阅读说明：本技术 微生物测试装置、提供这种装置的方法及其用途 (microbial testing device, method of providing such a device and use thereof ) 是由 弗洛里安·米歇尔 弗雷德里克·富科 克里斯蒂娜·罗藏 于 2018-04-10 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种微生物测试装置(10),用于测试易于含有至少一种微生物的待分析的液体,该微生物测试装置的类型包括：-封闭内部空间(12)；-微生物过滤构件(32),-入口(40),其特征在于,该装置(10)包括与过滤构件(32)接触的营养层(36),并且在用于提供该装置(10)的构造中：-入口(40)的打开/关闭构件(46)处于关闭状态；-封闭内部空间(12)内的绝对气体压力严格小于标准大气压力,使得该装置能够在打开/关闭构件(46)的第一次打开期间通过入口产生抽吸。本发明还涉及提供这种装置的方法和这种装置的用途。(the invention relates to a microbiological test device (10) for testing a liquid to be analyzed susceptible to containing at least one microorganism, of the type comprising: -an enclosed inner space (12); -a microbial filtration member (32), -an inlet (40), characterized in that the device (10) comprises a nutrition layer (36) in contact with the filtration member (32), and in a configuration for providing the device (10): -the opening/closing member (46) of the inlet (40) is in a closed condition; -the absolute gas pressure inside the closed internal space (12) is strictly less than the standard atmospheric pressure, so that the device is able to generate suction through the inlet during the first opening of the opening/closing member (46). The invention also relates to a method of providing such a device and to the use of such a device.)

微生物测试装置、提供这种装置的方法及其用途

技术领域

本发明一般涉及微生物分析领域。它更具体地涉及一种用于测试待分析的液体的微生物测试装置，该液体易于含有至少一种微生物。它还涉及一种提供这种装置的方法以及这种装置在测试待分析的液体的方法中的用途，该液体易于含有至少一种微生物。

本发明更具体地涉及食品加工、药物或化妆品工业微生物测试领域。

本发明是在受益于国家空间研究中心(CNES)[法国国家空间研究中心]参与的研究之后开发的。

背景技术

有许多情况下，试图测试液体中至少一种微生物的存在，通常是为了能够注意到不存在这种微生物。

当然，待分析的液体可以是生物液体(全血、血清、血浆、尿液、脑脊液、器官分泌物等)。尽管如此，液体也可以是工业液体，尤其是食品液体(水、一般饮料，尤其是果汁、牛奶、苏打水等)或药物或化妆品液体。

已知许多实验室技术使得可以过滤待分析的液体以收集可能含有在液体中的微生物，培养这些微生物，以便随后能够检测它们，对它们进行计数、表征和/或鉴定。这些技术需要一定数量的实验室技术人员熟知的处理操作。

在这些技术中，通常需要使用过滤装置，该过滤装置包括由腔室界定的封闭内部空间，并且构造成接收待分析的液体。这种技术特别地被称为“膜过滤”。微生物过滤构件，例如过滤膜，布置在封闭内部空间中，并且在封闭内部空间中将第一隔室与封闭内部空间的第二隔室分离。该装置包括用于待分析的液体的入口，该入口通向封闭内部空间的第一隔室。

在已知的过滤装置中，例如文献EP-1.783.494的那些过滤装置中，设置有吸气口，该吸气口被构造成连接到外部吸气源。因此，在使用这种装置时，需要将外部吸气源连接到吸气口，以便当待分析的液体经由入口引入装置时，在封闭内部空间内产生负压，这种负压促进，或者甚至是过滤所必需的。

一旦进行过滤，微生物被保留在过滤构件上，打开装置以回收过滤构件，将过滤构件转移到培养装置中以使微生物能够孵育。

这种技术易于在实验室中进行。

然而，这种技术难以在操作环境中进行，特别是在生产、包装、分配或使用液体的工业环境中。实际上，在这种情况下，能够具有用于检测不期望的微生物对液体的潜在污染的元件是有益的。然而，如上所述的通常的技术需要将待分析的液体样品运输到实验室，在实验室中可以进行通常的方法。实际上，难以设想在工业现场就地进行这些通常的操作以生产、包装、分配或使用液体。这是因为如果处理不正确，在这种环境中处理污染的液体会造成传播污染的风险。此外，培养可能存在的任何微生物的步骤需要存在营养培养基，根据定义，这种培养基促进微生物的生长。当然，在这种工业环境中引入这种营养培养基是不希望的。此外，通常的检测技术还需要保护待分析的样品免受任何外部污染，因此在尽可能无菌的环境中工作以避免误报。

发明内容

因此，本发明的目的是提出一种用于待分析的液体的微生物测试的装置和方法，其能够实现特别简化的测试操作，甚至可以设想在微生物实验室外使用或进行，包括在工业环境中使用或进行。

为此，本发明首先提出了一种微生物测试装置，用于测试待分析的液体，该液体易于含有至少一种微生物，该装置包括：

-封闭内部空间，由腔室界定并构造成接收待分析的液体；

-微生物过滤构件，布置在封闭内部空间中，并在封闭内部空间中将第一隔室与封闭内部空间的第二隔室分离；

-用于待分析的液体的入口，入口通向封闭内部空间的第一隔室。

这种装置的特征在于，在用于在使用前提供微生物测试装置的构造中，微生物测试装置在封闭内部空间内包括营养层，该营养层包括微生物培养基的成分，该营养层与过滤构件接触，并且特征在于该微生物测试装置的入口包括打开/关闭构件，并且特征在于，在用于在使用前提供微生物测试装置的构造中：

-入口的打开/关闭构件处于关闭状态，用于以气密方式关闭入口和封闭内部空间；

-封闭内部空间内的绝对气体压力，相对于25℃的温度，严格小于25℃下1巴的标准大气压力，使得该装置能够在打开/关闭构件的第一次打开期间通过入口产生抽吸。

根据本发明的装置的其他可选特征，单独或组合使用：

-在用于在使用前提供微生物测试装置的构造中，封闭内部空间与任何外部吸气源隔离。

-封闭内部空间的第二隔室没有与封闭内部空间的外部流体连通的端口。

-在用于在使用前提供装置的构造中，营养层的微生物培养基是脱水的。

-封闭内部空间的第一隔室和第二隔室之间的任何流体交换均通过过滤构件进行。

-微生物测试装置包括用于过滤构件和营养层的支撑件。

-用于过滤构件的支撑件包括例如以多孔板的形式制成的筛网，该筛网延伸穿过第一隔室和第二隔室之间的封闭内部空间。

-营养层布置在过滤构件和用于过滤构件的支撑件之间。

-营养层局部固定在过滤构件和用于过滤构件的支撑件之间。

-用于过滤构件的支撑件包括布置在第二隔室中的支撑隔板。

-支撑隔板被穿孔以使流体能够在第二隔室中的所述的隔板的任一侧上流动。

-吸水材料布置在第二隔室中。

-入口的打开/关闭构件包括阀。

-入口的打开/关闭构件包括防漏膜，并且通过使膜破裂而使入口的打开/关闭构件处于打开状态。

-微生物测试装置的腔室包括至少部分地界定第二隔室的至少一个主体，并且包括至少部分地界定第一隔室的盖，主体和盖由组装在一起的单独部件形成，以形成微生物测试装置。

-微生物测试装置的腔室包括至少一个透明部分。

-入口包括分配器，该分配器包括用于待分析的液体的若干单独的通道。

-入口包括通向封闭内部空间的第一隔室的内部部分和用于连接到待分析的液体的容器的外部部分，并且入口的打开/关闭构件***入口的内部部分和外部部分之间。

-在用于在使用前提供微生物测试装置的构造中，封闭内部空间内的绝对气体压力使得在预定体积的待分析的样品进入期间，能够使得预定体积的待分析的样品进入而不从内部空间排出流体。特别地，封闭内部空间内的绝对气体压力优选地严格小于标准大气压力乘以在预定体积的待分析的样品的进入之后内部空间中的最终自由体积除以内部空间的总体积的比。在实践中，在用于在使用前提供微生物测试装置的构造中，封闭内部空间内的绝对气体压力严格小于600毫巴绝对压力，优选地严格小于300毫巴绝对压力，更优选地严格小于200毫巴绝对压力。

本发明还涉及一种提供微生物测试装置的方法，该微生物测试装置用于测试易于含有至少一种微生物的待分析的液体，该方法包括提供微生物测试装置，该微生物测试装置包括：

-腔室，设置用于界定封闭内部空间，该封闭内部空间构造成接收待分析的液体；

-微生物过滤构件，设置成布置在封闭内部空间中并且在封闭内部空间中将第一隔室与封闭内部空间的第二隔室分离；

-用于待分析的液体的入口，入口通向封闭内部空间的第一隔室，

其特征在于，该方法包括提供营养层，该营养层设置成接收在封闭内部空间内并浸渍有微生物培养基的成分，该营养层与过滤构件接触。

并且其特征在于，在将微生物测试装置连接到待分析的液体的容器之前，该方法包括按此顺序依次包括：

-减压步骤，以降低封闭内部空间内的绝对气体压力；

-关闭步骤，以气密方式关闭封闭内部空间。

本发明还涉及具有上述特征之一的微生物测试装置在测试待分析的液体的方法中的用途，该液体易于含有至少一种微生物。

该用途还可以包括以下步骤：

-将待分析的液体的容器连接到入口；

-打开入口的打开/关闭构件，以使待分析的液体能够从贮器朝向封闭内部空间通过。

它还可以包括后续步骤，包括：

-关闭入口的打开/关闭构件；

-断开待分析的液体的容器；

-在微生物测试装置中孵育可能最初包含在待分析的液体中的微生物。

它可以包括另外的后续步骤，其包括通过观察微生物测试装置的腔室的透明部分，目视检测、计数、鉴定和/或表征可能最初包含在待分析的液体中的微生物。

附图说明

从以下参考附图的描述中显现出各种其他特征，附图通过非限制性示例的方式示出了本发明主题的实施例。

图1是根据本发明的装置的第一示例性实施例的分解立体图。

图2是组装的图1的装置的立体图。

图3是图2的装置的剖视图，剖面示于图1中。

图4是从图1的装置的盖的下方看的立体图。

图1至图4描绘了用于测试待分析的液体的微生物测试装置10的示例性实施例，所述的液体易于含有至少一种微生物。

图5是根据本发明的装置的第二示例性实施例的分解立体图。

图6是从根据本发明的装置的第二示例性实施例的主体和附加底部的下方的立体图。

图7是图5的装置的剖视图，剖面示于图5中。

具体实施方式

出于本发明的目的，术语微生物特别涵盖革兰氏阳性或革兰氏阴性细菌、酵母、阿米巴、病毒以及更通常地肉眼不可见且可在实验室中处理和繁殖的单细胞生物。

根据本发明的优选实施例，微生物是革兰氏阴性或***或酵母。

该微生物测试装置，其第一示例性实施例在图1至4中描绘并且其第二示例性实施例在图5至7中描绘，在其第一示例性实施例的图2和3和第二示例性实施例的图7中描绘的其操作状态下，具有封闭内部空间12，该封闭内部空间12由腔室界定并构造成接收待分析的液体。所描绘的两个示例性实施例将基本上同时描述。当它们出现时，将提到将它们彼此区别的特征。

在所描绘的示例中，微生物测试装置的腔室包括至少一个主体14和盖16。主体14和盖16由组装在一起的单独部件形成，以形成微生物测试装置的腔室。盖16封闭主体14以界定微生物测试装置10的封闭内部空间12。因此，盖16具有与主体14的形状互补的形状，以便提供其封闭。

在所描绘的示例中，主体14具有底壁18和周边侧壁20，使得主体14通过与其底壁18相对的端部开口。在所描绘的示例中，周边侧壁20具有中心轴线A1。在所描绘的情况中，底壁18是垂直于主体14的中心轴线A1的横向壁。在第一示例性实施例中，底壁18与周边侧壁20一起生产为单个部件，而在第二示例性实施例中，底壁18以单独部件的形式生产，其将封闭内部空间12从底部封闭。在底壁18以单独部件的形式生产的情况下，它可以通过任何已知的方式组装到周边侧壁20上，例如通过简单的紧密配合、通过粘接、通过焊接、通过用于机械连接的夹子拧紧等，然后可以提供密封，以确保当底壁18组装到周边侧壁20时，它以防漏方式将封闭内部空间12封闭。

为了描述的清楚，在说明书的其余部分中，考虑中心轴线A1垂直取向并且底壁18布置在微生物测试装置的下端，周边侧壁20沿着轴线A1的方向从底壁18向上延伸。然而，垂直度、水平度以及“顶部”、“底部”、“上部”和“下部”的概念仅用于参考图中所示的微生物测试装置相对于彼此的取向，而不对本发明的范围或使用中的微生物测试装置的取向具有限制作用。

周边侧壁20例如是围绕中心轴线A1旋转的表面。在所描绘的示例中，侧壁20基本上是圆柱形的。然而，可以提出其他形式。

因此，盖16具有垂直于中心轴线A1的横向壁22，在这种情况下，横向壁22具有与主体14的周边侧壁20的上边缘24的几何形状相对应的基本上圆形形状。在所描绘的示例中，盖16具有圆柱形裙部26，在这种情况下围绕中心轴线A1旋转的圆柱形，其从盖的横向壁22的下表面向下延伸。圆柱形裙部26构造成沿着中心轴线A1的竖直方向接合在主体14的周边侧壁20的上端内。

应注意的是，在第一示例性实施例中，主体的周边侧壁20的上端在内表面上具有横向凹部，该横向凹部界定了向上翻转的中心轴线A1的环形轴承表面28。圆柱形裙部26具有下边缘30，当盖16组装在主体14上时，该下边缘30面向环形轴承表面28。

根据本发明的微生物测试装置10包括微生物过滤构件32，该微生物过滤构件32布置在封闭内部空间12中并且在封闭内部空间中将第一隔室12a与封闭内部空间12的第二隔室12b分离。

在所描绘的示例中，第一隔室12a至少部分地由盖16界定，而第二隔室12b至少部分地由主体14界定。

实际上，微生物过滤构件32在封闭内部空间12中沿封闭内部空间的任何截面基本上横向地延伸。在该示例中，微生物过滤构件32具有基本上平面的形状，在这种情况下为盘形。它优选地垂直于中心轴线A1布置。

在第一个描绘的示例中，微生物过滤构件32具有周边边缘34，其具有与主体14的周边侧壁20的内表面的截面相同的形状和相同的尺寸。在第一个描绘的示例中，周边边缘34构造成直接或间接地轴向向下抵靠主体14的环形轴承表面28。如下所示，在第一个描绘的示例中，微生物过滤构件32的周边边缘34优选地设置成轴向固定在盖16的圆柱形裙部26的下边缘30和主体14的环形轴承表面28之间。

微生物测试装置在封闭内部空间12内包括浸渍有微生物培养基的成分的营养层36，该营养层36与微生物过滤构件32接触。

在所描绘的实施例中，营养层36是与微生物过滤构件32分离的元件，同时营养层36与微生物过滤构件32接触。一旦所述装置组装好，营养层36和微生物过滤构件32在微生物测试装置内彼此接触。

在这种情况下，营养层36优选地以如上面列出的条件位于微生物过滤构件32下方。在这种情况下，营养层36位于封闭内部空间12的第二隔室12b中。然而，在如上面列出的条件下，没有什么阻止营养层位于微生物过滤构件32上方。在这种特定情况下，营养层有利地包括至少一种显色和/或荧光底物，其使得能够直接或间接检测目标微生物的酶活性或代谢活性。然后，由所述至少一个底物产生的视觉信号通过营养层的至少一部分厚度可见。

在所描绘的示例中，营养层36具有基本上平面的形状，在这种情况下为盘形。营养层36具有周边边缘38，其优选地与微生物过滤构件32的周边侧壁34相匹配。因此，营养层36和过滤构件32具有相同的形状。这意味着，在第一个描绘的示例中，周边边缘38可以轴向向下抵靠环形轴承表面28，被***主体14的环形轴承表面28和微生物过滤构件32的周边边缘34之间。在第一个描绘的示例中，营养层36的周边边缘38优选地设置成与微生物过滤构件32的周边边缘34一起轴向固定在盖16的圆柱形裙部26的下边缘30和主体14的环形轴承表面28之间。

出于本发明的目的，营养层36包括含有微生物培养基的支撑件。

该支撑件可以基于各种吸收性化合物，优选地具有非常高的保水能力，例如人造丝、棉、天然或化学改性的纤维素纤维，如羧甲基纤维素、吸收性或超吸收性化学聚合物，如聚丙烯酸酯盐、丙烯酸酯/丙烯酰胺共聚物。这种支持件可以用液体形式的微生物培养基浸渍。这种微生物培养基可以有利地脱水，即具有与微生物生长不相容的“AW”(水活性)。或者，支撑件可以在干燥条件下用微生物培养基或其粉末形式的组分覆盖或浸渍。或者，可以在脱水之后通过加入粉末来补充液体浸渍。

“微生物培养基”构造成表示包括微生物存活和/或生长所必需的营养元素的培养基，特别是来自碳水化合物的一种或多种，包括糖、蛋白胨、生长因子、矿物盐和/或维生素等。在实践中，本领域技术人员将根据完全众所周知并且在本领域技术人员的掌握之内的标准选择微生物培养基作为目标微生物的功能。

营养层36可以含有可选的添加元素，例如：

-一种或多种选择性试剂，例如抑制剂或抗生素，以促进一种特定微生物物种/菌株相对于另一种的生长和发育；

-缓冲液，染色剂。

一般而言，营养层36还可以含有底物，该底物能够通过直接或间接可检测的信号来检测目标微生物的酶活性或代谢活性。对于直接检测，该底物可以连接到用作荧光或显色标记的部分。对于间接检测，根据本发明的营养层还可以包括pH指示剂，该pH指示剂对由底物消耗引起的pH变化敏感并且显示目标微生物的生长。所述pH指示剂可以是发色团或荧光团。作为发色团的示例，将提及中性红、苯胺蓝、溴甲酚蓝。荧光团包括，例如，4-甲基伞形酮、羟基香豆素衍生物或试卤灵衍生物。因此，优先用于实施本发明方法的荧光PC-PLC底物对应于4-甲基伞形基胆碱磷酸酯(4MU-CP)。

根据本发明的优选实施例，营养层36的微生物培养基在用于在使用前提供微生物测试装置的构造中脱水。在这种情况下，在用脱水的微生物培养基干燥浸渍营养层的支撑件后，可以对营养层36进行压延操作。通过产生的压力和加热温度进行压延，使得脱水的微生物培养基能够在营养层的支持件中随时间稳定地保留和维持，确保营养元素和可选的添加元素保留在营养层中。

营养层36的压延还使得能够获得营养层的光滑且平坦的表面。由于由此诱导的营养层的压缩，与非压延的营养层相比，压延还能够加速营养层的再水化。在支撑件由纤维形成的情况下，这种压缩与营养层36内的脱水介质的存在相结合，使所述营养层的毛细能力大大增加，导致其几乎瞬间的再水化。这也可能有助于抵靠其表面布置的单独的微生物过滤构件32的抽吸现象。因此，微生物过滤构件32可以压靠营养层36，从而确保这两者之间不存在空间或空间减少，这有利于微生物过滤构件32的整个表面上的最佳微生物生长和/或存活。由此，当微生物过滤构件32与营养层36分离时，可以避免它们之间粘接构件的存在(例如，避免粘接层的存在)。这代表了显著的优点，因为这种结合构件将减缓营养元素和可选的添加元素从再水化的营养层36到存在于微生物过滤构件32上的微生物的通过，从而减少这些微生物的生长和/或存活机会。

微生物过滤构件32包括透水过滤器，其保留微生物，特别是在其表面处。在微生物过滤构件32与营养层36分离的情况下，微生物过滤构件32对包含在位于微生物过滤构件32下方的营养层36中的营养元素和可选的添加元素是可渗透的。这种过滤器可以包括多孔体，该多孔体可以由一种材料形成，该材料通过其性质、其大小、其立体排列具有这些性质。这种多孔体可以通过孔的排列而具有这些性质。

微生物过滤构件32可以例如基于一种或多种材料或这些材料的衍生物，该材料来自胶乳、聚四氟乙烯、聚(偏二氟乙烯)、聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚酰胺、聚砜、聚醚砜、纤维素、纤维素和硝基纤维素的混合物。优选地，微生物过滤构件32以多孔膜的形式生产，该多孔膜对包含在营养层36中的营养元素和可选的添加元素是可渗透的并且能够将微生物保留在其表面。优选地，微生物过滤构件32覆盖整个营养层36。申请人已经发现，目前出售的用于水(通常称为液体)的微滤膜通常具有用作微生物过滤构件32所需的性质。它们使得可以在处理过程中获得良好的抗撕裂性、可控的孔隙率、光滑的表面、薄度以及大部分时间的高水平的亲水性。它们的颜色通常是白色，这使得可以优化其表面上有色菌落的分化。利用这种过滤膜的过滤能力和亲水性使得能够并优化存在于营养层中(可选地在其再水化之后)的营养元素和可选的添加元素朝向微生物过滤构件32的上表面的通过，同时防止或限制在微生物过滤构件32的上表面处过滤的细菌、酵母等的相反方向上的迁移。出于本申请的目的，上述过滤膜无区别地被称为“过滤膜”、“微滤膜”或“滤膜”，这些表述彼此同义。这些过滤膜包括在由多孔膜形成的组中。

微生物过滤构件32使得营养培养基的元素和选择性试剂或试剂能够通过。有利地，过滤构件包括孔，该孔的直径在0.01微米至0.8微米之间，优选地在0.2微米至0.6微米之间，以便在其表面上保留细菌、酵母和霉菌。根据特定实施例，过滤构件包括孔，该孔的直径在0.25微米至0.6微米之间，例如在0.3微米至0.6微米之间，或者在0.4微米至0.6微米之间。或者，这可以是不具有可测量的孔的层，例如透析膜。

例如，微生物过滤构件可以是由Fisher Scientific Company L.L.C,300IndustrialDrive，匹兹堡，PA 15275,USA销售的“Fisherbrand^TM General FiltrationMembrane Filters”过滤膜，或者由Zefon International,Inc.,5350SW 1st Lane,Ocala,FL 34474,USA制造的“硝化纤维素膜过滤器”过滤膜，或类似的膜。

在一些变型中，营养层可以与微生物过滤构件32彼此成一体，后者用作微生物培养基的支撑件。在这种情况下，应理解的是营养层与微生物过滤构件32接触。

根据本发明的微生物测试装置10包括用于待分析的液体的入口40。入口40使得当微生物测试装置10组装成使得腔室界定封闭内部空间时，例如当盖16与主体14组装在一起时，能够将待分析的液体引入到由腔室界定的封闭内部空间内，该液体源自封闭内部空间12的外部。

在所描绘的示例性实施例中，入口40包括内部部分42，该内部部分42通向封闭内部空间12的第一隔室12a，并且包括外部部分44，该外部部分44用于连接到待分析的液体的容器，该容器可能是例如注射器、管、袋、漏斗等。

在所描绘的示例中，入口40沿中心轴线A1竖直布置。入口有利地布置在盖16上，在这种情况下例如布置在其横向壁22的中心。

入口40的内部部分42可以包括分配器56，分配器56包括用于待分析的液体的若干单独的通道。这种分配器56促进待分析的液体在微生物过滤构件32的较大部分的表面区域上分配，该待分析的液体经由入口40引入。特别是在示例性实施例的构造的情况下，入口40的内部部分42可以包括具有孔口的分配器56，每个孔口至少部分地沿着相对于中心轴线A1的径向方向打开，孔口优选地围绕入口40的中心轴线A1成角度地向右分布。

入口40的外部连接部分44可以包括用于联接到容器上的元件。外部连接部分44本身可以具有漏斗形状。外部连接部分44还可以包括用于将容器对接在入口40处的机械对接构件。

微生物测试装置10包括打开/关闭构件46，在示例性实施例中，该打开/关闭构件46***在入口的内部部分42和外部部分44之间，以便阻挡入口40，从而在打开/关闭构件的关闭状态下防止气体通过入口40在微生物测试装置10的封闭内部空间12和外部之间的任何循环。

优选地，入口40是可重新关闭的端口。在这种情况下，如所描绘的情况，打开/关闭构件46可以包括阀。这种阀优选地可以从打开状态到关闭状态连续多次，并且再次返回。

在某些情况下，打开/关闭构件可以包括防漏膜，并且可以通过使膜破裂而使打开/关闭构件处于打开状态。在这种情况下，膜不能重新关闭。在这种情况下，可以通过添加到外部连接部分44的第二打开/关闭构件来重新关闭入口40。这种第二打开/关闭构件(未示出)可以例如由帽、防漏膜或塞形成。

应当注意，在存在如上所述的阀类型的打开/关闭构件的情况下，也可以设置这种第二打开/关闭构件。这种第二打开/关闭构件例如使得可以加强阀的气密性，尤其是气密性，并且尤其是在使用之前在装置10的存储期间的长期气密性。

在这两种情况下，这种第二打开/关闭构件使得可以在使用之前在装置10的储存期间保护入口免受任何污染。

在所描绘的示例中，一旦组装，微生物测试装置10仅包括用于在封闭内部空间12和外部之间流体连通的单个端口，在这种情况下为入口40。在所描绘的示例中，将注意到，封闭内部空间12的第二隔室12b没有与封闭内部空间的外部流体连通的端口。然而，这并不妨碍微生物测试装置10能够包括用于流体连通的若干端口，包括入口40，所有端口都通向封闭内部空间的第一隔室12a。。

在示例性实施例中，微生物过滤构件32相对于其长度具有较小的厚度。例如，过滤构件的直径大于50毫米，例如在80毫米至100毫米之间。其厚度约为几毫米，通常小于5毫米。

还有利的是，为微生物测试装置10提供包括用于微生物过滤构件32和用于营养层36的支撑件48。

支撑件48使得可以将微生物过滤构件32和营养层36保持在第一隔室12a和第二隔室12b之间的位置。

在所描绘的第一示例性实施例中，用于微生物过滤构件32和用于营养层36的支撑件48包括布置在第二隔室12b中的支撑隔板50。

例如，支撑隔板50可以是平面形状，每一个都布置在含有中心轴线A1的径向平面中。它们可以例如从主体14的底壁18延伸并且具有上边缘52，微生物过滤构件32和营养层36可以直接或间接地竖直向下抵靠该上边缘52。在所描绘的第一示例中，每个支撑隔板50径向延伸穿过整个第二隔室12b，因此被主体14的周边侧壁20的两个径向相对的部分横向限制。在该特定实施例中，应该理解的是，支撑隔板50通过其上边缘52来实现其支撑功能。在所描绘的示例中，支撑隔板50的上边缘52都在垂直于中心轴线A1的相同横向平面中延伸。

尽管如此，在它们之间，支撑隔板在它们之间，在第二隔室12b中，界定该第二隔室12b的分部。这种支撑隔板50可以被穿孔以使流体能够在第二隔室12b中的所述的隔板的任一侧上流动。在所描绘的示例中，选择为支撑隔板50提供通孔54，通孔54使得第二隔室12b的两个相邻分部之间能够流体连通，该分部由这些支撑隔板50中的一个隔开。这些通孔54是可选的。在所描绘的示例中，它们以狭缝的形式生产，这些狭缝从基本上位于第二隔室12b的一半的低点沿着中心轴线A1的方向延伸，并且它们在上边缘52中以敞开的方式打开。这些通孔可以具有完全不同的几何形状，并且例如以孔的形式，尤其是圆形孔的形式生产。它们不一定通向上边缘52。

在所描绘的示例中，支撑隔板50还使得可以机械地加强装置的腔室，尤其是使其更能抵抗腔室内部和外部之间的压力差。

用于微生物过滤构件32的支撑件48可以不同方式生产。产生不同的效果。它可以例如以在垂直于中心轴线A1的横向平面上延伸的筛网的形式生产。这种筛网例如可以通过支承在主体14的轴承表面28上而被支撑。用于微生物过滤构件32的支撑件可以以一个或多个柱的形式产生，该柱从主体14的横向底壁18沿着轴线A1的方向竖直地延伸。用于微生物过滤构件32的支撑件也可以以从周边侧壁20的内表面横向延伸的一个或多个支架的形式产生。

在图5至7中描绘的第二示例中，用于过滤构件的支撑件48包括筛网49。这种筛网可以由交叉的金属丝网或交叉的条网形成。在图5至7中描绘的示例中，筛网由多孔板形成，该多孔板在垂直于第一隔室和第二隔室之间的中心轴线A1延伸。在所描绘的情况下，该筛网49与主体14的周边侧壁20一起生产为单个部件。可以理解的是，这种多孔板形式的筛网49为微生物过滤构件32提供了更好的支撑，尤其是如果后者不是非常刚硬的话。这导致微生物过滤构件32和营养层36的更好的平坦性，尤其是在进行过滤过程时。

在所描绘的示例中，板在其整个内径上延伸穿过主体14。该板具有环形外周部分51，该环形外周部分51从周边侧壁20的内圆柱表面朝向中心轴线A1径向延伸。板的外周部分51是实心的，即没有穿孔。该板具有穿孔的中心部分，在该外周部分的中心，其形成筛网49。穿孔的中心部分49的上表面相对于外周部分的上表面向下偏移。这样，外周部分51在板的上表面中界定了凹部，该凹部的直径对应于穿孔的中心部分49的直径。在所描绘的示例中，过滤构件32和营养层36具有外径，其等于或小于凹部的直径。因此，过滤构件32和营养层36可以容纳在凹部中，径向楔入凹部中。应注意，在该第二示例性实施例中，与第一示例性实施例不同，过滤构件32和营养层36未被夹在盖16和主体14之间。

值得注意的是，在图6中，在从下方的视图中，第二示例性实施例在第二隔室12b中包括隔板53，除了过滤构件的直接支撑的功能之外，该隔板53具有与第一示例性实施例的支撑隔板相同的功能和基本相同的几何形状。

支撑件48的尺寸被设计成形成对封闭内部空间的第一隔室和第二隔室之间的流体流动的有限阻力，或者甚至可忽略的阻力。在多孔板的情况下，例如将确保沿穿孔55的中心轴线A1投影的累积总表面积占过滤构件32的表面积的至少30％，优选地占过滤构件的表面积的至少50％。多孔板具有多个穿孔55，其分布在限定的圆(含有所有穿孔的较小圆)内，其对应于过滤构件32的表面积的至少50％，优选至少70％。在设想的示例中，穿孔55的数量大于20，优选大于50。然而，对于较大的穿孔，并且可选地具有不同的几何形状，例如星形，扇形等，可以使用较少数量的穿孔。

在所描绘的示例中，用于微生物过滤构件32的支撑件48与主体14一起生产为单个部件。然而，这种支撑件可以以一个或多个独立部件的形式生产。这些部件可以简单地放置在第二隔室12b内，或者可以例如通过粘接、焊接、卡扣或互锁而组装到主体14。

在所描绘的示例中，应注意到营养层36布置在微生物过滤构件32和用于过滤构件的支撑件48之间。

有利地，可以提供营养层36，以局部地固定在微生物过滤构件32及其支撑件48之间。例如，盖16可以包括轴承元件，例如对应于一个或多个支撑隔板50的上边缘，使得当组装微生物测试装置时，微生物过滤构件32和营养层36固定在盖16的这些轴承元件和支撑件48之间。在所描绘的示例中，分配器56在下表面上具有这种轴承元件，用于将微生物过滤构件32和营养层36夹紧在微生物测试装置的中心的支撑件48上。

在所描绘的示例中，封闭内部空间12的第二隔室12b的体积大于封闭内部空间的第一隔室12a的体积。优选地，封闭内部空间12的第二隔室12b的体积至少为封闭内部空间12的第一隔室12a的体积的两倍，优选地，至少为封闭内部空间12a的体积的三倍。在一个实施例中，对于构造用于分析100毫升样品的装置，封闭内部空间12的第二隔室12b的体积例如为至少100毫升，优选地大于100毫升且小于150毫升，以便能够容纳所有待分析的液体的体积。由腔室界定的封闭内部空间的总体积为例如120毫升至300毫升，该总体积为例如150毫升。

在用于在使用前提供微生物测试装置10的构造中，打开/关闭构件46处于关闭状态，以以气密方式关闭入口40和封闭内部空间12。

在这种提供的构造中，微生物测试装置10因此以防漏方式被封闭，而在由腔室界定的封闭内部空间12与外部之间没有可能的气体连通。在这种提供的构造中，微生物过滤构件32和营养层36包含在由腔室界定的封闭内部空间12内，从而形成用于过滤待分析的液体的即用型微生物测试装置，以便从其收集微生物过滤构件32上的潜在微生物，并使得这些微生物能够生长，以进行检测、计数、表征和/或鉴定。

此外，在用于在使用前提供微生物测试装置10的这种构造中，封闭内部空间内的绝对气体压力处于降低的初始压力值，使得该装置能够在打开/关闭构件46的第一次打开期间通过入口产生抽吸。

前两段的结果是，在用于在使用前提供微生物测试装置10的这种构造中，因此在将样品引入到由腔室界定的封闭内部空间12中之前，微生物过滤构件32和包括微生物培养基的成分的营养层36包含在由腔室界定的封闭内部空间12内，并且封闭内部空间内的绝对气体压力处于降低的初始压力值，使得装置能够在打开/关闭构件46的第一次打开期间通过入口产生抽吸。

为此目的，封闭内部空间(12)内的绝对气体压力的降低的初始压力值，相对于25℃的温度，严格地小于在25℃下1巴的标准大气压力。

在实践中，与内部空间中的初始压力等于大气压的情况相比，这种抽吸现象将通过在打开/关闭构件的第一次打开期间预定量的液体更快地进入装置的内部空间而得到反映。

应当注意，不必精确地知道降低的初始压力的精确值。实际上，首先确定该值，以便足以将至少一部分或甚至全部预定体积的待分析的样品吸入装置内。

优选地，该值被确定为足以使该装置能够在该装置内抽吸全部预定体积的待分析的样品，而不必使待分析的样品经受大于标准大气压的压力以使其进入该装置内。

优选地，这种降低的初始压力值足够低，以使得待分析的样品的预定体积的全部能够进入内部空间内，而在待分析的样品的预定体积的进入期间不从内部空间排放流体。这使得可以确保整个样品容易进入装置中。这也使得可以避免在样品进入装置期间，最初包含在装置中的元素，特别是培养基的元素向外部的任何传播。

本领域技术人员通过可选地补充一些测试的初始评估，将能够确定作为使用该装置的所设想的条件(由该装置的腔室界定的封闭内部空间12的总体积、样品的体积、使用该装置时的温度和压力条件等)的函数的该装置的期望的降低的初始压力。

期望的降低的初始压力可以通过以下方式进行实际评估。考虑了由腔室界定的封闭内部空间12的总体积VT。随后确定待分析的样品的预定体积VE，期望能够将其引入装置10中以进行分析。随后从中推断出预定体积的待分析的样品进入内部空间之后内部空间中的最终自由体积VL。因此，该最终自由体积VL等于由腔室界定的封闭内部空间12的总体积VT，从该总体积减去期望能够引入到装置10以进行分析的待分析的样品的预定体积VE：

VL＝VT–VE

然后，理想气体定律作为近似应用于在样品刚进入之前的时刻和该样品刚进入之后的时刻之间由腔室界定的封闭内部空间12中的条件变化，假设仅引入含有样品的液体而没有显著的温度变化。样品的这种进入由压力变化反映，该压力从降低的初始压力值Pi到最终值Pf，降低的初始压力值Pi是在提供的构造中的封闭内部空间内的绝对气体压力值，最终值Pf是在待分析的样品的预定体积进入之后的内部空间内的绝对气体压力值。

因此，得到以下方程式：

Pf×VL＝Pf×(VT–VE)＝Pi×VT

这使

Pi＝Pf×(VT–VE)/VT＝Pf×VL/VT

由此推断，在用于在使用前提供微生物测试装置10的构造中，封闭内部空间12内的绝对气体压力(称为降低的初始压力)优选严格小于大气压力乘以，在预定体积的待分析的样品的进入之后内部空间中的最终自由体积除以内部空间的总体积的比。

标准大气压力的值实际上可以在25℃下任意地固定在1巴。

在实践中，通常认为样品的体积VE必须至少为20毫升，优选至少为50毫升，更优选至少为100毫升。另一方面，通常认为样品的体积VE必须为300毫升或更小，优选为200毫升或更小，更优选为150毫升或更小。

在装置的内部空间的总体积VT为150毫升的情况下，并且对于体积VE为100毫升的样品，上述快速计算给出了期望的降低的初始压力，对于用于在使用前提供装置的构造中的封闭内部空间12内的绝对气体压力，该初始压力严格小于333毫巴绝对压力。然而，在实践中，考虑到与所提出的假设和实验现实之间的差异有关的近似，最好提供一个严格小于300毫巴绝对压力的降低的初始压力。更优选地，将优选提供严格小于200毫巴绝对压力的初始压力，尤其是为了促进样品快速进入该装置。

应当注意的是，对于装置的内部空间为300毫升的总体积VT，因此确定了严格小于666毫巴绝对压力的期望的降低的初始压力，优选严格小于600毫巴绝对压力，更优选严格小于400毫巴绝对压力。

应当注意的是，上述值是指示性值，包括用于给定和给定使用条件的指示性值。实际上，装置中降低的初始压力实际上小于上述值会更好。

在实践中，这些值将能够用作开发根据本发明的装置的基础，并且能够利用一些例行测试容易地确定使得装置正确操作的制造条件。

因此，上述值可以通过将压力计连接到入口的进口，并尽可能靠近打开/关闭构件46来测量，即使这导致关于降低的初始压力的实际值的不确定性，包括如果该不确定性高达50毫巴。

这意味着，当准备微生物测试装置时，在封闭内部空间中产生至少部分真空。该至少部分真空可以例如通过在真空下组装，或至少在小于或等于期望的降低的初始压力的压力下组装，在任何情况下在25℃下严格小于1巴，或者通过在组装微生物测试装置之后对封闭内部空间减压而产生。

可以理解的是，在用于在使用前提供微生物测试装置10的这种构造中，封闭内部空间与任何外部吸气源隔离。因此，这解释了需要提供在其关闭状态下的腔室和入口40是气密的、尤其是气密的。这通过本领域技术人员已知的任何方式获得。

在所描绘的示例中，盖16和主体14因此以气密方式组装。

该组件可以是可拆卸的组件，使得能够在其使用后打开微生物测试装置而不损坏，例如以便移除微生物过滤构件32。例如，可以使用分别布置在盖16和主体16上的互补螺纹来生产可拆卸的组件。在所描绘的构造中，这种互补螺纹(未示出)可以分别装配在盖16的圆柱形裙部26的外表面上和主体14的周边侧壁20的上端的内表面上。可拆卸的组件的另一个可能的示例可以通过卡口组件的系统获得。可拆卸的组件的又一示例可以通过提供外部组件凸缘或通过提供用于将盖16组装在主体14上的螺钉来获得。

该组件可以是不能拆卸的组件，其不能在其使用后打开微生物测试装置10而不损坏，例如通过粘接、通过焊接或通过铆接。

为了提供所需的气密性，特别是气密性，尤其是在可拆卸组件的情况下，可以在主体14和盖16之间提供一个或多个密封件(未示出)。

在用于在使用前提供微生物测试装置的构造中，筛网层36的微生物培养基有利地脱水。然后提供了在使用时将该微生物培养基再水化。这种再水化可由待分析的液体本身进行。

实际上，微生物过滤构件32和营养层36布置成使得封闭内部空间的第一隔室12a和第二隔室12b之间的任何流体交换通过微生物过滤构件32和营养层36发生。因此，可以使流体不可能绕过微生物过滤构件32或营养层36而从第一隔室12a流向第二隔室12b。在所描绘的实施例中，这是由于微生物过滤构件32和营养层36延伸穿过微生物测试装置的封闭内部空间12的在封闭内部空间的第一隔室12a和第二隔室12b之间的整个部分。

有利地，可以提供在第二隔室中布置吸水材料。在所描绘的示例中，这种材料可以布置在支撑隔板50之间的第二隔室12b的一个、几个或所有分部内。吸水材料可以基于各种吸收性化合物，优选地具有非常高的保水能力，例如人造丝、棉、天然或化学改性的纤维素纤维，如羧甲基纤维素、吸收性或超吸收性化学聚合物，如聚丙烯酸酯盐、丙烯酸酯/丙烯酰胺共聚物。因此，这种材料可以从英国DN31 2SS的Grimsby的1Moody Lane工业吸收剂有限公司获得，商品名为“Super Absorbent Fiber”。

微生物测试装置的腔室可以有利地由聚合物材料制成。然而，也可以由其他材料制成，包括至少部分由玻璃制成。在所描绘的示例中，主体14、盖16和支撑件48可以由相同的材料或不同的材料制成。

优选地，微生物测试装置的腔室包括至少一个透明部分。特别地，该透明部分可以布置成使得观察者可以看到朝向第一隔室12a的微生物过滤构件32的上表面的至少一部分。优选地，该透明部分布置成使得观察者可以看到朝向第一隔室12a的微生物过滤构件32的所有上表面。这是因为在这个表面上，孵育后任何潜在的微生物都是可见的。在所描绘的示例中，腔室的透明部分因此优选地至少布置在盖16的横向壁22中。盖16的整体可以是透明的。在一些实施例中，将提供整个腔室由透明材料制成。腔室的透明部分例如由聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)或玻璃制成。

因此，如上所述的微生物测试装置构造成用于测试易于含有至少一种微生物的待分析的液体的方法中。

在这种用途中，预先以在使用前提供的构造来提供微生物测试装置。如上所述，在该构造中，微生物测试装置具有以防漏方式容纳在封闭内部空间12中的微生物过滤构件32和营养层36，并且在该封闭内部空间中，负压水平占主导，该负压水平对应于降低的初始压力，在任何情况下对应于封闭内部空间内的绝对气体压力，相对于25℃的温度，严格小于1巴。

为了提供一种用于测试易于含有至少一种微生物的待分析的液体的微生物测试装置，首先需要提供一种微生物测试装置，如上所述，该微生物测试装置包括：

-腔室，设置以界定封闭内部空间12，该封闭内部空间构造成例如以主体14和盖16的形式接收待分析的液体；

-微生物过滤构件32，设置成布置在封闭内部空间12中并且在封闭内部空间中将第一隔室12a与封闭内部空间的第二隔室12b分离；

-用于待分析的液体的入口40，设置以通向封闭内部空间的第一隔室12a，入口能够例如包括内部部分42和外部连接部分44，内部部分42设置成通向封闭内部空间的第一隔室12a。

此外，在使用前提供的方法包括提供营养层36，该营养层36设置成接收在封闭内部空间内并且包括微生物培养基的成分，该营养层36被构造成与过滤构件接触。如上所述，该营养层36可以与微生物过滤构件32分离，或者作为变型，可以提供彼此成一体的营养层和微生物过滤构件。

根据本发明，用于以用于提供的构造提供微生物测试装置的方法，在任何使用之前，因此在与待分析的液体的容器的任何连接之前，按此顺序依次包括：

-减压步骤，以降低封闭内部空间12内的绝对气体压力；

-关闭步骤，以气密方式关闭封闭内部空间12。

应当注意的是，在减压步骤时，包括上述元件的微生物测试装置10可以已经组装，使得腔室关闭并且包含上述元件。在这种情况下，减压步骤可以通过将微生物测试装置的封闭内部空间12例如通过入口40连接到吸气源例如真空泵来进行，入口40因此处于打开状态。由此，将压力降低到期望的降低的初始压力，该降低的初始压力在任何情况下相对于25℃的温度严格小于1巴。

在另一个变型中，减压步骤可以伴随组装步骤。实际上，在所描绘的示例中，可以提供的是例如盖16在主体14上的组装，其使得可以关闭腔室并因此界定封闭内部空间12，该组装可以在绝对气体压力下进行，该绝对气体压力等于或小于期望的降低的初始压力，即，尤其是相对于25℃的温度严格小于1巴的压力。

在第一种情况下，关闭步骤可以包括关闭入口40的阀或放置密封膜，只要仍然存在等于或小于期望的降低的初始压力的绝对气体压力。在第二种情况下，关闭步骤可以包括以防漏方式将盖16组装在主体14上，这使得可以关闭腔室。在这种情况下，入口40的打开/关闭构件优选地预先处于关闭状态。

因此，获得一种微生物测试装置10，其构造为在由腔室界定的封闭内部空间12内定位微生物过滤构件32和营养层36，封闭内部空间12处于预定的初始水平的负压，称为降低的初始压力，并且其对应于封闭内部空间中的小于预定阈值的气体压力，该预定阈值本身严格地小于标准大气压力，预定阈值例如为相对于25℃的200毫巴的绝对压力。

应当注意的是，在这种提供的构造中，微生物测试装置可以被存储、运输等，并且在这种提供的构造中，没有将待分析的液体引入到微生物测试装置的封闭内部空间12中。

根据本发明的微生物测试装置的使用对应于通过入口40将待分析的液体引入封闭内部空间12内。该引入通常对应于其中发现待分析的液体的容器与入口40的连接。这种连接可以采取各种形式，简单地假设在容器和入口40之间建立流体连接。优选地，该连接是流体密封连接，并且优选地是气体密封的，尤其是气密连接。这种连接可以包括在容器和入口40之间的机械对接。

因此，根据本发明的微生物测试装置的使用包括以下步骤：

-将待分析的液体的容器连接到入口40，尤其是在示例性实施例中连接到入口40的外部连接部分42；

-打开入口的打开/关闭构件46，以使待分析的液体能够从容器朝向微生物测试装置的封闭内部空间12通过。

打开入口的打开/关闭构件46的步骤是在提供过程期间用于以防漏方式关闭封闭内部空间12的关闭步骤之后打开/关闭构件的第一次打开。

在该步骤中，预定初始水平的负压具有特别重要的作用。实际上，该负压的存在促进了将待分析的液体引入到微生物测试装置的封闭内部空间12中。一方面，这是由于如果待分析的液体最初例如处于大气压力下，则在待分析的液体上施加抽吸的现象。另一方面，这是由于在引入待分析的液体之前，预定水平的负压被微生物测试装置中少量气体的存在所反映，使得在引入待分析的液体期间，微生物测试装置不必排放相应量的气体。这不仅有利于待分析的液体进入微生物测试装置的封闭内部空间，而且还避免了最初包含在微生物测试装置中的颗粒或分子排到外部。

应当注意的是，在使用微生物测试装置的该步骤期间，在打开/关闭构件的打开使得待分析的液体能够从容器通向封闭内部空间12期间，封闭内部空间12可以与任何外部吸气源隔离。实际上，在提供过程期间以防漏方式关闭封闭内部空间12的关闭步骤之后的装置的第一次打开之前，借助于装置中存在的降低的初始压力有利地获得抽吸。

因此，通过入口40将待分析的液体引入根据本发明的微生物测试装置10中使得液体能够首先引入封闭内部空间12的第一隔室12a中，然后待分析的液体自然地与微生物过滤构件32接触。待分析的液体因此通过该微生物过滤构件32过滤，使得至少一些潜在的微生物，尤其是针对预想的测试的那些，被微生物过滤构件32保留。另一方面，待分析的液体的液体部分朝向封闭内部空间12的第二隔室12b迁移。为此，应当理解的是，至少对于该步骤，微生物测试装置有利地是处于图中所示的方向，封闭内部空间12的第二隔室12b位于第一隔室的下方，这两个隔室通过微生物过滤构件32彼此分开，在所描绘的示例中，微生物过滤构件32沿着随后是水平的平面延伸。

待分析的液体使得营养层36能够再水化。由于营养层36与过滤构件接触，因此营养元素及其可选的添加元素可朝向微生物过滤构件32所保留的微生物迁移。因此，如果微生物测试装置10置于有利的环境中，尤其是温度中，则可以在微生物测试装置10本身内获得微生物的孵育，而不必打开微生物测试装置10，在任何情况下都不必从微生物测试装置10的腔室中移除微生物过滤构件32。

因此，在将待分析的液体引入微生物测试装置的封闭内部空间12内的步骤之后，根据本发明的微生物测试装置10的使用可以包括以下后续步骤：

-关闭入口40的打开/关闭构件46；

-在微生物测试装置中孵育可能最初包含在待分析的液体中的微生物。

在这段孵育时期之后，该使用可以包括随后的步骤，该步骤包括目视检测、计数、鉴定和/或表征可能最初包含在待分析的液体中的微生物，尤其是通过观察微生物测试装置的腔室的透明部分。此处同样，该测试步骤可以在不需要打开微生物测试装置10、潜在的微生物位于其上的微生物过滤构件32，从而保留在微生物测试装置10的封闭内部空间内的情况下进行。

本发明不限于所描述和描绘的示例，因为在不脱离本发明的范围的情况下可以对其进行各种修改。