阅读说明：本技术 抗心肌缺血缺氧多肽、组合物及其应用和多肽药物 (Polypeptide and composition for resisting myocardial ischemia and myocardial anoxia, application thereof and polypeptide medicament ) 是由 钱玲梅 李沄 冯梦文 尹安雯 于 2019-08-26 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种抗心肌缺血缺氧多肽、组合物及其应用和多肽药物。其中,所述抗心肌缺血缺氧多肽的序列具有：如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列,或具有与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。上述抗心肌缺血缺氧多肽可显著降低细胞内乳酸脱氢酶的活性水平和释放,可对细胞起到保护作用；同时该抗心肌缺血缺氧多肽可显著提高缺氧情况下的细胞存活率。动物实验表明,该多肽可显著降低大鼠血清中的乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK),对心肌细胞缺血损伤有显著的保护作用,预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病,降低心肌梗死的死亡率。(The invention relates to an anti-myocardial ischemia and anti-hypoxia polypeptide, a composition, application thereof and a polypeptide medicament. Wherein the sequence of the anti-myocardial ischemia and anoxia polypeptide has the following structure: the amino acid sequence shown as SEQ ID NO.1 or the amino acid sequence with at least 70 percent of homology with the amino acid sequence shown as SEQ ID NO. 1. The polypeptide for resisting myocardial ischemia and hypoxia can obviously reduce the activity level and release of lactic dehydrogenase in cells and can protect the cells; meanwhile, the polypeptide for resisting myocardial ischemia and hypoxia can obviously improve the survival rate of cells under the condition of hypoxia. Animal experiments show that the polypeptide can obviously reduce Lactate Dehydrogenase (LDH) and Creatine Kinase (CK) in rat serum, has obvious protective effect on myocardial cell ischemia injury, prevents and/or treats coronary atherosclerotic heart disease, and reduces the mortality rate of myocardial infarction.)

抗心肌缺血缺氧多肽、组合物及其应用和多肽药物

技术领域

本发明涉及生物医药领域，特别是涉及一种抗心肌缺血缺氧多肽、组合物及其应用和多肽药物。

背景技术

冠状动脉粥样硬化性心脏病是冠状动脉血管发生动脉粥样硬化病变而引起血管腔狭窄或阻塞，造成心肌缺血、缺氧或坏死而导致的心脏病，通常被称为“冠心病”。“冠心病”在美国和许多发达国家排在死亡原因的第一位。在我国，“冠心病”的发病率和死亡率均处于较高水平，给社会经济和家庭生活造成了极大的负担。

目前，“冠心病”的治疗方法主要分为血运重建治疗和药物治疗，治疗“冠心病”的药物主要包括：(1)硝酸酯类药物：常用有***、硝酸异山梨酯等；(2)抗血栓药物：包括抗血小板药和抗凝药，抗血小板药主要有阿司匹林、氯吡格雷、替罗非班等，可以抑制血小板聚集，避免血栓形成而堵塞血管；抗凝药物包括肝素、璜达肝癸钠、比伐卢定等；(3)β-阻滞剂：常用药物有美托洛尔、阿替洛尔、比索洛尔、卡维地洛等；(4)钙通道阻断剂：常用药物有维拉帕米、硝苯地平、氨氯地平、地尔硫卓等；(5)肾素血管紧张素系统抑制剂：包括血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)、血管紧张素2受体拮抗剂(ARB)以及醛固酮拮抗剂；(6)调脂药：常用有辛伐他汀、阿托伐他汀等；(7)纤溶药物：主要有链激酶、尿激酶、组织型纤溶酶原激活剂等。然而上述药物大多为化学药物，其缺点为副作用大，药物在器官中蓄积性高、易引发严重的免疫反应。

目前，近年来随着多肽组学的快速发展，多肽类物质因其多样的生物学特性，在疾病治疗中的作用受到了越来越多的重视。随着肽类筛选、合成、稳定及修饰技术的不断发展，一大批具有诊断及治疗潜能的内源性多肽被识别并转化到临床疾病的诊断与治疗之中。与其他化学药物相比，例如：与***美他嗪相比，多肽具有组织穿透力强、溶解性好、稳定、易吸收、可大量制备、口服或注射理想、免疫原性差、特异性及亲和力高、器官蓄积性低、较少引起严重的免疫反应等特点，成为新药物研究的热点之一，具有良好的市场前景。目前本领域未见二十个氨基酸以内的多肽类药物被报道用于因心肌缺血缺氧引发的冠状动脉粥样硬化性心脏病的治疗中。

发明内容

基于此，提供一种能够有效预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的小分子抗心肌缺血缺氧多肽。

一种抗心肌缺血缺氧多肽，所述抗心肌缺血缺氧多肽的序列具有：

如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，或

具有与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。

经细胞实验表明，上述抗心肌缺血缺氧多肽可显著降低细胞内乳酸脱氢酶的活性水平和释放，可对细胞起到保护作用；同时该抗心肌缺血缺氧多肽可显著提高缺氧情况下的细胞存活率。大鼠冠状动脉结扎引起心肌缺血的动物实验表明，上述抗心肌缺血缺氧多肽可显著降低大鼠血清中的乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)，对心肌细胞缺血损伤有显著的保护作用，综合细胞实验和动物实验的结果，上述抗心肌缺血缺氧多肽可以预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病，降低心肌梗死患者的死亡率。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽的序列具有如M-Q式表示的氨基酸序列，其中，M为Arg-Ala，Q为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽的序列具有如Q-N式表示的氨基酸序列，其中，Q为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，N为Gln或Gln-Lys。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽的序列具有如M-Q-N式表示的氨基酸序列，其中，M为Arg-Ala，Q为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，N为Gln或Gln-Lys。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或为与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为如M-Q式表示的氨基酸序列、如Q-N式表示的氨基酸序列或如M-Q-N式表示的氨基酸序列，其中，M为Arg-Ala，Q为SEQID NO.1所示的氨基酸序列，N为Gln或Gln-Lys。

本发明还提供一种抗心肌缺血缺氧多肽组合物，其包括具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽、具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽、具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽、具有如SEQ IDNO.4所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽以及具有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽中的至少两种。

本发明还提供一种用于预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病或预防和/或治疗心肌缺血的多肽药物，所述多肽药物的活性成分包括本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽或本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽组合物。

本发明还提供一种如本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽或本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽组合物在制备预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病药物中的应用。

本发明还提供一种如本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽或本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽组合物在制备预防和/或治疗心肌缺血缺氧药物中的应用。

附图说明

图1为乳酸脱氢酶活性实验下各测试组对乳酸脱氢酶作用的比较图；

图2为台盼蓝染色细胞存活率实验下各测试组对细胞存活率作用的比较图；

图3为大鼠动物模型实验下各测试组对血清乳酸脱氢酶作用的比较图；

图4为大鼠动物模型实验下各测试组对肌酸激酶作用的比较图。

具体实施方式

为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合附图对本发明的具体实施方式做详细的说明。在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明。但是本发明能够以很多不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似改进，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。

除非另有定义，本文所使用的所有的技术和科学术语与属于本发明的技术领域的技术人员通常理解的含义相同。本文中在本发明的说明书中所使用的术语只是为了描述具体的实施例的目的，不是旨在于限制本发明。本文所使用的术语“及/或”包括一个或多个相关的所列项目的任意的和所有的组合。

本发明一实施例提供了一种抗心肌缺血缺氧多肽，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列中具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

其中，SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列为：Ser-Thr-Ser-Lys-Ser-Glu-Ser-Ser。

在其中一个实施例中，本发明中所述的抗心肌缺血缺氧多肽序列是SEQ ID NO.1：Ser-Thr-Ser-Lys-Ser-Glu-Ser-Ser所示的氨基酸序列，由SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列组成的抗心肌缺血缺氧多肽命名为多肽E。

可以理解，本发明所述抗心肌缺血缺氧多肽序列中具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列是指包括但不限于如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，例如还可以在SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列中***、替换、缺失一个或多个氨基酸片段。

本发明另一实施例中提供了一种抗心肌缺血缺氧多肽，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列中具有与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。

本发明中的术语“同源性”是指两个多肽部分之间的同一性百分比。同源性是指与给定氨基酸序列的同一性程度，并且可以表示为百分比。在本发明公开的内容中，具有与给定氨基酸序列相同或相似活性的同源序列可以用“同源性％”表示。从一个部分到另一个部分的序列之间的同源性可以通过本领域已知的技术来确定。例如，可以使用用于计算参数例如分数、同一性和相似性的标准软件，特别是BLAST 2.0。例如，本发明中使用的70％同源性是指，与通过明确的算法确定的70％序列同一性相同的序列，且因此给定序列的同源物在给定序列的长度上具有大于或等于70％序列同一性。其中，本发明所称的同源性包括但不限于在一条多肽序列中***、替换、缺失一个或多个氨基酸片段。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列中具有如M-Q式表示的氨基酸序列，其中，M为Arg-Ala，Q为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列中具有如Q-N式表示的氨基酸序列，其中，Q为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，N为Gln或Gln-Lys。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列中具有如M-Q-N式表示的氨基酸序列，其中，M为Arg-Ala，Q为SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列，N为Gln或Gln-Lys。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列或为与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少80％同源性的氨基酸序列。进一步地，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少85％同源性的氨基酸序列。更进一步地，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少90％同源性的氨基酸序列，又进一步地，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为与所述SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列具有至少95％同源性的氨基酸序列。

在其中一个实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为如M-Q式表示的氨基酸序列、如Q-N式表示的氨基酸序列或如M-Q-N式表示的氨基酸序列，其中，M为Arg-Ala，Q为SEQID NO.1所示的氨基酸序列，N为Gln或Gln-Lys。

在本实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为如M-Q-N式表示的氨基酸序列，当M为Arg-Ala，N为Gln-Lys时，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为SEQ ID NO.2：Arg-Ala-Ser-Thr-Ser-Lys-Ser-Glu-Ser-Ser-Gln-Lys，由SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列组成的抗心肌缺血缺氧多肽命名为多肽A，该多肽包含12个氨基酸，分子量为1295g/mol，等电点为10.58，平均疏水性-1.85。

在本实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为如M-Q式表示的氨基酸序列，当M为Arg-Ala时，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为SEQ ID NO.3：Arg-Ala-Ser-Thr-Ser-Lys-Ser-Glu-Ser-Ser，由SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列组成的抗心肌缺血缺氧多肽命名为多肽B，该多肽包含10个氨基酸，分子量为1039g/mol，等电点为10.09，平均疏水性-1.48。

在本实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为如Q-N式表示的氨基酸序列，当N为Gln-Lys时，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为SEQ ID NO.4：Ser-Thr-Ser-Lys-Ser-Glu-Ser-Ser-Gln-Lys，由SEQ ID NO.4所示的氨基酸序列组成的抗心肌缺血缺氧多肽命名为多肽C，该多肽包含10个氨基酸，分子量1068g/mol，等电点为9.88，平均疏水性-1.95。

在本实施例中，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为如Q-N式表示的氨基酸序列，当N为Gln时，所述抗心肌缺血缺氧多肽序列为SEQ ID NO.5：Ser-Thr-Ser-Lys-Ser-Glu-Ser-Ser-Gln，由SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列组成的抗心肌缺血缺氧多肽命名为多肽D，该多肽包含9个氨基酸，分子量为939g/mol，等电点为7，平均疏水性-1.73。

可以理解，本发明中所称的多肽A、多肽B、多肽C、多肽D和多肽E所对应的氨基酸序列均具有至少70％的序列同源性，即多肽A、多肽B、多肽C、多肽D和多肽E互为同源性多肽。当然还可以理解，与多肽E具有至少70％同源性的多肽包括但不限于多肽A、多肽B、多肽C和多肽D，还可以为其他本发明中未列举的有相似生理活性的多肽，即与多肽E具有至少70％同源性的多肽也具有降低大鼠血清中的乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)，对心肌细胞缺血损伤有显著的保护作用，预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病，降低心肌梗死的死亡率的作用。

可以理解，本发明所称的抗心肌缺血缺氧多肽均可以采用本领域技术人员常用的固相合成方法制备而成，在此不在过多赘述。

经细胞实验表明，上述抗心肌缺血缺氧多肽可显著降低细胞内乳酸脱氢酶的活性水平和释放，可对细胞起到保护作用；同时该抗心肌缺血缺氧多肽可显著提高缺氧情况下的细胞存活率。大鼠冠状动脉结扎引起心肌缺血的动物实验表明，上述抗心肌缺血缺氧多肽可显著降低大鼠血清中的乳酸脱氢酶(LDH)和肌酸激酶(CK)，对心肌细胞缺血损伤有显著的保护作用，综合细胞实验和动物实验的结果，上述抗心肌缺血缺氧多肽可以预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病，降低心肌梗死的死亡率。

本发明还提供一种抗心肌缺血缺氧多肽组合物，其包括具有如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽、具有如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽、具有如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽、具有如SEQ IDNO.4所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽以及具有如SEQ ID NO.5所示的氨基酸序列的抗心肌缺血缺氧多肽中的至少两种。上述抗心肌缺血缺氧多肽组合物可以预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病，降低心肌梗死的死亡率。

本发明还提供一种用于预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的多肽药物，所述多肽药物的活性成分包括本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽或本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽组合物。上述含本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽或多肽组合物的药物具有预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病的作用。

本发明还提供一种用于预防和/或治疗心肌缺血的多肽药物，所述多肽药物的活性成分包括本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽或本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽组合物。上述含本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽或多肽组合物的药物具有预防和/或治疗心肌缺血的作用。

本发明还提供一种本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽或本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽组合物在制备预防和/或治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病药物中的应用。

本发明还提供一种本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽或本发明所述的抗心肌缺血缺氧多肽组合物在制备预防和/或治疗心肌缺血缺氧药物中的应用。

为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合细胞实验和动物实验对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实验仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。

如无特殊说明，以下实验中所使用的试剂均来源于市售，操作方法均为现有的常规操作方法。

实验设计

对缺氧心肌细胞的保护作用的细胞实验

1.实验细胞

实验选用大鼠心肌细胞H9c2，购自美国菌种保藏中心(ATCC,American TypeCulture Collection)。

2.细胞缺氧方法

实验分组：分为缺氧组、实验组、对照组和曲美他嗪组。

对照组：以六孔板接种细胞，待密度达到80％后，换无糖无血清的DMEM完全培养基，置于常氧孵箱中培养。

缺氧组：以六孔板接种细胞，待密度达到80％后，换无糖无血清的DMEM培养基，置于缺氧箱中按条件进行缺氧10h。

实验组：分为多肽A组(对应本发明的多肽A)、多肽B组(对应本发明的多肽B)、多肽C组(对应本发明的多肽C)、多肽D组(对应本发明的多肽D)和多肽E组(对应本发明的多肽E)，具体而言，以六孔板接种细胞，待密度达到80％后，换无糖无血清的DMEM培养基，分别选用上述各实验组中的多肽以50μmol/L的浓度预处理H9c2细胞，2h后，置于缺氧箱中按条件进行缺氧10h。

曲美他嗪组：以六孔板接种细胞，待密度达到80％后，换无糖无血清的DMEM培养基，以10μmol/L的曲美他嗪预处理H9c2细胞，2h后，置于缺氧箱中按条件进行缺氧10h。

3.实验方法

3.1乳酸脱氢酶的活性检测

吸取细胞培养基，8000rpm,5min离心，96孔板每孔加入样品120μL和工作液60μL,室温孵育30min后，酶标仪检测490nm的吸光度。

3.2台盼蓝染色

收集各组所有的H9c2细胞，按照台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒步骤进行染色，染色后用血细胞计数板计数，细胞死亡率＝蓝色细胞数/细胞总数×100％。

4.数据及统计学处理：

本实验中数据采用SPSS13.0软件处理，以平均数±标准差(mean±SD)来表示，组间以One-way ANOVA以及t检验分析比较，以p<0.05表示有显著性差异。

动物实验

1.实验动物：SD大鼠共28只，雄性，清洁级，体重：200-220g，由上海西普尔-必凯实验动物有限公司提供。

2.实验分组：将实验大鼠随机分组(n＝7)：假手术组、模型组、多肽A组(对应本发明的多肽A)、多肽B组(对应本发明的多肽B)、多肽C组(对应本发明的多肽C)、多肽D组(对应本发明的多肽D)、多肽E组(对应本发明的多肽E)、曲美他嗪(TMZ)组。给药剂量以体重计算，各多肽组均按6mg/kg给药，曲美他嗪(TMZ)组按5mg/kg给药，药物以生理盐水为溶剂配成注射液，尾静脉注射给药。

3.大鼠冠状动脉结扎

将大鼠给予10％的水合氯醛腹腔注射麻醉，充分麻醉后仰卧位固定于动物台上，沿胸骨左侧2mm处，第四、五肋间切口，钝性分离至肋间隙剪断第四、五肋肋骨，暴露胸腔，剪开心包膜，小拉钩牵拉胸壁，充分暴露心脏。以无损伤缝合针将0/3号缝合线于左冠状动脉前降支下穿过，结扎左前降支血管，将心脏放回胸腔，排出胸腔内气体，迅速关闭胸腔。整个过程应在30秒内完成。大鼠左冠状动脉前降支结扎后造成心肌缺血，假手术组仅穿线不结扎。冠脉结扎前30分钟多肽A组、多肽B组、多肽C组、多肽D组、多肽E组及曲美他嗪(TMZ)组经尾静脉注射给药，各多肽组的给药剂量均为6mg/Kg、曲美他嗪(TMZ)组的给药剂量为0.0115mmol/kg，假手术组和模型组均注射等体积的生理盐水。各组大鼠在冠脉结扎40min后剪断结扎线，恢复血供。5小时后各组大鼠经股动脉取血3ml，离心取上清，测定血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性，并继续饲养大鼠，观察其生存状况。

4.数据及统计学处理：

本实验中数据采用SPSS13.0软件处理，以平均数±标准差(mean±SD)来表示，组间以t检验分析比较，以p<0.05表示有显著性差异。

实验结果

1.多肽降低乳酸脱氢酶的活性

请参考图1所示，通过应用乳酸脱氢酶细胞毒性检测试剂盒，检测细胞的损伤作用。结果表明：

缺氧组LDH的吸光度值(3.185±0.292)与对照组[(1.340±0.165)相比明显增加，差异有统计学意义(P＜0.001)；加入多肽后乳酸脱氢酶的释放[A(1.823±0.258)、B(2.320±0.145)、C(2.053±0.198)、D(2.471±0.337)、E(2.315±0.253)]与单纯缺氧组相比，明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)；而多肽A组与曲美他嗪组(TMZ)(1.657±0.153)的乳酸脱氢酶的水平相当，多肽B组、多肽C组、多肽D组、多肽E组相对于曲美他嗪组的乳酸脱氢酶的水平略高。综上所述，多肽A、多肽B、多肽C和多肽D、多肽E组均可显著降低乳酸脱氢酶的活性，对缺氧细胞损伤起到保护作用。

2.多肽提高细胞的存活率

请参考图2所示，应用台盼蓝染色细胞存活率检测试剂盒进行细胞存活率的检测。结果表明：

缺氧组死亡率(82.01±5.446％)与相应的对照组(18.29±3.351％)相比，细胞的死亡率显著增加，差异有统计学意义(P＜0.001)，说明缺氧造模成功；各多肽组[A(32.14±4.005％)、B(52.73±4.960％)、C(44.68±5.025％)、D(48.38±5.870％)、E(40.14±3.767％)]或曲美他嗪组(TMZ)(28.16±2.774％)与单纯缺氧组相比，由缺氧造成的细胞死亡率下降30-40％，说明本发明的抗心肌缺血缺氧多肽能降低由缺氧造成的细胞死亡，且A多肽效果与曲美他嗪相当。

3.多肽组降低心肌缺血大鼠血清肌酸激酶及乳酸脱氢酶的含量

结合图3和图4，检测各组大鼠血清肌酸激酶及乳酸脱氢酶的含量，结果表明：

与假手术组(血清肌酸激酶[(3142±123.71)IU/L]、乳酸脱氢酶[(1685±98.5)IU/L])相比，模型组(血清肌酸激酶[(7518±359.4)IU/L]、乳酸脱氢酶[(6309±395.8)IU/L])明显升高，差异有统计学意义(P＜0.001)，说明冠状动脉结扎后造成大鼠心肌缺血，心肌细胞受到损伤，释放血清肌酸激酶、乳酸脱氢酶入血。

与模型组相比，多肽A组、多肽B组、多肽C组和多肽D组、多肽E组中的血清肌酸激酶[A(4100±411.9)IU/L、B(4448±397.2)IU/L、C(4574±156.8)IU/L、D(4225±387.9)IU/L、E(4133±325.8)IU/L]和乳酸脱氢酶[A(3663±241.6)IU/L、B(4400±497.4)IU/L、C(4552±200.6)IU/L、D(4124±186.5)IU/L、E(3986±258.7)IU/L]的含量明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.01)。综上所述，本发明的抗心肌缺血缺氧多肽可降低心肌缺血大鼠的血清肌酸激酶及乳酸脱氢酶的含量，对心肌细胞缺血损伤有保护作用，且其作用与曲美他嗪(血清肌酸激酶[(3802±300.4)IU/L]、乳酸脱氢酶[(3302±222.6)IU/L])干预结果相类似。

4.多肽A降低心肌缺血大鼠的死亡率

如表1所示，在大鼠冠状动脉结扎后的第6天，7只模型组大鼠死亡6只，多肽A组与曲美他嗪组中的大鼠分别死亡3只与4只，与模型组大鼠相比，多肽A组中的大鼠死亡数明显降低。综上所述，多肽A可降低心肌梗死大鼠的死亡率，对心肌缺血缺氧损伤起到保护作用。

表1各组大鼠心肌缺血再灌注死亡率的影响

上述实验结果表明，在细胞水平，本发明所述的多肽均能降低缺氧心肌细胞的死亡率、乳酸脱氢酶的活性水平及释放，对细胞起到保护作用。在动物水平，本发明所述多肽能降低冠脉结扎大鼠心肌缺血大鼠的血清肌酸激酶及乳酸脱氢酶，同时能降低心肌缺血大鼠的死亡率，对心肌缺血缺氧损伤起到保护作用。本发明的多肽在细胞和动物实验的效果等同甚至更优于曲美他嗪。

以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。

以上所述实施例仅表达了本发明的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对发明专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于本发明的保护范围。因此，本发明专利的保护范围应以所附权利要求为准。

序列表

<110> 上海市同仁医院

<120> 抗心肌缺血缺氧多肽、组合物及其应用和多肽药物

<141> 2019-08-26

<160> 5

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 8

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 1

Ser Thr Ser Lys Ser Glu Ser Ser

1 5

<210> 2

<211> 12

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 2

Arg Ala Ser Thr Ser Lys Ser Glu Ser Ser Gln Lys

1 5 10

<210> 3

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 3

Arg Ala Ser Thr Ser Lys Ser Glu Ser Ser

1 5 10

<210> 4

<211> 10

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 4

Ser Thr Ser Lys Ser Glu Ser Ser Gln Lys

1 5 10

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> Artificial Sequence

<400> 5

Ser Thr Ser Lys Ser Glu Ser Ser Gln

1 5