阅读说明：本技术 一种包埋脱水法微藻保种技术 (Microalgae seed conservation technology by embedding dehydration method ) 是由 刘军 于 2018-06-22 设计创作，主要内容包括：本发明提供了微藻保种技术邻域内的一种包埋脱水法微藻保种技术,其先定量称取固定剂、氯化钠、藻液,然后将固定剂和氯化钠分别加入蒸馏水,配成一定浓度的凝胶溶液,将固定剂凝胶溶液煮沸消毒,再将固定剂凝胶溶液与藻液按一定比例充分混匀,注射器均匀的速率滴入CaCl<Sub>2</Sub>溶液中,边滴边摇动,一定时间后形成固化的微藻胶珠,形成的微藻酸钙胶珠用消毒蒸馏水洗涤数次,得到固定藻细胞,最后取上述胶球称鲜重后,在22℃暗室内用硅胶吸湿法按每小时含水量减少0.9％的平均脱水速率脱水至指定含水量,液氮保存；本发明的备方法简单,操作简单,不易污染,保种时间较长。(The invention provides an embedding dehydration method microalgae seed preservation technology in the neighborhood of microalgae seed preservation technology, which comprises the steps of firstly weighing a fixing agent, sodium chloride and algae liquid in a certain amount, then respectively adding the fixing agent and the sodium chloride into distilled water to prepare a gel solution with a certain concentration, boiling the fixing agent gel solution for disinfection, then fully and uniformly mixing the fixing agent gel solution and the algae liquid according to a certain proportion, and dripping CaCl into the CaCl at a uniform speed by an injector 2 Dripping while shaking in the solution, forming solidified microalgae gel beads after a certain time, washing the formed microalgae calcium gel beads with sterilized distilled water for several times to obtain fixed algae cells, weighing the gel beads, dewatering at an average dewatering rate of 0.9 percent of water content per hour in a dark room at 22 ℃ by using a silica gel wet absorption method to reach a specified water content, and storing with liquid nitrogen; the preparation method is simple, the operation is simple, the pollution is not easy to occur, and the seed preservation time is longer.)

一种包埋脱水法微藻保种技术

技术邻域

本发明涉及一种保种技术，特别涉及一种包埋脱水法微藻保种技术。

背景技术

微藻的营养丰富，在人们的生活和生产实践中具有很广援的应用，在微藻的培养和应用中，保种技术十分重要，大规模微藻产业仅仅靠培养微藻是不够的，必须将藻种保存起来备用，才能满足需要，但微藻个体小，难分离，容易在保种过程中出现藻种单细胞纯种随环境变化发生变异，丧失自身的生理活性和遗传特性，所以藻种保存就显得尤为重要困，目前藻种保种方法常采用继代保种方法，操作重复且繁琐，不断传代过程藻种易污染，保种时间较短。

发明内容

针对现有技术中的缺陷，本发明的目的在于克服上述现有技术中的不足之处，提供一种包埋脱水法微藻保种技术，制备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种包埋脱水法微藻保种技术，所述制备方法包括以下步骤：

（A1）称量配液：定量称量固定剂、氯化钠、藻液，将固定剂和氯化钠分别加入蒸馏水，配成凝胶溶液；

（A2）包埋：将固定剂凝胶溶液消毒，固定剂凝胶溶液与藻液按一定比例充分混匀，用注射器以6mL/min的速率滴入2%的CaCl₂溶液中，边滴边摇动，一定时间后形成固化的微藻胶珠，得到固定藻细胞；

（A3）脱水保存：取上述胶球称鲜重后，在22℃暗室内用硅胶吸湿法按含水量减少0.9％/h的平均脱水速率脱水至指定含水量，液氮保存。

本发明挑选出固定剂，天平定量称取固定剂、氯化钠、藻液，然后将固定剂和氯化钠分别加入蒸馏水，配成一定浓度的凝胶溶液，将固定剂凝胶溶液煮沸消毒备用，然后再固定剂凝胶溶液与藻液按一定比例充分混匀，用注射器均匀的速率滴入CaCl₂溶液中，边滴边摇动，使游离的微藻细胞包埋在多糖或多聚化合物制成的网状支持物中，一定时间后形成固化的微藻胶珠，形成的微藻酸钙胶珠用消毒蒸馏水洗涤数次，得到固定藻细胞，取上述胶球称鲜重后，在22℃暗室内用硅胶吸湿法按每小时含水量减少0.9％的平均脱水速率脱水至指定含水量，液氮保存；与现有技术相比，本发明的有益效果在于：该方法制备方法简单，操作简单，不易污染，保种时间较长。

作为本发明的进一步改进，所述固定剂包括褐藻酸盐、琼脂、琼脂糖、角叉藻聚糖、明胶、聚丙烯酰胺的一种。

作为本发明的进一步改进，所述固定剂浓度为1%～5%。

作为本发明的进一步改进，所述固定剂与藻液混合比例为1:1～4:1。

具体实施方式

实施例1

一种包埋脱水法微藻保种技术，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）称量配液：挑选出固定剂褐藻酸钠，天平定量称取固定剂褐藻酸钠2.5g、氯化钠2g、量筒量取藻液25mL，蒸馏水100mL，然后将褐藻酸钠和氯化钠分别加入到100mL蒸馏水中，玻璃棒搅拌配成浓度为2.5%（W/V）的凝胶溶液；

（A2）固定：将褐藻酸钠凝胶溶液煮沸消毒备用，然后再固定剂凝胶溶液与藻液按4:1的比例进行接种，充分混匀后制成胶-藻混悬液，用9号针头的注射器以6mL/min的速率滴入2%的CaCl2溶液中，边滴边摇动，约30min后形成固化的褐藻酸钙胶珠，从而使藻细胞得以固定，得到固定藻细胞；

（A3）脱水保存：取上述胶球30个称鲜重后，在22℃暗室内用硅胶吸湿法按每小时含水量减少0.9％的平均脱水速率脱水至指定含水量，液氮保存。

实施例2

一种包埋脱水法微藻保种技术，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）称量配液：挑选出固定剂琼脂，天平定量称取固定剂琼脂5g、氯化钠2g、量筒量取藻液100mL，蒸馏水100mL，然后将琼脂和氯化钠分别加入到100mL蒸馏水中，玻璃棒搅拌配成浓度为5%（W/V）的凝胶溶液；

（A2）固定：将琼脂凝胶溶液煮沸消毒备用，然后再固定剂凝胶溶液与藻液按4:1的比例进行接种，充分混匀后制成胶-藻混悬液，用9号针头的注射器以6mL/min的速率滴入2%的CaCl2溶液中，边滴边摇动，约30min后形成固化的琼脂胶珠，从而使藻细胞得以固定，得到固定藻细胞；

（A3）脱水保存：取上述胶球40个称鲜重后，在22℃暗室内用硅胶吸湿法按每小时含水量减少0.9％的平均脱水速率脱水至指定含水量，液氮保存。

实施例3

一种包埋脱水法微藻保种技术，为制备微藻保种，其按如下步骤进行：

（A1）称量配液：挑选出固定剂琼脂糖，天平定量称取固定剂琼脂糖1g、氯化钠2g、量筒量取藻液50mL，蒸馏水100mL，然后将琼脂糖和氯化钠分别加入到100mL蒸馏水中，玻璃棒搅拌配成浓度为5%（W/V）的凝胶溶液；

（A2）固定：将琼脂糖凝胶溶液煮沸消毒备用，然后再固定剂凝胶溶液与藻液按4:1的比例进行接种，充分混匀后制成胶-藻混悬液，用9号针头的注射器以6mL/min的速率滴入2%的CaCl2溶液中，边滴边摇动，约30min后形成固化的琼脂糖胶珠，从而使藻细胞得以固定，得到固定藻细胞；

（A3）脱水保存：取上述胶球50个称鲜重后，在22℃暗室内用硅胶吸湿法按每小时含水量减少0.9％的平均脱水速率脱水至指定含水量，液氮保存。

本发明并不局限于上述实施例，在本发明公开的技术方案的基础上，本邻域的技术人员根据所公开的技术内容，不需要创造性的劳动就可以对其中的一些技术特征作出一些替换和变形，这些替换和变形均在本发明保护范围内。