阅读说明：本技术 一种丝状真菌分离纯化专用培养皿装置 (Special culture dish device of filamentous fungi separation and purification ) 是由 陈健 周翔 于 2019-09-29 设计创作，主要内容包括：一种丝状真菌分离纯化专用培养皿装置,包括样品培养皿和分离纯化盖,样品培养皿设有底托,在底托周边设有隔离外壁,在底托的正中设有中心小环,中心小环内为样品室,在中心小环内倒入培养基,所述分离纯化盖下表面设有分离室,分离室由中间分隔环分隔而成,分离室设有分离层选择性培养基层,所述中间分隔环设置在中心小环与隔离外环之间；中间分隔环的侧部上开有分离孔。可直接将高污染本底土壤样品直接定植在样品培养环中,利用反向孢子弹射方法实现细菌和真菌的分离,通过同心环装置隔离可以实现对真菌和放线菌的分离,其中利用气生菌丝爬避性和菌丝穿透性实现真菌和放线菌在分离环中分离。可用于高污染细菌本底的真菌分离和纯化分析。(A culture dish device special for separation and purification of filamentous fungi comprises a sample culture dish and a separation and purification cover, wherein the sample culture dish is provided with a bottom support, an isolation outer wall is arranged at the periphery of the bottom support, a central small ring is arranged in the center of the bottom support, a sample chamber is arranged in the central small ring, a culture medium is poured into the central small ring, a separation chamber is arranged on the lower surface of the separation and purification cover and is formed by separating a middle separating ring, the separation chamber is provided with a separation layer selective culture medium layer, and the middle separating ring is arranged between the central small ring and the isolation outer ring; the side part of the middle separating ring is provided with a separating hole. The high-pollution background soil sample can be directly planted in the sample culture ring, bacteria and fungi are separated by using a reverse spore ejection method, the fungi and actinomycetes can be separated by using a concentric ring device, and the fungi and the actinomycetes are separated in the separation ring by using aerial hypha creeping property and hypha penetrability. Can be used for fungus separation and purification analysis of high-pollution bacterial background.)

一种丝状真菌分离纯化专用培养皿装置

技术领域

本发明涉及一种生物技术检测，特别是一种丝状真菌分离纯化专用培养皿装置。

背景技术

真菌分离和纯化研究一般多来自环境高污染本底的样本，其中对常规划线和稀释法分离土壤样本时大量的芽孢杆菌会始终伴随丝状真菌生长，导致菌种分离困难和纯化工作困难。

发明内容

本发明要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提出了一种不用多次反复划线分离或者稀释分离的丝状真菌分离纯化专用培养皿装置。

本发明要解决的技术问题是通过以下技术方案来实现的，一种丝状真菌分离纯化专用培养皿装置，其特点是：包括样品培养皿和分离纯化盖，

样品培养皿设有底托，在底托周边设有隔离外壁，在底托的正中设有中心小环，中心小环内为样品室，在中心小环内设有培养基层，其高度为中心小环高度的2/3，

所述分离纯化盖下表面设有分离室，分离室由中间分隔环分隔而成，

分离室设有分离层选择性培养基层，

所述中间分隔环设置在中心小环与隔离外环之间，中间分隔环的高度为中心小环高度的1.5~2倍，中间分隔环底沿与中心小环的上沿之间的距离为中心小环高度的1~1.5倍；

中间分隔环的侧部上开有分离孔。

本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，所述培养基为水琼脂或者半固体琼脂。待培养基凝固后，将被测泥土直接压入铺有培养基的样品室环中，防止土壤飘移可以滴加一滴无菌水或稀水琼脂即可；

本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，所述分离层培养基是指以PDA培养基为基底，添加VB1、目标测试底物、化感物质的分离选择性培养基。

本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，所述化感物质为植物提取液、3-己烯-1-醇、水芹烯、2-蒈烯、α-蒎烯或者、莰烯中的一种或多种，化感物质添加的量为培养基基底每1000ml 添加1μg。

本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，所述中间分隔环设有内环和外环，内环和外环之间间隔为10~20mm。

本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，内环上的分离孔为对角开2个，外环为上的分离孔为对角开4个。

本发明要解决的技术问题还可以通过以下技术方案来进一步实现，所述分离孔由为中间分隔环的底沿向上开至中间分隔高度的2/3处，分离孔长度为8~12mm。

本发明与现有技术相比，可直接将高污染本底土壤样品直接定植在样品培养环中，利用反向孢子弹射方法实现细菌和真菌的分离，通过同心环装置隔离可以实现对真菌和放线菌的分离，其中利用气生菌丝爬避性和菌丝穿透性实现真菌和放线菌在分离环中分离。可用于高污染细菌本底的真菌分离和纯化分析。

附图说明

图1为本发明结构示意图；

图2为分隔环结构图。

具体实施方式

以下进一步描述本发明的具体技术方案，以便于本领域的技术人员进一步地理解本发明，而不构成对其权利的限制。

一种丝状真菌分离纯化专用培养皿装置，包括样品培养皿2和分离纯化盖1，

样品培养皿设有底托，在底托周边设有隔离外壁6，在底托的正中设有中心小环5，中心小环内为样品室3，在中心小环内设有培养基层4，其高度为中心小环高度的2/3，

所述分离纯化盖下表面设有分离室，分离室由中间分隔环分隔而成，

分离室内设有分离层选择性培养基层8，

所述中间分隔环设置在中心小环与隔离外环之间，中间分隔环的高度为中心小环高度的1.5~2倍，中间分隔环底沿与中心小环的上沿之间的距离为中心小环高度的1~1.5倍；

中间分隔环的侧部上开有分离孔。

所述培养基为水琼脂或者半固体琼脂。待培养基凝固后，将被测泥土直接压入铺有培养基的样品室环中，防止土壤飘移可以滴加一滴无菌水或稀水琼脂即可。

所述分离层培养基是指以PDA培养基为基底，添加VB1、目标测试底物、化感物质的分离选择性培养基。

所述化感物质为植物提取液、3-己烯-1-醇、水芹烯、2-蒈烯、α-蒎烯或者、莰烯中的一种或多种，化感物质添加的量为培养基基底每1000ml 添加1μg。

所述中间分隔环设有内环7和外环9，内环和外环之间间隔为10~20mm。

内环上的分离孔10为对角开2个，外环为上的分离孔为对角开4个。

所述分离孔由为中间分隔环的底沿向上开至中间分隔高度的2/3处，分离孔长度为8~12mm。

以下具体介绍本发明具体实施方式，提供1个实施例，但是，本发明的实施不限于以下的实施例。

具体的：样品培养皿底托是由PE注塑形成，底面直径89mm，隔离外壁高度35mm。

中心小环直径20mm，高度为8mm。

顶部分离室，外圈直径92mm，高度为35mm。中间分隔环间隔15mm，分隔环高度11.2mm.。分隔环内外环之间有分离孔，分离孔为中间分隔高度的2/3，一般孔长度为10mm。内环为对角开2个，外环为对角开4个。

所述目分离层培养基是指以PDA培养基为基底，添加VB1、目标测试底物、化感物质的分离选择性培养基。

VB1：添加6~10mg/L，目标测试底物用纤维素：添加质量百分比4~6%。所述化感物质为植物提取液、3-己烯-1-醇、水芹烯、2-蒈烯、α-蒎烯或者、莰烯中的一种或多种，化感物质添加的量为培养基基底每1000ml 添加1μg。

(1)使用本装置制样简单，测试方便，适合高污染样本真菌分离;

(2)本装置可以分别分离真菌和放线菌及细菌，也适合对噬菌体的分离或分离未被噬菌体污染的微生物；

(3)制造成本低廉，使用分离效率高;

(4)已用于三十多例复杂样本的真菌分离纯化分析，符合率大于95%;

(5)可以通过倒置使用分离污染样本中细菌或噬菌体的纯化分离。

为了更清楚地说明本发明，列举以下实施例，但其对本发明的范围无任何限制。

实施例1，以泥土分离真菌为例：

本丝状真菌分离纯化用培养皿装置，将选择性培养基平铺在分离室中分隔环内，高度为没过分离孔即可，在样品室倒入水琼脂或者半固体琼脂，其高度为样品室环的2/3处，待培养基凝固后，将被测泥土直接压入铺有水琼脂的样品室环中，防止土壤飘移可以滴加一滴无菌水或稀水琼脂即可。将分离室部分盖在样品室皿上，注意不得倒置！

将平皿放入培养箱在22℃分离培养温度下培养，待菌体气生菌丝形成后可通过侧视来观察，当气生菌丝接触分离环内培养基立即可以将分离室取下用无菌平皿更换下样品室皿继续培养分离。或当样品室中丝状真菌产生孢子后放置到弹孢子，及时将样品室皿和样品分离环皿分离，用无菌平皿底皿取代样品室皿继续培养。

在22℃条件下有利于和细菌分开，所获得真菌的进一步分离可以通过菌丝贴壁生长的速度实现翻越分离环，或菌丝从分离孔在培养基内穿过分离环实现下级分离环穿透生长，这时及时将分离环中不同位置的单菌丝挑取做继代培养即可获得纯化真菌菌丝。

该方法相比较传统方法的优点：

所用时间更少，传统方法一般纯化分离真菌需要耗时20天以上，该方法只需要5-7天即可完成极大提高了实验效率。

本方法可以实现多菌种的分离，有利于对放线菌、细菌、噬菌体的分离。这是传统方法很难做到的。

方法不需要对泥土样品稀释，可以直接用泥土做分离，这是较传统稀释方法具有更好地检出效果，同时避免了繁琐实验过程和时间。

所用试剂不需要使用抗生素或者重金属抑制剂，有利于实验室环境控制。