阅读说明：本技术 一种从覆盆子中提取花色苷的方法 (Method for extracting anthocyanin from raspberry ) 是由 侯温甫 王宏勋 易阳 胥伟 王丽梅 闵婷 于 2019-10-12 设计创作，主要内容包括：本发明提供一种从覆盆子中提取花色苷的方法,采用酶解闪式提取法提取覆盆子中的花色苷,即依靠高速机械剪刀力和超动分子渗透,使花色苷快速的被溶剂分子包围、解离、替代,最后脱离覆盆子进入溶剂中,花色苷迅速达到组织内外平衡,从而实现了快速、高得率的提取目的,同时采用脉冲强化超声辅助提取花色苷工艺,使得覆盆子花色苷的提取效率提高至50％以上,与现有技术相比提取得率有显著提高。(The invention provides a method for extracting anthocyanin from raspberry, which adopts an enzymolysis flash extraction method to extract anthocyanin in the raspberry, namely, anthocyanin is quickly surrounded, dissociated and replaced by solvent molecules by means of high-speed mechanical shearing force and ultra-dynamic molecule permeation, and finally separated from the raspberry and enters the solvent, and the anthocyanin quickly reaches the internal and external balance of tissues, so that the aim of quick and high-yield extraction is fulfilled.)

一种从覆盆子中提取花色苷的方法

技术领域

本发明属于天然活性物质提取技术领域，具体涉及一种脉冲电场强化超声辅助提取覆盆子花色苷的工艺方法。

背景技术

覆盆子的果实是一种聚合果，有红色，金色和黑色，富含花色苷，在欧美作为水果，在中国大量分布但少为人知，仅在东北地区有少量栽培，市场上比较少见。覆盆子植物可入药，有多种药物价值，其果实有补肾壮阳的作用。覆盆子油属于不饱和脂肪酸，可促进***分泌荷尔蒙。

花色苷是一种有着特殊分子结构的生物类黄酮混合物，其低聚物:低聚花色苷(OPC)是目前国际上公认的清除人体内自由基有效的天然抗氧化剂。一般为红棕色粉末，气微、味涩，溶于水和大多有机溶剂。花色苷的功效特别广泛，例如从银杏叶中提取，花色苷纯度低，与银杏黄酮结合，主要溶解、清除血栓，缓解症状，但对受损组织的修复、防止血栓的形成效果不明显。花色苷与植物黄酮、磷脂结合清除血栓同时，改善血管质量和输送能力。花色苷加上亚油酸、熊果酸等，能快速消除血栓，软化修复血管，更能从源头上改善血液质量和血管环境，逆转病变，彻底消除血栓形成、血管硬化的根本原因。

目前，花色苷的提取方法有水溶剂提取法、有机溶剂提取法、超声提取法、微波提取法、超临界提取法等。每种提取方法都存在着各自的优缺点，例如有机溶剂提取法能高效提取花色苷，但是有机溶剂回收及后续处理增加成本，同时对环境造成一定污染。并且，现有的花色苷的提取方法普遍存在提取得率低的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种从覆盆子中提取花色苷的方法，所述方法具有花色苷提取得率高的优势。

本发明提供的一种从覆盆子中提取花色苷的方法，包括以下步骤：

(1)将覆盆子粉、纤维素酶、果胶酶和水混合，调得到的料液的pH值3.0-4.5，酶解一定时间，得到酶解液；

(2)将步骤(1)中所述酶解液和70-90％酸化后的乙醇混合，调整得到的混合液中乙醇水溶液的体积浓度为50％-80％，闪式提取30-60s，得到的提取料液固液分离，收集液相，得到花色苷初提液；所述乙醇水溶液的体积与覆盆子粉质量的1-3：1-3；

(3)采用脉冲电场强化超声辅助法对步骤(2)中的花色苷初提液进行再提取，脉冲电场的电场强度为300-700V/cm，脉冲温度为40-80℃下脉冲3-8次处理，然后在超声功率为300-600W，超声温度为50-85℃，超声时间为20-40min的条件下处理。

优选地，步骤(2)中调整得到的混合液中酸化乙醇水溶液的体积浓度为60-70％，最优选为65％。

优选地，步骤(2)中闪式提取的时间为30-40s。

优选地，步骤(2)中闪式提取在闪式提取罐中进行，所述闪式提取时电压为100-180V。

优选地，步骤(2)中所述闪式提取的次数为4-6次。

优选地，步骤(1)中覆盆子粉的粒径为60-100目。

优选地，步骤(1)中覆盆子粉的质量、纤维素酶的质量、果胶酶的质量和水的体积的比例为1-5：0.1-0.5：0.1-0.3：1-3；所述纤维素酶或果胶酶的比活力独立为200-500U/mg。

优选地，步骤(1)中酶解的温度45-65℃。

优选地，步骤(1)中酶解的时间为2.0-4.0h。

本发明提供的一种从覆盆子中提取花色苷的方法，采用酶解闪式提取法提取覆盆子中的花色苷，即依靠高速机械剪刀力和超动分子渗透，使花色苷快速的被溶剂分子包围、解离、替代，最后脱离覆盆子进入溶剂中，花色苷迅速达到组织内外平衡，从而实现了快速、高得率的提取目的，同时采用脉冲强化超声辅助提取花色苷工艺，使覆盆子花色苷的提取效率提高至50％以上，与现有技术相比提取得率有显著提高。

本发明的其它特征和优点将在随后

具体实施方式

部分予以详细说明。

具体实施方式

下面将更详细地描述本发明的优选实施方式。虽然以下描述了本发明的优选实施方式，然而应该理解，可以以各种形式实现本发明而不应被这里阐述的实施方式所限制。

下面结合实施例对本发明提供的一种覆盆子中提取花色苷的方法进行详细的说明，但是不能把它们理解为对本发明保护范围的限定。

实施例1

本发明提供的一种从覆盆子中提取花色苷的方法，包括以下步骤：

(1)将覆盆子粉、纤维素酶、果胶酶和水混合，调得到的料液的pH值3.0，45℃酶解2.0h，得到酶解液；覆盆子粉的粒径为60目；覆盆子粉的质量、纤维素酶的质量、果胶酶的质量和水的体积比为1：0.1：0.1：1；所述纤维素酶或果胶酶的比活力为200U/mg。

(2)将步骤(1)中所述酶解液和70％酸化后的乙醇混合，调整得到的混合液中乙醇水溶液的体积浓度为50％，在闪式提取罐中进行闪式提取，所述闪式提取时电压为100V，闪式提取30s，闪式提取的次数为4次，得到的提取料液固液分离，收集液相，得到花色苷初提液；所述乙醇水溶液的体积与覆盆子粉质量的1：1；

(3)采用脉冲电场强化超声辅助法对步骤(2)中的花色苷初提液进行再提取，脉冲电场的电场强度为300V/cm，脉冲温度为40℃下脉冲3次处理，然后在超声功率为300W，超声温度为50℃，超声时间为20min的条件下处理。

本实施例所提取的覆盆子花色苷为159.8U/g。

实施例2

本实施例提供的一种从覆盆子中提取花色苷的方法，包括以下步骤：

(1)将覆盆子粉、纤维素酶、果胶酶和水混合，调得到的料液的pH值4.0，50℃酶解3.0h，得到酶解液；覆盆子粉的粒径为80目；覆盆子粉的质量、纤维素酶的质量、果胶酶的质量和水的体积的比例为3：0.3：0.1：1；所述纤维素酶或果胶酶的比活力为300U/mg；

(2)将步骤(1)中所述酶解液和80％酸化后的乙醇混合，调整得到的混合液中乙醇水溶液的体积浓度为70％，在闪式提取罐中进行闪式提取，所述闪式提取时电压为160V，闪式提取45s，所述闪式提取的次数为5次，得到的提取料液固液分离，收集液相，得到花色苷初提液；所述乙醇水溶液的体积与覆盆子粉质量的1：3；

(3)采用脉冲电场强化超声辅助法对步骤(2)中的花色苷初提液进行再提取，脉冲电场的电场强度为500V/cm，脉冲温度为60℃下脉冲3次处理，然后在超声功率为390W，超声温度为60℃，超声时间为30min的条件下处理。

本实施例所提取的覆盆子花色苷为239.8U/g。

实施例3

本发明提供的一种从覆盆子中提取花色苷的方法，包括以下步骤：

(1)将覆盆子粉、纤维素酶、果胶酶和水混合，调得到的料液的pH值4.5，65℃酶解4h，得到酶解液；覆盆子粉的粒径为100目；覆盆子粉的质量、纤维素酶的质量、果胶酶的质量和水的体积的比例为1：0.5：0.1：3；所述纤维素酶或果胶酶的比活力为300U/mg。

(2)将步骤(1)中所述酶解液和90％酸化后的乙醇混合，调整得到的混合液中乙醇水溶液的体积浓度为80％，在闪式提取罐中进行闪式提取，所述闪式提取时电压为180V，闪式提取60s，所述闪式提取的次数为6次，得到的提取料液固液分离，收集液相，得到花色苷初提液；所述乙醇水溶液的体积与覆盆子粉质量的1：2；

(3)采用脉冲电场强化超声辅助法对步骤(2)中的花色苷初提液进行再提取，脉冲电场的电场强度为700V/cm，脉冲温度为80℃下脉冲5次处理，然后在超声功率为600W，超声温度为85℃，超声时间为40min的条件下处理。

本实施例所提取的覆盆子花色苷为210.6U/g。

测试例

1、脉冲电场因素条件对花色苷提取效果的影响：

料液比对覆盆子花色苷提取效果的影响：分别以1∶1、2∶1、3∶1、4∶1、5∶1(g/L)的料液比溶于五份100mL，70％乙醇，60℃下水浴1h，在脉冲电场的电场强度为500V/cm，流速为1.5mL/s，脉冲3次的条件下对样品进行处理。处理完的样品装入10mL的离心管中放入离心机中离心。离心机的转速设定为5000r/min，离心时间为20min。取离心完的上清液用70％的乙醇稀释适当的倍数后，用扫描型紫外分光光度计从300nm到600nm扫描其吸光值，同时用70％乙醇作为阴性对照。用390nm、470nm和520nm下测得的吸光值除以被测样品的浓度来分别计算覆盆子花色苷的产量，单位是U/g。

2、前处理温度对花色苷提取效果的影响：

准确称取五份10g覆盆子粉溶于100mL，70％乙醇溶液，分别在温度为30℃、40℃、50℃、60℃、70℃下水浴1h，在脉冲电场的电场强度为500V/cm，流速为1.5mL/s，脉冲3次的条件下对样品进行处理。处理完的样品进行后处理，用390nm、470nm和520nm下测得的吸光值除以被测样品的浓度来计算覆盆子花色苷产量，单位是U/g。

3、脉冲次数对覆盆子花色苷提取效果的影响：

准确称取五份10g覆盆子粉粉溶于100mL，70％乙醇溶液，温度为60℃下水浴1h，在脉冲电场的电场强度为500V/cm，流速为1.5mL/s的条件下对样品分别脉冲1次、2次、3次、4次、5次处理。处理完的样品进行后处理，用390nm、470nm和520nm下测得的吸光值除以被测样品的浓度来分别计算覆盆子花色苷的产量，单位是U/g。

4、电场强度对覆盆子花色苷提取效果的影响：

准确称取五份10g干燥菌体粉溶于100mL，70％乙醇溶液，温度为60℃下水浴1h，分别以脉冲电场的电场强度为200、300、400、500、600V/cm，流速为1.5mL/s，脉冲3次的条件下对样品进行处理。处理完的样品进行后处理，用390nm、470nm和520nm下测得的吸光值除以被测样品的浓度来计算覆盆子花色苷的产量，单位是U/g。

5、脉冲电场强化超声辅助对覆盆子花色苷提取效果的影响：

准确称取五份10g干燥菌体粉溶于100mL，70％乙醇溶液，温度为60℃下水浴1h，在脉冲电场的电场强度为500V/cm，流速为1.5mL/s的条件下对样品分脉冲3次处理。

6、超声波功率对覆盆子花色苷提取效果的影响：

将经过脉冲电场处理后的样品分别在超声波功率为130、195、260、325、390W、温度60℃下浸提30min。处理完的样品装入10mL的离心管中放入离心机中离心。离心机的转速设定为5000r/min，离心时间为20min。取离心完的上清液用70％的乙醇稀释适当的倍数后，用扫描型紫外分光光度计从300nm到600nm扫描其吸光值，同时用70％乙醇作为阴性对照。用390nm、470nm和520nm下测得的吸光值除以被测样品的浓度来分别计算覆盆子花色苷的产量，单位是U/g。

7、超声时间对覆盆子花色苷提取效果的影响：

将经过脉冲电场处理后的样品在超声波功率为390W，温度60℃下分别以10、20、30、40、50、60、70min的超声波时间处理。处理完的样品进行后处理，用390nm、470nm和520nm下测得的吸光值除以被测样品的浓度来计算覆盆子花色苷的产量，单位是U/g。

将以上料液比、前处理温度、脉冲次数、超声波功率、超声时间单因素试验结果进行正交分析，得出覆盆子花色苷的提取最佳条件，实施例2，即在脉冲电场的电场强度为500V/cm，脉冲次数为3次，脉冲前处理温度为60℃，料液比为3:1(g/L)的条件下处理，然后在超声功率为390W，超声温度为60℃，超声处理时间为30min的条件下处理，测得花色苷的色价为239.8U/g，与传统的乙醇溶液浸提法相比，脉冲强化超声辅助提取花色苷的效果提高了50.2％。

以上已经描述了本发明的各实施例，上述说明是示例性的，并非穷尽性的，并且也不限于所披露的各实施例。在不偏离所说明的各实施例的范围和精神的情况下，对于本技术领域的普通技术人员来说许多修改和变更都是显而易见的。