阅读说明：本技术 作为血浆激肽释放酶抑制剂的n-((杂)芳基甲基)-杂芳基-甲酰胺化合物 (N- ((hetero) arylmethyl) -heteroaryl-carboxamide compounds as plasma kallikrein inhibitors ) 是由 丽贝卡·路易丝·戴维 汉娜·乔伊·爱德华兹 戴维·米歇尔·埃万斯 西蒙·泰亚比·霍奇森 于 2015-11-26 设计创作，主要内容包括：本发明提供式(I)的化合物；(I)包含这样的化合物的组合物；这样的化合物在治疗(例如在治疗或预防涉及血浆激肽释放酶活性的疾病或病症)中的用途；以及利用这样的化合物治疗患者的方法；其中R5、R6、R7、A、B、W、X、Y和Z如本文所定义。<Image he="639" wi="606" file="DDA0002175892660000011.GIF" imgContent="drawing" imgFormat="GIF" orientation="portrait" inline="no"></Image>(The present invention provides compounds of formula (I); (I) compositions comprising such compounds; the use of such compounds in therapy (e.g. in the treatment or prevention of a disease or condition in which plasma kallikrein activity is implicated); and methods of treating patients with such compounds; wherein R5, R6, R7, A, B, W, X, Y and Z are as defined herein.)

具体实施方式

加以举例说明。此外，通过利用本文所述的步骤，本领域普通技术人员可以容易地制备属于本文所要求的本发明范围内的其他化合物。然而，实施例中所举例说明的化合物不被解释为形成被认为是所述发明的仅有物质。实施例进一步举例说明制备本发明化合物的细节。本领域技术人员将容易地理解，以下制备程序的条件和过程的已知改变可以用来制备这些化合物。

本发明化合物可以其药用盐的形式分离，如上文之前描述的那些。

可能有必要保护在制备本发明化合物中使用的中间体中的反应性官能团(例如，羟基，氨基，硫羟基或羧基)以避免它们在导致所述化合物形成的反应中不希望的参与。可以使用常规保护基，例如，由T.W.Greene和P.G.M.Wuts在“Protective groups in organicchemistry”John Wiley和Sons，第4^th版，2006中描述的那些。例如，适于本文使用的常用氨基保护基是叔丁氧基羰基(Boc)，其通过在有机溶剂如二氯甲烷中的酸如三氟乙酸或盐酸处理而容易除去。备选地，氨基保护基可以是可通过在氢气氛下用钯催化剂氢化除去的苄氧基羰基(Z)，或可以通过仲有机胺如二乙胺或哌啶在有机溶剂中的溶液除去的9-芴基甲基氧基羰基(Fmoc)。羧基典型地作为酯如如甲基，乙基，苄基或叔丁基保护，其可以通过在碱如氢氧化锂或氢氧化钠存在下水解而除去。苄基保护基也可以通过在氢气氛下用钯催化剂氢化除去，而叔丁基也可以通过三氟乙酸除去。备选地，三氯乙基酯保护基用在乙酸中的锌除去。适于本文使用的常用羟基保护基是甲基醚，去保护条件包括在48％含水HBr中回流1-24小时，或通过用在二氯甲烷中的三溴化硼烷搅拌1-24小时。备选地，在羟基作为苄基醚保护的情况下，去保护条件包括在氢气氛下用钯催化剂氢化。

可以用于制备4-羧基咪唑的合成方法的实例描述于EP 1426364 A1(“Imidazole-derivatives as factor Xa inhibitors(作为因子Xa抑制剂的咪唑衍生物)”，p27-28)中。

根据通式I的化合物可以使用常规合成方法制备，所述方法例如但不限于在方案1中概述的路线。将胺2与酸1偶联，得到化合物3。该偶联典型地使用标准偶联条件如羟基苯并***和碳二亚胺，如水溶性碳二亚胺，在有机碱存在下进行。其他标准偶联方法包括在存在2-(1H-苯并***-1-基)-1，1，3，3-四甲基六氟磷酸铵、2-(3H-[1，2，3]***并[4，5-b]吡啶-3-基)-1，1，3，3-四甲基异脲六氟磷酸盐(V)、苯并***-1-基-氧基-三-吡咯烷基-六氟磷酸鏻或溴-三吡咯烷基-六氟磷酸鏻的情况下在存在有机碱如三乙胺、二异丙基乙胺或N-甲基吗啉的情况下酸与胺的反应。备选地，酰胺形成可以在有机碱存在下经由酰氯发生。所述酰氯可以通过文献中已知的方法形成，例如酸与草酰氯或亚硫酰氯的反应。

备选地，根据通式I的化合物可以使用方案2a中描述的路线制备。可以使用如之前所述的合适偶联方法将酸4与胺2偶联，得到化合物5。在典型的第二步中，将杂环的氮用化合物6烷基化，得到化合物7。烷基化可以在碱如碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠或氢化钠存在下进行，在这种情况下，离去基团是卤化物或磺酸盐。备选地，烷基化可以使用醇在Mitsunobu条件下在三苯基膦存在下进行。

在方案2a的一种变形中，根据通式I的化合物可以使用方案2b中描述的路线制备。方案2b与方案2a的区别在于部分Y等于N，因此可以采用保护基策略并且以不同的次序进行合成步骤。如之前所述的作为酯(PG)被保护的吡唑羧酸化合物8用化合物6烷基化。烷基化可以在碱如碳酸钾、碳酸铯、碳酸钠或氢化钠存在下进行，在这种情况下，离去基团是卤化物或磺酸盐。备选地，烷基化可以使用醇在Mitsunobu条件下在三苯基膦存在下进行。在此情况中，存在两个可能发生烷基化的氮，因此有可能形成两种区域异构体9和10。化合物9和10可以使用本领域技术人员已知的分离方法(例如通过色谱法或级分结晶)在该阶段分离或在合成的随后阶段分离。化合物9的保护基通过使用如之前所述的标准方法进行水解而被去除，得到相应的酸11。可以使用如之前所述的合适偶联方法将化合物11与胺2偶联，得到化合物12。

备选地，根据通式I化合物可以使用方案3中描述的路线来制备。吡咯17可以以两个步骤形成，第一个步骤涉及典型地如前所述的用保护基(PG)保护的烷基酮乙酸酯13的钠盐与氯酮14在碱如碳酸钾存在下的反应以得到化合物15，化合物15在典型的第二步中与胺16在酸如(但不限于)磺酸衍生物(例如对甲苯磺酸)存在下反应以得到化合物17，随后在典型的第三步中使用如前所述的标准方法将化合物17水解成相应的酸18。在典型的第四步中，使用如前所述的合适偶联方法将酸18与胺2偶联以得到化合物19。

胺化合物2可以使用常规合成方法例如(但不限于)方案4中所述的路线来制备。通过标准还原剂(包括但不限于氢化铝锂，硼氢化钠，硼氢化钠和氯化镍，硼氢化钠和氯化钴，硼烷)以及利用催化剂如钯、铂或阮内镍(Raney nickel)的催化氢化将腈化合物20还原。在一些情况中，例如当还原剂是硼氢化钠或采用催化氢化时，可以对所得的氨基进行原位保护，例如产生氨基甲酸酯21，例如叔丁氧基氨基甲酸酯。这可以有助于使得能够例如通过色谱法纯化中间体化合物21。随后使用如前所述的标准条件除去保护基以得到化合物2。

实施例

通过以下非限制性实施例来举例说明本发明，在这些实施例中使用以下缩写和定义：

除非另外说明，所有反应都在氮气氛下进行。

在Bruker(400MHz)谱仪上关于氘溶剂并且在室温记录¹H NMR谱。

使用LCMS(其使用Chromolith Speedrod RP-18e柱，50x 4.6mm进行，利用在13min内的10％至90％0.1％HCO₂H/MeCN至0.1％HCO₂H/H₂O的线性梯度，流速1.5mL/min)或使用Agilent，X-Select，酸性，5-95％MeCN/水(4min)获得分子离子。使用与ThermofinniganSurveyor LC系统结合的具有电喷离子化的Thermofinnigan Surveyor MSQ质谱仪收集数据。

在产物通过快速色谱法纯化的情况下，‘二氧化硅(silica)’是指用于色谱法的硅胶，0.035至0.070mm(220至440目)(例如Merck硅胶60)，并且施加的氮气压力直至10p.s.i加速柱洗脱。反相制备型HPLC纯化使用Waters 2525二元梯度泵送洗脱以典型地20mL/min流速，利用Waters 2996光电二极管阵列检测器进行。

所有溶剂和商购试剂以原样使用。

使用自动化软件如作为来自MDL Information Systems的ISIS Draw软件包的部分提供的Autonom软件或作为MarvinSketch的组件或作为IDBS E-WorkBook的组件提供的Chemaxon软件生成化学名称。

A.1-(4-羟基甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮

将4-(氯甲基)苄基醇(5.0g，31.93mmol)溶解在丙酮(150mL)中。加入2-羟基吡啶(3.64g，38.3mmol)和碳酸钾(13.24g，95.78mmol)并将反应混合物在50℃搅拌3小时，之后将溶剂在真空中除去并将剩余物置于氯仿(100mL)中。将该溶液用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并在真空中蒸发。将剩余物通过急骤色谱法纯化(二氧化硅)，洗脱剂3％MeOH/97％CHCl₃，得到白色固体，其被鉴定为1-(4-羟基甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮(5.30g，24.62mmol，77％收率)。

[M+Na]⁺＝238

B1. 1-(4-氯甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮

将1-(4-羟甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮(8.45g，39.3mmol)、无水DCM(80mL)和三乙胺(7.66ml，55.0mmol)在冰浴中冷却。加入甲磺酰氯(3.95ml，51.0mmol)并在冰浴中搅拌15min。将冰浴除去并在室温继续搅拌过夜。将反应混合物在DCM(100mL)和饱和NH₄Cl水溶液(100mL)之间分配。将水层进一步用DCM(2x 50mL)萃取并将合并的有机物用盐水(50mL)洗涤，用Na₂SO₄干燥，过滤并浓缩，得到1-(4-氯甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮(8.65g，36.6mmol，93％收率)，为淡黄色固体。

[MH]⁺＝234.1

B2. 1-(4-溴甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮

将1-(4-羟甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮(2.30g，6.97mmol)溶解在DCM(250mL)中。向该溶液中加入三溴化磷(5.78g，21.37mmol)。将反应混合物在室温搅拌18小时并用CHCl₃(250mL)稀释。将滤液用饱和NaHCO₃(水溶液)(30mL)、水(30mL)、盐水(30mL)洗涤、干燥(Na₂SO₄)并在真空中蒸发，得到白色固体，其被鉴定为是1-(4-溴甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮(2.90g，10.43mmol，98％)。

[M+H]⁺＝277.7

C.3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯

将碳酸钾(519mg，3.76mmol)加入至3-(甲氧基甲基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯(320mg，1.88mmol；CAS no.318496-66-1(根据WO 2012/009009中所述的方法合成))和1-(4-(氯甲基)苄基)吡啶-2(1H)-酮(527mg，2.26mmol)在DMF(5mL)中的溶液并在60℃加热过夜。将反应混合物用EtOAc(50mL)稀释并用盐水(2x 100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并在真空中还原。将粗产物通过急骤色谱法(40g柱，0-100％EtOAc，在异己烷中)纯化，得到两种区域异构体。收集离开柱的第二种异构体，得到3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯(378mg，1.01mmol，53.7％收率)，为无色胶状物。

[MH]⁺＝368.2

D.3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸

向在THF(5mL)和MeOH(5mL)中的3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯(3.77g，10.26mmol)加入2MNaOH溶液(15.39ml，30.8mmol)并在室温搅拌过夜。加入1M HCl(50mL)并用EtOAc(50mL)萃取。将有机层用盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并在真空中还原，得到3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸(1.22g，3.45mmol，33.6％收率)，为白色粉末。

[MH]⁺＝354.2

G.[4-(4-甲基-吡唑-1-基甲基)-苯基]-甲醇

将4-(氯甲基)苄基醇(5.47g，34.9mmol)溶解在丙酮(50mL)中。加入4-甲基吡唑(2.86g，34.9mmol)和碳酸钾(5.07g，36.7mmol)并将反应混合物在室温搅拌18小时并在60℃搅拌30小时，之后将溶剂在真空中除去并将剩余物置于EtOAc(100mL)中。将该溶液用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，干燥(MgSO₄)并在真空中蒸发。将剩余物通过急骤色谱法(二氧化硅)纯化，洗脱剂梯度为在异己烷中的10至80％EtOAc，将级分合并并在真空中蒸发，得到白色固体，其被鉴定为[4-(4-甲基-吡唑-1-基甲基)-苯基]-甲醇(3.94g，18.90mmol，54％收率)。

[MH]⁺＝203

H.1-(4-氯甲基-苄基)-4-甲基-1H-吡唑

将[4-(4-甲基-吡唑-1-基甲基)-苯基]-甲醇(2.03g，10.04mmol)和三乙胺(1.13g，11.54mmol)溶解在DCM(40mL)中。向该溶液中逐滴加入甲磺酰氯(1.26g，11.04mmol)。将反应混合物在室温搅拌18小时并用CHCl₃(250mL)稀释。将混合物用饱和NH₄Cl(30mL)、水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并在真空中蒸发。将剩余物通过急骤色谱法(二氧化硅)纯化，洗脱剂梯度为在异己烷中的0至60％EtOAc，将级分合并并在真空中蒸发，得到白色固体，其被鉴定为1-(4-氯甲基-苄基)-4-甲基-1H-吡唑(1.49g，6.62mmol，60％收率)。

[MH]⁺＝221，223

M.3-氨基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯

将1-(4-溴甲基-苄基)-1H-吡啶-2-酮(850mg，3.06mmol)溶解在DMF(10mL)中。加入5-氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(522mg，3.36mmol)和碳酸铯(1.99g，6.11mmol)并将反应混合物在50℃搅拌18小时，之后将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释。将该溶液用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并在真空中蒸发。将剩余物通过急骤色谱法(二氧化硅)纯化，洗脱剂梯度为30％石油醚/70％EtOAc至100％EtOAc，得到两种区域异构体。收集离开柱的第二种异构体，得到3-氨基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(480mg，1.36mmol，45％收率)，为白色固体。

[MH]⁺＝353.1

N.3-氨基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸

将3-氨基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(480mg，1.36mmol)溶解在THF(50mL)和水(5mL)中。加入氢氧化锂(163mg，6.81mmol)。将反应混合物在50℃搅拌18小时，之后将挥发物在真空中除去并将含水剩余物用CHCl₃(150mL)洗涤。将水层用1M HCl酸化至pH7并用CHCl₃(3x 50mL)萃取。将合并的萃取物用水(30mL)、盐水(30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并在真空中蒸发，得到白色固体，其被鉴定为3-氨基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸(370mg，1.14mmol，84％收率)。

[MH]⁺＝325.2

P.(2-氟-3-甲氧基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯

将2-氟-3-甲氧基苄腈(500mg，3.31mmol)溶解在甲醇(40mL)中。将该溶液冷却至0℃。加入六水合氯化镍(II)(79mg，0.33mmol)和二碳酸二叔丁酯(1.44g，6.62mmol)，之后分批加入硼氢化钠(876mg，23.16mmol)。将反应混合物搅拌，允许温热至室温并搅拌3天。将MeOH在真空中除去。将剩余物溶解在CHCl₃(150mL)中，用饱和NaHCO₃(水溶液)(50mL)，水(50mL)、盐水(50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并在真空中蒸发。将剩余物通过色谱法(二氧化硅)纯化，洗脱剂20％EtOAc/80％石油醚，得到白色固体，其被鉴定为(2-氟-3-甲氧基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯(540mg，0.2mmol，64％收率)。

[MH]⁺＝255.8

Q.2-氟-3-甲氧基-苄胺盐酸盐

将(2-氟-3-甲氧基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯(600mg，2.35mmol)溶解在4M HCl在二烷(40mL)中。在室温2小时后，将溶剂在真空中除去，得到淡黄色固体，其被鉴定为2-氟-3-甲氧基-苄胺盐酸盐(414mg，2.17mmol，92％收率)。

[MH]⁺＝155.9

T.3-氨基吡唑-1，4-二甲酸1-叔丁基4-乙酯

向在DCM(10mL)中的5-氨基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(250mg，1.61mmol)加入二碳酸二叔丁酯(352mg，1.61mmol)和二异丙基乙胺(702μL，521mg，4.03mmol)并将反应在室温搅拌过夜。将反应混合物用DCM稀释，加入水，分离，用盐水洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。急骤色谱法得到3-氨基吡唑-1，4-二甲酸1-叔丁基4-乙酯，为白色固体(122mg，30％收率)。

[MH]⁺＝256.2

U.3-乙酰胺基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯

将3-氨基吡唑-1，4-二甲酸1-叔丁基4-乙酯和乙酰氯的混合物在0℃搅拌然后在回流加热2小时。将过量的乙酰氯在真空中除去。加入水并将所得的混合物在室温搅拌18小时。将沉淀通过真空过滤收集并干燥，得到3-乙酰胺基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯，为白色固体(46mg)。将含水滤液用DCM(4x 15mL)萃取并将合并的有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩，得到另一批的3-乙酰胺基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(48mg)(总收率94mg，99％)。

[MH]⁺＝197.8

V.5-二甲基氨基-1H-吡唑-4-甲酸酯

将5-氨基-1H-吡唑-4-甲酸酯(1.0g，6.45mmol)溶解在甲醇(200mL)中并将溶液用氮气吹扫。加入甲醛(37重量％，4.5mL，21.18mmol)，之后加入10％Pd/C(1.0g)。将反应混合物在Parr氢化器上在10psi振荡18小时。将反应混合物通过硅藻土过滤以除去催化剂并将剩余物用甲醇(200mL)和水(20mL)洗涤。将合并的滤液在真空中蒸发。将粗制剩余物与甲醇/二***一起研磨并将滤液浓缩，得到无色油状物，其被鉴定为是标题化合物(1.1g，6.00mmol，93％收率)。

[MH]⁺＝183.7

实施例1

N-(3，5-二甲氧基苄基)-3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基) 苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺

向3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸(80mg，0.226mmol)、(3，5-二甲氧基苯基)甲胺(45.4mg，0.272mmol)和HATU(95mg，0.249mmol)在无水DCM(1.5mL)和无水DMF(0.3mL)中的混合物中加入N，N-二异丙基乙胺(99μl，0.566mmol)并将混合物在室温搅拌过夜。将反应在真空中浓缩并将剩余物通过急骤色谱法纯化，上样在DCM中，用1至10％MeOH(含0.3％NH₃)/DCM的梯度洗脱，得到胶状物。将其溶解在乙腈(0.5mL)中并加入水(3mL)，形成沉淀。将其超声处理，然后过滤并在真空下干燥，得到N-(3，5-二甲氧基苄基)-3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酰胺(76mg，0.150mmol，66.1％收率)，为粘性淡黄色固体。

NMR(d6-DMSO)δ：3.20(3H，s)，3.71(6H，s)，4.32(2H，d，J＝5.8Hz)，4.53(2H，s)，5.07(2H，s)，5.28(2H，s)，6.22(1H，td，J＝6.7，1.4Hz)，6.37(1H，t，J＝2.3Hz)，6.40(1H，dd，J＝9.2，1.4Hz)，6.44(2H，d，J＝2.3Hz)，7.20-7.29(4H，m)，7.41(1H，ddd，J＝9.1，6.6，2.1Hz)，7.76(1H，dd，J＝6.8，2.1Hz)，8.24(1H，s)，8.32(1H，t，J＝5.9Hz)。

[MH]⁺＝503.3

实施例2

3-氨基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸2-氟-3-甲氧 基-苯甲酰胺

将3-氨基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸(75mg，0.23mmol)溶解在DCM(20mL)和DMF(1ml)中。将该溶液冷却至0℃。加入2-氟-3-甲氧基-苄胺盐酸盐(53mg，0.28mmol)，之后加入HOBt(34mg，0.25mmol)和三乙胺(70mg，0.69mmol)。然后加入水溶性碳二亚胺(53mg，0.28mmol)。将反应混合物搅拌，允许温热至室温并搅拌3天。将混合物用氯仿(200mL)稀释并用NaHCO₃(水溶液)(50mL)、水(50mL)和盐水(50mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并在真空中蒸发。将剩余物通过急骤色谱法(二氧化硅)纯化，洗脱剂4％MeOH/96％CHCl₃，得到白色固体，其被鉴定为3-氨基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺(92mg，0.20mmol，86％收率)。

[MH]⁺＝462.2

¹H NMR：(d6-DMSO)δ：3.82(3H，s)，4.36(2H，d，J＝5.7Hz)，5.04(2H，s)，5.07(2H，s)，5.38(2H，s)，6.21-6.24(1H，m)，6.39(1H，t，J＝0.7Hz)，6.86-6.87(1H，m)，7.04-7.07(2H，m)，7.20(2H，d，J＝8.1Hz)，7.26(2H，d，J＝8.1Hz)，7.39-7.43(1H，m)，7.76(1H，dd，J＝6.6，1.6Hz)，8.00(1H，s)，8.27(1H，t，J＝5.9Hz)。

实施例3

1-(7-氯-喹啉-3-基甲基)-3-甲氧基甲基-1H-吡唑-4-甲酸2-氟-3-甲氧基-苯甲 酰胺

(7-氯-喹啉-3-基)-甲醇

将7-氯喹啉-3-甲酸(500mg，2.4mmol)溶解在无水THF(20mL)中并冷却至-20℃。向该溶液加入三乙胺(1.0mL，7.23mmol)和氯甲酸异丁酯(0.38mL，2.9mmol)。将反应混合物在-20℃搅拌20min然后在0℃倒入硼氢化钠(731mg，19mmol)在水(2mL)中的溶液中。使反应混合物温热至室温并搅拌18小时。将混合物用EtOAc(50mL)稀释并分离各层。将有机层用水(20mL)、盐水(20mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中蒸发，得到黄色固体。将该固体通过在二氧化硅上的色谱法进行纯化，用EtOAc/石油醚洗脱，得到(7-氯-喹啉-3-基)-甲醇，为灰白色固体，134mg，29％收率。

[MH]⁺＝194.1

3-溴甲基-7-氯-喹啉

将(7-氯-喹啉-3-基)-甲醇(134mg，0.692mmol)溶解在DCM(5mL)中。加入PBr₃(65μL，0.692mmol)并将反应在室温搅拌3小时。在完成后，将反应混合物用稀NaHCO₃(水溶液)(10mL)猝灭。分离各层并将有机物用水(10mL)和盐水(10mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩，得到黄色固体，其被鉴定为3-溴甲基-7-氯-喹啉(78mg，44％收率)。

[MH]⁺＝257.6

1-(7-氯-喹啉-3-基甲基)-3-甲氧基甲基-1H-吡唑-4-甲酸甲酯

将3-(甲氧基甲基)-1H-吡唑-4-甲酸甲酯(51mg，0.304mmol；CAS no.318496-66-1(根据WO 2012/009009中所述的方法合成))置于DMF(2mL)中并用碳酸钾(84mg，0.608mmol)和3-溴甲基-7-氯-喹啉(78mg，0.304mmol)处理。将反应在室温搅拌过夜。加入EtOAc(60mL)和水(20mL)并分离各层。将有机层用水(3x 10mL)、盐水(10mL)洗涤，干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中蒸发。将剩余物通过色谱法纯化，用EtOAc/石油醚洗脱，得到两种异构体产物。流动更快的产物被鉴定为是非所需的区域异构体。流动较慢的产物得到黄色油状物并被鉴定为是1-(7-氯-喹啉-3-基甲基)-3-甲氧基甲基-1H-吡唑-4-甲酸甲酯(53mg，50％收率)。

[MH]⁺＝345.8

1-(7-氯-喹啉-3-基甲基)-3-甲氧基甲基-1H-吡唑-4-甲酸

向在乙醇(10mL)中的1-(7-氯-喹啉-3-基甲基)-3-甲氧基甲基-1H-吡唑-4-甲酸甲酯(53mg，0.153mmol)中加入氢氧化钠(61mg，1.53mmol)并将反应在剧烈回流下加热4.5小时。将混合物冷却并在真空中浓缩。将剩余物用水(5mL)稀释，用2M HCl调节至pH 3.6并用90％氯仿/10％异丙醇(6x 15mL)萃取。将合并的有机层干燥(Na₂SO₄)，过滤并在真空中浓缩，得到1-(7-氯-喹啉-3-基甲基)-3-甲氧基甲基-1H-吡唑-4-甲酸，为淡黄色固体(50mg，98％收率)。

[MH]⁺＝332

1-(7-氯-喹啉-3-基甲基)-3-甲氧基甲基-1H-吡唑-4-甲酸2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺

在0℃将1-(7-氯-喹啉-3-基甲基)-3-甲氧基甲基-1H-吡唑-4-甲酸(25mg，0.075mmol)置于DCM(5mL)中。向该溶液中加入三乙胺(52μL，0.377mmol)、HOBt(12mg，0.09mmol)和水溶性碳二亚胺(20mg，0.106mmol)。15min后，加入2-氟-3-甲氧基-苄胺盐酸盐(14mg，0.075mmol)并使反应温热至室温并搅拌过周末。将反应用CHCl₃(50ml)稀释并用饱和NaHCO₃水溶液(20ml)洗涤，之后用水(20mL)和盐水(20mL)洗涤。将有机层干燥(MgSO₄)，过滤并在真空中浓缩。将粗产物通过色谱法纯化，用6％甲醇/94％DCM洗脱，得到白色固体(16mg，45％收率)，其被鉴定为是1-(7-氯-喹啉-3-基甲基)-3-甲氧基甲基-1H-吡唑-4-甲酸2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺。

[MH]⁺＝469

1H NMR(DMSO)：3.20(3H，s)，3.82(3H，s)，4.41(2H，d，J＝5.8Hz)，4.54(2H，s)，5.57(2H，s)，6.87-6.91(1H，m)，7.03-7.09(2H，m)，7.67(1H，dd，J＝8.8，2.1Hz)，8.07(1H，d，J＝8.8Hz)，8.10(1H，d，J＝1.9Hz)，8.30(1H，d，J＝1.7Hz)，8.37(1H，s)，8.39(1H，t，J＝5.8Hz)，8.92(1H，d，J＝2.2Hz)

实施例41

3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-甲腈

向大的微波瓶，将氰基铜(1.304g，14.56mmol)加入至2-溴-3-氟-4-甲氧基吡啶(1g，4.85mmol)在DMF(5mL)中的溶液。将反应瓶密封并加热至100℃达16小时。将反应混合物用水(20mL)和EtOAc(20mL)稀释。对稠的悬浮液进行超声处理并需要额外的水(40mL)和EtOAc(2x 50mL)，利用超声处理破碎沉淀的固体。将合并的层通过硅藻土塞过滤并将有机层分离，用盐水(50mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并将溶剂在减压下除去，得到浅绿色固体，其被鉴定为所需的化合物3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-甲腈(100mg，0.578mmol，12％收率)。

(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯

将3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-甲腈(100mg，0.578mmol)溶解在无水甲醇(10mL，247mmol)中并加入六水合氯化镍(14mg，0.058mmol)，之后加入二碳酸二叔丁酯(255mg，1.157mmol)。将所得的浅绿色溶液在冰盐浴中冷却至-5℃然后分批加入硼氢化钠(153mg，4.05mmol)，将反应温度保持在～0℃。将深褐色溶液在0℃搅拌并缓慢地允许温热至室温然后在室温搅拌3小时。将反应混合物在40℃蒸发至干燥，得到黑色剩余物，将所述剩余物用DCM(10mL)稀释并用碳酸氢钠(10mL)洗涤。因此形成乳剂，将有机物经由相分离柱分离并浓缩。将粗制液体通过色谱法纯化，用EtOAc/异己烷洗脱，得到标题化合物(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯，为清澈黄色油状物(108mg，62％收率)。

[MH]⁺＝257

C-(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基)-甲胺盐酸盐

将(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基甲基)-氨基甲酸叔丁酯(108mg，0.358mmol)置于异丙醇(1mL)中，然后在室温加入HCl(6N，在异丙醇中)(1mL，0.578mmol)，并且在40℃搅拌2小时。将反应混合物在减压下浓缩，然后与***一起研磨，超声处理，然后倾析，得到奶油色固体(75mg，55％收率)，其被鉴定为是C-(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基)-甲胺盐酸盐。

[MH]⁺＝157

3-甲氧基甲基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基甲基)-酰胺

将3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸(75mg，0.212mmol)、C-(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基)-甲胺盐酸盐(49mg，0.212mmol)和HATU(89mg，0.233mmol)悬浮在无水DCM(3mL)中，向其中加入三乙胺(177μL，1.270mmol)，超声处理然后在室温搅拌4小时。在减压下除去溶剂并将所得的剩余物用氯化铵溶液(5mL)猝灭。产生灰白色固体，将其超声处理，在减压下过滤，用水洗涤，然后置于真空炉中在40℃过夜。将粗制物料通过色谱法纯化，用(1％氨-甲醇)/DCM洗脱，得到3-甲氧基甲基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸(3-氟-4-甲氧基-吡啶-2-基甲基)-酰胺，为白色固体(67mg，64％收率)

[MH]⁺＝492

NMR(d⁶-DMSO)δ：3.25(3H，s)，3.92(3H，s)，4.46-4.57(4H，m)，5.07(2H，s)，5.28(2H，s)，6.22(1H，td，J＝1.4，6.7Hz)，6.39(1H，ddd，J＝0.7，1.4，9.2Hz)，7.17-7.28(5H，m)，7.41(1H，ddd，J＝2.1，6.6，8.9Hz)，7.75(1H，ddd，J＝0.7，2.1，6.8Hz)，8.21-8.29(2H，m)，8.42(1H，t，J＝5.4Hz)

实施例77

6-溴-2-氟-3-甲氧基-苯甲酸

在室温向2-氟-3-甲氧基苯甲酸(10g，58.8mmol)在乙酸(50mL)和水(50mL)中的悬浮液中逐滴加入溴(6.06mL，118mmol)。然后将反应加热至60℃达1小时。将反应冷却至室温并将白色沉淀过滤。将固体用水(200mL)和异己烷(50mL)洗涤，得到6-溴-2-氟-3-甲氧基-苯甲酸，为白色固体，12.098g，82％收率。

[MH]⁺＝249/251

(6-溴-2-氟-3-甲氧基-苯基)-甲醇

向6-溴-2-氟-3-甲氧基-苯甲酸(4.13g，16.58mmol)在THF(20mL)中的经搅拌的溶液中加入4-甲基吗啉(1.914mL，17.41mmol)，然后加入氯甲酸异丁酯(2.15mL，16.58mmol)。1小时后，将反应混合物过滤以除去产生的任何盐，将固体用另外的THF(10mL)洗涤。将滤液和洗液合并并在冰浴中冷却至0℃，然后一次性加入在冷水(10mL)中的NaBH₄(0.659g，17.41mmol)(气体溢出)，然后使其温热至室温并搅拌2小时。通过小心加入1MHCl(30mL)直至获得酸性pH来猝灭反应混合物。将产物萃取到二***(150mL)中。然后将有机层用2MNaOH(2x 100mL)洗涤以除去起始的羧酸，然后通过用1M HCl(100mL)洗涤酸化，之后用盐水(100mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并在真空中除去溶剂。将粗产物通过色谱法纯化，用0-50％EtOAc/异己烷洗脱，得到(6-溴-2-氟-3-甲氧基-苯基)-甲醇，为无色油状物，1.37g，50％收率。

[MH]⁺＝217/219

1-溴-2-氯甲基-3-氟-4-甲氧基-苯

将(6-溴-2-氟-3-甲氧基-苯基)-甲醇(500mg，2.127mmol)在无水DCM(4mL)中的溶液用三乙胺(415μL，2.98mmol)处理，之后用甲磺酰氯(214μL，2.77mmol)处理。将混合物在环境温度搅拌过夜。将反应混合物在DCM(50mL)和饱和NH₄Cl水溶液(40mL)之间分配。收集有机层并将水层进一步用DCM(40mL)萃取。将合并的有机物用水(40mL)、盐水(40mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩。将粗制物料通过色谱法纯化，用0至30％EtOAc/异己烷的梯度洗脱，得到1-溴-2-氯甲基-3-氟-4-甲氧基-苯(468mg，86％收率)，为白色固体。

2-(6-溴-2-氟-3-甲氧基-苄基)-异吲哚-1，3-二酮

向1-溴-2-氯甲基-3-氟-4-甲氧基-苯(460mg，1.815mmol)在无水DMF(5mL)中的溶液中加入酞酰亚胺钾(403mg，2.178mmol)，并将混合物在90℃加热过夜。将混合物用EtOAc(75mL)稀释并用水(3x 35mL)、盐水(35mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)，过滤并浓缩至黄色固体。将粗制物料通过急骤色谱法纯化，用0至50％EtOAc/异己烷的梯度洗脱。分离所需产物2-(6-溴-2-氟-3-甲氧基-苄基)-异吲哚-1，3-二酮，为白色针状物，372mg，56％收率。

[MH]⁺＝364.0/366.0

6-溴-2-氟-3-甲氧基-苄胺

将2-(6-溴-2-氟-3-甲氧基-苄基)-异吲哚-1，3-二酮(0.368g，1.011mmol)在甲醇(7.5mL)中的悬浮液用水合肼(0.064mL，1.314mmol)处理，并将反应混合物在回流下加热5小时。将粗制混合物直接上样到SCX柱(8g)上，用MeOH洗涤并用1％NH₃/MeOH洗脱，得到6-溴-2-氟-3-甲氧基-苄胺(204mg，85％收率)，为黄色油状物。

[MH]⁺＝233.9/235.9

3-甲氧基甲基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸6-溴-2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺

在25mL烧瓶中装入3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸(130mg，0.368mmol)、(6-溴-2-氟-3-甲氧基-苄胺(86mg，0.368mmol)、HATU(154mg，0.405mmol)、无水DCM(3mL)和无水DMF(0.5mL)。加入N，N-二异丙基乙胺(160μL，0.920mmol)并将混合物在环境温度搅拌过夜。将反应在真空下浓缩并重新溶解在MeOH(4mL)中，然后通过SCX纯化，用MeOH洗涤，用1％NH₃/MeOH洗脱。将剩余物进一步通过色谱法纯化，用0至10％MeOH(含0.3％NH₃)/DCM的梯度洗脱，得到3-甲氧基甲基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸6-溴-2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺(191mg，89％收率)，为白色泡沫状物。

[MH]⁺＝569.2/571.2

3-甲氧基甲基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸6-氰基-2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺

向二氰基锌(24.13mg，0.205mmol)和3-甲氧基甲基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸6-溴-2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺(90mg，0.158mmol)在二甲基乙酰胺(1.2mL)中的脱气溶液中加入四(三苯基膦)钯(0)(18.26mg，0.016mmol)并将混合物加热至110℃过夜。将混合物通过色谱法纯化，用0至10％(0.3％NH₃/MeOH)/DCM的梯度洗脱，得到3-甲氧基甲基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸6-氰基-2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺，为淡黄色泡沫状物，21mg，25％收率。

[MH]⁺＝516.3

¹H NMR(d⁶-DMSO)δ：3.21(3H，s)，3.92(3H，s)，4.47-4.55(4H，m)，5.06(2H，s)，5.27(2H，s)，6.21(1H，td，J＝6.7，1.4Hz)，6.39(1H，d，J＝9.1Hz)，7.17-7.31(5H，m)，7.40(1H，ddd，J＝8.9，6.6，2.1Hz)，7.67(1H，dd，J＝8.6，1.5Hz)，7.75(1H，dd，J＝6.8，2.1Hz)，8.20(1H，s)，8.40(1H，t，J＝5.2Hz)

实施例83

2-氯-3-氟-6-甲氧基-苯甲醛

向装有甲醇(8mL，198mmol)的冰-盐冷却的烧瓶中缓慢加入氢化钠(1.318g，33.0mmol)。完成添加后，将冷却浴除去，然后允许温热至室温。在第二容器(250mL烧瓶)中，将2-氯-3，6-二氟苯甲醛(5g，27.5mmol)溶解在无水甲醇(60mL，1483mmol)和THF(25mL，305mmol)的混合物中并温热至60℃。同时，在60℃将甲醇钠溶液缓慢加入至反应混合物。完成添加后，将反应混合物在60℃加热过夜。在减压下除去溶剂，得到淡黄色固体，将所述固体用水(100mL)猝灭，超声处理然后搅拌30min。将所得的黄色固体过滤，用水洗涤，然后在减压下干燥，之后转移至真空烘箱在40℃过夜。将粗制物料通过色谱法纯化，用EtOAc/异己烷洗脱，得到所需化合物2-氯-3-氟-6-甲氧基-苯甲醛，为灰白色固体，3.19g，61％收率。

[MH]⁺＝189/191

2-氯-3-二氟甲基-1-氟-4-甲氧基-苯

在充有氮的气球下将2-氯-3-氟-6-甲氧基-苯甲醛(2g，10.61mmol)溶解在无水DCM(30mL，466mmol)中并在盐-冰浴中冷却。向该溶液中逐滴加入二乙基氨基三氟化硫(4.20mL，31.8mmol)以形成黄色溶液。将反应在0℃搅拌5min，然后除去冷却浴，并允许反应温热至室温过夜。将反应混合物缓慢猝灭到饱和碳酸氢钠(100mL)中，将有机层分离，用盐水(100mL)洗涤并使用相分离柱干燥。在减压下除去溶剂，得到橙色油状物，将其通过色谱法纯化，用EtOAc/异己烷洗脱。分离2-氯-3-二氟甲基-1-氟-4-甲氧基-苯(1.0g，43％收率)，为淡黄色油状物，其在静置后固化。

2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苄腈

将2-氯-3-二氟甲基-1-氟-4-甲氧基-苯(1g，4.75mmol)溶解在无水二甲基乙酰胺(7mL，74.7mmol)中，向其中加入二氰基锌(0.558g，4.75mmol)。将氮气鼓泡到反应混合物中达20min，然后加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.087g，0.095mmol)和[1，1’二(二苯基膦基)二茂铁]二氯钯(II)络合物以及二氯甲烷(0.139g，0.190mmol)。将反应混合物在150℃在氮气氛下加热过夜。将反应混合物猝灭到水(100mL)中，然后用EtOAc(3x 200mL)萃取。将合并的有机物用盐水(3x 200mL)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并在减压下蒸发，得到深褐色油状物。将粗产物通过色谱法纯化，用EtOAc/异己烷洗脱，得到2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苄腈(182mg，17％收率)，为褐色固体。

[MH]⁺＝202.1

(2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯

将2-(二氟甲基)-6-氟-3-甲氧基-苄腈(182mg，0.778mmol)溶解在无水甲醇(5mL，124mmol)中，向其中加入六水合氯化镍(19mg，0.078mmol)，之后加入二碳酸二叔丁酯(343mg，1.556mmol)。将所得的浅绿色溶液在冰-盐浴中冷却至-5℃，然后分批加入硼氢化钠(206mg，5.45mmol)，将反应温度保持在～0℃。将深褐色溶液在0℃搅拌并缓慢温热至室温过夜。在减压下除去溶剂然后在DCM(10mL)和水(10mL)之间分配。将水层用DCM(2x 10mL)再萃取。将合并的有机物用盐水(10mL)洗涤，使用相分离筒干燥并在真空中浓缩。将粗产物通过色谱法纯化，用EtOAc/异己烷洗脱，得到(2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯，为白色蜡状固体(158mg，63％收率)。

[MNa]⁺＝328

2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苄胺盐酸盐

将(2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苄基)-氨基甲酸叔丁酯(158mg，0.492mmol)置于异丙醇(1mL)中，然后加入HCl(6N，在异丙醇中)(1mL，0.778mmol)并在40℃搅拌1小时。形成灰白色沉淀并经由真空过滤收集，并用异丙醇(1mL)洗涤，得到所需产物2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苄胺盐酸盐，为灰白色固体(43mg，22％收率)。

[MH]⁺＝206

3-甲氧基甲基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺

将3-(甲氧基甲基)-1-(4-((2-氧代吡啶-1(2H)-基)甲基)苄基)-1H-吡唑-4-甲酸(58mg，0.162mmol)、2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苄胺盐酸盐(40.2mg，0.163mmol)和HATU(68.3mg，0.180mmol)悬浮在无水DCM(3mL)中，向其中加入三乙胺(91μL，0.653mmol)，超声处理，然后在室温搅拌3小时。在减压下除去溶剂并将剩余物用氯化铵溶液(5mL)猝灭，产生浅褐色固体，将其在室温搅拌过周末。将固体在减压下过滤，用水洗涤，在减压下干燥，然后置于干燥器中在50℃达3小时。分离所需产物3-，乙氧基甲基-1-[4-(2-氧代-2H-吡啶-1-基甲基)-苄基]-1H-吡唑-4-甲酸2-二氟甲基-6-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺(74mg，83％收率)，为自由流动的奶油状固体。

[MH]⁺＝541.2

NMR(d⁶-DMSO)δ3.12(3H，s)，3.83(3H，s)，4.43(2H，s)，4.52-4.59(2H，m)，5.05(2H，s)，5.25(2H，s)，6.21(1H，td，J＝1.4，6.7Hz)，6.39(1H，dt，J＝1.0，9.2Hz)，7.15-7.44(8H，m)，7.75(1H，ddd，J＝0.7，2.1，6.8Hz)，8.08(1H，t，J＝4.9Hz)，8.22(1H，s)

实施例126

5-溴甲基-2-氟-吡啶

将2-氟-5-甲基吡啶(5.0g，45mmol)溶解在1，2-二氯乙烷(120mL)中。向该溶液中加入N-溴琥珀酰亚胺(9.61g，54mmol)和偶氮二异丁腈(739mg，4.5mmol)。将反应在回流(95℃)搅拌5小时然后将反应冷却至室温。将反应混合物用CHCl₃(50mL)稀释并用饱和NaHCO₃(1x 20mL)、水(1x 20mL)洗涤，之后用盐水(1x 20mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并通过PS纸过滤并在真空中蒸发。将剩余物通过色谱法(二氧化硅)纯化，用10％EtOAc，90％石油醚洗脱，得到无色油状物，其被鉴定为是5-溴甲基-2-氟-吡啶，5.9g，69％收率。

[MH]⁺＝191.76

NMR(CDCl3)：4.46(2H，s)，6.93(1H，dd，J＝8.4，3.0Hz)，7.84(1H，td，J＝7.8，2.6Hz)，8.23(1H，d，J＝2.2Hz)

1-(6-氟-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯

将3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(1.57g，7.53mmol)溶解在DMF(20mL)中，加入5-溴甲基-2-氟-吡啶(1.3g，6.84mmol)和碳酸铯(6.69g，20.53mmol)。将反应混合物在50℃搅拌18小时，之后将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释，将该溶液用水(1x 30mL)、盐水(1x30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并通过PS纸过滤并在真空中蒸发。将剩余物通过色谱法(二氧化硅)纯化，用85％石油醚、15％EtOAc洗脱，得到白色泡沫状固体(1.26g，58％收率)，其被鉴定为是1-(6-氟-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯。

[MMeCN]⁺＝358.75

1-(6-氟-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸

将1-(6-氟-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸乙酯(1.26g，3.97mmol)溶解在THF(50mL)和水(5mL)中，然后加入氢氧化锂(476mg，19.86mmol)。将反应混合物在50℃搅拌18小时，之后将溶剂在真空中浓缩并将剩余物置于EtOAc(50mL)中。萃取水层并用1M HCl酸化至pH2并用CHCl₃(3x 50mL)萃取。将合并的萃取物用水(1x 30mL)洗涤，之后用盐水(1x 30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并通过PS纸过滤并在真空中蒸发。将剩余物通过色谱法(二氧化硅)纯化，用3％MeOH，97％CHCl₃洗脱，得到无色油状物，其被鉴定为是1-(6-氟-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸，946mg，82％收率。

[MH]⁺＝289.82

1-(6-吡咯烷-1-基-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸

将1-(6-氟-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸(300mg，1.04mmol)溶解在二烷(25mL)和吡咯烷(2mL)中，并将反应混合物在80℃搅拌18小时。完成后，将反应混合物用EtOAc(100mL)稀释，将该溶液用水(1x 30mL)、盐水(1x 30mL)洗涤，干燥(Na₂SO₄)并通过PS纸过滤并在真空中蒸发。将剩余物通过色谱法纯化，用1％AcOH，9％MeOH，90％CHCl₃洗脱，得到白色泡沫状固体(267mg，76％收率)，其被鉴定为是1-(6-吡咯烷-1-基-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸。

MH]⁺＝340.72

1-(6-吡咯烷-1-基-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺

在0℃将2-氟-3-甲氧基-苄胺盐酸盐(56mg，0.294mmol)和1-(6-吡咯烷-1-基-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸(100mg，0.294mmol)合并并置于DCM(10mL)中。向该溶液中加入HOBt(48mg，0.353mmol)、三乙胺(205μL，1.469mmol)和水溶性碳二亚胺(79mg，0.411mmol)。使反应温热至室温并搅拌3天。将反应用CHCl₃(50mL)稀释并加入饱和NaHCO₃水溶液(20mL)。将有机层分离，干燥(MgSO₄)，过滤并浓缩。将粗产物通过色谱法纯化，用MeOH/DCM洗脱，得到所需产物1-(6-吡咯烷-1-基-吡啶-3-基甲基)-3-三氟甲基-1H-吡唑-4-甲酸2-氟-3-甲氧基-苯甲酰胺，为白色固体，95mg，68％收率。

[MH]⁺＝478.0

¹H NMR(DMSO)δ：1.90-1.94(4H，m)，3.31-3.37(4H，m)，3.82(3H，s)，4.39(2H，d，J＝5.6Hz)，5.26(2H，s)，6.44(1H，d，J＝8.6Hz)，6.85-6.90(1H，m)，7.03-7.10(2H，m)，7.50(1H，dd，J＝8.8，2.4Hz)，8.14(1H，d，J＝2.3Hz)，8.36(1H，d，J＝0.6Hz)，8.74(1H，t，J＝5.8Hz)

表1

表2

实施例编号	R14	R15	游离碱MW	[M+H]<sup>+</sup>
					29	F	H	472.4	472.9
30	H	Cl	488.9	488.9

表3

表4

实施例编号	R14	R15	R17	游离碱MW	[M+H]<sup>+</sup>
						40	H	H	OMe	473.5	474.0
41	F	OMe	H	491.5	492.0
						42	F	H	OMe	491.5	492.3

表5

实施例编号	R14	R16	游离碱MW
				43	Cl	H	483.0
44	Cl	Me	497.0

表6

表7

表8

表9

表10

表11

实施例编号	T	游离碱MW	[M+H]<sup>+</sup>
				139	Me	519.0	519.1
140	H	505.0	505.1

表12：化合物名称

表13：实施例的NMR数据(溶剂d6 DMSO)

生物学方法

式(I)化合物抑制血浆激肽释放酶的能力可以使用以下生物学测定确定：

血浆激肽释放酶的IC₅₀的确定

血浆激肽释放酶体外抑制活性使用标准公开的方法确定(参见例如Johansen等，Int.J.Tiss.Reac.1986，8，185；Shori等，Biochem.Pharmacol.，1992，43，1209；Stürzebecher等，Biol.Chem.Hoppe-Seyler，1992，373，1025)。人血浆激肽释放酶(Protogen)在25℃与荧光底物H-DPro-Phe-Arg-AFC和各种浓度的试验化合物温育。残留的酶活性(初始反应速率)通过测量在410nm的光学吸光度的变化确定并且确定试验化合物的IC₅₀值。

从这些测定获得的数据显示在表14中：

对于针对相关酶KLK1的抑制活性进一步筛选所选的化合物。式(I)化合物抑制KLK1的能力可以使用以下生物学测定确定：

对于KLK1的IC₅₀的确定

体外KLK1抑制活性使用标准公开的方法确定(参见例如Johansen等，Iht.J.Tiss.Reac.1986，8，185；Shori等，Biochem.Pharmacol.，1992，43，1209；Stürzebecher等，Biol.Chem.Hoppe-Seyler，1992，373，1025)。人KLK1(Callbiochem)在25℃与荧光底物H-DVal-Leu-Arg-AFC和各种浓度的试验化合物温育。残留酶活性(初始反应速率)通过测量在410nm的光学吸光度的变化确定并确定试验化合物的IC₅₀值。

从此测定获得的数据显示在表14中：

对于针对相关酶FXIa的抑制活性进一步筛选所选的化合物。式(I)的化合物抑制FXIa的能力可以使用以下生物学测定确定：

确定对FXIa的％抑制

体外FXIa抑制活性使用标准公开的方法确定(参见例如Johansen等，Int.J.Tiss.Reac.1986，8，185；Shori等，Biochem.Pharmacol.，1992，43，1209；Stürzebecher等，Biol.Chem.Hoppe-Seyler，1992，373，1025)。将人FXIa(Enzyme ResearchLaboratories)在25℃与荧光底物Z-Gly-Pro-Arg-AFC和40μM的测试化合物一起温育。残留酶活性(初始反应速率)通过测量在410nm的光吸收的变化来确定。

从此测定获得的数据显示在表14中。

表14

药物动力学

在雄性Sprague-Dawley大鼠中的单个口服剂量后，进行表15中的化合物的药物动力学研究以评估药物动力学。给予两只大鼠5mL/kg的标称2mg/mL(10mg/kg)在赋形剂中的测试化合物的组合物的单次口服剂量。在用药后，收集24小时内的血液样品。取样时间为5、15和30分钟，然后是1、2、4、6、8和12小时。在收集后，将血液样品离心并通过LCMS分析血浆级分中的测试化合物浓度。从这些研究获得的口服暴露数据在以下显示：

表15：口服暴露数据