阅读说明：本技术 一种用于火龙果溃疡病的防治剂 (Prevention and treatment agent for dragon fruit canker ) 是由 郑伟 王彬 黄国全 蒋邦念 韦堂倩 韦家平 黄家改 李兴忠 于 2019-08-30 设计创作，主要内容包括：本发明涉及火龙果溃疡病防治技术领域,具体涉及一种用于火龙果溃疡病的防治剂,通过如下方法制成：(1)溃疡病菌液培养：取患溃疡病的火龙果枝条浸泡于溃疡病菌培养液中,于温度为30-35℃下培养；(2)抗病菌培养：向步骤(1)所得物中添加枝条质量0.5-1.0倍的有益菌液,于温度25-35℃条件下培养；(3)有害菌杀灭处理：依次用蓝光、绿光照射步骤(2)所得物各；(4)向步骤(2)所得物中添加无患子粉和香菇粉,超声波处理；本发明的防治剂不仅抑制了火龙果溃疡病病原菌的滋生,还改善了火龙果苗木光合作用和吸收能力,提高了火龙果苗木抗病能力。(The invention relates to the technical field of prevention and treatment of dragon fruit canker, in particular to a prevention and treatment agent for dragon fruit canker, which is prepared by the following method: (1) culturing ulcer disease bacterial liquid: soaking dragon fruit branches with canker in a canker bacterium culture solution, and culturing at 30-35 deg.C; (2) and (3) anti-bacterial culture: adding beneficial bacterium liquid with the mass of 0.5-1.0 time of that of branches into the product obtained in the step (1), and culturing at the temperature of 25-35 ℃; (3) and (3) harmful bacterium killing treatment: sequentially irradiating each substance obtained in the step (2) with blue light and green light; (4) adding soapberry powder and lentinus edodes powder into the product obtained in the step (2), and carrying out ultrasonic treatment; the prevention and control agent disclosed by the invention not only inhibits the breeding of pathogenic bacteria of the dragon fruit canker, but also improves the photosynthesis and absorption capacity of the dragon fruit nursery stock, and improves the disease resistance of the dragon fruit nursery stock.)

一种用于火龙果溃疡病的防治剂

技术领域

本发明涉及火龙果溃疡病防治技术领域，具体涉及一种用于火龙果溃疡病的防治剂。

背景技术

火龙果富含大量果肉纤维、花青素、胡萝卜素、维生素B1、维生素B2等，更含有丰富的钙、磷、铁等矿物质，具有美容、保健、治疗等功效；但火龙果病害的发生比较频繁，在湿热多雨季节其发生尤为严重，严重影响了其产量和品质，制约了火龙果产业的发展。

溃疡病作为火龙果主要病害之一，该病害从火龙果抽生嫩芽到开花结果期间均可发生，溃疡病主要为害火龙果的枝条和果实，该病害从火龙果抽生嫩芽到开花结果期间均可发生，发病始于幼嫩的茎部，发病初期茎上出现圆形凹陷褪绿病斑，病斑逐渐变成橘黄色，严重时整条肉质茎上密密麻麻布满了病斑；发病后期受侵染部位呈灰白色突起，形成溃疡斑，其上产生黑色分生孢子器，严重时茎部完全腐烂。果实受侵染，在发病初期，果实的鳞片和果实表面出现圆形凹陷褪绿病斑，病斑逐渐变成橘黄色，随着果实成熟黄色病斑突起，呈灰白色，形成溃疡斑，其上着生分生孢子器。该病害在火龙果果园中普遍发生，植株发病率为30％以上。而且，火龙果溃疡病病原菌的最适生长温度为30℃，pH值为7-8，所以高温多雨季节溃疡病发生最为严重。

专利号CN201910002945.X公开了火龙果溃疡病的防治方法，包括在火龙果树苗长新梢、花苞或者果实时，在火龙果园内喷洒嘧菌酯、醚菌酯或者嘧菌酯与醚菌酯的组合药物；定期检测火龙果园的土壤的pH值，当pH值小于5.5时，增施有机肥，并用枯草芽孢杆菌处理土壤；清除火龙果园内的杂草，并把枯死或者腐烂的草杆清除出火龙果园；火龙果树苗上出现黄色圆点时，喷洒吡矬密菌酯；火龙果树苗上出现黄色圆点里出现红点时，把出现黄色圆点里出现红点的苗枝剪切，并清理出火龙果园；修剪重叠或者遮光的火龙果老苗，并把修剪后的苗枝清理出火龙果园。再如专利号CN201710292738.3公开了一种火龙果溃疡病的综合防控方法，针对新建果园，选择无病苗木、抗病品种进行栽培；发病果园于春季喷施杀菌剂抑制病原孢子萌发；夏季为防治关键时期，通过及时剪除新发嫩枝来减少病原菌循环侵染媒介，并喷施杀菌剂；秋、冬及时修剪、清园、喷施药剂，清除病原孢子越冬场所。上述专利的防治方法主要在于喷施化学药剂，增加了种植成本和加重了环境污染。

专利号CN201710451896.9公开了防治火龙果溃疡病和炭疽病的组合物及其制备方法，该防治火龙果溃疡病和炭疽病的组合物由95～105重量份的大青叶、55～65重量份的菊花、5～15重量份的稻秆、0.5～1重量份的红糖和0.5～1重量份的食盐提取制得。但该药剂是从外部抵抗溃疡病病原菌，无法提高火龙果自身的抗病能力。

所以，寻找一种既能预防、治疗火龙果溃疡病病害的绿色防控方法尤为重要。

发明内容

本发明为解决上述技术问题，提供了一种用于火龙果溃疡病的防治剂。

具体是通过以下技术方案来实现的：

一种用于火龙果溃疡病的防治剂，通过如下步骤制成：

(1)溃疡病菌液培养：取患溃疡病的火龙果枝条浸泡于枝条质量3-5倍的溃疡病菌培养液中，于温度为30-35℃下培养5-7d；

(2)抗病菌培养：向步骤(1)所得物中添加枝条质量0.5-1.0倍的有益菌液，于温度25-35℃条件下培养5-7d；

(3)有害菌杀灭处理：依次用蓝光、绿光照射步骤(2)所得物各20-30min；

(4)向步骤(3)所得物中添加枝条质量0.3-0.5倍的无患子粉和0.5-0.7倍的香菇粉，超声波处理300-500s。

所述每升溃疡病菌培养液中含有葡萄糖10-20g，葡萄糖酸锌20-30mg，葡萄糖酸铜40-50mg，氨基酸15-25mg。

所述每升有益菌液包括双歧杆菌(2.5-4.5)×10⁷cfu，哈茨木霉菌(1.2-2.8)×10⁶cfu，解淀粉芽孢杆菌(1.5-2.0)×10⁸cfu。

所述无患子粉的制备方法为：取无患子果皮干燥、研磨至100目筛，置于0-5℃条件下冷冻处理10-18h，置于矿物质水中至水固质量比(8-12):1，经高静压处理25-30min。

所述每升矿物质水中含有如下成分：含有钠12-18mg、钙5-9mg、钾12-15mg、镁1-3mg、锰2-6mg、硒4-8mg、碳32-38mg。

所述高静压处理：增压至280-360MPa，保压10-12min，升压速率4-5MPa/min。

所述香菇粉的制备方法为：将香菇置于质量浓度为70-80％的乙醇溶液中，在50-60℃条件下微波处理10-18min，然后等离子体处理8-12min，分离，取下沉物，干燥、粉磨。

所述等离子体处理：保护气体为氮气，氮气流量为100-120sccm，功率为250-300W，处理时间320-400s。

所述超声波处理：功率150-250W，温度为60-65℃。

有益效果：

在火龙果发芽后10天，按照每株喷洒50-70mL的防治剂，使得火龙果溃疡病危害率降低20％，商品果率提高15％，亩收入增加800元以上，且防治成本低。本发明的防治剂不仅抑制了火龙果溃疡病病原菌的滋生，还改善了火龙果苗木光合作用和吸收能力，提高了火龙果苗木抗病能力。

本发明通过添加有益菌，提高了有益菌对病原菌的抵抗能力，同时使得有益菌大量增殖，利用蓝光和绿光照射处理，通过每种菌对光反应效果的不同，有效地杀灭了病原菌；再结合对无患子粉和香菇粉合理提取，不仅为有益菌提供营养成分，保证防治剂的效果，延长其保存时间，还提高了有效成分的活性及其活性稳定性，进而提升了作物抗病能力，降低了溃疡病的复发率和治疗成本，缩短了治疗时间。

具体实施方式

下面对本发明的具体实施方式作进一步详细的说明，但本发明并不局限于这些实施方式，任何在本实施例基本精神上的改进或代替，仍属于本发明权利要求所要求保护的范围。

实施例1

一种用于火龙果溃疡病的防治剂，通过如下步骤制成：

(1)溃疡病菌液培养：取患溃疡病的火龙果枝条浸泡于枝条质量3-5倍的溃疡病菌培养液中，于温度为35℃下培养7d；

(2)抗病菌培养：向步骤(1)所得物中添加枝条质量1.0倍的有益菌液，于温度35℃条件下培养7d；

(3)有害菌杀灭处理：依次用蓝光、绿光照射步骤(2)所得物各30min；

(4)向步骤(3)所得物中添加枝条质量0.5倍的无患子粉和0.7倍的香菇粉，超声波处理500s；

所述每升溃疡病菌培养液中含有葡萄糖20g，葡萄糖酸锌30mg，葡萄糖酸铜50mg，氨基酸25mg；

所述每升有益菌液包括双歧杆菌4.5×10⁷cfu，哈茨木霉菌2.8×10⁶cfu，解淀粉芽孢杆菌2.0×10⁸cfu；

所述无患子粉的制备方法为：取无患子果皮干燥、研磨至100目筛，置于5℃条件下冷冻处理18h，置于矿物质水中至水固质量比12:1，经高静压处理25-30min；

所述每升矿物质水中含有如下成分：含有钠18mg、钙9mg、钾15mg、镁3mg、锰6mg、硒8mg、碳38mg；

所述高静压处理：增压至360MPa，保压12min，升压速率5MPa/min；

所述香菇粉的制备方法为：将香菇置于质量浓度为80％的乙醇溶液中，在60℃条件下微波处理18min，然后等离子体处理12min，分离，取下沉物，干燥、粉磨；

所述等离子体处理：保护气体为氮气，氮气流量为120sccm，功率为300W，处理时间400s；

所述超声波处理：功率250W，温度为65℃。

实施例2

一种用于火龙果溃疡病的防治剂，通过如下步骤制成：

(1)溃疡病菌液培养：取患溃疡病的火龙果枝条浸泡于枝条质量3倍的溃疡病菌培养液中，于温度为30℃下培养5d；

(2)抗病菌培养：向步骤(1)所得物中添加枝条质量0.5倍的有益菌液，于温度25℃条件下培养5d；

(3)有害菌杀灭处理：依次用蓝光、绿光照射步骤(2)所得物各20min；

(4)向步骤(3)所得物中添加枝条质量0.3倍的无患子粉和0.5倍的香菇粉，超声波处理300s；

所述每升溃疡病菌培养液中含有葡萄糖10g，葡萄糖酸锌20mg，葡萄糖酸铜40mg，氨基酸15mg；

所述每升有益菌液包括双歧杆菌2.5×10⁷cfu，哈茨木霉菌1.2×10⁶cfu，解淀粉芽孢杆菌1.5×10⁸cfu；

所述无患子粉的制备方法为：取无患子果皮干燥、研磨至100目筛，置于0℃条件下冷冻处理10h，置于矿物质水中至水固质量比8:1，经高静压处理25min；

所述每升矿物质水中含有如下成分：含有钠12mg、钙5mg、钾12mg、镁1mg、锰2mg、硒4mg、碳32mg；

所述高静压处理：增压至280MPa，保压10min，升压速率4MPa/min；

所述香菇粉的制备方法为：将香菇置于质量浓度为70-80％的乙醇溶液中，在50℃条件下微波处理10min，然后等离子体处理8min，分离，取下沉物，干燥、粉磨；

所述等离子体处理：保护气体为氮气，氮气流量为100sccm，功率为250W，处理时间320s；

所述超声波处理：功率150W，温度为60℃。

实施例3

一种用于火龙果溃疡病的防治剂，通过如下步骤制成：

(1)溃疡病菌液培养：取患溃疡病的火龙果枝条浸泡于枝条质量4倍的溃疡病菌培养液中，于温度为32℃下培养6d；

(2)抗病菌培养：向步骤(1)所得物中添加枝条质量0.8倍的有益菌液，于温度30℃条件下培养6d；

(3)有害菌杀灭处理：依次用蓝光、绿光照射步骤(2)所得物各25min；

(4)向步骤(3)所得物中添加枝条质量0.4倍的无患子粉和0.6倍的香菇粉，超声波处理400s；

所述每升溃疡病菌培养液中含有葡萄糖15g，葡萄糖酸锌25mg，葡萄糖酸铜45mg，氨基酸20mg；

所述每升有益菌液包括双歧杆菌3.5×10⁷cfu，哈茨木霉菌1.9×10⁶cfu，解淀粉芽孢杆菌1.7×10⁸cfu；

所述无患子粉的制备方法为：取无患子果皮干燥、研磨至100目筛，置于3℃条件下冷冻处理14h，置于矿物质水中至水固质量比10:1，经高静压处理28min；

所述每升矿物质水中含有如下成分：含有钠15mg、钙7mg、钾12mg、镁2mg、锰4mg、硒6mg、碳35mg；

所述高静压处理：增压至310MPa，保压11min，升压速率4.5MPa/min；

所述香菇粉的制备方法为：将香菇置于质量浓度为75％的乙醇溶液中，在55℃条件下微波处理15min，然后等离子体处理10min，分离，取下沉物，干燥、粉磨；

所述等离子体处理：保护气体为氮气，氮气流量为110sccm，功率为280W，处理时间360s；

所述超声波处理：功率200W，温度为62℃。

对比例1

与实施例3的区别在于：未用蓝光照射。

对比例2

与实施例3的区别在于：未用绿光照射。

对比例3

与实施例3的区别在于：矿物质水替换为蒸馏水。

试验例1

对700株火龙果苗木进行处理，随机均分为7组，分别为实验组1-3、对比组1-3、对照组；

实验组1-3分别在火龙果发芽后10天，按照每株喷洒60mL的实施例1-3制备的防治剂；

对比组1-3分别在火龙果发芽后10天，按照每株喷洒60mL的对比例1-3制备的防治剂；

对照组不作处理；

统计火龙果抽生嫩芽到开花结果期间，溃疡病发病率，计算与对照组相比，病害发生的变化情况，变化率如表1所示：

表1(注：“-”代表降低，“+”代表升高)

	实验组1	实验组2	实验组3	对比组1	对比组2	对比组3
							变化率/％	-21.2	-19.6	-23.5	-10.2	-15.1	-7.62

试验例2有益菌液筛选试验

本发明人进行了有益菌液对火龙果溃疡病病原菌的抑制情况的探究，实验如下：

1.火龙果病菌的分离及筛选：切取多块火龙果枝条病害样本，用体积浓度75％的酒精表面消毒片刻，待挑取病斑部后，吸取200μL在PDA平板上进行涂板，并于30℃倒置培养2-3d，此后将分离到的细菌转接到LB培养基划为被感染的植物组织，加1mL无菌水，磨碎，然后将研磨后得到的原液分别稀释100×和1000×进行线培养，最后将分离到的真菌转接到PDA平板上培养；

2.抑菌筛选实验：按照表2配制有益菌液，然后用灭过菌的圆形滤纸(直径5mm)蘸取有益菌液，防止在均匀涂满病原菌液的平板中央，以水作为对照组(CK)，每个处理重复5次，放于30℃的培养箱中倒置培养2d，然后测量抑制圈直径，取平均值，计算抑制率，其中抑制率＝(处理抑制圈直径-对照)/(平板直径-对照)×100％。

表2

3.结果分析

不同处理对火龙果溃疡病的抑菌率如表3所示：

表3

项目

处理1

处理2

处理3

处理4

处理5

处理6

处理7

抑菌率

89.5％

50.1％

37.6％

44.2％

40.8％

56.4％

62.3％

试验例3植物提取物筛选的抑菌实验

本发明人进行了植物提取物对火龙果溃疡病病原菌的抑制情况的探究，实验如下：

1.火龙果病菌的分离及筛选：切取多块火龙果枝条病害样本，用体积浓度75&的酒精表面消毒片刻，待挑取病斑部后，吸取200μL在PDA平板上进行涂板，并于30℃倒置培养2-3d，此后将分离到的细菌转接到LB培养基划为被感染的植物组织，加1mL无菌水，磨碎，然后将研磨后得到的原液分别稀释100×和1000×进行线培养，最后将分离到的真菌转接到PDA平板上培养；

2.提取物的制备：分别对无患子、五倍子、香菇、石榴皮、蒲公英、山芝麻进行提取；具体方法为：用超临界CO₂流体进行萃取，萃取压力为7MPa，萃取温度为45℃，萃取时间为15min，夹带剂用量为1mL/g，加入待提取植物重量3.5倍的水中，于温度为80℃下进行提取23min；

3.抑菌筛选实验：用灭过菌的圆形滤纸(直径5mm)蘸取提取物，防止在均匀涂满病原菌液的平板中央，以水作为对照组(CK)，每个处理重复5次，放于30℃的培养箱中倒置培养2d，然后测量抑制圈直径，取平均值，计算抑制率，其中抑制率＝(处理抑制圈直径-对照)/(平板直径-对照)×100％。

3.结果分析

不同提取物对火龙果溃疡病的抑菌率如表4所示：

表4

项目

无患子

五倍子

香菇

石榴皮

蒲公英

山芝麻

抑菌率

76.1％

12.6％

43.4％

21.1％

37.5％

29.6％