98％以上同一性、更进一步优选具有99％以上同一性的序列作为抗体M3、M11、M23、M29、M48、R2、R3、R8、R9、R11、R14、R20、R28的重链可变区整体的序列、及轻链可变区整体的序列。突变位点可以为任意，在不以减弱抗体的亲和性为目的时，优选为除CDR以外的部位。

本发明的抗体可以为单克隆抗体、多克隆抗体中的任一种，从Kd值、特异性等角度出发，优选为单克隆抗体。

本发明的抗体的分子量没有特别限制，下限例如为20,000，优选为50,000，优选为100,000，更优选为120,000，上限例如为1,000,000，优选为500,000，更优选为200,000。

本发明的抗体的结构没有特别限制。本发明的抗体可含有恒定区，也可不含恒定区。在含有恒定区时，可含有全部的重链的恒定区(CH1、CH2及CH3)以及轻链的恒定区(CL)，也可含有其中的任意一种或两种以上的组合。

作为本发明的抗体的结构的具体例，可列举出免疫球蛋白、Fab、F(ab’)₂、微抗体(minibody)、scFv-Fc、Fv、scFv、双链抗体(diabody)、三链抗体(triabody)、四链抗体(tetrabody)等。其中，从本发明的效果的角度出发，可优选列举出免疫球蛋白。

免疫球蛋白具备将两个含有1条重链与1条轻链的结构组合而成的结构，所述重链具有重链可变区及重链恒定区，所述轻链具有轻链可变区及轻链恒定区。

Fab包含重链的片段和轻链，所述重链的片段含有重链可变区及重链恒定区中的CH1，所述轻链含有轻链可变区及轻链恒定区(CL)，Fab具有重链可变区与轻链可变区通过上述非共价结合的分子间相互作用而缔合、或是通过二硫键键合而成的结构。在Fab中，分别存在于CH1与CL的半胱氨酸残基的巯基可彼此进行二硫键键合。

F(ab’)₂是指，具有两对上述Fab，且CH1之间通过包含在它们中的半胱氨酸残基的巯基形成二硫键而成的结构。

微抗体是指，两个在构成下述scFV的重链可变区上结合有CH3的片段通过非共价结合的分子间相互作用而在CH3之间缔合的结构。

scFv-Fc是指，以与上述微抗体相同的方式，两个含有下述scFv、CH2及CH3的抗体片段通过非共价结合的分子间相互作用而在CH3之间缔合，在包含于各自的CH3的半胱氨酸残基的巯基之间形成二硫键的结构。

Fv也被称为抗体的最小结构单元，其为重链可变区与轻链可变区通过非共价结合的分子间相互作用而缔合的结构。在Fv中，存在于重链可变区及轻链可变区内的半胱氨酸残基的巯基可彼此形成二硫键。

scFv为以接头连接重链可变区的C端与轻链可变区的N端而成的结构、或以接头连接重链可变区的N端与轻链可变区的C端而成的结构，也被称为单链抗体。

双链抗体、三链抗体及四链抗体分别为上述scFv形成二聚体、三聚体及四聚体，以与Fv等相同的方式、通过可变区之间的非共价结合的分子间相互作用等、以结构上稳定的状态进行缔合的结构。

当本发明的抗体为免疫球蛋白时，其类别没有特别限定。作为该类别，例如可列举出IgA、IgD、IgE、IgG、IgM等以及这些类别的亚类。作为优选的类别，例如可列举出IgG、IgM等，可优选列举出IgG，可更优选地列举出IgG2，可进一步优选地列举出IgG2a。

本发明的抗体的来源没有特别限制。本发明的抗体例如可以为来自人的抗体、来自小鼠的抗体、来自大鼠的抗体、来自兔的抗体、来自猴的抗体、来自黑猩猩的抗体等。此外，本发明的抗体可以是嵌合抗体(例如将来自除人以外的生物(小鼠等)的抗体的恒定区的氨基酸序列替换为来自人的抗体的恒定区的氨基酸序列而成的抗体)、人源化抗体、全人源化抗体等。

本发明的抗体例如可通过将表达序列号27所表示的人CLDN-5蛋白的质粒用作免疫原，除此以外通过根据或基于常规方法的方法进行制备。(制备方法1)。具体而言，当本发明的抗体为多克隆抗体时，可用该质粒免疫家兔等非人动物，通过常规方法从该免疫动物的血清中获得。另一方面，当本发明的抗体为单克隆抗体时，可用质粒免疫小鼠等非人动物，使回收自所得到的淋巴节或脾脏的淋巴球与骨髓瘤细胞进行细胞融合而制备杂交瘤细胞，并从中获得(Current protocols in Molecular Biology edit.Ausubel et al.(1987)Publish.John Wiley and Sons.Section 11.4～11.11)。

用质粒免疫的对象动物只要是能够制备抗体的动物则没有特别限制。作为该对象动物，可优选列举出自身免疫性疾病动物(为小鼠时，例如为BXSB小鼠等)。

在至少已知本发明的抗体CDR的氨基酸序列时，也可通过包含以下工序的方法(制备方法2)进行制备：培养利用编码本发明抗体的多核苷酸进行了转化的宿主，对含有本发明抗体的部分进行回收的工序。

编码本发明抗体的多核苷酸只要以能够表达的状态包含本发明抗体，则没有特别限制，除本发明的抗体的编码序列以外，也可含有其他序列。作为其他序列，可列举出与本发明的抗体编码序列相邻排列的分泌信号肽编码序列、启动子序列、增强子序列、阻抑序列(repressor sequence)、绝缘子序列、复制起点、耐药基因编码序列等。此外，编码本发明抗体的多核苷酸可以是直链状的多核苷酸，也可以是环状的多核苷酸(载体等)。

作为本发明的多核苷酸的具体例，可以为(I)含有对选自由本发明抗体的重链、重链可变区及重链CDRs1-3组成的组中的至少一种进行编码的碱基序列的多核苷酸、(II)含有对选自由本发明抗体的轻链、轻链可变区及轻链CDRs1-3组成的组中的至少一种进行编码的碱基序列的多核苷酸，也可列举出(III)含有对选自由本发明抗体的重链、重链可变区及重链CDRs1-3组成的组中的至少一种进行编码的碱基序列的核酸、以及含有对选自由本发明抗体的轻链、轻链可变区及轻链CDRs1-3组成的组中的至少一种进行编码的碱基序列的多核苷酸等。

宿主没有特别限制，例如可列举出昆虫细胞、真核细胞、哺乳类细胞等。其中，从更有效地表达抗体的角度出发，优选作为哺乳类细胞的HEK细胞、CHO细胞、NSO细胞、SP2/0细胞、P3U1细胞等。

转化、培养及回收的方法没有特别限制，可采用抗体制备中公知的方法。

在回收后，可根据需要对本发明的抗体进行纯化。纯化可通过抗体制备中公知的方法，例如层析法、透析等进行。

3.复合体

作为一个实施方式，本发明涉及本发明的抗体与药物的复合体(在本说明书，也记作“本发明的复合体”)。以下，对所述复合体进行说明。

药物没有特别限制，可根据需要进行适当选择。作为药物，例如可列举出核酸、多核苷酸、基因及它们的类似物、糖胺聚糖及其衍生物、寡糖、多糖及它们的衍生物、蛋白质及肽等生理活性物质；抗神经剂(抗神経剤)、抗病毒剂、抗癌剂、抗生物质、酶制剂、抗氧化剂、抗炎剂、类固醇制剂、血管紧张素转化酶抑制剂、血管扩张剂、平滑肌细胞的增殖和/或迁移抑制剂、血小板凝集抑制剂、抗凝剂、过敏介质释放抑制剂、免疫抑制剂、脂质摄取抑制剂、激素、血管紧张素受体拮抗剂、血管内皮细胞的增殖或抑制剂、醛糖还原酶抑制剂、脂肪氧合酶抑制剂、免疫刺激剂、美拉德反应抑制剂、淀粉样变性抑制剂、一氧化氮合成酶(NOS；Nitric Oxide Synthase)抑制剂、晚期糖基化终末产物(AGEs；Advanced glycationendproducts)抑制剂、抗Aβ抗体、抗Tau抗体等神经疾病抗体及自由基清除剂等药理性活性物质等。本发明的复合体含有本发明的抗体作为部分结构，并能够由此更有效地透过血脑屏障，因此在药物中优选抗神经剂(例如，能够用于中枢神经系统的治疗和/或诊断的药物)。

作为抗神经剂的具体例，可列举出Constan、氯赛***(Sepazon)、***、奥沙***(Serenal)、Solanax、依替***(Depas)、异恶唑草酮(Balance)、来克伦(Meilax)、氯噻西泮(Rize)、氯硝安定(Rivotril)、溴西泮(Lexotan)、劳拉西泮(Wypax)、坦度螺酮(Sediel)、托非索洋(Grandaxin)、氟***(Erispan)等抗焦虑药；安拿芬尼(Anafranil)、盐酸丙咪嗪(Tofranil)、阿米替林(Tryptanol)、阿莫沙平、洛非帕明(Amplit)、度琉平(Prothiaden)、司普替林(Tecipul)、盐酸米安色林(Tetramide)、路滴美、曲唑酮(Desyrel)、***唑酮(Reslin)、舒必林(Abilit)、脱蒙治(Dogmatyl)、舒必利(Miradol)、***、Depromel、帕罗西汀、马来酸氟伏沙明、盐酸米那普仑(Toledomine)等抗抑郁药；佐匹克隆(Amoban)、酣乐欣(Halcion)、Evamyl、酒石酸唑吡坦(Myslee)、利马扎封(Rhythmy)、乐导蒙、乐得眠、氟硝西泮(Silece)、夸西泮(Doral)、硝基安定(Benzalin)、艾司***、氟硝安定(Rohypnol)、盐酸氟安定(Insumin)、卤噁***(Somelin)、盐酸氟西泮(Dalmate)、***(Phenobal)、异戊巴比妥(Isomytal)等抗失眠药；冬眠灵、氯丙嗪(Contomin)、哌氰嗪(Neuleptil)、左美丙嗪(Hirnamin)、PZC、硫利达嗪(Mellaril)、溴哌利多(Impromen)、氟哌啶醇(Serenace)、匹莫齐特(Orap)、莫沙帕明(Cremine)、盐酸氯卡帕明(Clofekton)、盐酸卡匹帕明(Defekton)、奥昔哌汀(Forit)、佐替平(Lodopin)、羟嗪(Atarax)等镇静剂；碳酸锂(Limas)、卡马西平等抗躁狂症药；乙苯妥英、苯妥英、乙酰苯丁酰脲、扑痫酮、苏太明、乙琥胺、氯硝西泮、卡马西平、丙戊酸钠、唑尼沙胺等抗癫痫药；左旋多巴、甲磺酸培高利特、盐酸金刚烷胺、盐酸苯海索、盐酸吡咯庚汀(piroheptine hydrochloride)、盐酸马扎替可、盐酸美噻吨、比哌立登、普罗吩胺、屈昔多巴等抗帕金森病药等。

本发明的复合体可通过直接结合本发明的抗体与药物而形成，或通过经由接头等间接结合本发明的抗体与药物而形成。结合方式没有特别限制，例如可列举出共价键、配位键、离子键等。此外，也可在脂质体等微粒的表面上修饰本发明的抗体，使微粒内含有药物。本发明的抗体与药物的结合可根据其结合方式，按照公知的方法或以公知的方法为基准进行实施。

共价键例如可通过使本发明的抗体与药物各自具有的官能团或根据需要导入的官能团进行反应而进行。作为该官能团的组合，例如可列举出氨基与羧基、羧基与羟基、马来酰亚胺基与巯基、巯基与巯基、酰肼基与酮基、酰肼基与醛基、氨基与醛基、巯基与羧基、氨基与方酸衍生物、烯醛基与氨基、卤代酯与巯基、叠氮化物与炔烃等。

4.药物

作为一个实施方式，本发明涉及含有选自由本发明的抗体及本发明的复合体组成的组中的至少一种的药物(在本说明书中，也记作“本发明的药物”)。

本发明的抗体可打开脑血管内皮细胞间的连接，促进血脑屏障的物质透过。因此，本发明的抗体、本发明的复合体可适宜地用作药物的有效成分，特别是可适宜地用作用于如下用途的药物的有效成分：血脑屏障调控(抑制)用、脑血管内皮细胞层屏障功能调控(抑制)用、血脑屏障的药物透过促进用、CLDN-5蛋白的定位变动用(即，使通常存在于细胞间隙的CLDN-5的定位发生变化，减弱细胞间隙的粘附性的用途)等用途。

本发明的药物含有本发明的抗体但不含本发明的复合体时，可通过与药物联合使用，从而谋求促进该药物透过血脑屏障。此外，本发明的药物含有本发明的复合体时，可通过直接使用或与药物联合使用，从而谋求促进该复合体中的药物或联合使用的药物透过血脑屏障。

本发明的药物中的有效成分的含量可考虑作为对象的疾病的种类、作为目标的治疗效果、给药方法、治疗时间、患者的年龄及患者的体重等而适当设定。例如，将本发明的药物整体设为100重量份时，可将本发明的药物中的有效成分的含量设为0.0001重量份～100重量份左右。

只要能够得到所需的效果，则本发明的药物的给药形式没有特别限制，可通过口服给药及非口服给药(例如静脉注射、肌肉注射、皮下给药、直肠给药、经皮给药、局部给药)中的任一种给药途径对包括人的哺乳类进行给药。优选的给药形式为非口服给药，更优选为静脉注射。用于口服给药及非口服给药的剂型及其制造方法为本领域技术人员所周知，能够通过将有效成分与药学上可接受的载体等进行混合等，并按照常规方法进行制造。

用于非口服给药的剂型可列举出注射用制剂(例如，静脉滴注剂、静脉注射剂、肌肉注射剂、皮下注射剂、皮内注射剂)、外用剂(例如，软膏剂、泥罨敷剂、洗剂)、栓剂、吸入剂、滴眼剂、眼膏剂、点鼻剂、点耳剂、脂质体制剂等。例如，可将抗体或细胞溶解于注射用蒸馏水而制备注射用制剂，并根据需要添加助溶剂、缓冲剂、pH调节剂、等渗剂、镇痛剂、防腐剂及稳定剂等。药物也可制成使用时进行制备的冻干制剂。

本发明的药物优选进一步含有能够提高血脑屏障调控(抑制)活性、脑血管内皮细胞层屏障功能调控(抑制)活性、血脑屏障的药物透过促进活性等的其他成分。作为这样的成分，例如可列举出闭合蛋白(occludin)抗体等。

本发明的药物可进一步含有对疾病的治疗或预防有效的其他药物制剂。本发明的药物还可根据需要掺合杀菌剂、消炎剂、细胞活化剂、维生素类及氨基酸等成分。

作为用于本发明的药物的制剂化的载体，可使用在本技术领域中常用的赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、着色剂、矫味矫臭剂，或是根据需要使用稳定剂、乳化剂、吸收促进剂、表面活性剂(surfactant)、pH调节剂、防腐剂、抗氧化剂、增量剂、湿润剂、表面活化剂(surface activator)、分散剂、缓冲剂、防腐剂、助溶剂、镇痛剂等。

本发明的药物的给药量例如能够以给药途径、疾病的种类、症状的程度、患者的年龄、性别、体重、疾病的严重程度、药物动力学及毒理学特征等药理学见解、有无利用药物传递系统、以及是否作为其他药物组合的一部分进行给药等各种因素为基础，由临床医生确定。本发明的药物的给药量例如可设为每天1μg/kg(体重)～10g/kg(体重)左右。本发明的药物的给药方案可考虑与其给药量相同的重要因素而进行确定。例如，可设为以上述每天的给药量，每1天～1个月给药1次。

5.试剂

作为一个实施方式，本发明涉及含有选自由本发明的抗体及本发明的复合体组成的组中的至少一种的试剂(在本说明书中，也记作“本发明的试剂”)，更详细而言，涉及用于检测CLDN-5表达细胞或增溶状态的CLDN-5等的试剂。其中，“试剂”还包含用于通过检测CLDN-5等而进行检查、检测、诊断等的“诊断试剂”。

本发明的试剂可以为含有选自由本发明的抗体及本发明的复合体组成的组中的至少一种的组合物的形态。该组合物可根据需要含有其他成分。作为其他成分，例如可列举出基质(base)、载体、溶剂、分散剂、乳化剂、缓冲剂、稳定剂、赋形剂、粘合剂、崩解剂、润滑剂、增稠剂、保湿剂、着色料、香料、螯合剂等。

本发明的试剂还可以为含有选自由本发明的抗体及本发明的复合体组成的组中的至少一种的试剂盒的形态。该试剂盒中可含有能够用于实施CLDN-5表达细胞或增溶状态的CLDN-5的检测、分离等的器具、试剂等。作为这样的器具、试剂，例如可列举出试管、微量滴定板、琼脂糖颗粒、乳胶颗粒、纯化用层析柱、标记抗体、标准试样(阳性对照、阴性对照)、提取外泌体(exosome)的试剂(WO2016/088689号公报)等。

实施例

以下，根据实施例对本发明进行详细说明，但本发明并不受这些实施例限定。

实施例1)抗体的制作

实施例1-1)细胞融合

向哺乳细胞用蛋白表达载体pcDNA3.1(Thermo Fisher Scientific,V79020)等中***由野生型人CLDN-5蛋白(序列号27)的编码序列形成的DNA片段，由此制作免疫用质粒。使用制作的免疫用质粒，进行皮下免疫。通过免疫，对观察到血清中抗体升高的BXSB小鼠及Wistar大鼠个体进行最终免疫。最终免疫后，按照常规方法从动物中收集淋巴节细胞，使其与小鼠骨髓瘤细胞(P3U1)进行细胞融合。将融合后的细胞接种在10块96孔板上，在培养基1*中、在37℃、10％CO₂下培养10天。

*培养基1：Hybridoma SFM(Thermo Fisher Scientific,12045084)+1x BMcondimed H1 Hybridoma cloning supplement(Roche,1088947),1x HAT添加剂(ThermoFisher Scientific,21060017),1x青链霉素溶液(Wako,168-23191)。

实施例1-2)筛选用细胞的制备

向pCX4pur载体(Osaka Bioscience Institute制备)中***由野生型人CLDN-5蛋白(序列号27)的编码序列形成的DNA片段，得到逆转录病毒制作用载体。在12孔板的各孔中分别接种0.5×10⁵个细胞的包装细胞(Phoenix A细胞)，培养24小时。然后，使用3μL的X-treme GENE HP DNA(Roche Diagnosis,06366244001)，将0.5μg的pCL ampho载体及0.5μg的逆转录病毒制作用载体转染至phoenix A细胞。在24小时后更换培养基，进一步培养24小时。回收含有逆转录病毒的培养上清，通过使用孔径为0.45μm的过滤器对其进行过滤，由此除去异物，以成为8μg/mL的方式向其中加入聚凝胺(SigmaAldrich,H9268-5G)。使用得到的溶液，对来自人纤维肉瘤的细胞(HT-1080细胞)进行24小时培养。然后，在10cm培养皿中使用含有5μg/mL的嘌呤霉素(InvivoGen,ant-pr-1)且添加有10％FBS的DMEM，在37℃、5％CO₂下对细胞进行2天培养，去除未感染细胞。将仅表达嘌呤霉素耐性基因的细胞记作HT-1080/mock，将表达嘌呤霉素耐性基因及hCLDN-5的细胞记作HT-1080/hCLDN-5。

实施例1-3)产生特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞的建立

在培养后，从所有的96孔板上回收培养上清，进行使用HT-1080/hCLDN-5的cell-ELISA分析。Cell-ELISA分析中，利用回收的培养上清及HRP标记抗大鼠IgG抗体对粘附在96孔板表面的HT-1080/hCLDN-5进行染色后，使其与荧光基质Amplex Red试剂(ThermoFisher Scientific,A12222)进行反应，用酶标仪测定荧光强度。

进一步，对于阳性的孔部分的培养上清，按照以下方式进行流式细胞仪(FCM)分析。具体而言，利用培养上清及PE标记抗大鼠IgG抗体对HT-1080/mock及HT-1080/hCLDN-5进行染色，供于FCM分析。

通过FCM分析，分别从阳性的孔中回收杂交瘤细胞，进行单克隆化操作。具体而言，在1块96孔板上以1.2个细胞/孔接种各FCM阳性孔的杂交瘤细胞，在培养基1中、在37℃、10％CO₂下培养10～12天。培养后，从全部的96孔板中回收培养上清，进行使用HT-1080/hCLDN-5的上述cell-ELISA分析。

从在Cell-ELISA中确认为阳性的孔中选择在显微镜下确认到单一菌落形成的孔，依次在24孔板、6孔板中进行扩增培养。培养后，从6孔板中回收培养上清，进行使用上述HT-1080/mock及HT-1080/hCLDN-5的FCM分析。

在每个单克隆化前的孔中分别选择1个在FCM分析中位移强度强的克隆，在15cm培养皿中扩增，在37℃、10％CO₂下进行培养。培养后，回收细胞，通过CellBanker 1(ZENOAQ,CB011)制作细胞冻存液(cell stock)。此外，使用冻存时的培养上清，并使用IsoStrip小鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒(IsoStrip Mouse Monoclonal Antibody Isotyping Kit)(Roche,11493027001)及大鼠单克隆抗体亚型鉴定试剂盒(Rat Monoclonal AntibodyISotyping Test Kit)(Bio-Rad,RMT1)，确定抗体的类别、亚类。

将对各抗体的类别、亚类进行确定的结果记载于下述表1。

[表1]

实施例1-4)抗体的纯化

在Balb/c nu/nu小鼠的腹腔中给药0.5mL的姥鲛烷(Funakoshi Co.,Ltd.，980-60542)，一周后，用建立的杂交瘤细胞(1×10⁷个细胞)进行腹腔内给药。给药了杂交瘤细胞的小鼠在给药后第7-10天，腹水开始急速积聚，因此在预估腹部的肿胀达到最大时，在麻醉下采集腹水。将腹水采集至15mL的离心管中，通过离心分离(3000rpm,10min)去除不需要的物质，在-80℃下保存腹水。

向腹水中加入其3倍量的起始缓冲液*，静置20分钟后，通过离心分离(3000rpm,30分钟)及孔径为0.8μm的滤膜过滤器，去除不溶物。将得到的样品上样至使用起始缓冲液进行了充分的平衡的蛋白质G(GE healthcare,17061801)层析柱(层析柱长度0.7×5cm)中。在样品液完全流出后，使用30mL的起始缓冲液清洗层析柱。然后，使10mL的洗脱缓冲液*流经层析柱，使抗体溶出。使用馏分收集器来各分装50滴溶出液。此时，预先向馏分收集器的各馏分中加入50μL的中和缓冲液*。在4℃的条件下、在PBS中对得到的抗体组分进行透析(Slide A Lyzer 20 kMWCO,Thermo Fisher Scientific,66003)。以下，将经过纯化的单克隆抗体命名为与上述杂交瘤细胞相同的名称(例如，从杂交瘤细胞M3中得到的抗体记作“抗体M3”或简写为“M3”)。

*起始缓冲液：20mM磷酸钠缓冲液、pH 7.0*洗脱缓冲液：100mM甘氨酸盐酸盐、pH2.7*中和缓冲液：1.0M tris HCl、pH 9.0。

实施例2)抗体的氨基酸序列的确定

根据实施例1)中克隆的杂交瘤细胞的基因组信息确定抗体的氨基酸序列。将各抗体中重链可变区内的各区域(CDR1～3及FR1～4)的氨基酸序列示于表2及表3，将轻链可变区内的各区域(CDR1～3及FR1～4)的氨基酸序列示于表4及表5。在表2～5中，氨基酸以单字母标记进行表示，各序列的最上面一行的左侧为N端侧，括号内的数字表示该序列的序列号，“整体”表示重链可变区或轻链可变区的整体的序列(从N端侧开始以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排列而成的序列)。

[表2]

[表3]

[表4]

[表5]

实施例3)抗体的结合特异性分析

实施例3-1)CLDN特异性的评价

***由hCLDN-1蛋白(序列号30)的编码序列、hCLDN-2蛋白(序列号31)的编码序列、hCLDN-3蛋白(序列号32)的编码序列、hCLDN-4蛋白(序列号33)的编码序列、hCLDN-6蛋白(序列号34)的编码序列、hCLDN-7蛋白(序列号35)的编码序列、mCLDN-1蛋白(序列号37)的编码序列、mCLDN-2蛋白(序列号38)的编码序列、mCLDN-3蛋白(序列号39)的编码序列或mCLDN-5蛋白(序列号29)的编码序列形成的DNA片段，得到逆转录病毒制作用载体，使用该逆转录病毒制作用载体与在实施例1-2)中制作的逆转录病毒制作用载体，制作各种CLDN蛋白表达细胞。使用该细胞与各产生抗体的杂交瘤细胞的培养上清作为第一抗体，以下述所示的方法进行FACS分析。

在10cm培养皿中接种得到的各CLDN表达细胞，在次日回收细胞。向得到的细胞1.0×10⁵个细胞中添加100μL的第一抗体，在4℃下使其反应1小时。此时，将在非专利文献3中使用的C-CPE突变体(C-CPEmt)与小鼠抗His标签抗体(Abcam)的混合溶液作为阳性对照使用。使用0.2％BSA-PBS对细胞进行3次洗涤后，与100μL的使用1％BSA-PBS进行了400倍稀释的第二抗体溶液(FITC标记山羊抗小鼠IgG或抗大鼠IgG(Jackson ImmuneResearch,115-095-003或112-095-003)混合，在4℃下使其反应1小时。使用0.2％BSA-TBS洗涤细胞后，使用FACS细胞仪(BD Bioscience)。

在图1A中示出各抗体克隆与各人CLDN的反应性，在图1B中示出与各小鼠CLDN的反应性。如图1A所示，获得的抗CLDN-5抗体仅与hCLDN-5进行反应。如图1B所示，获得的抗CLDN-5抗体与小鼠CLDN未表现出强反应性。虽非常弱，但M48与R9对mCLDN-5表现出了结合性。

实施例3-2)CLDN-5种间交叉性的评价

以与实施例1-2)相同的方式，向pCX4pur载体中***由cCLDN-5蛋白(序列号28)的编码序列或mCLDN-5蛋白(序列号29)的编码序列形成的DNA片段，得到逆转录病毒制作用载体，使用该逆转录病毒制作用载体与在实施例1-2)中制作的逆转录病毒制作用载体，制作各动物种类CLDN-5蛋白表达细胞。使用该细胞与各抗体(抗体浓度5μg/mL，作为第一抗体)，以与3-1)相同的方式进行FACS分析。在图2中示出横轴为荧光信号、纵轴为细胞数的直方图。

如图2所示，获得的抗CLDN-5抗体对hCLDN-5及cCLDN-5表现出强结合性。此外，虽非常弱但R9对mCLDN-5表现出结合性。

实施例3-3)抗体的Kd值的确定

使用HT-1080/hCLDN-5与100μL用1.0％BSA-PBS进行了稀释的各浓度的抗CLDN-5抗体，以与实施例3-1)相同的方式进行FACS分析。绘制将在FACS分析中得到的MFI作为Y轴的饱和结合曲线，求出50％饱和结合浓度，由此计算Kd值。此时，使用Graph Pad prisim 7(GraphPad Software)的饱和结合-1位点特异性结合的公式。将各抗体的Kd值示于表6。

[表6]

实施例3-4)利用hCLDN-5/hCLDN-1嵌合CLDN的表位分析

以与实施例1-2)相同的方式，向pCX4pur载体中***编码野生型人CLDN-5蛋白与野生型人CLDN-5蛋白的嵌合蛋白[1-1-5：在人CLDN-5蛋白中，第一胞外环被替换为人CLDN-1蛋白的序列而成的蛋白质(序列号45)，1-5-5：在人CLDN-5蛋白中，第一胞外环的N端侧的大约一半被替换为人CLDN-1蛋白的序列而成的蛋白质(序列号46)，5-1-5：在人CLDN-5蛋白中，第一胞外环的C端侧的大约一半被替换为人CLDN-1蛋白的序列而成的蛋白质(序列号47)，5-5-1：在人CLDN-5蛋白中，第二胞外环被替换为人CLDN-1蛋白的序列而成的蛋白质(序列号48)]的DNA片段，得到逆转录病毒制作用载体，使用该逆转录病毒制作用载体与在实施例1-2)中制作的逆转录病毒制作用载体，制作各种嵌合CLDN蛋白表达细胞。使用该细胞与各抗体(抗体浓度5μg/mL，作为第一抗体)，以与实施例3-1)相同的方式进行FACS分析。将横轴为荧光信号、纵轴为细胞数的直方图示于图4。

图3中，无法识别1-1-5但能够识别5-5-1暗示了抗体M11及R2识别第一胞外环，无法识别5-5-1但能够识别1-1-5暗示了抗体M3、M23、M48、R3、R9、R14识别第二胞外环。此外，识别第一胞外环的抗体M11与R2中，R2能够识别1-5-5，但M11无法识别1-5-5等，这暗示了所识别的CLDN-5的三维结构不同。

实施例3-5)利用hCLDN-5/mCLDN-5嵌合CLDN的表位分析

以与实施例1-2)相同的方式，向pCX4pur载体中***编码hCLDN-5蛋白的点突变体[D68E：在hCLDN-5蛋白中，N端第68位氨基酸(天冬氨酸)突变为谷氨酸(mCLDN-5蛋白中对应位置的氨基酸)而成的蛋白质(序列号41)，T75A：在mCLDN-5蛋白中，N端第75位氨基酸(苏氨酸)突变为丙氨酸(mCLDN-5蛋白中对应位置的氨基酸)而成的蛋白质(序列号42)，S151T：在hCLDN-5蛋白中，N端第151位氨基酸(丝氨酸)突变为苏氨酸(mCLDN-5蛋白中对应位置的氨基酸)而成的蛋白质(序列号43)]及结构域替换物[TM：将hCLDN-5蛋白中的、除含有胞外区第一环的N端第28～86位的氨基酸及含有第二环的N端第147～176位的氨基酸以外替换为mCLDN-5蛋白中对应位置的氨基酸而成的蛋白质(序列号44)]的DNA片段，得到逆转录病毒制作用载体，使用该逆转录病毒制作用载体与在实施例1-2)中制作的逆转录病毒制作用载体，制作各种嵌合CLDN蛋白表达细胞。使用该细胞与各抗体(抗体浓度5μg/mL，作为第一抗体)，以与实施例3-1)相同的方式进行FACS分析。将横轴为荧光信号、纵轴为细胞数的直方图示于图3。

由图4可知，M3及R14识别hCLDN-5的跨膜区域所产生的三维结构，M11及R2识别存在于第一胞外环的N端第68位氨基酸的附近，M23、M48、R3、R9及R14识别存在于第二胞外环的N端第151位氨基酸的附近。

实施例3-6)蛋白质印迹活性(作動性)的确认

由实施例1-2)中得到的HT-1080/mock及HT-1080/hCLDN-5制备细胞裂解物，通过还原条件下的SDS-PAGE分离该裂解物。使用在实施例1中得到的各抗体(抗体浓度10μg/mL)作为第一抗体，按照常规方法进行蛋白质印迹法。作为第一抗体，还使用了识别CLDN-5的C端的市售单克隆抗体(4C3C2,Invitrogen,35-2500)作为阳性对照、并使用β肌动蛋白抗体(SigmaAldrich,A1978)作为内标物(loading control)。将结果示于图5。

根据图5，抗体R9较强地识别直链状的肽，R14较弱地识别直链状的肽。暗示了其他未表现出蛋白质印迹活性的抗体识别CLDN-5的三维结构。

实施例4)使用CLDN-5强制表达系统的抗体的屏障调控活性的评价

实施例4-1)细胞的制备

以与实施例1-2)相同的方式，向pCX4pur载体中***由cCLDN-5蛋白(序列号28)的编码序列或mCLDN-5蛋白(序列号29)的编码序列形成的DNA片段，得到逆转录病毒制作用载体，使用该逆转录病毒制作用载体与在实施例1-2)中制作的逆转录病毒制作用载体，制备各动物种类CLDN-5蛋白表达MDCKII细胞(分别为MDCKII/mock、MDCKII/hCLDN-5、MDCKII/cCLDN-5、MDCKII/mCLDN-5)。使用培养基3*培养这些细胞。

*培养基3：DMEM(Nissui Pharmaceutical Co.,Ltd.)+10％FBS(NichireiBiomedical),50μg/mL青霉素/链霉素(Nacalai Tesque,INC.,26253-84),2mM L-谷氨酰胺(Nacalai Tesque,INC.,04260-64)。

实施例4-2)CLDN-5强制表达系统的跨上皮/跨内皮电阻(TEER)的测定

在24孔板的各孔中设置底面为聚对苯二甲酸乙二醇酯制透过膜(孔径0.4μm，1.6×10⁶孔/cm²)的单层培养用小室(insert)(BD Falcon,353095)，在该膜上培养在实施例4-1)中制备的MDCKII/mock、MDCKII/hCLDN-5、MDCKII/cCLDN-5、MDCKII/mCLDN-5细胞。在显微镜观察下，在细胞汇合后，使用Millicell-ERS电阻测定系统(Milipore)，每天对TEER进行评价。

如图6所示，对于各细胞的TEER，MDCKII/mock稳定在较低的值(约30～40Ω〃cm²)，MDCKII/hCLDN-5、MDCKII/cCLDN-5、MDCKII/mCL DN-5稳定在较高的值(分别约为200～220、240～260、390～420Ω〃cm²)。

实施例4-3)抗体处理对CLDN-5强制表达系统的TEER造成的影响的评价

以与实施例4-2)相同的方式培养细胞，在TEER值稳定后，在下侧的培养孔中添加90μL在实施例1-4)中得到的各抗体、对照IgG或用于稀释抗体的溶液。使用在非专利文献3中使用的C-CPEmt作为阳性对照。然后，使用Millicell-ERS电阻测定系统(Milipore)，经时性评价TEER。将结果示于图7。进一步，在添加抗体12小时后，用培养基3洗涤3次，然后用培养基3继续培养24小时，对因添加抗体而变化的TEER是否可逆性恢复进行评价。将结果示于图7B。

如图7A～7D所示，作为阳性对照的C-CPEmt在MDCKII/mock、MDCKII/hCLDN-5、MDCKII/cCLDN-5、MDCKII/mCLDN-5中均诱导了TEER的降低，但抗CLDN-5抗体仅在MDCKII/hCLDN-5、MDCKII/cCLDN-5中诱导了TEER的降低。该倾向与抗CLDN-5抗体的种间交叉性相关。可知该抗体的TEER的降低作用依赖于抗体的给药量，还存在像M3、M48及R9那样，具有使TEER大幅减少的作用的抗体。

如图8A～8D所示可知，在抗体处理后，将抗体从培养基中充分地去除并培养24小时的情况下，因各抗CLDN-5抗体而降低的TEER恢复为与添加抗体前相同的值。这表示抗CLDN-5抗体可逆地发挥作用。

实施例4-4)抗体处理对CLDN-5强制表达系统的物质透过性造成的影响的评价

以与实施例4-2)相同的方式培养细胞，在TEER值稳定后，在下侧的培养孔中添加90μL在实施例1-4)中得到的各抗体、C-CPEmt、对照IgG或用于稀释抗体的溶液。使用非专利文献3中使用的C-CPEmt作为阳性对照。在添加抗体12小时后，将单层培养用小室移至加入了试验培养基*的24孔板中，将小室侧的培养基更换为试验培养基。然后，将单层培养用小室移至加入了试验培养基并在HIENAI平板加热器上进行保温的24孔板中，将小室侧的培养基更换为含有100μg/mL的荧光素钠(Wako Pure Chemical Industries,Ltd.)或10mg/mL的4kDa FITC标记葡聚糖(SigmaAldrich)的试验培养基，计时30分钟(对每个小室分别进行操作)。然后，回收下侧的培养孔内的试验培养基，使用TriSTAR LB 941(BertholdTechnologies)测定培养基中的荧光强度。表观渗透系数(Papp)通过下述公式计算；Papp(cm/s)＝(培养孔侧的培养基量×透过到培养孔侧的荧光素钠的浓度)/小室的透过膜的表面积×荧光物质在小室侧的添加浓度×实验时间)。将添加荧光素钠时的结果示于图9，将添加4kDa FITC标记葡聚糖时的结果示于图10。

如图9所示，作为阳性对照的C-CPEmt在MDCKII/mock、MDCKII/hCLDN-5、MDCKII/cCLDN-5、MDCKII/mCLDN-5中均提高了荧光素钠的透过性，抗CLDN-5抗体仅在MDCKII/hCLDN-5、MDCKII/cCLDN-5中提高了荧光素钠的透过性。该倾向与抗CLDN-5抗体的种间交叉性相关。该抗体的荧光素钠透过性提高作用依赖于给药量。

如图10所示，作为阳性对照的C-CPEmt在MDCKII/mock、MDCKII/hCLDN-5、MDCKII/cCLDN-5、MDCKII/mCLDN-5中均提高了4kDa FITC标记葡聚糖的透过性，抗CLDN-5抗体未提高4kDa FITC标记葡聚糖的透过性。*试验培养基：DMEM(Nissui Pharmaceutical Co.,Ltd.)+50μg/mL青霉素/链霉素(Nacalai Tesque,INC.,26253-84),2mM L-谷氨酰胺(Nacalai Tesque,INC.,04260-64)。

实施例5)使用血脑屏障模拟系统的抗体的屏障调控活性的评价

实施例5-1)抗体处理对血脑屏障模拟系统的TEER造成的影响的评价

使用模仿了血脑屏障的培养物(猴型BBB试剂盒，PharmaCo-Cell Company Ltd.制造)，评价屏障功能调控活性。该培养物具有在培养孔中设置了底面为聚对苯二甲酸乙二醇酯制透过膜(孔径3.0μm，1.6×10⁶孔/cm²)的小室的结构，在小室底面的上侧上形成有猴脑毛细血管内皮细胞的单层状片，在该底面的下侧形成有大鼠周细胞的细胞片，且在培养孔的底面上形成有大鼠星形胶质细胞的细胞片。在培养中使用随附的专用培养基。

在确认到该培养物的TEER值达到150Ω〃cm²后，在小室侧(血管侧)的培养基中添加30μL在实施例1-4)中得到的各抗体、C-CPEmt、对照IgG的溶液或用于稀释抗体的溶液。在添加后，测定TEER值的经时变化。将结果示于图11。

根据图11可知，各抗CLDN-5抗体具有降低血脑屏障模拟系统的TEER的作用。此外，该TEER降低作用依赖于给药量。

实施例5-2)抗体处理对血脑屏障模拟系统的物质透过性造成的影响的评价

在确认到猴型BBB试剂盒的TEER值达到150Ω〃cm²后，在该培养物的小室侧(血管侧)的培养基中添加30μL在实施例1-4)中得到的各抗体、C-CPEmt、对照IgG的溶液或用于稀释抗体的溶液。在添加12小时后，以与实施例4-3)相同的方法，对荧光物质(10μg/mL的荧光素钠或1mg/mL的4kDa FITC标记葡聚糖)的透过性进行评价。将添加荧光素钠时的结果示于图12，将添加4kDa FITC标记葡聚糖时的结果示于图13。

如图12所示可知，各抗CLDN-5抗体具有提高血脑屏障模拟系统的荧光素钠透过性的作用。此外，该荧光素钠透过性提高作用依赖于给药量。

如图13所示，在各抗CLDN-5抗体内，仅M48与R9表现出了提高血脑屏障模拟系统的4kDa FITC标记葡聚糖的透过性的作用。这与抗体的活性的强度相关。

实施例5-3)抗体处理对血脑屏障模拟系统的CLDN-5的定位造成的影响的评价

在确认到猴型BBB试剂盒的TEER值达到150Ω〃cm²后，在该培养物的小室侧(血管侧)的培养基中添加30μL在实施例1-4)中得到的各抗体、C-CPEmt或用于稀释抗体的溶液。在添加12小时后，使用PBS进行洗涤，在使用刮刀剥离附着在小室下部的周细胞后，用4％PFA-PBS进行固定操作。然后，使用0.1％triton-X进行透过性处理后，经过利用1％BSA-PBS的封闭操作，将兔抗ZO-1(Thermo Fisher Scientific)或兔抗CLDN-5(SigmaAldrich)用作第一抗体，将Alexa488标记山羊抗兔(Jackson ImmuneReseach)用作第二抗体，进行免疫染色。使用荧光显微镜(Keyence,BZ-X910)进行观察。将结果示于图14。

如图14所示，在Vehicle、M48、R9、C-CPEmt处理中，ZO-1的定位未发生变化，定位于细胞间隙，而在M48及R9处理中，观察到CLDN-5的定位于细胞间隙的性质发生混乱而分散在细胞表面的情况。该CLDN-5的定位发生变化的现象被认为与抗CLDN-5抗体的屏障功能下降作用的机制密切相关。

SEQUENCE LISTING

<110> 国立大学法人大阪大学

国立大学法人爱媛大学

富士胶片和光纯药株式会社

<120> 抗CLDN-5抗体及含有该抗体的药物

<130> KHP192117273.3

<150> JP 2017-092658

<151> 2017-05-08

<160> 230

<170> PatentIn version 3.5

<210> 1

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 VH

<400> 1

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

20 25 30

Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Asp Ile Asn Pro Ser Thr Gly Gly Ala Thr Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys

85 90 95

Ala Leu Tyr Ser Asn Tyr Gly Phe Val Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu

100 105 110

Val Thr Val Ser Ala

115

<210> 2

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 VL

<400> 2

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Lys Arg Leu Ile Tyr Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Tyr Cys Val Gln Gly

85 90 95

Ile His Phe Pro Arg Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

100 105 110

<210> 3

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 VH

<400> 3

Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser Gly Phe Ser Leu Ile Arg Tyr

20 25 30

Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

35 40 45

Gly Val Lys Trp Ser Gly Gly Ser Thr Asp Tyr Asn Gly Ala Phe Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asp Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg Gly Leu Asp Gly Tyr Tyr Val Pro Asp Val Trp Gly Thr Gly Thr

100 105 110

Ser Val Thr Val Ser

115

<210> 4

<211> 108

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 VL

<400> 4

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Asn

20 25 30

Val Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Leu Ile

35 40 45

Tyr Trp Ala Ser Thr Arg His Thr Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg Arg

100 105

<210> 5

<211> 122

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 VH

<400> 5

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Pro

1 5 10 15

Ser Val Met Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Leu Val Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg Cys Leu Tyr Asp Gly Leu Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr Trp

100 105 110

Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 6

<211> 114

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 VL

<400> 6

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser

20 25 30

Arg Ala Arg Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Met Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Phe Tyr Cys Lys Gln

85 90 95

Ser Tyr Asn Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

Lys Arg

<210> 7

<211> 120

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 VH

<400> 7

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Ile Tyr

20 25 30

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Arg Ile Arg Ser Lys Ser Ser Asn Tyr Ala Thr Tyr Tyr Val Asp

50 55 60

Ser Val Lys Asp Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp Asp Ser Gln Ser Met

65 70 75 80

Leu Tyr Leu Gln Val Asn Asn Leu Lys Thr Glu Asp Thr Ala Met Tyr

85 90 95

Tyr Cys Val Arg Glu Gly Asn Trp Asp Cys Phe Asp Tyr Trp Gly Gln

100 105 110

Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 8

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 VL

<400> 8

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Gln Lys Val Thr Met Thr Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr

20 25 30

Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Tyr Tyr Arg Tyr His Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

100 105 110

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<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 VH

<400> 9

Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

20 25 30

Asn Met His Trp Val Lys Lys Thr Arg Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile

35 40 45

Gly Ala Ile Ser Pro Gly Asn Gly Asn Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe

50 55 60

Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr

65 70 75 80

Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys

85 90 95

Ala Arg Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Ala Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 10

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 VL

<400> 10

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Asn Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Arg Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ser Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Leu Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105

<210> 11

<211> 119

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 VH

<400> 11

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser Gly Leu Ser Leu Ile Arg Asn

20 25 30

Ser Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

35 40 45

Gly Val Ile Trp Ser Asn Gly Gly Thr Glu Tyr Asn Ser Thr Val Lys

50 55 60

Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu

65 70 75 80

Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu Asp Ser Ala Met Phe Phe Cys Ala

85 90 95

Arg Thr Pro Asp Gly Tyr Tyr Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly

100 105 110

Val Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 12

<211> 106

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 VL

<400> 12

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Val Ser Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Ser

20 25 30

Ile His Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Asn Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile

35 40 45

Arg Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser Arg Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly

50 55 60

Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asn Gly Val Glu Ser

65 70 75 80

Glu Asp Leu Ser Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Tyr Asn Leu Pro Leu

85 90 95

Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

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<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 VH

<400> 13

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Arg His Pro Arg Arg Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 14

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 VL

<400> 14

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Met Asn Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Phe Ser Ser

20 25 30

Gly Asp Gln Lys Lys Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser Leu Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Asn Asn Met Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

His Tyr Asp Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu

100 105 110

<210> 15

<211> 116

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 VH

<400> 15

Val Lys Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser

1 5 10 15

Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr Phe

20 25 30

Met Ala Trp Val Arg Gln Ser Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala

35 40 45

Ser Ile Asn Tyr Gly Gly Ser Arg Thr Tyr Tyr Glu Asp Ser Val Lys

50 55 60

Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr Leu

65 70 75 80

Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala

85 90 95

Arg His Pro His Arg Leu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val Met Val

100 105 110

Thr Val Ser Ser

115

<210> 16

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 VL

<400> 16

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ala Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Phe Leu Ser Ser

20 25 30

Gly Asn Gln Glu Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile His Leu Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Met Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln

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100 105 110

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<211> 118

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 VH

<400> 17

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser His

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Asn Thr Tyr

20 25 30

Gly Val Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp His Gly Lys Thr Tyr Ile Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Lys Asn Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Pro Ser Asn Asn Gln Ala

65 70 75 80

Phe Leu Glu Val Thr Asn Val Asp Pro Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala His Ala Arg Ala Gln Leu Leu Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Val

100 105 110

Met Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 18

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 VL

<400> 18

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Gln Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Gly Asp Gln Lys Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Thr Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

His Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

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<211> 121

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 VH

<400> 19

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr

20 25 30

Gly Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Thr Asn Ser Gly Tyr Thr Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Thr Thr Gly Gly Tyr Gly Gly Tyr Phe Pro Leu Phe Asp Tyr Trp Gly

100 105 110

His Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 20

<211> 111

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 VL

<400> 20

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly

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Gly Gln Thr Ser Ile Ser Cys Arg Ser Ser Gln Ser Leu Phe His Ser

20 25 30

Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr Trp Tyr Leu Arg Lys Pro Gly Gln Ser

35 40 45

Pro Gln Leu Leu Ile Tyr Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser Gly Val Pro

50 55 60

Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Lys Ile

65 70 75 80

Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Tyr Cys Tyr Gln Gly

85 90 95

Thr His Tyr Pro Pro Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 VH

<400> 21

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser His

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr

20 25 30

Gly Met Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu

35 40 45

Trp Leu Ala Ser Ile Trp Trp Asn Gly Arg Thr Tyr Thr Asn Pro Ser

50 55 60

Leu Met Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp Thr Ser Thr Asn Gln Ala

65 70 75 80

Phe Leu Arg Val Thr Ser Val Glu Thr Ala Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr

85 90 95

Cys Ala His Thr Pro Tyr Asp Tyr Ser Asn Leu Gly Trp Phe Thr Tyr

100 105 110

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

115 120

<210> 22

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 VL

<400> 22

Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Gln Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Val Ser Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser

20 25 30

Gly Asp Gln Lys Ser Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Thr Arg Lys Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

His Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

100 105 110

<210> 23

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 VH

<400> 23

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Ser Tyr Glu Gly Arg Asn Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Pro Arg Arg Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Pro Gly Thr Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 24

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 VL

<400> 24

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser

20 25 30

Gly Asp Gln Glu Asn His Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln

35 40 45

Ser Ala Lys Leu Leu Ile Tyr Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Ser Ser Met Gln Ala Glu Asp Arg Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

Asn Tyr Asp Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu

100 105 110

<210> 25

<211> 117

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 VH

<400> 25

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

20 25 30

Phe Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val

35 40 45

Ala Ser Ile Asn Tyr Glu Gly Ser Arg Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val

50 55 60

Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Thr Lys Thr Thr Leu Tyr

65 70 75 80

Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys

85 90 95

Ala Arg His Pro Arg Arg Tyr Phe Asp Phe Trp Gly Gln Gly Val Met

100 105 110

Val Thr Val Ser Ser

115

<210> 26

<211> 112

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 VL

<400> 26

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Asn Cys Lys Ser Ser Arg Ser Leu Phe Ser Ser

20 25 30

Gly Tyr Gln Glu Asn Tyr Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln

35 40 45

Ser Pro Lys Met Leu Ile Tyr Leu Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val

50 55 60

Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr

65 70 75 80

Ile Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys Gln Gln

85 90 95

His Tyr Asp Ile Pro Tyr Thr Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu

100 105 110

<210> 27

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hCLDN-5

<400> 27

Met Gly Ser Ala Ala Leu Glu Ile Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Val

1 5 10 15

Gly Trp Gly Gly Leu Ile Leu Ala Cys Gly Leu Pro Met Trp Gln Val

20 25 30

Thr Ala Phe Leu Asp His Asn Ile Val Thr Ala Gln Thr Thr Trp Lys

35 40 45

Gly Leu Trp Met Ser Cys Val Val Gln Ser Thr Gly His Met Gln Cys

50 55 60

Lys Val Tyr Asp Ser Val Leu Ala Leu Ser Thr Glu Val Gln Ala Ala

65 70 75 80

Arg Ala Leu Thr Val Ser Ala Val Leu Leu Ala Phe Val Ala Leu Phe

85 90 95

Val Thr Leu Ala Gly Ala Gln Cys Thr Thr Cys Val Ala Pro Gly Pro

100 105 110

Ala Lys Ala Arg Val Ala Leu Thr Gly Gly Val Leu Tyr Leu Phe Cys

115 120 125

Gly Leu Leu Ala Leu Val Pro Leu Cys Trp Phe Ala Asn Ile Val Val

130 135 140

Arg Glu Phe Tyr Asp Pro Ser Val Pro Val Ser Gln Lys Tyr Glu Leu

145 150 155 160

Gly Ala Ala Leu Tyr Ile Gly Trp Ala Ala Thr Ala Leu Leu Met Val

165 170 175

Gly Gly Cys Leu Leu Cys Cys Gly Ala Trp Val Cys Thr Gly Arg Pro

180 185 190

Asp Leu Ser Phe Pro Val Lys Tyr Ser Ala Pro Arg Arg Pro Thr Ala

195 200 205

Thr Gly Asp Tyr Asp Lys Lys Asn Tyr Val

210 215

<210> 28

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> cCLDN-5

<400> 28

Met Gly Ser Ala Ala Leu Glu Ile Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Val

1 5 10 15

Gly Trp Gly Gly Leu Ile Leu Ala Cys Gly Leu Pro Met Trp Gln Val

20 25 30

Thr Ala Phe Leu Asp His Asn Ile Val Thr Ala Gln Thr Thr Trp Lys

35 40 45

Gly Leu Trp Met Ser Cys Val Val Gln Ser Thr Gly His Met Gln Cys

50 55 60

Lys Val Tyr Asp Ser Val Leu Ala Leu Ser Thr Glu Val Gln Ala Ala

65 70 75 80

Arg Ala Leu Thr Val Gly Ala Val Leu Leu Ala Phe Val Ala Leu Phe

85 90 95

Val Thr Leu Ala Gly Ala Gln Cys Thr Thr Cys Val Ala Pro Gly Pro

100 105 110

Ala Lys Ala Arg Val Ala Leu Thr Gly Gly Val Leu Tyr Leu Leu Cys

115 120 125

Gly Leu Leu Ala Leu Val Pro Leu Cys Trp Phe Ala Asn Ile Val Val

130 135 140

Arg Glu Phe Tyr Asp Pro Ser Val Pro Val Ser Gln Lys Tyr Glu Leu

145 150 155 160

Gly Ala Ala Leu Tyr Ile Gly Trp Ala Ala Thr Ala Leu Leu Met Val

165 170 175

Gly Gly Gly Leu Leu Cys Cys Gly Ala Trp Val Cys Thr Ser Arg Pro

180 185 190

Asp Leu Ser Phe Pro Val Lys Tyr Ser Ala Pro Arg Arg Pro Thr Ala

195 200 205

Thr Gly Asp Tyr Asp Lys Lys Asn Tyr Val

210 215

<210> 29

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> mCLDN-5

<400> 29

Met Gly Ser Ala Ala Leu Glu Ile Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Val

1 5 10 15

Gly Trp Val Gly Leu Ile Leu Ala Cys Gly Leu Pro Met Trp Gln Val

20 25 30

Thr Ala Phe Leu Asp His Asn Ile Val Thr Ala Gln Thr Thr Trp Lys

35 40 45

Gly Leu Trp Met Ser Cys Val Val Gln Ser Thr Gly His Met Gln Cys

50 55 60

Lys Val Tyr Glu Ser Val Leu Ala Leu Ser Ala Glu Val Gln Ala Ala

65 70 75 80

Arg Ala Leu Thr Val Gly Ala Val Leu Leu Ala Leu Val Ala Leu Phe

85 90 95

Val Thr Leu Thr Gly Ala Gln Cys Thr Thr Cys Val Ala Pro Gly Pro

100 105 110

Val Lys Ala Arg Val Ala Leu Thr Gly Gly Ala Leu Tyr Ala Val Cys

115 120 125

Gly Leu Leu Ala Leu Val Pro Leu Cys Trp Phe Ala Asn Ile Val Val

130 135 140

Arg Glu Phe Tyr Asp Pro Thr Val Pro Val Ser Gln Lys Tyr Glu Leu

145 150 155 160

Gly Ala Ala Leu Tyr Ile Gly Trp Ala Ala Ser Ala Leu Leu Met Cys

165 170 175

Gly Gly Gly Leu Val Cys Cys Gly Ala Trp Val Cys Thr Gly Arg Pro

180 185 190

Glu Phe Ser Phe Pro Val Lys Tyr Ser Ala Pro Arg Arg Pro Thr Ala

195 200 205

Asn Gly Asp Tyr Asp Lys Lys Asn Tyr Val

210 215

<210> 30

<211> 211

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hCLDN-1

<400> 30

Met Ala Asn Ala Gly Leu Gln Leu Leu Gly Phe Ile Leu Ala Phe Leu

1 5 10 15

Gly Trp Ile Gly Ala Ile Val Ser Thr Ala Leu Pro Gln Trp Arg Ile

20 25 30

Tyr Ser Tyr Ala Gly Asp Asn Ile Val Thr Ala Gln Ala Met Tyr Glu

35 40 45

Gly Leu Trp Met Ser Cys Val Ser Gln Ser Thr Gly Gln Ile Gln Cys

50 55 60

Lys Val Phe Asp Ser Leu Leu Asn Leu Ser Ser Thr Leu Gln Ala Thr

65 70 75 80

Arg Ala Leu Met Val Val Gly Ile Leu Leu Gly Val Ile Ala Ile Phe

85 90 95

Val Ala Thr Val Gly Met Lys Cys Met Lys Cys Leu Glu Asp Asp Glu

100 105 110

Val Gln Lys Met Arg Met Ala Val Ile Gly Gly Ala Ile Phe Leu Leu

115 120 125

Ala Gly Leu Ala Ile Leu Val Ala Thr Ala Trp Tyr Gly Asn Arg Ile

130 135 140

Val Gln Glu Phe Tyr Asp Pro Met Thr Pro Val Asn Ala Arg Tyr Glu

145 150 155 160

Phe Gly Gln Ala Leu Phe Thr Gly Trp Ala Ala Ala Ser Leu Cys Leu

165 170 175

Leu Gly Gly Ala Leu Leu Cys Cys Ser Cys Pro Arg Lys Thr Thr Ser

180 185 190

Tyr Pro Thr Pro Arg Pro Tyr Pro Lys Pro Ala Pro Ser Ser Gly Lys

195 200 205

Asp Tyr Val

210

<210> 31

<211> 230

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hCLDN-2

<400> 31

Met Ala Ser Leu Gly Leu Gln Leu Val Gly Tyr Ile Leu Gly Leu Leu

1 5 10 15

Gly Leu Leu Gly Thr Leu Val Ala Met Leu Leu Pro Ser Trp Lys Thr

20 25 30

Ser Ser Tyr Val Gly Ala Ser Ile Val Thr Ala Val Gly Phe Ser Lys

35 40 45

Gly Leu Trp Met Glu Cys Ala Thr His Ser Thr Gly Ile Thr Gln Cys

50 55 60

Asp Ile Tyr Ser Thr Leu Leu Gly Leu Pro Ala Asp Ile Gln Ala Ala

65 70 75 80

Gln Ala Met Met Val Thr Ser Ser Ala Ile Ser Ser Leu Ala Cys Ile

85 90 95

Ile Ser Val Val Gly Met Arg Cys Thr Val Phe Cys Gln Glu Ser Arg

100 105 110

Ala Lys Asp Arg Val Ala Val Ala Gly Gly Val Phe Phe Ile Leu Gly

115 120 125

Gly Leu Leu Gly Phe Ile Pro Val Ala Trp Asn Leu His Gly Ile Leu

130 135 140

Arg Asp Phe Tyr Ser Pro Leu Val Pro Asp Ser Met Lys Phe Glu Ile

145 150 155 160

Gly Glu Ala Leu Tyr Leu Gly Ile Ile Ser Ser Leu Phe Ser Leu Ile

165 170 175

Ala Gly Ile Ile Leu Cys Phe Ser Cys Ser Ser Gln Arg Asn Arg Ser

180 185 190

Asn Tyr Tyr Asp Ala Tyr Gln Ala Gln Pro Leu Ala Thr Arg Ser Ser

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Pro Arg Pro Gly Gln Pro Pro Lys Val Lys Ser Glu Phe Asn Ser Tyr

210 215 220

Ser Leu Thr Gly Tyr Val

225 230

<210> 32

<211> 220

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hCLDN-3

<400> 32

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1 5 10 15

Trp Leu Gly Thr Ile Val Cys Cys Ala Leu Pro Met Trp Arg Val Ser

20 25 30

Ala Phe Ile Gly Ser Asn Ile Ile Thr Ser Gln Asn Ile Trp Glu Gly

35 40 45

Leu Trp Met Asn Cys Val Val Gln Ser Thr Gly Gln Met Gln Cys Lys

50 55 60

Val Tyr Asp Ser Leu Leu Ala Leu Pro Gln Asp Leu Gln Ala Ala Arg

65 70 75 80

Ala Leu Ile Val Val Ala Ile Leu Leu Ala Ala Phe Gly Leu Leu Val

85 90 95

Ala Leu Val Gly Ala Gln Cys Thr Asn Cys Val Gln Asp Asp Thr Ala

100 105 110

Lys Ala Lys Ile Thr Ile Val Ala Gly Val Leu Phe Leu Leu Ala Ala

115 120 125

Leu Leu Thr Leu Val Pro Val Ser Trp Ser Ala Asn Thr Ile Ile Arg

130 135 140

Asp Phe Tyr Asn Pro Val Val Pro Glu Ala Gln Lys Arg Glu Met Gly

145 150 155 160

Ala Gly Leu Tyr Val Gly Trp Ala Ala Ala Ala Leu Gln Leu Leu Gly

165 170 175

Gly Ala Leu Leu Cys Cys Ser Cys Pro Pro Arg Glu Lys Lys Tyr Thr

180 185 190

Ala Thr Lys Val Val Tyr Ser Ala Pro Arg Ser Thr Gly Pro Gly Ala

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hCLDN-4

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65 70 75 80

Arg Ala Leu Val Ile Ile Ser Ile Ile Val Ala Ala Leu Gly Val Leu

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Leu Ser Val Val Gly Gly Lys Cys Thr Asn Cys Leu Glu Asp Glu Ser

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Ala Lys Ala Lys Thr Met Ile Val Ala Gly Val Val Phe Leu Leu Ala

115 120 125

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Gln Asp Phe Tyr Asn Pro Leu Val Ala Ser Gly Gln Lys Arg Glu Met

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Gly Ala Ser Leu Tyr Val Gly Trp Ala Ala Ser Gly Leu Leu Leu Leu

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hCLDN-6

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Gly Ala Ser Leu Tyr Leu Gly Trp Ala Ala Ser Gly Leu Leu Leu Leu

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<220>

<223> hCLDN-7

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Ser Ser Tyr Ala Gly Asp Asn Ile Ile Thr Ala Gln Ala Met Tyr Lys

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65 70 75 80

Arg Ala Leu Met Val Val Ser Leu Val Leu Gly Phe Leu Ala Met Phe

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210

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> hCLDN-9

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1 5 10 15

Gly Trp Leu Gly Thr Leu Val Ser Cys Ala Leu Pro Leu Trp Lys Val

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Gly Ala Ser Leu Tyr Leu Gly Trp Ala Ala Ala Ala Leu Leu Met Leu

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<212> PRT

<213> 人工序列

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210

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<211> 230

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> mCLDN-2

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210 215 220

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> mCLDN-3

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> mCLDN-4

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1 5 10 15

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65 70 75 80

Arg Ala Leu Met Val Ile Ser Ile Ile Val Gly Ala Leu Gly Met Leu

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Leu Ser Val Val Gly Gly Lys Cys Thr Asn Cys Met Glu Asp Glu Thr

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130 135 140

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Gly Ala Ser Leu Tyr Val Gly Trp Ala Ala Ser Gly Leu Leu Leu Leu

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210

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

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<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> T75A

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210 215

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<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> S151T

<400> 43

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1 5 10 15

Gly Trp Gly Gly Leu Ile Leu Ala Cys Gly Leu Pro Met Trp Gln Val

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<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> TM

<400> 44

Met Gly Ser Ala Ala Leu Glu Ile Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Val

1 5 10 15

Gly Trp Val Gly Leu Ile Leu Ala Cys Gly Leu Pro Met Trp Gln Val

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Gly Leu Trp Met Ser Cys Val Val Gln Ser Thr Gly His Met Gln Cys

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65 70 75 80

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Gly Gly Gly Leu Val Cys Cys Gly Ala Trp Val Cys Thr Gly Arg Pro

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210 215

<210> 45

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-1-5

<400> 45

Met Gly Ser Ala Ala Leu Glu Ile Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Val

1 5 10 15

Gly Trp Gly Gly Leu Ile Leu Ala Cys Ala Leu Pro Gln Trp Arg Ile

20 25 30

Tyr Ser Tyr Ala Gly Asp Asn Ile Val Thr Ala Gln Ala Met Tyr Glu

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Gly Leu Trp Met Ser Cys Val Ser Gln Ser Thr Gly Gln Ile Gln Cys

50 55 60

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65 70 75 80

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Gly Ala Ala Leu Tyr Ile Gly Trp Ala Ala Thr Ala Leu Leu Met Val

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Gly Gly Cys Leu Leu Cys Cys Gly Ala Trp Val Cys Thr Gly Arg Pro

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195 200 205

Thr Gly Asp Tyr Asp Lys Lys Asn Tyr Val

210 215

<210> 46

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 1-5-5

<400> 46

Met Gly Ser Ala Ala Leu Glu Ile Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Val

1 5 10 15

Gly Trp Gly Gly Leu Ile Leu Ala Cys Ala Leu Pro Gln Trp Arg Ile

20 25 30

Tyr Ser Tyr Ala Gly Asp Asn Ile Val Thr Ala Gln Ala Met Tyr Glu

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Gly Leu Trp Met Ser Cys Val Val Gln Ser Thr Gly His Met Gln Cys

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65 70 75 80

Arg Ala Leu Thr Val Ser Ala Val Leu Leu Ala Phe Val Ala Leu Phe

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100 105 110

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130 135 140

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145 150 155 160

Gly Ala Ala Leu Tyr Ile Gly Trp Ala Ala Thr Ala Leu Leu Met Val

165 170 175

Gly Gly Cys Leu Leu Cys Cys Gly Ala Trp Val Cys Thr Gly Arg Pro

180 185 190

Asp Leu Ser Phe Pro Val Lys Tyr Ser Ala Pro Arg Arg Pro Thr Ala

195 200 205

Thr Gly Asp Tyr Asp Lys Lys Asn Tyr Val

210 215

<210> 47

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5-1-5

<400> 47

Met Gly Ser Ala Ala Leu Glu Ile Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Val

1 5 10 15

Gly Trp Gly Gly Leu Ile Leu Ala Cys Gly Leu Pro Met Trp Gln Val

20 25 30

Thr Ala Phe Leu Asp His Asn Ile Val Thr Ala Gln Thr Thr Trp Lys

35 40 45

Gly Leu Trp Met Ser Cys Val Ser Gln Ser Thr Gly Gln Ile Gln Cys

50 55 60

Lys Val Phe Asp Ser Leu Leu Asn Leu Ser Ser Thr Val Gln Ala Ala

65 70 75 80

Arg Ala Leu Thr Val Ser Ala Val Leu Leu Ala Phe Val Ala Leu Phe

85 90 95

Val Thr Leu Ala Gly Ala Gln Cys Thr Thr Cys Val Ala Pro Gly Pro

100 105 110

Ala Lys Ala Arg Val Ala Leu Thr Gly Gly Val Leu Tyr Leu Phe Cys

115 120 125

Gly Leu Leu Ala Leu Val Pro Leu Cys Trp Phe Ala Asn Ile Val Val

130 135 140

Arg Glu Phe Tyr Asp Pro Ser Val Pro Val Ser Gln Lys Tyr Glu Leu

145 150 155 160

Gly Ala Ala Leu Tyr Ile Gly Trp Ala Ala Thr Ala Leu Leu Met Val

165 170 175

Gly Gly Cys Leu Leu Cys Cys Gly Ala Trp Val Cys Thr Gly Arg Pro

180 185 190

Asp Leu Ser Phe Pro Val Lys Tyr Ser Ala Pro Arg Arg Pro Thr Ala

195 200 205

Thr Gly Asp Tyr Asp Lys Lys Asn Tyr Val

210 215

<210> 48

<211> 218

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> 5-5-1

<400> 48

Met Gly Ser Ala Ala Leu Glu Ile Leu Gly Leu Val Leu Cys Leu Val

1 5 10 15

Gly Trp Gly Gly Leu Ile Leu Ala Cys Gly Leu Pro Met Trp Gln Val

20 25 30

Thr Ala Phe Leu Asp His Asn Ile Val Thr Ala Gln Thr Thr Trp Lys

35 40 45

Gly Leu Trp Met Ser Cys Val Val Gln Ser Thr Gly His Met Gln Cys

50 55 60

Lys Val Tyr Asp Ser Val Leu Ala Leu Ser Thr Glu Val Gln Ala Ala

65 70 75 80

Arg Ala Leu Thr Val Ser Ala Val Leu Leu Ala Phe Val Ala Leu Phe

85 90 95

Val Thr Leu Ala Gly Ala Gln Cys Thr Thr Cys Val Ala Pro Gly Pro

100 105 110

Ala Lys Ala Arg Val Ala Leu Thr Gly Gly Val Leu Tyr Leu Phe Cys

115 120 125

Gly Leu Leu Ala Leu Val Pro Leu Cys Trp Phe Ala Asn Ile Val Val

130 135 140

Arg Glu Phe Tyr Asp Pro Met Thr Pro Val Asn Ala Arg Tyr Glu Phe

145 150 155 160

Gly Gln Ala Leu Tyr Ile Gly Trp Ala Ala Thr Ala Leu Leu Met Val

165 170 175

Gly Gly Cys Leu Leu Cys Cys Gly Ala Trp Val Cys Thr Gly Arg Pro

180 185 190

Asp Leu Ser Phe Pro Val Lys Tyr Ser Ala Pro Arg Arg Pro Thr Ala

195 200 205

Thr Gly Asp Tyr Asp Lys Lys Asn Tyr Val

210 215

<210> 49

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 重链 FR1

<400> 49

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Ile Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 50

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 重链 CDR1

<400> 50

Gly Tyr Ser Phe Thr Gly Tyr

1 5

<210> 51

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 重链 FR2

<400> 51

Tyr Met Asn Trp Val Lys Gln Ser Pro Glu Lys Ser Leu Glu Trp Ile

1 5 10 15

Gly Asp Ile

<210> 52

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 重链 CDR2

<400> 52

Asn Pro Ser Thr Gly Gly

1 5

<210> 53

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 重链 FR3

<400> 53

Ala Thr Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Ala Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp

1 5 10 15

Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Lys Ser Leu Thr Ser Glu

20 25 30

Asp Ser Ala Val Phe Tyr Cys Ala Leu

35 40

<210> 54

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 重链 CDR3

<400> 54

Tyr Ser Asn Tyr Gly Phe Val Tyr

1 5

<210> 55

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 重链 FR4

<400> 55

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ala

1 5 10

<210> 56

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 重链 FR1

<400> 56

Gln Val Gln Leu Lys Gln Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Ser Leu Ser Ile Thr Cys Thr Val Ser

20 25

<210> 57

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 重链 CDR1

<400> 57

Gly Phe Ser Leu Ile Arg Tyr

1 5

<210> 58

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 重链 FR2

<400> 58

Gly Val His Trp Val Arg Gln Ser Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

1 5 10 15

Gly Val Lys

<210> 59

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列e

<220>

<223> M11 重链 CDR2

<400> 59

Trp Ser Gly Gly Ser

1 5

<210> 60

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 重链 FR3

<400> 60

Thr Asp Tyr Asn Gly Ala Phe Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ser Lys Asp

1 5 10 15

Asn Ser Lys Ser Gln Val Phe Phe Lys Met Asn Ser Leu Gln Ala Asp

20 25 30

Asp Thr Ala Ile Tyr Tyr Cys Ala Arg

35 40

<210> 61

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 重链 CDR3

<400> 61

Gly Leu Asp Gly Tyr Tyr Val Pro Asp Val

1 5 10

<210> 62

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 重链 FR4

<400> 62

Trp Gly Thr Gly Thr Ser Val Thr Val Ser

1 5 10

<210> 63

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 重链 FR1

<400> 63

Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Val Leu Val Lys Pro Gly Pro

1 5 10 15

Ser Val Met Ile Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 64

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 重链 CDR1

<400> 64

Gly Phe Thr Phe Thr Asp Tyr

1 5

<210> 65

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 重链 FR2

<400> 65

Tyr Met His Trp Val Lys Gln Ser His Gly Lys Ser Leu Glu Trp Ile

1 5 10 15

Gly Leu Val

<210> 66

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 重链 CDR2

<400> 66

Tyr Pro Tyr Asn Gly Gly

1 5

<210> 67

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 重链 FR3

<400> 67

Thr Asp Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp

1 5 10 15

Thr Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Glu Leu Asn Ser Leu Thr Ser Glu

20 25 30

Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg

35 40

<210> 68

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 重链 CDR3

<400> 68

Cys Leu Tyr Asp Gly Leu Tyr Phe Tyr Ala Met Asp Tyr

1 5 10

<210> 69

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 重链 FR4

<400> 69

Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 70

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 重链 FR1

<400> 70

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Lys Gly

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 71

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 重链 CDR1

<400> 71

Gly Phe Thr Phe Asn Ile Tyr

1 5

<210> 72

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 重链 FR2

<400> 72

Ala Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val

1 5 10 15

Ala Arg Ile

<210> 73

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 重链 CDR2

<400> 73

Arg Ser Lys Ser Ser Asn Tyr Ala

1 5

<210> 74

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 重链 FR3

<400> 74

Thr Tyr Tyr Val Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Ile Ile Ser Arg Asp

1 5 10 15

Asp Ser Gln Ser Met Leu Tyr Leu Gln Val Asn Asn Leu Lys Thr Glu

20 25 30

Asp Thr Ala Met Tyr Tyr Cys Val Arg

35 40

<210> 75

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 重链 CDR3

<400> 75

Glu Gly Asn Trp Asp Cys Phe Asp Tyr

1 5

<210> 76

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 重链 FR4

<400> 76

Trp Gly Gln Gly Thr Thr Leu Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 77

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 重链 FR1

<400> 77

Gln Ala Tyr Leu Gln Gln Ser Gly Ala Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala

1 5 10 15

Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser

20 25

<210> 78

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 重链 CDR1

<400> 78

Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr

1 5

<210> 79

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 重链 FR2

<400> 79

Asn Met His Trp Val Lys Lys Thr Arg Arg Gln Gly Leu Glu Trp Ile

1 5 10 15

Gly Ala Ile

<210> 80

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 重链 CDR2

<400> 80

Ser Pro Gly Asn Gly Asn

1 5

<210> 81

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 重链 FR3

<400> 81

Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp

1 5 10 15

Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr Met Gln Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu

20 25 30

Asp Ser Ala Val Tyr Phe Cys Ala Arg

35 40

<210> 82

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 重链 CDR3

<400> 82

Asp Asp Gly Tyr Tyr Gly Ala Leu Asp Tyr

1 5 10

<210> 83

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 重链 FR4

<400> 83

Trp Gly Gln Gly Thr Ser Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 84

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 重链 FR1

<400> 84

Gln Val Gln Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Leu Val Gln Pro Ser Gln

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Thr Val Ser

20 25

<210> 85

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 重链 CDR1

<400> 85

Gly Leu Ser Leu Ile Arg Asn

1 5

<210> 86

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 重链 FR2

<400> 86

Ser Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Met

1 5 10 15

Gly Val Ile

<210> 87

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 重链 CDR2

<400> 87

Trp Ser Asn Gly Gly

1 5

<210> 88

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 重链 FR3

<400> 88

Thr Glu Tyr Asn Ser Thr Val Lys Ser Arg Leu Ser Ile Ser Arg Asp

1 5 10 15

Thr Ser Lys Asn Gln Val Phe Leu Lys Met Asn Ser Leu Gln Thr Glu

20 25 30

Asp Ser Ala Met Phe Phe Cys Ala Arg

35 40

<210> 89

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 重链 CDR3

<400> 89

Thr Pro Asp Gly Tyr Tyr Pro Tyr Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 90

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 重链 FR4

<400> 90

Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 91

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 重链 FR1

<400> 91

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 92

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 重链 CDR1

<400> 92

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 93

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 重链 FR2

<400> 93

Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val

1 5 10 15

Ala Ser Ile

<210> 94

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 重链 CDR2

<400> 94

Ser Tyr Glu Gly Arg Asn

1 5

<210> 95

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 重链 FR3

<400> 95

Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp

1 5 10 15

Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln Met Lys Ser Leu Arg Ser Glu

20 25 30

Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Arg

35 40

<210> 96

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 重链 CDR3

<400> 96

His Pro Arg Arg Tyr Phe Asp Tyr

1 5

<210> 97

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 重链 FR4

<400> 97

Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 98

<211> 24

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 重链 FR1

<400> 98

Val Lys Val Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg Ser

1 5 10 15

Met Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20

<210> 99

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 重链 CDR1

<400> 99

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 100

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 重链 FR2

<400> 100

Phe Met Ala Trp Val Arg Gln Ser Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val

1 5 10 15

Ala Ser Ile

<210> 101

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 重链 CDR2

<400> 101

Asn Tyr Gly Gly Ser Arg

1 5

<210> 102

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 重链 FR3

<400> 102

Thr Tyr Tyr Glu Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp

1 5 10 15

Asn Ala Lys Ser Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu

20 25 30

Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg

35 40

<210> 103

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 重链 CDR3

<400> 103

His Pro His Arg Leu Phe Asp Tyr

1 5

<210> 104

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 重链 FR4

<400> 104

Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 105

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 重链 FR1

<400> 105

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser His

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser

20 25

<210> 106

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 重链 CDR1

<400> 106

Gly Phe Ser Leu Asn Thr Tyr Gly Val

1 5

<210> 107

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 重链 FR2

<400> 107

Gly Val Asn Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

1 5 10 15

Ala Ser Ile

<210> 108

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 重链 CDR2

<400> 108

Trp Trp His Gly Lys

1 5

<210> 109

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 重链 FR3

<400> 109

Thr Tyr Ile Asn Pro Ser Leu Lys Asn Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp

1 5 10 15

Pro Ser Asn Asn Gln Ala Phe Leu Glu Val Thr Asn Val Asp Pro Ala

20 25 30

Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His

35 40

<210> 110

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 重链 CDR3

<400> 110

Ala Arg Ala Gln Leu Leu Asp Tyr

1 5

<210> 111

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 重链 FR4

<400> 111

Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 112

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 重链 FR1

<400> 112

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Arg Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 113

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 重链 CDR1

<400> 113

Gly Phe Thr Phe Asn Asn Tyr

1 5

<210> 114

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 重链 FR2

<400> 114

Gly Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Thr Lys Gly Leu Glu Trp Val

1 5 10 15

Ala Ser Ile

<210> 115

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 重链 CDR2

<400> 115

Thr Asn Ser Gly Tyr Thr

1 5

<210> 116

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 重链 FR3

<400> 116

Thr Tyr Tyr Arg Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp

1 5 10 15

Asn Ala Lys Asn Ala Leu Tyr Leu Gln Met Asp Ser Leu Arg Ser Glu

20 25 30

Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Thr Thr

35 40

<210> 117

<211> 12

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 重链 CDR3

<400> 117

Gly Gly Tyr Gly Gly Tyr Phe Pro Leu Phe Asp Tyr

1 5 10

<210> 118

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 重链 FR4

<400> 118

Trp Gly His Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 119

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 重链 FR1

<400> 119

Gln Val Thr Leu Lys Glu Ser Gly Pro Gly Ile Leu Gln Pro Ser His

1 5 10 15

Thr Leu Ser Leu Thr Cys Ser Phe Ser

20 25

<210> 120

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 重链 CDR1

<400> 120

Gly Phe Ser Leu Ser Thr Tyr Gly Met

1 5

<210> 121

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 重链 FR2

<400> 121

Gly Val Ser Trp Ile Arg Gln Pro Ser Gly Lys Gly Leu Glu Trp Leu

1 5 10 15

Ala Ser Ile

<210> 122

<211> 5

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 重链 CDR2

<400> 122

Trp Trp Asn Gly Arg

1 5

<210> 123

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 重链 FR3

<400> 123

Thr Tyr Thr Asn Pro Ser Leu Met Ser Arg Leu Thr Val Ser Lys Asp

1 5 10 15

Thr Ser Thr Asn Gln Ala Phe Leu Arg Val Thr Ser Val Glu Thr Ala

20 25 30

Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala His

35 40

<210> 124

<211> 13

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 重链 CDR3

<400> 124

Thr Pro Tyr Asp Tyr Ser Asn Leu Gly Trp Phe Thr Tyr

1 5 10

<210> 125

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 重链 FR4

<400> 125

Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 126

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 重链 FR1

<400> 126

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Met Lys Leu Ser Cys Ala Val Ser

20 25

<210> 127

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 重链 CDR1

<400> 127

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 128

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 重链 FR2

<400> 128

Tyr Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val

1 5 10 15

Ala Ser Ile

<210> 129

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 重链 CDR2

<400> 129

Ser Tyr Glu Gly Arg Asn

1 5

<210> 130

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 重链 FR3

<400> 130

Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp

1 5 10 15

Asn Ala Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ser Glu

20 25 30

Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg

35 40

<210> 131

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 重链 CDR3

<400> 131

His Pro Arg Arg Tyr Phe Asp Phe

1 5

<210> 132

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 重链 FR4

<400> 132

Trp Gly Pro Gly Thr Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 133

<211> 25

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 重链 FR1

<400> 133

Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Arg

1 5 10 15

Ser Leu Lys Leu Ser Cys Ala Ala Ser

20 25

<210> 134

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 重链 CDR1

<400> 134

Gly Phe Thr Phe Ser Asp Tyr

1 5

<210> 135

<211> 19

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 重链 FR2

<400> 135

Phe Met Ala Trp Val Arg Gln Ala Pro Lys Lys Gly Leu Glu Trp Val

1 5 10 15

Ala Ser Ile

<210> 136

<211> 6

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 重链 CDR2

<400> 136

Asn Tyr Glu Gly Ser Arg

1 5

<210> 137

<211> 41

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 重链 FR3

<400> 137

Thr Tyr Tyr Gly Asp Ser Val Lys Asp Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp

1 5 10 15

Asn Thr Lys Thr Thr Leu Tyr Leu Gln Met Thr Ser Leu Arg Ser Glu

20 25 30

Asp Thr Ala Thr Tyr Tyr Cys Ala Arg

35 40

<210> 138

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 重链 CDR3

<400> 138

His Pro Arg Arg Tyr Phe Asp Phe

1 5

<210> 139

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 重链 FR4

<400> 139

Trp Gly Gln Gly Val Met Val Thr Val Ser Ser

1 5 10

<210> 140

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 轻链 FR1

<400> 140

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Leu Thr Leu Ser Val Thr Leu Gly

1 5 10 15

Gln Pro Ala Ser Ile Ser Cys

20

<210> 141

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 轻链 CDR1

<400> 141

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Asp Gly Lys Thr Tyr Leu Asn

1 5 10 15

<210> 142

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 轻链 FR2

<400> 142

Trp Leu Leu Gln Arg Pro Gly Gln Ser Pro Lys Arg Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 143

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 轻链 CDR2

<400> 143

Leu Val Ser Lys Leu Asp Ser

1 5

<210> 144

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 轻链 FR3

<400> 144

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Ala Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 145

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 轻链 CDR3

<400> 145

Val Gln Gly Ile His Phe Pro Arg Thr

1 5

<210> 146

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M3 轻链 FR4

<400> 146

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 147

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 轻链 FR1

<400> 147

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser His Lys Phe Met Ser Thr Ser Val Gly

1 5 10 15

Asp Arg Val Ser Ile Thr Cys

20

<210> 148

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 轻链 CDR1

<400> 148

Lys Ala Ser Gln Asp Val Ser Thr Asn Val Ala

1 5 10

<210> 149

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 轻链 FR2

<400> 149

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Thr Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 150

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 轻链 CDR2

<400> 150

Trp Ala Ser Thr Arg His Thr

1 5

<210> 151

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 轻链 FR3

<400> 151

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Tyr Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Leu Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 152

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 轻链 CDR3

<400> 152

Gln Gln His Tyr Ser Thr Pro Leu Thr

1 5

<210> 153

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M11 轻链 FR4

<400> 153

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu Arg Arg

1 5 10

<210> 154

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 轻链 FR1

<400> 154

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Thr Cys

20

<210> 155

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 轻链 CDR1

<400> 155

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Asn Ser Arg Ala Arg Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 156

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 轻链 FR2

<400> 156

Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Met Tyr

1 5 10 15

<210> 157

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 轻链 CDR2

<400> 157

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 158

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 轻链 FR3

<400> 158

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Ala Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Val Phe Tyr Cys

20 25 30

<210> 159

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 轻链 CDR3

<400> 159

Lys Gln Ser Tyr Asn Leu Pro Trp Thr

1 5

<210> 160

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M23 轻链 FR4

<400> 160

Phe Gly Gly Gly Thr Lys Leu Glu Ile Lys Arg

1 5 10

<210> 161

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 轻链 FR1

<400> 161

Asp Ile Val Met Ser Gln Ser Pro Ser Ser Leu Pro Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Gln Lys Val Thr Met Thr Cys

20

<210> 162

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 轻链 CDR1

<400> 162

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Thr Ser Asn Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 163

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 轻链 FR2

<400> 163

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 164

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 轻链 CDR2

<400> 164

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 165

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 轻链 FR3

<400> 165

Gly Val Pro Asp Arg Phe Thr Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Lys Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 166

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 轻链 CDR3

<400> 166

Gln Gln Tyr Tyr Arg Tyr His Thr

1 5

<210> 167

<211> 10

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M29 轻链 FR4

<400> 167

Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys

1 5 10

<210> 168

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 轻链 FR1

<400> 168

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Val Ser Leu Ser Cys

20

<210> 169

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 轻链 CDR1

<400> 169

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Ser Ile His

1 5 10

<210> 170

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 轻链 FR2

<400> 170

Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Asn Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Arg

1 5 10 15

<210> 171

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 轻链 CDR2

<400> 171

Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser

1 5

<210> 172

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 轻链 FR3

<400> 172

Arg Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Asn Gly Val Glu Ser Glu Asp Leu Ser Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 173

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 轻链 CDR3

<400> 173

Gln Gln Ser Tyr Asn Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 174

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> M48 轻链 FR4

<400> 174

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

1 5

<210> 175

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 轻链 FR1

<400> 175

Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Val Thr Pro Gly

1 5 10 15

Glu Ser Val Ser Leu Ser Cys

20

<210> 176

<211> 11

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 轻链 CDR1

<400> 176

Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Thr Ser Ile His

1 5 10

<210> 177

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 轻链 FR2

<400> 177

Trp Tyr Gln Gln Lys Ser Asn Glu Ser Pro Arg Leu Leu Ile Arg

1 5 10 15

<210> 178

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 轻链 CDR2

<400> 178

Tyr Ala Ser Gln Ser Ile Ser

1 5

<210> 179

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 轻链 FR3

<400> 179

Arg Ile Pro Ser Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Asn Gly Val Glu Ser Glu Asp Leu Ser Val Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 180

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 轻链 CDR3

<400> 180

Gln Gln Ser Tyr Asn Leu Pro Leu Thr

1 5

<210> 181

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R2 轻链 FR4

<400> 181

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

1 5

<210> 182

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 轻链 FR1

<400> 182

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Met Asn Cys

20

<210> 183

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 轻链 CDR1

<400> 183

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Phe Ser Ser Gly Asp Gln Lys Lys Phe Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 184

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 轻链 FR2

<400> 184

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Ser

1 5 10 15

<210> 185

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 轻链 CDR2

<400> 185

Leu Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 186

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 轻链 FR3

<400> 186

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Asn Asn Met Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 187

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 轻链 CDR3

<400> 187

Gln Gln His Tyr Asp Ile Pro Tyr Thr

1 5

<210> 188

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R3 轻链 FR4

<400> 188

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu

1 5

<210> 189

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 轻链 FR1

<400> 189

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Phe Leu Ala Val Ser Val Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Asn Cys

20

<210> 190

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 轻链 CDR1

<400> 190

Lys Ser Ser Gln Ser Phe Leu Ser Ser Gly Asn Gln Glu Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 191

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 轻链 FR2

<400> 191

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile His

1 5 10 15

<210> 192

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 轻链 CDR2

<400> 192

Leu Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 193

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 轻链 FR3

<400> 193

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Met Gln Ala Glu Asp Val Ala Ile Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 194

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 轻链 CDR3

<400> 194

Gln Gln His Tyr Asp Ile Pro Tyr Thr

1 5

<210> 195

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R8 轻链 FR4

<400> 195

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu

1 5

<210> 196

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 轻链 FR1

<400> 196

Asp Ile Val Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Gln Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Met Ser Cys

20

<210> 197

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 轻链 CDR1

<400> 197

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Gly Asp Gln Lys Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 198

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 轻链 FR2

<400> 198

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 199

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 轻链 CDR2

<400> 199

Leu Thr Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 200

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 轻链 FR3

<400> 200

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 201

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 轻链 CDR3

<400> 201

Gln Gln His Tyr Ser Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 202

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R9 轻链 FR4

<400> 202

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

1 5

<210> 203

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 轻链 FR1

<400> 203

Asp Val Val Met Thr Gln Thr Pro Val Ser Leu Ser Val Ser Leu Gly

1 5 10 15

Gly Gln Thr Ser Ile Ser Cys

20

<210> 204

<211> 16

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 轻链 CDR1

<400> 204

Arg Ser Ser Gln Ser Leu Phe His Ser Asp Gly Asn Thr Tyr Leu Tyr

1 5 10 15

<210> 205

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 轻链 FR2

<400> 205

Trp Tyr Leu Arg Lys Pro Gly Gln Ser Pro Gln Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 206

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 轻链 CDR2

<400> 206

Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser

1 5

<210> 207

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 轻链 FR3

<400> 207

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Lys Ile Ser Arg Val Glu Pro Glu Asp Leu Gly Leu Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 208

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 轻链 CDR3

<400> 208

Tyr Gln Gly Thr His Tyr Pro Pro Thr

1 5

<210> 209

<211> 8

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R11 轻链 FR4

<400> 209

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu

1 5

<210> 210

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 轻链 FR1

<400> 210

Asp Ile Leu Met Thr Gln Thr Pro Ser Ser Gln Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Lys Val Thr Val Ser Cys

20

<210> 211

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 轻链 CDR1

<400> 211

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Tyr Ser Gly Asp Gln Lys Ser Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 212

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 轻链 FR2

<400> 212

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 213

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 轻链 CDR2

<400> 213

Leu Ala Ser Thr Arg Lys Ser

1 5

<210> 214

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 轻链 FR3

<400> 214

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Val Gln Ala Glu Asp Leu Ala Asp Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 215

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 轻链 CDR3

<400> 215

Gln Gln His Tyr Thr Tyr Pro Leu Thr

1 5

<210> 216

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R14 轻链 FR4

<400> 216

Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Ile

1 5

<210> 217

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 轻链 FR1

<400> 217

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Asn Cys

20

<210> 218

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 轻链 CDR1

<400> 218

Lys Ser Ser Gln Ser Leu Leu Phe Ser Gly Asp Gln Glu Asn His Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 219

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 轻链 FR2

<400> 219

Trp Tyr Gln Gln Lys Ala Gly Gln Ser Ala Lys Leu Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 220

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 轻链 CDR2

<400> 220

Trp Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 221

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 轻链 FR3

<400> 221

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Ala Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Ser Ser Met Gln Ala Glu Asp Arg Ala Thr Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 222

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 轻链 CDR3

<400> 222

Gln Gln Asn Tyr Asp Ile Pro Tyr Thr

1 5

<210> 223

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R20 轻链 FR4

<400> 223

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu

1 5

<210> 224

<211> 23

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 轻链 FR1

<400> 224

Asp Ile Val Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ala Val Ser Ala Gly

1 5 10 15

Glu Thr Val Thr Ile Asn Cys

20

<210> 225

<211> 17

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 轻链 CDR1

<400> 225

Lys Ser Ser Arg Ser Leu Phe Ser Ser Gly Tyr Gln Glu Asn Tyr Leu

1 5 10 15

Ala

<210> 226

<211> 15

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 轻链 FR2

<400> 226

Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ser Pro Lys Met Leu Ile Tyr

1 5 10 15

<210> 227

<211> 7

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 轻链 CDR2

<400> 227

Leu Ala Ser Thr Arg Glu Ser

1 5

<210> 228

<211> 32

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 轻链 FR3

<400> 228

Gly Val Pro Asp Arg Phe Ile Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr

1 5 10 15

Leu Thr Ile Asn Thr Leu Gln Ala Glu Asp Leu Ala Ile Tyr Tyr Cys

20 25 30

<210> 229

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 轻链 CDR3

<400> 229

Gln Gln His Tyr Asp Ile Pro Tyr Thr

1 5

<210> 230

<211> 9

<212> PRT

<213> 人工序列

<220>

<223> R28 轻链 FR4

<400> 230

Phe Gly Ala Gly Thr Lys Leu Glu Leu

1 5