冰片在提高微粒制剂的淋巴靶向作用中的应用
阅读说明：本技术 冰片在提高微粒制剂的淋巴靶向作用中的应用 (Application of borneol in improving lymph targeting effect of microparticle preparation ) 是由 叶田田 吴悦 王淑君 于 2018-06-11 设计创作，主要内容包括：本发明属于医药技术领域,涉及冰片在提高微粒制剂的淋巴靶向作用中的应用,具体涉及冰片在提高脂质体、胶束、微乳液、凝胶、聚合物纳米粒等微粒制剂的淋巴靶向作用中的应用。冰片可以与微粒制剂同时服用；或冰片作为微粒制剂的成分,与药物共同制成微粒制剂。冰片可以促进微粒制剂通过淋巴循环,增强淋巴暴露,增加了淋巴摄取和滞留的作用,从而提高药物治疗作用。(The invention belongs to the technical field of medicines, and relates to application of borneol in improving the lymph targeting effect of a particle preparation, in particular to application of borneol in improving the lymph targeting effect of particle preparations such as liposome, micelle, microemulsion, gel, polymer nanoparticles and the like. The borneol can be taken together with the particle preparation; or Borneolum Syntheticum as component of the microparticle preparation, and making into microparticle preparation together with the medicine. The borneol can promote the particle preparation to pass through lymphatic circulation, enhance lymphatic exposure and increase the effect of lymphatic uptake and retention, thereby improving the therapeutic effect of the medicine.)
技术领域
本发明涉及医药技术领域，具体涉及冰片在提高微粒制剂的淋巴靶向作用中的应用。
背景技术
冰片，又名龙脑，味辛、苦，性凉，归心、脾、肺经，有醒脑开窍、清热止痛、防腐生肌的功效。最早记载于《名医别录》，为芳香类中药的代表。其来源主要有三种：一是右旋龙脑(d-borneol)，来源于龙脑香科常绿乔木龙脑香树(Dryobalanops aromatica Gacrtn.f.)树脂，经蒸馏冷却而得的结晶，在“***进口药材暂行质量标准(1997年版)”中收载为“天然冰片”；二是左旋龙脑(l-borneol)，也称艾片，为菊科植物多年生草本植物艾纳香(Blumca
balsamifgra(L)DC.)叶提取的结晶；三是合成龙脑，俗称“机制冰片”，由松节油、樟脑等经化学方法合成，主含外消旋龙脑(含量不低于55.0％)及异龙脑(含量约为35％)。在《本草衍义》中，冰片被认为“独行则示弱，佐使则有功”。故冰片作为佐剂成分经常被应用到复方制剂中治疗心脑血管疾病，如安宫牛黄丸。现代研究表明冰片除了具有抑菌抗炎、镇痛的作用，还可以增加生物膜屏障通透性，如血脑屏障、胃肠粘膜等。
微粒制剂的粒径在1-1000nm之间，包括脂质体、胶束、微乳液、凝胶、聚合物纳米粒等，因其可以促进药物溶解、改善吸收、增强靶向性从而提高药物有效性而被广泛应用。近几年，微粒制剂技术也开始应用于中药研究领域，受到国内外科研工作者的广泛关注。其针对组成中药方剂中某味中药的有效部位或有效成分进行纳米技术加工处理，可提高其生物利用度，拓宽原药的适应症，丰富中药的剂型选择，节省中药资源等。微粒制剂已经被广泛的应用于靶向给药***疾病。
淋巴系统由淋巴组织、***道及其中的淋巴液组成，是人体的重要防卫体系，与心血管系统密切相关。同时，在免疫系统对抗疾病的过程中也起着积极的作用。淋巴系统已经成为药物治疗的一种传输途径。其淋巴暴露包含淋巴渗透和***摄取两个过程。越来越多的研究关注于增强淋巴暴露，从而通过淋巴递送系统提高药物吸收。
发明内容
针对于现有技术中存在的上述问题，本发明提供了冰片在提高微粒制剂淋巴靶向作用中的应用，所述的冰片可以佐使微粒制剂增强淋巴靶向的作用，从而有效提高微粒制剂的应用。
为实现上述目的，本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：
冰片在提高微粒制剂的淋巴靶向作用中的应用。
进一步地，所述冰片包括天然冰片或合成冰片。
进一步地，所述微粒制剂包括含有药物的脂质体、胶束、微乳液、凝胶、聚合物纳米粒中的一种或几种。
进一步地，所述药物为单一品种药物或多种品种药物等重量混合，所述的药物为抗肿瘤药物，选自：羟基喜树碱、伊立替康等喜树碱类药物中的一种或几种。
进一步地，所述微粒制剂为7-乙基-10羟基喜树碱脂质体、羟基喜树碱脂质体、伊立替康脂质体、SN-38胶束、SN-38纳米乳液、SN-38纳米粒。
当所述微粒制剂为7-乙基-10羟基喜树碱脂质体时，蛋黄卵磷脂350～450质量份，胆固醇90～110质量份，7-乙基-10羟基喜树碱9～11质量份。
进一步地，所述冰片与微粒制剂的组合方式包括冰片单独与微粒制剂共同服用；或冰片作为微粒制剂的成分，与药物共同制成微粒制剂等。
当冰片作为微粒制剂的成分，与药物共同制备微粒制剂时，冰片与药物质量比为1：10-20，冰片在微粒制剂所占的比例0.02％-0.2％。
进一步地，所述微粒制剂的粒径小于100nm，包封率大于80％。
进一步地，所述冰片和微粒制剂是通过淋巴途径促进吸收。
进一步地，所述冰片能够提高脂质体的淋巴靶向作用，所述脂质体为按照常规辅料常规方法制备的脂质体。
本发明提供的冰片在提高微粒制剂的淋巴靶向作用中的应用，具有以下优势：
(1)冰品与微粒制剂联合使用，冰片可以促进微粒制剂进入淋巴循环，增加淋巴暴露，提高淋巴靶向作用。
(2)冰片有通诸窍，散郁火，去翳明目，消肿止痛等功效。还具有协同作用。本发明和微粒制剂联合使用，充分发挥冰片促进微粒制剂淋巴暴露的作用。
(3)该发明将冰片和微粒制剂联合使用，毒副作用小，起效迅速。
附图说明
图1为天然冰片和合成冰片促进SN-38脂质体增强淋巴暴露结果图。
图2为天然冰片和合成冰片促进SN-38脂质体在心、肝、脾、肺、肾、脑中的组织分布结果图。
图3为1mg/ml，2mg/ml,5mg/ml合成冰片佐使SN-38在腘窝***中药代动力学结果图。
图4为1mg/ml，2mg/ml,5mg/ml合成冰片佐使SN-38在髂***中药代动力学结果图。
图5为1mg/ml，2mg/ml,5mg/ml合成冰片佐使SN-38在肾***中药代动力学结果图。
具体实施方式
下面结合实施例及附图对本发明作进一步地描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1冰片混悬剂的制备
将冰片进行研磨，过150目筛。再分别精密称量合成冰片5mg，10mg，15mg，均加入5ml蒸馏水，400w超声10min，得到浓度为1mg/ml，2mg/ml，5mg/ml的混悬液。天然冰片混旋液制备方法同合成冰片。
实施例2
1、7-乙基-10羟基喜树碱(SN-38)脂质体的制备
精密称取SN-38原料10mg、大豆磷脂400mg、胆固醇100mg、溶于20ml无水乙醇，超声30s至完全溶解，并倒入1.5g葡萄糖粉末，振摇至葡萄糖粉末混悬，50℃恒温水浴减压蒸去无水乙醇，将10ml的纯净水倒入圆底烧瓶(55℃)水化，400W超声5min，过0.8μm微孔滤膜，即得SN-38脂质体。通过分光光度法(检测波长为381nm)测定所得SN-38脂质体的包封率为(93.51±1.32)％，粒径为(94±4.1)nm。
2、SN-38脂质体的表征
(1)形态观察：乳白色的悬浮液，略带蓝色乳光
(2)粒径及电位：采用动态光散射技术测定SN-38脂质体平均粒径和Zeta电位，平均粒径为(94±4.1)nm，PDI为0.01，电位为(-4.7±1.5)mV。
(3)包封率与载药量测定：精密吸取0.2mL SN-38脂质体上样于填充好的SephadexG-50微型柱上，于离心机中2000r·min-1离心2min；然后用0.2mL蒸馏水洗脱，离心(2000r·min-1)2min，收集洗脱液，重复此操作3次，合并收集的洗脱液后，用甲醇定容至10mL；于381nm下用紫外分光光度计进行测定，记录吸光度A1。另精密吸取0.2mL SN-38脂质体溶液于10mL容量瓶中，并用甲醇定容至刻度，同法测定，记录吸光度A2。
包封率＝(脂质体中包封的药量/脂质体中总药物量)×100％
载药量＝脂质体中包封的药量/脂质体的总重量×100％
测定结果：包封率为(93.51±1.32)％，载药量为(4.55±0.73)％。
实施例3不同冰片混悬剂对SN-38脂质体淋巴暴露作用以及组织分布
将KM小鼠(雄性，18-22g)随机分为10组，即SN-38脂质体组，1mg/ml1mg/ml天然冰片-SN-38脂质体组(SN-38+1mg/ml天然冰片)，2mg/ml天然冰片-SN-38脂质体组(SN-38+2mg/ml天然冰片)，5mg/ml天然冰片-SN-38脂质体组(SN-38+5mg/ml天然冰片)，1mg/ml合成冰片-SN-38脂质体组(SN-38+1mg/ml合成冰片)，2mg/ml合成冰片-SN-38脂质体组(SN-38+2mg/ml合成冰片)，5mg/ml合成冰片-SN-38脂质体组(SN-38+5mg/ml合成冰片)。分别皮下注射各冰片混悬剂10μl，3min后，皮下注射SN-38脂质体20μl。分别在5min，30min后摘眼球取血，脱颈处死。摘取腘窝***、髂***、肾***，及心、肝、脾、肺、肾、脑、脚，冷冻保存。加入3倍样品质量的生理盐水研磨成匀浆；精密量取50μl的匀浆，加入250μl含0.5％盐酸的乙腈，涡旋3min，13000r离心10min，取出上清液，酶标检测。
淋巴暴露结果如图1所示，相比于SN-38脂质体组，1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml的合成冰片-SN-38脂质体组和天然冰片-SN-38脂质体组在5min和30min时均会提高腘窝***、髂***、肾***中SN-38的药物浓度。其中，2mg/ml合成冰片-SN-38脂质体组的SN-38浓度随着给药时间的延长而增加，并且在各给药组最高，显著高于SN-38脂质体组(p>0.01)。同时，天然冰片-SN-38脂质体组中5mg/ml天然冰片可以明显提高SN-38药物浓度。说明合成冰片和天然冰片均可以增加淋巴暴露，且2mg/ml的合成冰片具有显著的促进作用。
组织分布结果由图2所示，各个给药组中肝脏中分布较少。30min时，2mg/mL和5mg/mL的天然冰片-SN-38脂质体组可以在肺中检测到SN-38。所有组在5min时都能在心脏中被检测到，而在30min时则检测不到，说明SN-38在心脏中消除很快。在脾脏和肾脏中，SN-38的浓度随着时间的延长而增加，尤其是肾脏中，说明SN-38主要分布于肾脏。除此，天然冰片组和合成冰片组均可以增加SN-38在脑中的含量，说明SN-38可能通过淋巴途径入脑吸收，而冰片可以增强这种作用。
实施例4淋巴药代动力学研究
将浓度为1，2和5mg/mL的20μL合成冰片混悬液注射到皮下。3min后以4mg/kg的剂量将SN-38脂质体注射到皮下。分别在0.083，0.167，0.5，1，2，4，6，12，24h时，收集腘窝***、髂***、肾***和后肢足底。按实施例2中生物组织处理方法进行处理，检测。
由图3可知，在腘窝***中，药时曲线出现双峰。各组的达峰时间为1h，1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml合成冰片给药组的达峰浓度比SN-38脂质体组要分别高1.858倍，7.486倍和6.544倍，其中2mg/ml的合成冰片组具有显著差异(p<0.05)。同时，相应的AUC(0-24h)分别增加2.590，7.623，5.187倍。药动学参数表明，t1/2和MRT(0-24h)均有延长，CL显著减慢(p<0.05)。上述结果表明合成冰片可以增加SN-38脂质体的***摄取和滞留，尤其以2mg/ml的合成冰片可以显著的提高SN-38脂质体的淋巴暴露。
由图4可知，在髂***中，1mg/ml和5mg/ml的合成冰片组在1h时达峰。而2mg/ml的合成冰片组延长在6h时达峰。1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml合成冰片给药组的达峰浓度比SN-38脂质体组要分别高3.159倍，16.613倍和8.698倍。其中2mg/ml合成冰片的Cmax明显高于SN-38脂质体组。t1/2和MRT(0-24h)在SN-38脂质体组、2mg/ml合成冰片-SN-38脂质体组、1mg/ml合成冰片-SN-38脂质体组、5mg/ml合成冰片-SN-38脂质体组依次降低。
由图5可知，肾***中，2mg/ml合成冰片出现双峰，在6h达峰，与髂***结果类似。且与髂***相比，Cmax和AUC(0-24h)分别略提高1.043倍和1.384倍。说明2mg/ml合成冰片组在肾***中促进效果要优于SN-38脂质体在髂***中的吸收。
综上所述，从腘窝***、髂***和肾***的药物动力学参数表明，合成冰片具有明显佐使作用，当和SN-38脂质体组合使用时，可以明显促进SN-38脂质体的淋巴摄取和滞留，从而增加淋巴暴露。
实施例5.羟基喜树碱脂质体
精密称取羟基喜树碱原料10mg、大豆磷脂400mg、胆固醇100mg、溶于20ml无水乙醇，超声30s至完全溶解，并倒入1.5g葡萄糖粉末，振摇至葡萄糖粉末混悬，50℃恒温水浴减压蒸去无水乙醇，将10ml的纯净水倒入圆底烧瓶(55℃)水化，400W超声5min，过0.8μm微孔滤膜，即得羟基喜树碱脂质体。通过分光光度法(检测波长为381nm)测定所得羟基喜树碱脂质体的包封率为(99.26±4.19)％，粒径为(92±6.2)nm。在腘窝***、髂***和肾***中，合成冰片组和天然冰片组的AUC(0-24h)分别是脂质体组的5.976倍和3.295倍，13.784倍和11.792倍，1.112倍和0.926倍。
实施例6.伊立替康脂质体
精密称取伊立替康10mg、大豆磷脂400mg、胆固醇100mg、溶于20ml无水乙醇，超声30s至完全溶解，并倒入1.5g葡萄糖粉末，振摇至葡萄糖粉末混悬，50℃恒温水浴减压蒸去无水乙醇，将10ml的纯净水倒入圆底烧瓶(55℃)水化，400W超声5min，过0.8μm微孔滤膜，即得伊立替康脂质体。通过分光光度法(检测波长为381nm)测定所得伊立替康脂质体的包封率为(90.70±5.86)％，粒径为(93±3.9)nm。在腘窝***、髂***和肾***中，合成冰片组和天然冰片组的AUC(0-24h)分别是脂质体组的4.938倍和2.978倍，11.546倍和9.748-倍，1.023倍和0.857倍。
实施例7.SN-38胶束
通过一步固相分散法制备SN-38胶束。首先，将97mg PEG-PAsp和3mg SN-38一起充分溶解到5mL丙酮中。在60℃条件下用旋转蒸发仪将溶剂旋干，同时形成一层薄膜。然后，用60℃热水将薄膜溶解。SN-38和PEG-PAsp共聚物在水中通过自组装形成SN-38胶束。将SN-38胶束溶液用0.22um的滤膜过滤，冻干并保存在4℃中待用。通过分光光度法(检测波长为381nm)测定所得SN-38胶束的包封率为(85.23±4.78)％，粒径为(95±2.9)nm。在腘窝***、髂***和肾***中，合成冰片组和天然冰片组的AUC(0-24h)分别是胶束组的3.286倍和2.155倍，9.274倍和7.598倍，0.922倍和0.735倍。
实施例8.SN-38纳米乳液
称取SN-38 10mg，蛋黄卵磷脂250mg，油酸20mg于梨形烧瓶中，溶于适量四氢呋喃，50℃水浴搅拌1h；再加入1.5g大豆油和中链油(1:1)使溶解，然后减压旋干四氢呋喃，制得油相；将200mg F68溶解于8.5ml注射用水中得水相。将油相加入水相中，用高速剪切机剪切2min制得初乳；再将初乳高压均质15次(3000～8500psi)，形成SN-38纳米乳液。通过分光光度法(检测波长为381nm)测定所得SN-38胶束的包封率为(88.45±6.32)％，粒径为(94±2.5)nm。在腘窝***、髂***和肾***中，合成冰片组和天然冰片组的AUC(0-24h)分别是SN-38纳米乳组的3.454倍和2.176倍，9.324倍和7.173倍，0.744倍和0.578倍。
实施例9.SN-38纳米粒
称取10mg SN-38、40mg蛋黄卵磷脂，置50mL圆底烧瓶中，加入15ml四氢呋喃，于50℃水浴中反应1h，减压除去四氢呋喃，再加入30mg大豆油，溶于适量四氢呋喃中，继续搅拌10min，减压蒸干，在烧瓶底部形成薄膜，将20％血清白蛋白0.5ml溶解于9.5ml注射用水中，并预热至50℃，加入到已形成的薄膜中；用探头超声初乳，再使用高压均质机均质15次，压力为5×103～1.5×104psi，即得SN-38白蛋白纳米粒。通过分光光度法(检测波长为381nm)测定所得SN-38胶束的包封率为(90.14±3.2)％，粒径为(93±4.7)nm。在腘窝***、髂***和肾***中，合成冰片组和天然冰片组的AUC(0-24h)分别是SN-38纳米粒组的4.869倍和2.688倍，10.945倍和8.966倍，1.012倍和0.847倍。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质和原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。