阅读说明：本技术 抑制肿瘤生长的CHK1(SRA737)/PARPi组合方法 (CHK1(SRA737)/PARPi combined method for inhibiting tumor growth ) 是由 C·A·哈西格 B·W·斯特劳斯 R·J·汉森 K·L·安德雷斯 于 2018-04-10 设计创作，主要内容包括：本文公开了可用于抑制肿瘤(诸如癌症患者中的肿瘤)生长的关卡激酶1(Chk1)抑制剂和PARP抑制剂的组合。具体地,该组合对作为肿瘤的代表性模型的癌细胞表现出显著的协同效果。还提供了用于治疗由Chk1和/或PARP活性介导或影响的病症或疾病的方法。(Disclosed herein are combinations of checkpoint kinase 1(Chk1) inhibitors and PARP inhibitors useful for inhibiting the growth of tumors, such as tumors in cancer patients. In particular, the combination showed a significant synergistic effect on cancer cells as a representative model of tumors. Also provided are methods for treating a disorder or disease mediated or affected by Chk1 and/or PARP activity.)

抑制肿瘤生长的CHK1(SRA737)/PARPi组合方法

相关申请的交叉引用

本申请要求于2017年4月10日提交的美国临时申请第62/483,888号、于2017年8月30日提交的美国临时申请第62/552,364号、于2018年1月05日提交的美国临时申请第62/614,268号、于2018年2月26日提交的美国临时申请第62/635,394号以及于2018年3月29日提交的美国临时申请第62/650,185号的权益，其全部内容均通过引用方式并入本文中。

技术领域

本发明涉及抑制肿瘤生产的方法、组合物和试剂盒。特别地，本文公开了可用于抑制肿瘤生长(例如与癌症相关的肿瘤生长)的药物组合物、试剂盒和方法的关卡激酶1(Chk1)抑制剂和聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂的组合。

背景技术

当DNA受损时，细胞激活信号转导途径。信号激活细胞周期机制以诱导DNA修复和/或细胞死亡，以缓解增殖。关卡激酶1(Chk1)是细胞中检测DNA损伤时的重要桥梁。参见《癌症生物学与治疗(Cancer Biology&Therapy)》(2004)3:3,305-313，其通过引用方式并入本文中。Chk1在调节多种多样的细胞功能中发挥作用，包括免疫和炎症反应、纺锤体形成、DNA损伤信号转导以及通常的细胞凋亡。Chk1抑制剂消除了S和/或G 2/M阶段中的DAN损伤诱发的细胞周期停滞。目前，还没有Chk1抑制剂被批准用于***生长抑制。一种Chk1抑制剂是SRA737。在国际专利申请第PCT/GB2013/05 1233号和美国专利第9,663,503号中描述了SRA737。

发明内容

在一个方面，本文描述了一种抑制有此需要的受试者中肿瘤生长的方法，包括向受试者给药第一有效量的Chk1抑制剂和第二有效量的聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂。在一个方面，本文描述了一种抑制有此需要的受试者中肿瘤生长的方法，包括向受试者给药第一有效量的SRA737和第二有效量的聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂。在一个实施例中，SRA737和PARP抑制剂(PARPi)分开给药。

在一个实施例中，在给药RARPi后至少二十四(24)小时给药SRA737。在一个实施例中，给药SRA737和PARPi；并且随后，间歇给药SRA737和PARPi至少二十四(24)小时。在一个实施例中，以非重叠的每隔一天的时间表给药SRA737和PARPi。在一个实施例中，以非重叠的每3天交替的时间表给药SRA737和PARPi。在一个实施例中，以非重叠的每7天交替的时间表给药SRA737和PARPi。在一个实施例中，PARPi选自由以下组成的组：奥拉帕尼(Olaparib)、卢卡帕尼(Rucaparib)、维利帕尼(Veliparib)、尼拉帕尼(Niraparib)、伊尼帕利(Iniparib)、他拉唑帕尼(Talazoparib)、维利帕尼(Veliparib)、氟唑帕利(Fluzoparib)、BGB-290、CEP-9722、BSI-201、EZ449、PF-01367338、AZD2281、INO-1001、MK-4827、SC10914和3-氨基苄胺。在一个实施例中，PARPi是奥拉帕尼。在一个实施例中，PARPi是尼拉帕尼。在一个实施例中，PARPi是卢卡帕尼。在一个实施例中，PARPi是他拉唑帕尼。

在本文描述的方法的某些实施例中，受试者患有选自由以下组成的组的病状或病症：膀胱癌、乳腺癌、***、结肠直肠癌、胃癌、子宫内膜癌、肝细胞癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、***癌、胰腺癌、脑癌、肉瘤、小细胞肺癌、小细胞肺癌、成神经细胞瘤，头颈癌、转移性去势抵抗性***癌(mCRPC)、HRR机制有效的mCRPC和高级浆液性卵巢癌(HGSOC)。在一个实施例中,受试者患有对化疗治疗有抗性的癌症。在一个实施例中，受试者患有对铂治疗有抗性的癌症。在一个实施例中，受试者患有对PARPi治疗有抗性的癌症。

在本文描述的方法的某些实施例中，受试者患有在参与DNA损伤反应(DDR)的至少一个基因中具有突变的癌症。在某些实施例中，受试者患有在选自由以下组成的组的至少一个基因中具有突变的癌症：BRIP1、HDAC2、ATM、BLM、BRCA1、BRCA2、CHEK2、FANCA、FANCC、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、FANCI、FANCL、FANCM、MLH1、MSH2、MSH6、PALB2、POLD1、POLE、PMS2、POLE、RAD50、RAD51、RAD51B、RAD51C、RAD51D、RAD52、RAD54L、RPA1、SETD2 SMARCA4、TP53BP1、XRCC2、XRCC3、KMT2D和ARID1A。在某些实施例中，受试者患有在REV7、SCHLFN-11或其组合中具有突变或异常表达的癌症。在一个实施例中，受试者患有在BRCA、其它同源重组基因或其组合中不具有突变或异常表达的癌症。在一个实施例中，受试者患有同源重组途径机制有效的癌症。在一个实施例中，受试者患有在BRCA、其它同源重组基因或其组合中具有突变或异常表达的癌症。在一个实施例中，受试者患有在BRCA1或BRCA2中具有逆转突变的癌症。在一个实施例中，受试者患有具有同源重组途径缺陷的癌症。

在本文描述的方法的某些实施例中，给药途径选自由以下组成的组：静脉内给药、皮下给药、经皮给药、口服给药、肌肉给药和腹腔给药。在一个实施例中，第一有效量是0.001mg/kg至15mg/kg，并且第二有效量是0.001mg/kg至15mg/kg。在一个实施例中，第一有效量是0.1mg/kg至1.5mg/kg，并且第二有效量是0.1mg/kg至1.5mg/kg。在一个实施例中，第一有效量是10mg至1000mg。在一个实施例中，受试者中的肿瘤生长减少。在一个实施例中，给药后肿瘤生长减少了至少1％。在一个实施例中，给药后测量，给药导致肿瘤生长不超过原肿瘤体积的5％。在一个实施例中，受试者是人类。

在某些方面，本文描述了减少细胞的细胞增殖的方法，包括使细胞与第一有效量的SRA737和第二有效量的PARPi接触。在某些方面，本文描述了抑制细胞中Chk1活性的方法，该方法包括使细胞与第一有效量的SRA737和第二有效量的PARPi接触。在某些方面，本文描述了抑制细胞中PARP活性的方法，该方法包括使细胞与第一有效量的SRA737和第二有效量的PARPi接触。

在某些实施例中，该细胞是肿瘤细胞。在某些实施例中，该方法在体外进行。在一个实施例中，SRA737和PARPi同时给药。在一个实施例中，SRA737和PARPi顺序给药。在一个实施例中，给药SRA737和PARPi；并且随后，间歇给药SRA737和PARPi至少二十四(24)小时。在一个实施例中，以非重叠的每隔一天的时间表给药SRA737和PARPi。在一个实施例中，以非重叠的每3天交替的时间表给药SRA737和PARPi。在一个实施例中，以非重叠的每7天交替的时间表给药SRA737和PARPi。

在一个方面，本文描述了一种包含SRA737和PARPi的组合。在一个实施例中，PARPi选自由以下组成的组：奥拉帕尼、卢卡帕尼、维利帕尼、尼拉帕尼、伊尼帕利、他拉唑帕尼、维利帕尼、氟唑帕利、BGB-290、CEP-9722、BSI-201、EZ449、PF-01367338、AZD2281、INO-1001、MK-4827、SC10914和3-氨基苄胺。在某些方面，本文描述了一种药物组合物，该药物组合物包括该组合以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。

在某些方面，本文描述了一种SRA737，该SRA737用于通过与PARPi共同给药来抑制有此需要的受试者中的肿瘤生长。在某些方面，本文描述了一种PARPi，该PARPi用于通过与SRA737共同给药来抑制有此需要的受试者中的肿瘤生长。在某些方面，本文描述了一种产品，该产品包括SRA737和PARPi，该SRA737和PARPi同时、分开或顺序地用于抑制有此需要的受试者中的肿瘤生长。在某些方面，本文描述了试剂盒，该试剂盒包括含有SRA737和PARPi的组合、或药物组合物以及使用说明书。在某些方面，本文描述了试剂盒，该试剂盒包括含有SRA737的药物组合物和含有PARPi的药物组合物。

在某些方面，本文描述了抑制有此需要的受试者中的肿瘤生长的方法，包括向受试者给药第一有效量的Chk1抑制剂和第二有效量的聚ADP核糖聚合酶(PARP)抑制剂。在某些实施例中，PARPi选自由以下组成的组：奥拉帕尼、卢卡帕尼、维利帕尼、尼拉帕尼、伊尼帕利、他拉唑帕尼、维利帕尼、氟唑帕利、BGB-290、CEP-9722、BSI-201、EZ449、PF-01367338、AZD2281、INO-1001、MK-4827、SC10914和3-氨基苄胺。在某些实施例中，受试者患有选自由以下组成的组的病状或病症：膀胱癌、乳腺癌、***、结肠直肠癌、胃癌、子宫内膜癌、肝细胞癌、白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、非小细胞肺癌、卵巢癌、***癌、胰腺癌、脑癌、肉瘤、小细胞肺癌、小细胞肺癌、成神经细胞瘤，头颈癌、转移性去势抵抗性***癌(mCRPC)、HRR机制有效的mCRPC和高级浆液性卵巢癌(HGSOC)。在某些实施例中，受试者患有在选自由以下组成的组的至少一个基因中具有突变的癌症：BRIP1、HDAC2、ATM、BLM、BRCA1、BRCA2、CHEK2、FANCA、FANCC、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、FANCI、FANCL、FANCM、MLH1、MSH2、MSH6、PALB2、POLD1、POLE、PMS2、POLE、RAD50、RAD51、RAD51B、RAD51C、RAD51D、RAD52、RAD54L、RPA1、SETD2SMARCA4、TP53BP1、XRCC2、XRCC3、KMT2D和ARID1A。在某些方面，本文公开了一种Chk1抑制剂，该Chk1抑制剂用于通过与PARPi共同给药来抑制有此需要的受试者中的肿瘤生长。在某些方面，本文公开了一种PARPi，该PARPi用于通过与Chk1抑制剂共同给药来抑制有此需要的受试者中的肿瘤生长。在某些方面，本文公开了一种产品，该产品包括Chk1抑制剂和PARPi，该Chk1抑制剂和PARPi同时、分开或顺序地用于抑制有此需要的受试者中的肿瘤生长。在某些方面，本文公开了通过共同给药PARPi在制造用于治疗有此需要的受试者中的肿瘤生长的药物中使用Chk1抑制剂的方法。在某些方面，本文公开了通过共同给药Chk1抑制剂在制造用于治疗有此需要的受试者中的肿瘤生长的药物中使用PARPi的方法。在某些实施例中，Chk1抑制剂选自由普瑞色替(Prexasertib)(LY2606368)、PF-477736、AZD7762、雷布色替(Rabusertib)(LY2603618)、MK-8776(SCH 900776)、CHIR-124、SAR-020106和CCT245737组成的组。在一个实施例中，Chk1抑制剂是普瑞色替(LY2606368)。在一个实施例中，Chk1抑制剂是PF-477736。在一个实施例中，Chk1抑制剂是AZD7762。在一个实施例中，Chk1抑制剂是雷布色替(LY2603618)。在一个实施例中，Chk1抑制剂是MK-8776(SCH900776)。在一个实施例中，Chk1抑制剂是CHIR-124。在一个实施例中，Chk1抑制剂是SAR-020106。在一个实施例中，Chk1抑制剂是CCT245737。

附图说明

参照以下描述和附图，本发明的这些和其它特征、方面和优点将变得更好理解，其中：

图1是用于鉴定与Chk1抑制剂、SRA737(Sierra化合物1或ProNAi化合物1)协同作用的PARPi化合物的实验的剂量方案图。

图2图示用于确定“ProNAi化合物1”(SRA737)和丝裂霉素C的协同作用分数和Loewe体积分数的剂量矩阵、Loewe模型和Loewe超量值。

图3示出具有BMN 673、尼拉帕尼、奥拉帕尼、卢卡帕尼和Sierra化合物1(SRA737)药剂的CAL-27、DU-145、PC-3、HT-29和A673细胞系的单一药剂剂量反应分布图。

图4示出具有BMN 673、尼拉帕尼、奥拉帕尼、卢卡帕尼和Sierra化合物1(SRA737)药剂的BT-474、MDA-MB-231、SK-BR-3、OVCAR-3和OVCAR-5细胞系的单一药剂剂量反应分布图。

图5示出在十种测试细胞系中的单一药剂活性(EC₅₀)、(GI₅₀)和观察到的SRA737最大反应。

图6示出细胞系对Sierra化合物1(SRA737)治疗的敏感性。

图7示出在CAL-27、HT-29和OVCAR-3细胞系中Sierra化合物1(SRA737)单一药剂活性结果与先前研究的比较。

图8示出十种细胞系对BMN 673、奥拉帕尼、尼拉帕尼和卢卡帕尼中每一种的敏感性。

图9图示十种细胞系对BMN 673、奥拉帕尼、尼拉帕尼和卢卡帕尼中每一种的敏感性的聚类分析结果。还使用专有Heat Map工具分析了细胞系板对PARP抑制的总体敏感性。使用反应面积(AUC)作为获得效力和功效的量度。基于4种抑制剂的平均反应面积对细胞系进行分级。

图10示出用“化合物1”(SRA737)和BMN673、尼拉帕尼、奥拉帕尼和卢卡帕尼处理的十种细胞系而获得的协同作用分数和Lowe体积值。

图11示出Sierra化合物1(SRA737)和BMN 673在PC-3细胞、HT-29细胞、DU-145细胞和CAL-27细胞中的组合活性。

图12示出Sierra化合物1(SRA737)和BMN 673在A673细胞、MDA-MB-231细胞、BT474细胞和SK-BR-3细胞中的组合活性。

图13示出Sierra化合物1(SRA737)和BMN 673在OVCAR-3细胞和OVCAR-5细胞中的组合活性。

图14示出Sierra化合物1(SRA737)和尼拉帕尼在PC-3细胞、HT-29细胞、DU-145细胞和CAL-27细胞中的组合活性。

图15示出Sierra化合物1(SRA737)和尼拉帕尼在A673细胞、MDA-MB-231细胞、BT474细胞和SK-BR-3细胞中的组合活性。

图16示出Sierra化合物1(SRA737)和尼拉帕尼在OVCAR-3细胞和OVCAR-5细胞中的组合活性。

图17示出Sierra化合物1(SRA737)和奥拉帕尼在PC-3细胞、HT-29细胞、DU-145细胞和CAL-27细胞中的组合活性。

图18示出Sierra化合物1(SRA737)和奥拉帕尼在A673细胞、MDA-MB-231细胞、BT474细胞和SK-BR-3细胞中的组合活性。

图19示出Sierra化合物1(SRA737)和奥拉帕尼在OVCAR-3细胞和OVCAR-5细胞中的组合活性。

图20示出Sierra化合物1(SRA737)和卢卡帕尼在PC-3细胞、HT-29细胞、DU-145细胞和CAL-27细胞中的组合活性。

图21示出Sierra化合物1(SRA737)和卢卡帕尼在A673细胞、MDA-MB-231细胞、BT474细胞和SK-BR-3细胞中的组合活性。

图22示出Sierra化合物1(SRA737)和卢卡帕尼在OVCAR-3细胞和OVCAR-5细胞中的组合活性。

图23示出在CAL-27和OVCAR-3细胞系中“Sierra化合物1”/“ProNAi化合物1”(SRA737)和奥拉帕尼的组合活性结果与先前研究的结果的比较。

具体实施方式

本文公开了通过向受试者给药Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的组合来抑制受试者(例如人类)中肿瘤生长的方法。本文还公开了Chk1抑制剂好PARP抑制剂在例如药物组合物和/或试剂盒中的组合，可用于实施抑制肿瘤生长的方法。本文还公开了通过在体内或体外向细胞给药Chk1抑制剂和PARP抑制剂的组合来降低细胞中标记基因的表达，抑制细胞中Chk1活性并抑制细胞中PARP的方法。

本文描述了令人惊讶的结果，即当根据本发明的方法给药时，PARP活性的药理学抑制增强了Chk1抑制剂的功效。Chk1抑制剂和PARP抑制剂的组合显示出可用于抑制肿瘤生长和和治疗诸如癌症等病症的意想不到的协同效果。

如下面详细描述的，通过使用ATP监测发光检测试验检测ATP代谢来进行体外细胞活力筛选试验，并且这些筛选证明了Chk1抑制剂、SRA737和PARP抑制剂的组合的协同抗肿瘤活性。通过PARP抑制剂显著增强了在PC-3、DU-145、HT-29、CAL-27、A673、MDA-MB-231、SK-BR-3、OVCAR-3和OVCAR-5癌细胞系中的SAR737活性。最后，PARP抑制剂与SRA737组合在代表肿瘤类型的广泛细胞系板中表现出显著增加的抗癌功效，该细胞系板包括但当然不限于：膀胱癌细胞系、结肠直肠癌细胞系、肺癌细胞系、卵巢癌细胞系、胰腺癌细胞系和头颈癌细胞系。

Apropos、Chk1抑制剂和PARP抑制剂组合在抑制肿瘤生长、抑制癌细胞复制(例如抑制肿瘤细胞生长、抑制Chk1和PARP活性)方面明显比单独的Chk1抑制剂或PARP抑制剂更强并且更有效。

定义

除非另有说明，权利要求和说明书中使用的术语定义如下。

本发明的实践包括使用有机化学、分析生物学(包括重组技术)、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学的常规技术，这些技术均在本领域的技术范围内。

在本申请中，将参考许多技术名称。所有数字名称(例如，pH、温度、时间、浓度和重量，包括各自的范围)都是近似值，通常可以适当地以0.1、1.0或10.0的增量(+)或(-)变化。本文描述的试剂是示范性的，并且这些试剂的等同物可以是本领域公知的。

本发明中使用的化合物具有不对称碳原子(光学中心)或双键；外消旋体、非对映异构体、几何异构体、位置异构体和单个异构体(例如单独的对映异构体)都旨在包含在本发明的范围内。本发明的化合物还可以在构成此类化合物的一个或多个原子上含有非自然比例的原子同位素。例如，化合物可以用放射性同位素进行放射性标记，诸如，例如但不限于氚(³H)、碘-125(¹²⁵I)或碳-14(¹⁴C)。本发明的化合物的所有同位素变体，无论是否是放射性的，都旨在包括在本发明的范围内。

术语“受试者”是指任何哺乳动物(包括人类)，因此包括哺乳动物，诸如兽医和研究感兴趣的那些动物，包括但不限于：患有肿瘤或癌症的猿、牛、马、狗、猫和啮齿动物。

术语向受试者“施用”药物或“给药”和/或治疗(以及该短语的语法等同物)是指直接或间接给药，可以是由医学专业人员对受试者给药，可以是自我给药和/或间接给药，间接给药可以是开处方或诱导向受试者开处方药物和/或治疗的行为。

术语“治疗”或对病症或疾病的“治疗”是指采取措施以减轻病症或疾病的症状，或者以其它方式获得受试者的一些有益或期望结果，包括临床结果。任何有益或期望临床结果可以包括但不限于：减轻或改善癌症或条件性存活的一种或多种症状以及减少肿瘤负荷或肿瘤体积；缩小疾病的范围；延迟或减缓肿瘤进展或疾病进展；改善、缓解或稳定肿瘤和/或疾病状态；或其它有益结果。

术语“原位”或“体外”是指在与活体分开生长的活细胞中发生的过程，例如在组织培养中生长。

术语“体内”是指在活体中发生的过程。

术语“Chk1”或“CHEK1”或“关卡激酶1”是指由CHEK1基因编码的丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶。CHEK1也可以称为细胞周期关卡激酶、CHK1关卡同系物、EC 2.7.11.1和EC 2.7.11。Chk1是指所有选择性剪接的类似物，并且包括由根据国家生物技术信息中心(NCBI)登记号NP_001107594.1、NP_001107593.1、NP_001265.2、NP_001231775.1、NP_001317356.1、NP_001317357.1、XP_016872635.1、XP_024304105.1和XP_011540862.1、NM_001114122、NM_001114121.2、NM_001274.5、NM_001244846.1、NM_001330427.1、NM_001330428.1和XM_017017146.2的氨基酸小序列和核苷酸序列编码的智人Chk1亚型。

术语“PARP”是指聚ADP核糖聚合酶。术语“PARP”是指PARP族的所有成员，包括：PARP1、PARP2、VPARP(ParP4)、端锚聚合酶1和端锚聚合酶2(PARP-5a或TNKS、以及PARPa5b或TNKS2)、PARP3、PARP6、TIPARP(或PARP7)、PARP8、PARP9、PARP10、PARP11、PARP12、PARP14、PARP15、PARP16以及任何选择性剪接的类似物。

术语“PARP抑制剂”或“PARPi”是指PARP的抑制剂。PARPi可以是小分子、抗体或核酸。PARPi可以降低PARP的表达，抑制细胞中PARP的活性或功能，或其组合。PARPi包括改变或不改变PARP与DNA结合的抑制剂。PARPi可以抑制PARP族中的任何成员。PARPi包括但不限于：奥拉帕尼(AZD2281)(购自Chemietek，目录号CT-A2281，LC目录号O-9201和Selleckchem目录号，SI060)、卢卡帕尼(PF-01367338)(购自Chemietek，目录号CT-AGO1，LC目录号，R-6399和Selleckchem，目录号S1098)、维利帕尼(ABT-888)(购自Chemietek，目录号CT-A888，LC目录号V-4703和Selleckchem，目录号SI004)、尼拉帕尼(MK-4827)(购自Chemietek，目录号CT-MK4827，Selleckchem，目录号S7625)、伊尼帕利(BSI-201)(购自Chemitek，目录号CT-BSI201，Selleckchem，目录号S1087)、他拉唑帕尼(BMN673)(购自Selleckchem，目录号S7048)、3-氨基苄胺(INO-1001)(购自Selleckchem，目录号SI132)、氟唑帕利、BGB-290(购自MedKoo Biosciences，Inc.目录号206852)、CEP-9722(购自MedKoo Biosciences，Inc.目录号204910)和SC-10914。

术语“Chk1抑制剂”是指Chk1或CHEK1的抑制剂。Chk1抑制剂可以是小分子、抗体或核酸。Chk1抑制剂可以降低CHEK1的表达，抑制细胞中Chk1的活性或功能，或其组合。Chk1抑制剂包括但不限于：SRA737、普瑞色替(LY2606368)(购自Sellechchem，目录号S7178)、PF-477736(购自Sellechchem，目录号S2904)、AZD7762(购自Sellechchem，目录号S1532)、雷布色替(LY2603618)(购自Sellechchem，目录号S2626)、MK-8776(SCH900776)(购自Sellechchem，目录号S2735)、CHIR-124(购自Sellechchem，目录号S2683)、SAR-020106(购自Sellechchem，目录号S7740)和CCT245737(购自Sellechchem，目录号S8253)。

术语“有效量”是指足以产生期望效果的量，例如足以抑制肿瘤生长的量。

术语“共同给药”是指以在相同时间段内发挥其药效的方式给药的两种或更多种化合物。这种共同给药可以通过同时、同期或顺序地给药两种或更多种化合物来实现。

术语“QnD或Qnd”是指每“n”天给药一次。例如，QD(或qd)是指每天给药一次或每日给药一次；Q2D(或q2d)是指每两天给药一次；Q7D是指每7天给药一次或每周给药一次；Q5D是指每5天给药一次；等等。

术语“减轻”一种或多种症状(以及该短语的语法等同物)是指减轻症状的严重性或频率，或消除症状。

术语“肿瘤抑制基因”是指当在细胞中被抑制、缺失、表达降低或功能降低时增加“肿瘤生长或癌症的特征”的任何基因。“肿瘤生长或癌症的特征”包括但不限于：细胞的持续或增加增殖、细胞中持续或增加的增殖信号传递、复制性永生化、抵抗细胞死亡(例如细胞凋亡)、逃避生长抑制、避免免疫破坏、诱导血管生成、激活侵入性或转移性潜能、促进炎症、失控的细胞能量学、基因组不稳定及其组合。肿瘤抑制基因包括但不限于以下基因：CDKN1A、CDKN1B、CDKN2A、CDKN2B、CDKN2C、RBI、TP53和任何选择性剪接的类似物。CDKN1A也可以称为：周期素依赖性激酶抑制剂1A、CDK相互作用蛋白1、CDKN1、CAP20、MDA-6、CIP1、SDI1、WAF1和P21。CDKN1B也可以称为：周期素依赖性激酶抑制剂1B、P27KIP1、KIP1、周期素依赖性激酶抑制剂P27、CDKN4、MEN1B和MEN4。CDKN2A也可以称为：周期素依赖性激酶抑制剂2A、周期素依赖性激酶4抑制剂A、多肿瘤抑制基因1、P16-INK4A、P14ARF、CDKN2、CDK4I、MTS-1、MTS1和MLM。CDKN2B也可以称为：周期素依赖性激酶抑制剂2B、周期素依赖性激酶4抑制剂B、多肿瘤抑制基因2、P14-INK4b、P15-INK4b、MTS-2、MTS2、P14 CDK抑制剂、P15 CDK抑制剂、CDK4B抑制剂、INK4B、TP15和P15。CDKN2C也可以称为：周期素依赖性激酶抑制剂2C、P18-INK4C、P18-INK6、周期素依赖性激酶6抑制剂P18、周期素依赖性激酶4抑制剂C、CDK6抑制剂P18、CDKN6、INK4C和P18。RBI也可以称为：RB、视网膜母细胞瘤1、视网膜母细胞瘤相关蛋白、RB转录辅阻遏物、蛋白磷酸酶1调节亚基130、P105-Rb、Pp110和PRb。TP53也可以称为：P53、肿瘤蛋白53、磷蛋白P53、P53肿瘤抑制基因、肿瘤抑制基因P53、TRP53、抗原NY-CO-13、BCC7和LFS1。CDKN1A包括由根据NCBI登记号NP_001207707和NM_001220778.1的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人CDKN1A。CDKN1B包括由根据NCBI登记号NP_004055和NM_004064的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人CDKN1B。CDKN2A包括由根据国家生物技术信息中心(NCBI)登记号NP_478102和NM_058195.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人CDKN2A。CDKN2B包括由根据NCBI登记号NP_004927和NM_004936.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人CDKN2B。CDKN2C包括根据NCBI登记号NP_001253和NM_001262.2的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人CDKN2C。RBI包括由根据NCBI登记号NP_000312和NM_000321.2的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人RBI。TP53包括由根据NCBI登记号NP_000537和NM_000546.5的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人TP53。

术语“DNA损伤修复(DDR)基因”或“DNA损伤修复途径基因”是指直接或间接租金DNA突变、断裂、或其它DNA损伤或结构变化的修复的任何基因。DNA损伤修复基因包括但不限于以下基因：ATM、BLM、BRCA1、BRCA2、CHEK2、MLH1、MSH2、PALB2、POLD1、RAD50、RAD51、RAD51B、RAD51C、RAD51D、MSH6、PMS2、RAD52、RAD54L、RPA1、SETD2、SMARCA4、TP53BP1、XRCC2、XRCC3、POLE、KMT2D、ARID1A和任何选择性剪接的类似物。DDR基因还包括范可尼贫血(FA)途径中的基因。FA途径中的基因包括但不限于：范可尼贫血互补组(FANC)基因，诸如FANCA、FANCC、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、FANCI、FANCL、FANCM和任何选择性剪接的类似物。ATM也可以称为：ATM丝氨酸/苏氨酸激酶、共济失调毛细血管扩张突变、A-T突变、TELO1、TEL1、ATDC、ATI、ATE、ATA、ATC和ATD。BLM也可以称为：布卢姆综合征RecQ样解旋酶，DNA解旋酶RecQ样类型2，RecQ蛋白样3、RECQL3、RECQL2、RECQ2和布卢姆综合征蛋白。BRCA1也称为：含有BRCA/BRCA1的复合亚基1、蛋白磷酸酶1调节亚基53、范可尼贫血互补组S、RING指蛋白53、BROVCA1、PPP1R53、BRCAI和BRCC1。BRCA2也可以称为：含BRCA/BRCA1的复合亚基2、范可尼贫血组D1蛋白、范可尼贫血互补组D1、乳腺癌2肿瘤抑制基因、乳腺癌和卵巢癌易感蛋白2、FANCD1、FACD、FANCD、FAD1、GLM3和FAD。CHEK2也称为：关卡激酶2、CHK2关卡同系物、CHK2、CDS1、Cds1同系物、HCds1、RAD53、PP1425和LFS2。MLH1也可以称为：MutL同系物1、DNA错配修复蛋白Mlh1、COCA2、HNPCC、HNPCC、HMLH1和FCC2。MSH2也可以称为：MutS同系物2、HMSH2、DNA错配修复蛋白Msh2、MutS蛋白同系物2、HNPCC1、HNPCC、LCFS2、COCA1和FCC1。PALB2也可以称为：BRACA2、FANCN、范可尼贫血互补组N和PNCA3的配偶体和***。POLD1也可以称为DNA聚合酶δ1催化亚基、DNA聚合酶亚基δP125、PPOLD、CDC2同系物、CRCS10、CDC2和MDPL。RAD50也可以称为：RAD50双链断裂修复蛋白、HRad50、DNA修复蛋白RAD50、RAD502和NBSLD。RAD51也可以称为：RAD51重组酶、RAD51同系物A、HRAD51、RAD51A、RECA、Rec-A样蛋白、重组蛋白A、HsT16930、BRCC5、FANCR和MRMV2。RAD51B也可以称为：RAD51横向同源物B、RAD51同系物B、RAD51同系物2、RAD51L1、REC2、DNA修复蛋白RAD51同系物B、RAD51样1和RAD51样蛋白1。RAD51C可以称为：RAD51横向同源物C、RAD51样蛋白2、RAD51同系物3、RAD51L2、R51H2、DNA修复蛋白RAD51同系物3、BROVCA3和FANCO。RAD51D也可以称为：RAD51横向同源物D、RAD51同系物4、RAD51样蛋白3、RAD51L3、R51H3、DNA修复蛋白RAD51同系物4、TRAD和BROVCA4。MSH6也可以称为：MutS同系物6、G/T错配结合蛋白、MutS蛋白同系物6、DNA错配修复蛋白Msh6、GTMBP、GTBP、P160，HNPCC5、HMSH6和HSAP。PMS2也可以称为：PMS1同系物2错配修复蛋白、DNA错配修复蛋白PMS2、PMS1蛋白同系物2、PMSL2、PMS2减数***后分离增加2、HNPCC4、PMS2CL和MLH4。RAD52也可以称为：RAD52同系物DNA修复蛋白。RAD54L也可以称为：RAD54同系物、RAD54样、RAD54A、HRAD54、HHR54、HR54和DNA修复与重组蛋白RAD54样。RPA1也可以称为：复制蛋白A1、单链DNA结合蛋白、复制因子A蛋白1、RF-A蛋白1、REPA1、RPA70、MSTP075、MST075、HSSB、RF-A和RP-A。SETD2也可以称为：有含2的SET结构域、蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶SETD2、亨廷顿蛋白相互作用蛋白B、赖氨酸N-甲基转移酶3A、P231HBP、HIP-1、HIF-1、KMT3A、HYPB、SET2、组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶SETD2、亨廷顿蛋白相互作用蛋白1、含有SET结构域的蛋白质2、KIAA1732、HSPC069、HBP231、HSET2、HIF1和LLS。SMARCA4也可以称为：染色质亚族A成员4的SWI/SNF相关的基质相关肌动蛋白依赖性调节因子、有丝***生长与转录激活因子、ATP依赖性解旋酶SMARCA4、BRG-1相关因子190A、蛋白质Brahma同系物1、BRM/SWI2相关基因、同源异型基因调节因子、Brahma蛋白样1、核蛋白GRB1、蛋白质BRG-1、SNF2样4、SNF2-β、BAF190A、BRG1、SNF2LB、BAF190、HSNF2b、MRD16、RTPS2、SNF2B、SWI2、SNF2和CSS4。TP53BP1也可以称为：肿瘤蛋白P53结合蛋白1、P53结合蛋白1、P53BP1、53BP1、肿瘤抑制基因P53结合蛋白1、肿瘤蛋白P53结合蛋白1、肿瘤蛋白53结合蛋白、TP53结合蛋白1、TDRD30和P202。XRCC2也可以称为：X-RAY修复交叉互补2、X-射线修复互补蛋白2、DNA修复蛋白XRCC2和FANCU。XRCC3也可以称为：X-RAY修复交叉互补3、X-射线修复互补蛋白3、DNA修复蛋白XRCC3和CMM6。POLE也可以称为：DNA聚合酶ε催化亚基、DNA聚合酶ε催化亚基A、DNA聚合酶II亚基A、POLE1、CRCS12和FILS。KMT2D也可以称为：MLL2、赖氨酸甲基转移酶2D、髓样/淋巴样或混合性白血病2、赖氨酸特异性甲基转移酶2D、赖氨酸-N-甲基转移酶2D、ALL相关蛋白、组蛋白-赖氨酸N-甲基转移酶2D、Kabuki智力迟钝综合征、MLL4、ALR、CAGL114、KABUK1、TNRC21、AAD10和KMS。ARID1A也可以称为：富含AT的相互作用结构域1A、染色质亚族F成员1的SWI/SNF相关的基质相关肌动蛋白依赖性调节因子、富含AT的相互作用结构域1A、含有ARID结构域的蛋白1A、SWI/SNF复合蛋白P270、BRG-1相关因子250a、BRG-1相关因子250、SWI样蛋白、Osa同系物1、BAF250a、SMARCF1、BAF250、HOSA1、B120、OSA1、染色质重塑因子P250、BM029、MRD14、CSS2、P270和ELD。ATM包括由根据NCBI登记号NP_000042和NM_000051.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人ATM。BLM包括由根据NCBI登记号NP_000048和NM_000057.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人BLM。BRCA1包括由根据NCBI登记号NP_009225和NM_007294.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人BRCA1。BRCA2包括由根据NCBI登记号NP_000050和NM_000059.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人BRCA2。CHEK2包括由根据NCBI登记号NP_009125和NM_007194.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人CHEK2。MLH1包括由根据NCBI登记号NP_000240和NM_000249.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人MLH1。MSH2包括由根据NCBI登记号NP_000242和NM_000251.2的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人MSH2。PALB2包括由根据NCBI登记号NP_078951和NM_024675.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人PALB2。POLD1包括由根据NCBI登记号NP_002682和NM_002691.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人POLD1。RAD50包括由根据NCBI登记号NP_005723和NM_005732.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人RAD50。RAD51包括由根据NCBI登记号NP_002866和NM_002875.4的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人RAD51。RAD51B包括由根据NCBI登记号NP_002868.1和NM_002877.5的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人RAD51B。RAD51C包括由根据NCBI登记号NP_478123和NM_058216.2的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人RAD51C。RAD51D包括由根据NCBI登记号NP_002869和NM_002878.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人RAD51D。MSH6包括由根据NCBI登记号NP_000170和NM_000179.2的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人MSH6。PMS2包括由根据NCBI登记号NP_000526和NM_000535.6的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人PMS2。RAD52包括由根据NCBI登记号NP_602296和NM_134424.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人RAD52。RAD54L包括由根据NCBI登记号NP_003570和NM_003579.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人RAD54L。RPA1包括由根据NCBI登记号NP_002936和NM_002945.4的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人RPA1。SETD2包括由根据NCBI登记号NP_054878和NM_014159.6的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人SETD2。SMARCA4包括由根据NCBI登记号NP_003063、NM_003072.3、NP_001122321和NM_001128849.1的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人SMARCA4。TP53BP1包括由根据NCBI登记号NP_001135452和NM_001141980.2的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人TP53BP1。XRCC2包括由根据NCBI登记号NP_005422和NM_005431.1的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人XRCC2。XRCC3包括由根据NCBI登记号NP_005423和NM_005432.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人XRCC3。POLE包括由根据NCBI登记号NP_006222和NM_006231.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人POLE。KMT2D包括由根据NCBI登记号NP_003473和NM_003482.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人KMT2D。ARID1A包括由根据NCBI登记号NP_006006和NM_006015.5的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人ARID1A。

FANCA也可以称为：范可尼贫血互补组A、FANCH、FACA、FAA、范可尼贫血类型1、FA-H、FA1、FAH和FA。FANCC也可以称为：范可尼贫血互补组C、FACC、FAC、范可尼贫血组C蛋白和FA3。FANCD2也称为范可尼贫血互补组D2、范可尼贫血组D2蛋白、FANCD、FA-D2、FAD2和FA4。FANCE也可以称为：范可尼贫血互补组E、范可尼贫血组E蛋白、FACE和FAE。FANCF也可以称为：范可尼贫血互补组F、范可尼贫血组F蛋白、FACF和FAF。FANCG也可以称为：范可尼贫血互补组G、范可尼贫血组G蛋白、DNA修复蛋白XRCC9、XRCC9截断的范可尼贫血组G蛋白、FACG和FAG。FANCI也可以称为：范可尼贫血互补组I、范可尼贫血组I蛋白、KIAA1794和FACI。FANCL也可以称为：范可尼贫血互补组L、范可尼贫血组L蛋白、RING型E3泛素转移酶FANCL、PHD指蛋白9、FAAP43、PHF9、E3泛素-蛋白连接酶FANCL和POG。FANCM也可以称为：范可尼贫血互补组M、范可尼贫血组M蛋白、ATP依赖性RNA解旋酶FANCM、KIAA1596、蛋白Hef直向同源物、FAAP250和蛋白FACM。FANCA包括由根据NCBI登记号NP_000126和NM_000135.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人FANCA。FANCC包括由根据NCBI登记号NP_000127和NM_000136.2的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人FANCC。FANCD2包括由根据NCBI登记号NP_149075、NM_033084.4、NP_001306913和NM_001319984.1的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人FANCD2。FANCE包括由根据NCBI登记号NP_068741和NM_021922.2的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人FANCE。FANCF包括由根据NCBI登记号NP_073562和NM_022725.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人FANCF。FANCG包括由根据NCBI登记号NP_004620和NM_004629.1的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人FANCG。FANCI包括由根据NCBI登记号NP_001106849和NM_001113378.1的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人FANCI。FANCL包括由根据NCBI登记号NP_001108108、NM_001114636.1、NP_060532和NM_018062.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人FANCL。FANCM包括由根据NCBI登记号NP_065988和NM_020937.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人FANCM。

术语“复制应激基因”是指在细胞暴露时诱导或激活的任何基因，以引起增加的DNA复制、增加的复制启动(即进入细胞周期的S期)、增加的有丝***、增加的细胞增殖、增加的DNA受损、染色质的过度压缩、致癌基因的过度表达或其组合，并且介导对应激的反应，诸如停滞复制叉。复制应激基因包括但不限于以下基因：ATR、CHEK1和任何选择性剪接的类似物。ATR也可以称为：ATR丝氨酸/苏氨酸激酶、共济失调毛细血管扩张与RAD3相关蛋白、FRP1、MEC1有丝***进入关卡1、FRAP相关蛋白1、FCTCS、SCKL1，MEC1和SCKL。ATR包括由根据NCBI登记号NP_001175和NM_001184.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人ATR。

术语“致癌驱动基因”或“致癌基因”是指当被激活、过度表达或活性或丰度增加时使细胞中的肿瘤生长或癌症的一个或多个特征增加的任何基因。致癌驱动基因包括但不限于以下基因：CCNE1、KRAS、MYC、MYCN、MDM2和任何选择性剪接的类似物。此外，如果突变导致功能丧失或功能减弱，则致癌驱动因子的负调节因子(诸如FBXW7)也可以视为是致癌的。CCNE1也可以称为：周期素E1、CCNE、G1/S特异性周期素E1、周期素Es、周期素Et和PCCNE1。KRAS也可以称为KRAS原癌基因GTP酶、V-Ki-Ras2Kirsten鼠肉瘤病毒致癌基因同系物、V-Ki-Ras2 Kirsten鼠肉瘤病毒致癌基因同系物、Kirsten鼠肉瘤病毒原癌基因、细胞C-Ki-Ras2原癌基因、转化蛋白P21、C-Kirsten-Ras蛋白、KRAS2A、K-RAS2B、K-RAS4A、K-RAs4B、K-Ras、KRAS1、C-Ki-Ras、K-Ras2、C-K-RAS、CFC2、RALD、NS3和NS。Myc也可以称为：C-Myc、MYC原癌基因BHLH转录因子、V-Myc禽骨髓细胞瘤病毒致癌基因同系物、E类碱性螺旋-环-螺旋蛋白39、原癌基因C-Myc、BHLHe39、禽骨髓细胞瘤病毒致癌基因同系物、Myc原癌基因蛋白、MRTL和MYCC。MYCN也可以称为：N-MYC、MYCN原癌基因BHLH转录因子、V-Myc禽骨髓细胞瘤病毒致癌基因成神经细胞瘤衍生同系物、E类碱性螺旋-环-螺旋蛋白37、BHLHe37、NMYC，成神经细胞瘤衍生的V-Myc禽骨髓细胞瘤病毒相关致癌基因、N-Myc原癌基因蛋白、成神经细胞瘤Myc致癌基因、致癌基因NMYC和ODED。MDM2也可以称为：MDM2原癌基因、MDM2原癌基因E3泛素蛋白连接酶、癌蛋白Mdm2、Hdm2、Mdm2转化的3T3细胞双微2P53结合蛋白、P53结合蛋白的双微2人同系物、RING型E3泛素转移酶Mdm2、P53结合蛋白Mdm2、双微2蛋白、ACTFS和HDMX。FBXW7也可以称为：含有7的F-Box与WD重复结构域、含有7的F-Box与WD重复结构域、E3泛素蛋白连接酶、F-BOX蛋白FBX30、Fbx30、SEL-10、SEL10、HCdc4、FBW7、HAgo、Archipelago同系物、F-Box蛋白SEL-10、Archipelago、FBXO30、FBXW6、CDC4、FBW6和AGO。CCNE1包括由根据NCBI登记号NP_001229和NM_001238.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人CCNE1。KRAS包括由根据NCBI登记号NP_203524和NM_033360.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人KRAS。MYC包括由根据NCBI登记号NP_002458、NM_002467.5和ABW69847的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人MYC。MYCN包括由根据NCBI登记号NP_005369和NM_005378.5的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人MYCN。MDM2包括由根据NCBI登记号NP_002383、NM_002392.5和Q00987的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人MDM2。

术语“同源重组基因”是指直接或间接促进、激活细胞中的同源重组或者对细胞中的同源重组非常重要的基因。同源重组基因包括但不限于参与双链断裂修复的基因(例如BRCA1和BRCA2)。

必须注意，如在说明书和所附权利要求中所使用的，单数形式“一”、“一个”和“该”包括复数指代物，除非上下文另有明确指示。

本文中范围的叙述包括所述端点以及端点之间的所有点。

本发明的方法

本文公开了通过给药Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂来抑制受试者(例如人)中肿瘤生长的方法。下面将对这两种化合物、包含这些化合物的试剂盒以其使用方法进行详细描述。

肿瘤抑制

本公开针对使用化合物a Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的组合来抑制肿瘤的进展、减小肿瘤的大小、减少肿瘤的凝聚、减小肿瘤的体积和/或抑制肿瘤的生长的方法。本文还提供了治疗潜在疾病(例如癌症)并延长受试者存活的方法。

在一个实施例中，提供了一种抑制有此需要的受试者中肿瘤生长的方法，该方法包括向受试者给药第一有效量的Chk1抑制剂和第二有效量的PARP抑制剂。在某些方面，本公开提供了一种抑制肿瘤生长的方法，其中，如通过肿瘤体积测量的，肿瘤生长减少了1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％、42％、44％、46％、48％、50％、52％、54％、56％、58％、60％、62％、64％、66％、68％、70％、72％、74％、76％、78％、80％、82％、84％、86％、88％、90％、92％、94％、96％、98％或100％。在某些方面，本公开提供了一种抑制肿瘤生长的方法，其中，如通过肿瘤的绝对大小测量的，肿瘤生长减少了1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％、42％、44％、46％、48％、50％、52％、54％、56％、58％、60％、62％、64％、66％、68％、70％、72％、74％、76％、78％、80％、82％、84％、86％、88％、90％、92％、94％、96％、98％或100％。在某些方面，本公开提供了一种抑制肿瘤生长的方法，其中，如通过该类型肿瘤的肿瘤标记物的表达水平测量的，肿瘤生长减少了1％、2％、3％、4％、5％、6％、7％、8％、9％、10％、12％、14％、16％、18％、20％、22％、24％、26％、28％、30％、32％、34％、36％、38％、40％、42％、44％、46％、48％、50％、52％、54％、56％、58％、60％、62％、64％、66％、68％、70％、72％、74％、76％、78％、80％、82％、84％、86％、88％、90％、92％、94％、96％、98％或100％。

附加方法

本公开提供了一种抑制细胞中Chk1活性的方法，该方法包括使细胞与第一有效量的Chk1抑制剂(例如SRA737)和第二有效量的PARP抑制剂接触。本公开还提供了一种抑制细胞中CDC25活性的方法，该方法包括使细胞与第一有效量的Chk1抑制剂和第二有效量的PARP抑制剂接触。本公开还提供了一种抑制细胞中CDK1/2活性的方法，该方法包括使细胞与第一有效量的Chk1抑制剂和第二有效量的PARP抑制剂接触。在某些方面，本公开提供了一种抑制细胞中Chk1或PARP活性的方法，其中，第一有效量和第二有效量是产生不超过0.001μM、不超过0.01μM、不超过0.1μM、不超过1μM、不超过2μM、不超过3μM、不超过5μM、不超过6μM、不超过8μM、不超过10μM、不超过12μM、不超过14μM、不超过16μM、不超过18μM、不超过20μM、不超过25μM、不超过30μM、不超过35μM、不超过40μM、不超过50μM、不超过75μM或不超过100μM的IC₅₀值的量。

体外方法

在一个方面，本公开提供了通过减缓或停止癌性肿瘤细胞复制和/或存活来抑制肿瘤生长的方法。本文中公开的Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的组合表现出抑制指示膀胱癌、结肠直肠癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌和头颈癌的癌细胞系的细胞增殖。因此，提供了抑制肿瘤生长的方法，该方法包括是癌性肿瘤细胞与Chk1抑制剂和PARP抑制剂的组合接触，其中癌性肿瘤细胞包括：膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、***、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、脑癌、肉瘤、成神经细胞瘤或头颈癌细胞的鳞状细胞癌。

提供了用于减少细胞的细胞增殖的方法，该方法包括使癌性肿瘤细胞与Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的组合接触，其中癌性肿瘤细胞包括：膀胱癌、乳腺癌、***、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、脑癌、肉瘤、成神经细胞瘤或头颈癌细胞的鳞状细胞癌。

提供了用于诱导DNA损伤和/或复制应激的标记物和/或诱导细胞凋亡的方法，该方法包括使癌性肿瘤细胞与Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的组合接触，其中癌性肿瘤细胞包括：膀胱癌、乳腺癌、***、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、脑癌、肉瘤、成神经细胞瘤或头颈癌细胞的鳞状细胞癌。

进一步地，本公开还提供了抑制Chk1活性、抑制PARP活性和/或减少细胞中标记基因表达的方法，该方法包括使细胞与第一有效量的Chk1抑制剂(例如SRA737)和第二有效量的PARP抑制剂。在这些方面的每一个方面上，即对于本文描述的用于抑制肿瘤生长、抑制Chk1活性、抑制PARP活性和/或激活细胞中细胞周期进程的方法中的任何方法和所有方法，细胞可以在受试者中，但是细胞也可以在生物学坏境之外。因此，提供了体外方法，其中细胞与活体分开生长，例如在组织培养中生长。在使用所述方法抑制肿瘤细胞生长的过程中，可能肿瘤的一些细胞或甚至微环境中或肿瘤附近的细胞还不是癌细胞，而是癌前细胞。因此，本公开提供了在细胞是癌性细胞情况下的方法以及在细胞是非癌细胞情况下的方法。对于细胞是癌细胞的体外方法，本公开提供了多种方法，其中癌症是膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、脑癌、肉瘤、成神经细胞瘤或头颈鳞状细胞癌。

在一个方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是PC-3癌细胞。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是DU-145癌细胞。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是HT-29癌细胞。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是Cal-27癌细胞。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是A673癌细胞。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是OV-90癌细胞。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是MDA-MB-231癌细胞。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是OVCAR-3癌细胞。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是OVCAR-5癌细胞。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中细胞是SK-BR-3癌细胞。

在一个方面，本公开提供了多种方法，其中细胞来自施用本文描述的组合之后的受试者。在一个方面，本公开提供了多种方法，其中细胞来自还未施用任何抗癌治疗达到至少一天、一周、一个月、两个月、三个月、六个月或一年的受试者。在一个方面，本公开提供了多种方法，其中细胞来自还未施用任何抗癌治疗达到至少一天、一周、一个月、两个月、三个月、六个月或一年的人类受试者。

在某些方面，本公开提供了在体内进行的方法。在某些方面，本公开提供了在人类受试者体内进行的方法。

肿瘤类型

在某些方面，本公开提供了抑制肿瘤生长的方法，其中肿瘤来自以下癌症：膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、小细胞肺癌、脑癌、肉瘤、成神经细胞瘤或头颈鳞状细胞癌。

在某些实施例中，肿瘤来自以下癌症：转移性去势抵抗性***癌(mCRPC)、HRR机制有效的mCRPC或高级浆液性卵巢癌(HGSOC)。

因此，本公开还提供了治疗有此需要的受试者中的癌症的方法，该方法包括向受试者施用第一有效量的Chk1抑制剂(例如SRA737)和第二有效量的PARP抑制剂。在某些方面，公开了用于治疗癌症的方法，其中癌症是膀胱癌、乳腺癌、***、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、脑癌、肉瘤、成神经细胞瘤或头颈鳞状细胞癌。

在某些方面，癌症是转移性去势抵抗性***癌(mCRPC)、HRR机制有效的mCRPC或高级浆液性卵巢癌(HGSOC)。

在其它方面，提供了减少细胞中标记基因表达的方法、抑制Chk1的方法和/或抑制PARP的方法，其中Chk1的抑制、PARP的抑制和/或标记基因的表达是在癌细胞中，癌细胞是膀胱癌、乳腺癌、***、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌，白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、脑癌、肉瘤、成神经细胞瘤或头颈鳞状细胞癌。

在某些实施例中，癌细胞来自癌症，该癌症是转移性去势抵抗性***癌(mCRPC)、HRR机制有效的mCRPC或高级浆液性卵巢癌(HGSOC)。

细胞试验

在某些方面，本公开包括使用试验测量化合物各自的和化合物组合的抗肿瘤和抗癌活性。在某些方面，试验包括使培养中生长的癌细胞系与本发明的接触，然后测定细胞的细胞数量、细胞增殖、细胞存活和细胞凋亡。在某些方面，测定细胞的DNA损伤或凋亡的标记物的表达。在某些实施例中，试验包括测量处理细胞的ATP水平。在某些实施例中，试验是MTT试验。在某些实施例中，使细胞系与化合物的组合接触，以识别表现出选择性协同杀伤肿瘤细胞的强大组合。

在某些实施例中，本公开提供了通过协同作用分数、生长抑制分数或Loewe体积分数评分来识别临床终点的方法。

在一个方面，通过本文描述的试验和公式所测量的协同作用分数来识别终点。

在一个方面，本公开提供了多种方法，其中组合具有不超过-40、-30、-20、-10、-5或-1的Loewe体积分数。

在一个方面，本公开提供了多种方法，其中组合具有至少2.8、3.1、3.5、3.8、4.2、4.5、5、7、10、12或15的协同作用分数。

临床终点

本文提供了用于抑制受试者和/或细胞中肿瘤生长的方法，其中，所述方法的条件是使得方法产生临床相关终点。

当一个或多个生物细胞生长和***比细胞***的正常健康过程宽的多而导致细胞数量增加时，就会发生肿瘤生长。这种现象表明细胞处于疾病状态，诸如癌症或癌症前期。此外，肿瘤生产通常发生在凝聚的细胞形成肿瘤之前的离散阶段。

本领域技术人员可以使用若干方法来测量细胞复制速率。细胞内的整体代谢活性可以通过标记的生物产物来测量。例如，有几种市售染料(例如MTT)可以穿透细胞并与某些酶和其它因子相互作用以产生可检测的产物。此外，可以在细胞中测量细胞生物标记物。例如，BrdU试验可以将胸苷衍生物掺入细胞DNA中，并且用抗体检测。增殖细胞核抗原是另一种用于检测的生物标记物。除了标记技术之外，本领域技术人员还可以使用例如显微镜或流式细胞术进行细胞计数。

在一个方面，通过临床终点来测量细胞复制，临床终点包括：生活质量(QOL)分数、反应持续时间(DOR)、临床受益率(CBR)、患者报告结果(PRO)、客观反应率(ORR)分数、无疾病存活(DFS)或无进展存活(PFS)、进展时间(TTP)、总存活、治疗失败时间(TTF)、RECIST标准和/或完全反应。可以使用本领域技术人员熟知的方法来确定临床终点。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在施用第一有效量的Chk1抑制剂之后但在施用第二有效率的PARP抑制剂之前，肿瘤生长减少不超过5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、97％、99％或99.9％。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在施用第二有效量的PARP抑制剂之后但在施用第一有效量的SRA737抑制剂之前，肿瘤生长减少不超过5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、97％、99％或99.9％。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中基于一个或多个临床终点的测量来计算减少百分比。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在施用第一有效量的SRA737之后但在施用第二有效量的PARP抑制剂之前，如通过MTT试验中总细胞计数的增加或减少或通过ctDNA试验测量的基因档案的变化所测量的，肿瘤生长减少了不超过或至少5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、97％、99％或99.9％。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在施用第二有效量的PARP抑制剂之后但在施用第一有效量的SRA737之前，如通过MTT试验中总细胞计数的增加或减少或通过ctDNA试验测量的基因档案的变化所测量的，肿瘤生长减少了不超过或至少5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、97％、99％或99.9％。

在某些一般方面，本公开提供了多种方法，其中在施用组合之后，肿瘤生长减少了至少5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、97％、99％或99.9％。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在施用组合之后，如通过MTT试验中总细胞计数的增加或减少或通过ctDNA试验测量的基因档案的变化所测量的，肿瘤生长减少了至少5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、97％、99％或99.9％。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中给药导致低于10μM的IC₅₀值和/或低于1μM的GI₅₀值。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在给药后二十四(24)小时，给药导致低于10μM的IC₅₀值和/或低于1μM的GI₅₀值。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在给药后48小时，给药导致低于10μM的IC₅₀值和/或低于1μM的GI₅₀值。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中给药导致至少1、10、25、50、100、200、400、600、800或1000的AUC。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中给药导致不超过0.001μM、0.005μM、0.01μM、0.05μM、0.1μM、1μM、3μM、5μM、10μM、20μM、40μM、50μM、60μM、80μM、90μM、100μM、200μM、250μM、300μM、350μM或400μM的IC₅₀值。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中给药导致至少0.01μM、0.1μM、1μM、3μM、5μM、10μM、20μM、40μM、50μM、60μM、80μM、90μM、100μM、200μM、250μM、300μM、350μM或400μM的EC₅₀值。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中给药导致在约1.001:1至约50:1、约1.1:1至约15:1、约1.2:1至约12:1、约1.2:1至约10:1、约1.2:1至约5:1或约1.2:1至约3:1范围内的治疗指数(TI)值。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中给药导致至少0.1μM、0.3μM、0.5μM、0.7μM、1μM、1.5μM、2μM、2.5μM、3μM、4μM、5μM或10μM的GI₅₀值。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中给药导致不超过0.1μM、0.5μM、1μM、2μM、2.5μM、3μM、4μM、5μM或10μM的观察最大反应(Max Response)值。

肿瘤生长可以用总肿瘤体积表示。基于实体瘤大致呈球形的假设，本领域技术人员可以使用一般的和特定于某些肿瘤模型的公式来计算肿瘤体积。在这点上，本领域技术人员可以使用实验工具(诸如超声成像、手动或数字卡尺、超声波检查、计算机断层摄像(CT)、microCT、¹⁸F-FDG-microPET或磁共振成像(MRI))来测量肿瘤体积。例如，参见MongaSP、Wadleigh R、Sharma A等人，用于缓解梗阻性食管癌患者的顺铂/肾上腺素注射凝胶的瘤内治疗(Intratumoral therapy of cisplatin/epinephrine injectable gel forpalliation in patients with obstructive esophageal cancer).《美国临床肿瘤学杂志(Am.J.Clin.Oncol.)》2000；23(4):386–392；Mary M.Tomayko C.、Patrick Reynolds，1989.无胸腺鼠(裸鼠)皮下肿瘤大小的确定(Determination of subcutaneous tumorsize in athymic(nude)mice).《癌症化疗与药理学(Cancer Chemotherapy andPharmacology)》，第24卷，第3期，第148-154页；E Richtig、G Langmann、K Müllner、GRichtig以及J Smolle,2004.计算肿瘤体积作为脉络膜黑色素瘤存活的预后参数(Calculated tumour volume as a prognostic parameter for survival in choroidalmelanomas).《眼睛(Eye)》(2004)18,619–623；Jensen等人，《BMC医学成像(BMC MedicalImaging)》2008.8:16；Tomayko等人，《癌症化疗与药理学》，1989年9月，第24卷，第3期，第148-154页；以及，Faustino-Rocha等人，《实验室动物(NY)(Lab Anim(NY))》.2013年6月；42(6):217-24，其全部内容均通过引用并入本文。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在施用组合之后，给药导致肿瘤体积减少至少5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、97％、99％或99.9％。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中如通过医学成像技术测量的，在施用组合之后，给药导致肿瘤大小减少至少5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％、97％、99％或99.9％。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中给药导致在1周、2周、3周、4周、6周、8周、12周、16周、20周、24周、36周或52周之后肿瘤体积减少至少5％。

适应症和基因标记

有效抑制肿瘤或治疗癌症的概率最高的受试者包括具有携带突变的癌细胞的受试者。通常，TP53缺陷的肿瘤细胞或其它癌细胞表现出这种敏感性。为了增加成功治疗的几率，科学家可以确定肿瘤细胞基因突变的程度，前者的情况是TP53突变的程度，或基因(TP53前体)或其次末级基因产物在癌细胞中过度表达(扩增)或表达不足的程度或者通过MDM2中的扩增而失活的程度。这些科学测量通过本领域技术人员熟知的方法确定，诸如免疫组织化学和逆转录聚合酶链式反应(RTPCR)。例如，评估p53状态的合适方法在Chiaretti等人，2011,《基因、染色体与癌症(Genes,Chrom.&Cancer)》50:263-274；和Berglind等人，2008,《癌症生物学与治疗(Cancer Biol.&Ther.)》7:5,699-708中进行了描述，其全部内容通过引用并入本文。此外，对于本领域技术人员来说，市售的测试试剂盒(比如AmpliChipTest)可用于实现这些目的，并且不会花费过多时间或训练以供利用。

本发明人观察到具有特定基因突变的某些癌细胞系‘更倾向’于Chk1抑制剂(例如SRA737)&PARP抑制剂的强组合活性，表现出在化合物库中相对较高的协同作用分数。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中使用癌细胞来识别基因标记，该癌细胞具有针对该标记的突变基因。在某些方面，通过与非癌细胞(即健康细胞)的基因档案进行比较来识别基因标记。而在某些方面，本公开提供了多种方法，其中使用癌细胞和非癌细胞两者来识别基因标记以确定一个或多个突变基因，任选地，癌细胞和非癌细胞来自单个人类受试者。

在某些方面，本公开提供用于抑制肿瘤生长的方法，其中肿瘤细胞与匹配的对照真核细胞的基因序列相比具有识别出的基因突变。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中肿瘤是来自在基因中具有基因突变的癌症的肿瘤，该基因是肿瘤抑制基因、DNA损伤修复基因、复制应激基因或致癌驱动基因，该癌症是膀胱癌、乳腺癌、***、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、脑癌、肉瘤、成神经细胞瘤或头颈鳞状细胞癌。

在某些方面，本文描述的方法用于治疗在选自由以下组成的组的至少一个基因中具有突变的受试者：BRIP1、HDAC2、ATM、BLM、BRCA1、BRCA2、CHEK2、FANCA、FANCC、FANCD2、FANCE、FANCF、FANCG、FANCI、FANCL、FANCM、MLH1、MSH2、MSH6、PALB2、POLD1、POLE、PMS2、POLE、RAD50、RAD51、RAD51B、RAD51C、RAD51D、RAD52、RAD54L、RPA1、SETD2 SMARCA4、TP53BP1、XRCC2、XRCC3、KMT2D和ARID1A。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中癌症是TP53缺陷型癌症。

在某些方面，癌症在REV7、SCHLFN-11或其组合中具有突变或异常表达。

在某些方面，癌症在BRCA、其它同源重组基因或其组合中具有突变或异常表达。

在某些方面，癌症具有同源重组途径缺陷。

在某些方面，癌症在BRCA、其它同源重组基因或其组合中不具有突变或异常表达。

在某些方面，癌症的同源重组途径机制有效。

在某些方面，癌症在BRCA1或BRCA2中具有逆转突变，导致同源重组途径和PARPi抗性的部分恢复。

在某些方面，癌症对PARPi治疗具有抗性。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者患有肿瘤和/或癌症，该肿瘤和/或癌症具有过度表达生物标记ORC1、CLSPN或USP1的细胞。在某些方面，本公开提供多种方法，其中受试者患有肿瘤和/或癌症，该肿瘤和/或癌症具有低表达生物标记RAD50的细胞。

在某些方面，本公开提供了使用高通量基因测序来选择患有癌症的受试者，受试者具有提供2.5的协同作用分数的细胞。在某些方面，本公开提供了使用高通量基因测序来选择患有癌症的受试者，受试者具有提供8.0的Loewe体积分数的细胞。

在某些方面，本公开提供了肿瘤细胞系和/或等基因细胞系的2D遗传筛选。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中通过下一代测序来识别基因标记。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在施用SRA737和PARP抑制剂的组合之前，对受试者进行筛选以确定其肿瘤和/或癌症是否提供高于3.0的协同作用分数。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在SRA737和PARP的组合前后，对受试者进行筛选以确定一个或多个临床相关终点和并确定协同作用分数和/或Loewe体积分数。

受试者

术语“受试者”可与术语“患者”互换。本公开提供了给有此需要的受试者或患者服用SRA737和PARP抑制剂的组合。在某些方面，在给药之前，用基因测试和/或测序对来自受试者的肿瘤进行筛选。在某些方面，给药之后，用基因测试和/或测序筛选对来自受试者的肿瘤进行筛选。在某些方面，在给药前后，对来自受试者的肿瘤进行筛选。在某些方面，在给药之前、在给药之后或者在给药前后，用基因测试和/或测序对来自受试者的健康细胞进行筛选。在某些方面，用其它生物测试或试验对来自受试者的肿瘤进行筛选，以确定某些生物标记的表达水平。在某些方面，用基因测试和/或测序以及其它生物标记测试或试验对来自受试者的肿瘤进行筛选。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是哺乳动物。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是灵长类动物。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是老鼠。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是人类。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有肿瘤的人类，该肿瘤在以下基因中的一种或多种中具有基因突变：肿瘤抑制基因、DNA损伤修复基因、复制应激基因或致癌驱动基因。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有TP53缺陷的肿瘤的人类。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有在CCNE1基因中具有突变的肿瘤的人类。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有在MYC基因中具有突变的肿瘤的人类。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有在MYCN基因中具有突变的肿瘤的人类。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有在CHEK1基因中具有突变的肿瘤的人类。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有在CHEK2基因中具有突变的肿瘤的人类。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有在KRAS基因中具有突变的肿瘤的人类。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中肿瘤存在于患有癌症的人类，癌症选自由以下组成的组：膀胱癌、乳腺癌、***、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、子宫内膜癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、脑癌、肉瘤、成神经细胞瘤或头颈鳞状细胞癌。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者患有癌症，癌细胞在以下基因中的一种或多种中具有基因突变：肿瘤抑制基因、DNA损伤修复基因、复制应激基因或致癌驱动基因。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有癌症的人类，该癌症是TP53缺陷型癌症。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有癌症的人类，该癌症是在NRAS基因中具有突变的癌症。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有癌症的人类，该癌症是在BRCA1基因中具有突变的癌症。在某些方面，受试者是患有在REV7、SCHLFN-11或其组合中具有突变或异常表达的癌症的人类。Rev7也可以称为：MAD2B、有丝***停滞缺陷型2样2、MAD2、聚合酶ζ2辅助亚基、MAD2样蛋白2、HREV7、有丝***纺锤体组装关卡蛋白MAD2B、FANCV和POLZ2。REV7包括由根据NCBI登记号NP_006332和NM_006341.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人REV7。SCHLFN-11也可以称为：SLFN11、Schlafen族成员11和SLFN8/9。SCHLFN-11(SLFN11)包括由根据NCBI登记号NP_689483和NM_152270.3的氨基酸序列和核苷酸序列编码的智人SLFN11。在某些方面，受试者患有在BRCA、其它同源重组基因或其组合中具有突变或异常表达的癌症。在某些方面，受试者患有具有同源重组途径缺陷的癌症。在某些方面，癌症在BRCA基因、其它同源重组基因或其组合中不具有突变或异常表达。在某些方面，癌症的同源重组途径机制有效。

在某些方面，癌症在BRCA或其它HR基因中具有逆转突变，导致导致同源重组途径的部分恢复，从而使肿瘤细胞PARPi具有抗性。

在某些方面，癌症对PARPi治疗具有抗性。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中受试者是患有癌症的人类，癌细胞过度表达和/或低表达一种或多种生物标记，包括：Myc、N-Myc、CCNE1、FBW7、TP53、BRAC1和Rb1。

给药

如本文所公开的，本发明的方法包括共同给药Chk1抑制剂和PARP抑制剂的组合。如本文所公开的，本发明的方法包括共同给药SRA737和PARP抑制剂的组合。共同给药包含同时给药Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的方法、顺序给药Chk1抑制剂和PARP抑制剂的方法、以及间歇地或连续地给药Chk1抑制剂和PARP抑制剂之一或两者的方法，或者同时、顺序、间歇和/或连续给药的任意组合。本领域技术人员应该认识到，间歇给药不一定于顺序给药相同，因为间歇给药还包括一种药剂的第一次给药，稍后再进行同一药剂的另一次给药。此外，本领域技术人员应该理解，在某些方面，间歇给药还包含顺序给药，因为间隙给药包括中断一种药剂的第一次给药以及在第一种药剂的再次给药之前给药不同药剂。进一步地，本领域技术人员还知道，连续给药可以通过多种途径(包括静脉滴注或饲管等)来完成。

此外，更一般地说，术语“共同给药”包含对受试者进行的Chk1抑制剂单独给药和PARP抑制剂单独给药在任何时间表期间重叠的任何和所有方法。

对受试者给药Chk1抑制剂和PARP抑制剂的频率在本领域中称为Qnd或qnd，其中n是该药剂的连续给药频率(以天为单位)。例如，Q3d将是每三(3)天给药一次药剂。这里，本公开提供了多种方法，包括以Q1d、Q2d、Q3d、Q4d、Q5d、Q6d、Q7d、Q8d、Q9d、Q10d、Q14d、Q21d、Q28d、Q30d、Q90d、Q120d、Q240d或Q365d向受试者给药Chk1抑制剂和/或PARP抑制剂中的任一种或两种或其任意组合。

在一个方面，本公开提供了多种方法，其中间歇地给药Chk1抑制剂和/或PARP抑制剂中的任一种或两种或其任意组合。在一个方面，本公开提供了多种方法，包括以至少十(10)分钟、十五(15)分钟、二十(20)分钟、三十(30)分钟、四十(40)分钟、六十(60)分钟、两(2)小时、三(3)小时、四(4)小时、六(6)小时、八(8)小时、十(10)小时、十二(12)小时、十四(14)小时、十八(18)小时、二十四(24)小时、三十六(36)小时、四十八(48)小时、三(3)天、四(4)天、五(5)天、六(6)天、七(7)天、八(8)天、九(9)天、十(10)天、十一(11)天、十二(12)天、十三(13)天、十四(14)天、三(3)周或四(4)周的给药延迟向受试者给药Chk1抑制剂或PARP抑制剂中的任一种或两种或其任意组合。在这些方面，延迟给药遵循这样的模式：Chk1抑制剂和/或PARP抑制剂中的任一种或两种或其任意组合在约10分钟至约365天的给定时间段内连续给药，然后在约10分钟至约30天的给定时间段内不给药。在一个方面，本公开提供了多种方法，Chk1抑制剂和/或PARP抑制剂中的任一种或任意组合间歇给药，而另一种连续给药。

在一个方面，本公开提供了多种方法，其中顺序地给药第一有效量的Chk1抑制剂和第二有效量的PARP抑制剂的组合。

在一个方面，本公开提供了多种方法，其中同时给药Chk1抑制剂和PARP抑制剂。在一个方面，本公开提供了多种方法，其中顺序地给药第一有效量的Chk1抑制剂和第二有效量的PARP抑制剂的组合。在这些方面，组合也称为“共同给药”，因为该术语包括使受试者暴露于组合中的两种组分的任何和所有方法。然而，这些方面不限于仅在一种制剂或组合物中给出的组合。一定浓度的Chk1抑制剂和PARP抑制剂可能更有利于以特定间隔递送，因此第一有效量和第二有效量可以根据所施用的制剂而变化。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中同时或顺序地给药Chk1抑制剂和PARP抑制剂。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在给药第二有效量的PARP抑制剂之后顺序地给药第一有效量的Chk1抑制剂。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在给药第一有效量的Chk1抑制剂之后顺序地给药第二有效量的PARP抑制剂。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在一种制剂中施用Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的组合。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在2种组合物中施用该组合，在与第二有效量的PARP抑制剂的制剂分开的制剂中施用第一有效量的Chk1抑制剂(例如SRA737)。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在2种组合物中施用该组合，在与第二有效量的PARP抑制剂的制剂分开的制剂中施用第一有效量的Chk1抑制剂。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在给药第二有效量的PARP抑制剂之后顺序地给药第一有效量的Chk1抑制剂。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在给药第二有效量的PARP抑制剂之后顺序地给药第一有效量的Chk1抑制剂。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中在给药第一有效量的Chk1抑制剂之后顺序地给药第二有效量的PARP抑制剂。在某些方面，给药Chk1抑制剂和PARPi；并且随后，间歇给药Chk1抑制剂和PARPi至少二十四(24)小时。在某些方面，Chk1抑制剂和PARPi以非重叠的每隔一天的时间表给药。

在某些方面，本公开提供多种方法，其中在给药第二有效量的PARP抑制剂后不少于4小时给药第一有效量的Chk1抑制剂。在一个方面，本公开提供了多种方法，其中在给药第二有效量的PARP抑制剂后不少于10分钟、不少于15分钟、不少于20分钟、不少于30分钟、不少于40分钟、不少于60分钟、不少于1小时、不少于2小时、不少于4小时、不少于6小时、不少于8小时、不少于10小时、不少于12小时、不少于24小时、不少于2天、不少于4天、不少于6天、不少于8天、不少于10天、不少于12天、不少于14天、不少于21天或不少于30天，给药第一有效量的Chk1抑制剂。在一个方面，本公开提供了多种方法，其中在给药第一有效量的Chk1抑制剂后不少于10分钟、不少于15分钟、不少于20分钟、不少于30分钟、不少于40分钟、不少于60分钟、不少于1小时、不少于2小时、不少于4小时、不少于6小时、不少于8小时、不少于10小时、不少于12小时、不少于24小时、不少于2天、不少于4天、不少于6天、不少于8天、不少于10天、不少于12天、不少于14天、不少于21天或不少于30天，给药第二有效量的PARP抑制剂。

在某些方面，本公开提供了多种方法，其中Chk1抑制剂(例如SRA737)和/或PARP抑制剂中的任一个或两者或任意组合通过选自由以下组成的组的途径给药：静脉内给药、皮下给药、经皮给药、口服给药、肌肉给药和腹腔给药。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中Chk1抑制剂和/或PARP抑制剂中的任一个或两者或任意组合通过静脉内给药。在某些方面，本公开提供了多种方法，其中Chk1抑制剂和/或PARP抑制剂中的任一个或两者或任意组合通过口服给药。

本领域技术人员应当理解，本公开的单位剂型可以以相同或不同的物理形式给药，即通过口服的胶囊或片剂和/或通过静脉输注的液体等。此外，每次给药的单位剂型可以因特定给药途径而不同。对于Chk1抑制剂和PARP抑制剂中的任一个或两者或组合可以存在几种不同的剂型。因为不同的医学病状可以保证不同的给药途径，所以本文描述的组合的相同组分在组成和物理形式上可以完全相同，并且可能需要以不同方式和可能在不同时间给药以减轻病状。例如，诸如持续恶心(特别是呕吐)等病状可能使得难以使用口服剂型，并且在这种情况下，可能需要通过吸入、口腔、舌下或栓剂途径替代或同时给药另一种单位剂型，甚至可能是与之前或之后使用的其它剂型相同的单位剂型。特定剂型可能需要Chk1抑制剂和PARP抑制剂的某些组合，因为可能存在与化学稳定性或药代动力学等各种因素的问题。

治疗有效量和单位剂型

本发明的方法包括给药第一有效量的Chk1抑制剂(例如SRA737)和第二有效量的PARP抑制剂。术语“治疗有效量”是指有效改善疾病症状的量，例如有效抑制肿瘤生长的量。

治疗有效量可以与第一有效量和第二有效量中的一个或两者。这是因为本公开提出本文描述的方法即使在第一或第二有效量都不是必须单独改善疾病症状的量的情况下也是有效的。然而，本公开确实提出必须提供组合的治疗有效量，即组合至少对疾病症状的治疗有影响。

单位剂型是本领域技术人员通常理解的术语。单位剂型是市售用于特定用途的药物产品。药物产品包括活性成分和任何非活性成分，最通常为药学上可接受的载体或赋形剂的形式。应当理解，多种单元剂型是不同的药物产品。因此，其中单位剂型可以是例如250mg的SRA737和PARP抑制剂按照各组分的一定比例的组合，例如750mg的SRA737和PARP抑制剂按照与上述相同的各组分的一定比例的组合。因此，从一种单位剂型到另一种单位剂型，第一有效量和第二有效量可以保持相同。当然，当第一有效量或第二有效量中的任一个发生变化时，单位剂型是不同的。

在某些方面，第一有效量是Chk1抑制剂化合物独有的，即它不同于第二有效量。在某些方面，第一有效量是等同于“治疗有效量”的量或产生治疗和/或有益效果的量。在某些方面，第一有效量是“治疗有效量”。在某些方面，第二有效量是“治疗有效量”。在某些方面，第一有效量和第二有效量均不是“治疗有效量”。在某些方面，第二有效量是PARP抑制剂化合物独有的，即第二有效量对于不同PARP抑制剂化合物是不同的量。在某些方面，第二有效量对PARP抑制剂的特性不敏感，并且是给定量，无论PARP抑制剂是否在组合中。

在某些方面，Chk1抑制剂和PARP抑制剂组合配制成1个单位剂型。在某些方面，相同的单位剂型至少给药4小时、6小时、8小时、12小时、24小时、1天、2天、3天、7天、10天、14天、21天或30天。

在某些方面，Chk1抑制剂和PARP抑制剂组合配制成至少2种单独不同的单位剂型。在某些方面，第一有效量在第一单元剂型中不同于在第二单位剂型中。在某些方面，第一有效量在第一单位剂型中与在第二单位剂型中相同。

在某些方面，第一单位剂型与第二单元剂型相同。在某些方面，第一单位剂型与第二单位剂型和第三单位剂型相同。在某些方面，第一单位剂型与第二单位剂型、第三单位剂型和第四单位剂型相同。

本发明化合物

在一个方面，本公开提供了化合物a Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂化合物的组合以及使用方法。

Chk1抑制剂

Chk1抑制剂包括但不限于：SRA737、普瑞色替(LY2606368)(购自Sellechchem，目录号S7178)、PF-477736(购自Sellechchem，目录号S2904)、AZD7762(购自Sellechchem，目录号S1532)、雷布色替(LY2603618)(购自Sellechchem，目录号S2626)、MK-8776(SCH900776)(购自Sellechchem，目录号S2735)、CHIR-124(购自Sellechchem，目录号S2683)、SAR-020106(购自Sellechchem，目录号S7740)和CCT245737(购自Sellechchem，目录号S8253)。

SRA737

SRA737可与本文中所用的术语“Sierra化合物1”和“ProNAi化合物1”互换。化合物SRA737也通过化学名称5-[[4-[[吗啉-2-基]甲基氨基]-5-(三氟甲基)-2-吡啶基]氨基]吡嗪-2-甲腈来识别。SRA737的各对映异构体可用于本文公开的组合物、方法和试剂盒。

SRA737是国际专利申请第PCT/GB2013/051233号和美国专利第9,663,503号中公开的化合物，其全部内容均通过引用并入本文。本领域技术人员将在国际专利申请第PCT/GB2013/051233和美国专利第9,663,503号中找到合成SRA737的可行方法。SRA737的对映异构体的合成见于PCT/GB2013/051233第40-42页的实例部分(合成1A-1C)。

在一个方面，SRA737结构如下表所示。

PARP抑制剂

PARP族包括至少17个成员，包括PARP1、PARP2、VPARP(ParP4)、端锚聚合酶1和端锚聚合酶2(PARP-5a或TNKS以及PARPa5b或TNKS2)、PARP3、PARP6、TIPARP(或PARP7)、PARP8、PARP9、PARP10、JPARP11、PARP12、PARP14、PARP15和PARP16。在某些方面，PARP抑制剂抑制一个或多个PARP族成员的活性。在某些方面，PARP抑制剂选自由以下组成的组：奥拉帕尼、卢卡帕尼、维利帕尼、尼拉帕尼、伊尼帕利、他拉唑帕尼、维利帕尼、氟唑帕利、BGB-290、CEP-9722、BSI-201、EZ449、PF-01367338、AZD2281、INO-1001、MK-4827、SC10914和3-氨基苄胺。在一个方面，PARPi是奥拉帕尼。在一个方面，PARPi是尼拉帕尼。在一个方面，PARPi是卢卡帕尼。在一个方面，PARPi是他拉唑帕尼。在一个方面，PARPi是BGB-290。

有效量

本公开还提供了Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制的组合。本公开还提供了第一有效量的Chk1抑制剂和第二有效量的PARP抑制剂的组合。本公开还提供了一种药物组合物，该药物组合物包括第一有效量的Chk1抑制剂和第二有效量的PARP抑制剂、以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。在某些方面，本公开还提供了组合，其中第一有效量和第二有效分别是约0.001mg/kg至约15mg/kg的量。在某些实施例中，Chk1抑制剂的第一有效量和/或PARP抑制剂的第二有效量是0.001mg/kg、0.005mg/kg、0.010mg/kg、0.020mg/kg、0.050mg/kg、0.1mg/kg、0.2mg/kg、0.5mg/kg、1.0mg/kg、2.0mg/kg、5.0mg/kg、10.0mg/kg或15.0mg/kg。

本发明的药物组合物

本文描述了用于抑制肿瘤生长、抑制癌症进展或治疗癌症的方法。本发明的所述方法包括给药治疗有效量或第一有效量的Chk1抑制剂(例如SRA737)和治疗有效量或第二有效量的PARP抑制剂。Chk1抑制剂和PARP抑制剂可以分别配制成药物组合物。除了活性化合物之外，这些药物组合物还可以包括药学上可接受的赋形剂、载体、缓冲剂、稳定剂或本领域技术人员熟知的其它物质。这些物质应当是无毒的，并且不应当干扰活性成分的功效。载体或其它物质的确切性质可以取决于给药途径，例如口服途径、静脉内途径、经皮或皮下途径、鼻腔途径、肌肉途径、腹腔途径。

用于口服给药的药物组合物可以是片剂、胶囊、粉剂或液体形式。片剂可以包括固体载体，诸如明胶或佐剂液体药物组合物通常包括液体载体，诸如水、石油、动物油或植物油、矿物油或合成油。可以包括生理盐水溶液、葡萄糖或其它糖溶液或二醇类，诸如乙二醇、丙二醇或聚乙二醇。

对于静脉注射、经皮注射或皮下注射或者在病痛部位处注射，活性成分将以肠胃外可接受的水溶液的形式存在，该水溶液是无热原的并且具有合适的pH、等张性和稳定性。本领域相关技术人员能够使用例如等张赋形剂(诸如氯化钠注射液、林格注射液、乳酸钠林格注射液)制备合适的溶液。根据需要，可以包括防腐剂、稳定剂、缓冲剂、抗氧化剂和/或其它添加剂。

组合物可以单独给药或与其它治疗方法联合给药，同时或顺序给药，这取决于待治疗的病状。

通常，本技术的化合物将通过用于相似用途的药剂的任何可接受给药方式以治疗有效量给药。本技术的化合物(即活性成分)的实际量将取决于多种因素，诸如待治疗疾病的严重程度、受试者的年龄和相对健康状况、所使用的化合物的效力、给药途径和形式、以及本领域技术人员熟知的其它因素。药物可以每天至少给药一次，优选地每天一次或两次。

这些药剂的有效量可以通过常规实验容易地确定，最有效且方便的给药途径和最合适的制剂也是如此。本领域中可获得各种制剂和药物递送系统。例如，参见Gennaro,A.R.,ed.(1995)《雷明顿药物科学(Remington's Pharmaceutical Sciences)》，第18版，马克出版公司。

治疗有效剂量最初可以使用本领域中熟知的多种技术来估计。动物研究中使用的初始剂量可以基于细胞培养试验中建立的有效浓度。例如，可以使用从动物研究和细胞培养试验获得的数据来确定适合人类受试者的剂量范围。

药剂(例如本技术的化合物)的有效量或治疗有效量或剂量是指使受试者的症状改善或存活延长的药剂或化合物的量。这些分子的毒性与疗效可以通过细胞培养或实验动物中的标准药学过程来确定，例如通过确定LD₅₀(对50％种群致死的剂量)和ED₅₀(对50％种群治疗有效的剂量)。毒性与疗效的剂量比是治疗指数，该治疗指数可以表示为LD₅₀/ED₅₀比。表现出高治疗指数的药剂是优选的。

有效量或治疗有效量是研究人员、兽医、医生或其他临床医生所寻求的将引起组织、系统、动物或人类的生物或医学反应的化合物或药物组合物的量。具体地，剂量落在包括毒性很小或没有毒性的ED₅₀的循环浓度范围内。根据所应用的剂型和/或所使用的给药途径，剂量可以在该范围内变化。考虑到受试者病状的具体情况，确切的剂型、给药途径、剂量和给药间隔应当根据本领域熟知的方法来选择。

可以对剂量和间隔进行单独调节以提供足以实现期望效果的活性部分的血浆水平，即最小有效浓度(MEC)。每种化合物的MEC会有所不同，但是可以例如通过体外数据和动物实验进行估计。实现MEC所需的剂量将取决于个体特性和给药途径。在局部给药或选择性摄取的情况下，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。

所施用的药剂或组合物的量可以取决于多种因素，包括正在治疗的受试者的性别、年龄和体重、病痛的严重程度、给药方式和处方医师的判断。

本技术不限于任何特定的组合物或药物载体，因此可以变化。通常，本技术的化合物将作为药物组合物通过以下途径中的任一种来给药：口服给药、全身给药(例如经皮给药、鼻腔给药或栓剂给药)或肠胃外给药(例如肌肉给药、静脉内给药或皮下给药)。优选的给药方式是使用可根据病痛程度调整的便利日剂量方案的口服。组合物可以采取片剂、丸剂、胶囊、半固体、粉剂、缓释制剂、溶液剂、混悬剂、酏剂、气雾剂或任何其它合适的组合物。本技术化合物的另一种优选给药方式是吸入。

制剂的选择取决于各种因素，诸如给药方式和药物物质的生物利用度。为了通过吸入递送，化合物可以配制成装入合适给药分配器的液体溶液、混悬剂、气雾推进剂或干粉剂。有几种类型的药物吸入装置——雾化吸入器、定量吸入器(MDI)和干粉吸入器(DPI)。雾化器装置产生高速空气流，该高速空气流使治疗药剂(以液体形式配制)作为薄雾喷射，薄雾被携带到受试者的呼吸道中。MDI通常是用压缩气体包装的制剂。在启动时，装置通过压缩气体排出测定量的治疗剂，从而提供设定量药剂的可靠给药方法。DPI以自由流动粉末的形式分配治疗机，该自由流动粉末可以在呼吸期间通过该装置分散在受试者的吸入气流中。为了获得自由流动的粉末，治疗剂与诸如乳糖等赋形剂一起配制。测定量的治疗剂以胶囊形式储存，并且通过每次启动来分配。

本技术化合物的药物剂型可以通过本领域熟知的任何方法制造，诸如，例如通过常规混合、筛分、溶解、熔融、制粒、制糖锭、压片、悬浮、挤出、喷雾干燥、研磨、乳化、(纳米/微米)包封、包埋或冻干工艺。如上所述，本技术的组合物可以包括促进活性分子加工成药用制剂的一种或多种生理上可接受的非活性成分。

最近，基于可以通过增加表面积(即减小粒度)来增加生物利用度的原理，已经特别研发出了生物利用度差的药物制剂。例如，美国专利第4,107,288号描述了具有10至1000nm大小的颗粒的药物制剂，其中活性物质负载在大分子的交联基质上。美国专利第5,145,684描述了药物制剂的生产，其中在存在表面改性剂的情况下将药物物质粉碎成纳米颗粒(平均粒度为400nm)，然后分散在液体介质中，得到表现出非常高深度利用度的药物制剂。

组合物通常由本技术的化合物与至少一种药学上可接受的赋形剂组合构成。可接受的赋形剂是无毒的，有助于给药，并且不会对所要求保护的化合物的治疗效益产生不利影响。这种赋形剂可以是任何固体、液体、半固体，或者在气雾剂组合物的情况下可以是本领域技术人员通常可获得的气体赋形剂。

固体药物赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、氯化钠、脱脂奶粉等。液体和半固体赋形剂可以选自甘油、丙二醇、水、乙醇和各种油类，包括石油、动物、织物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。优选的液体载体，特别是用于注射溶液的液体载体，包括水、生理盐水、葡萄糖水溶液和乙二醇。

压缩气体可以用于以气雾形式分散本技术的化合物。适用于此目的的惰性气体是氮气、二氧化氮等。其它合适的药物赋形剂及其制剂在由E.W.Martin编辑的《雷明顿药物科学》(马克出版公司，第18版，1990)中进行了描述。

在某些实施例中，药物组合物包括药学上可接受的盐。术语“药学上可接受的盐”是指衍生自本领域众所周知的各种有机和无机抗衡离子(例如，钠、钾、钙、镁、铵和四烷基铵)的盐；并且当分子含有碱性官能团时，“药学上可接受的盐”是有机或无机酸的盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、乙酸盐、马来酸盐和草酸盐。合适的盐包括Stahl和Wermuth(Eds.)，医药盐性能、选择与使用手册，2002。

如果需要，本组合物可以存在于含有一种或多种含活性成分的单位剂型的包装或分配器装置中。例如，这种包括或装置可以包括金属或塑料箔，诸如泡罩包装或玻璃、以及橡胶塞，例如小瓶中的橡胶塞。包装或分配器装置可以附有给药说明书。还可以制备包含配制在相容药物载体中的本技术的化合物的组合物，将该化合物放置在合适的容器中，并且标记用于治疗所指示的病状。

制剂中化合物的量可以在本领域技术人员使用的全范围内变化。通常，制剂将包含基于总制剂重量百分比(wt％)的约0.01wt％至99.99wt％的本技术的化合物，其余为一种或多种合适的药物赋形剂。优选地，化合物以约1wt％至80wt％的水平存在。下面将对代表性药物制剂进行描述。

制剂实例

以下是含有单独或组合的Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的代表性药物制剂。

制剂实例1——片剂制剂

将以下成分充分混合并压制成单一刻痕片。

成分	<u>每片的量(mg)</u>
		本技术的化合物	400
玉米淀粉	50
		交联羧甲基纤维素钠	25
乳糖	120
		硬脂酸镁	5

制剂实例2——胶囊制剂

将以下成分充分混合并装入硬壳明胶胶囊中。

制剂实例3——混悬制剂

将以下成分混合以形成用于口服给药的混悬剂。

成分	<u>每片的量(mg)</u>
		本技术的化合物	1000
富马酸	500
		氯化钠	2000
对羟基苯甲酸甲酯	150
		对羟基苯甲酸丙酯	50
砂糖	25
		山梨糖醇(70％溶液)	13
Veegum K(范德比尔特公司)	1000
		调味剂	0.035mL
着色剂	500
		蒸馏水	q.s.至100mL

制剂实例4——可注射制剂

将以下成分混合以形成可注射制剂。

成分	<u>每片的量(mg)</u>
		本技术的化合物	1000
乙酸钠缓冲溶液，0.4M	2mL
		HCl(1N)或NaOH(1N)	q.s.至合适的pH
水(蒸馏，无菌的)	q.s.至20mL

制剂实例5——栓剂制剂

通过将本发明的化合物与H-15(饱和植物脂肪酸的甘油三酯；Riches-Nelson，Inc.，纽约)来制备总重量为2.5g的栓剂，并且该栓剂具有以下组成：

组合物可以单独给药或与其它治疗方法联合给药，同时或顺序给药，这取决于待治疗的病状。

试剂盒

本公开还提供了一种试剂盒，该试剂盒包括Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的组合以及使用说明书。本公开还提供了一种试剂盒，该试剂盒包括一种或多种药物组合物以及使用说明书，其中药物组合物包括Chk1抑制剂和PARP抑制剂；任选地，组合包括至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。

试剂盒的单个组分可以包装在单独容器中并且与这些容器相关联，可以是由管理药物或生物产品的制造、使用或销售的政府机构规定的形式的商品描述，该商品描述反映了制造、使用或销售机构的批准。试剂盒可以任选地包含概述抗原结合构建体的使用方法或给药方案的说明或指示。

在某些方面，本公开提供了一种试剂盒，该试剂盒包括Chk1抑制剂(例如SRA737)和PARP抑制剂的组合以及至少一种药学上可接受的载体或赋形剂。

当试剂盒的一种或多种组分作为溶液(例如水溶液或无菌水溶液)提供时，容器装置自身可以是吸入注射器、移液管、滴眼管或其它类似装置，溶液可以从该装置施用于受试者，或者应用于试剂盒的其它组分并与其混合。

试剂盒的组分也可以以干燥或冻干形式提供，并且试剂盒可以另外包含用于重构冻干组分的合适溶剂。不管容器的数量或类型如何，本文描述的试剂盒还可以包括用于辅助向患者施用组合物的仪器。这种仪器可以是吸入器、鼻喷雾装置、注射器、移液管、医用镊子、量匙、滴眼管或相似的医学任何的递送载体。

在本文描述的另一个方面，提供了包含可用于治疗、预防和/或诊断本文所述病症(例如抑制肿瘤生长)的物质的制品。该制品包括容器以及在容器上或与容器相关联的标签或包装插页。例如，合适的容器包括瓶、小瓶、注射器、静脉注射溶液袋等。容器可以由诸如玻璃或塑料等多种材料形成。容器容纳有组合物，该组合物本身或与另一种组合物组合对治疗、预防和/或诊断病症有效；而且容器可以具有无菌入口(例如，容器可以是静脉溶液袋或具有皮下注射针可刺穿的塞子的小瓶)。

本文描述的本实施例中的制品可以进一步包括指示组合物可用于治疗特定病状的标签或包装插页。可替代地或此外，制品可以进一步包括第二(或第三容器)，该第二(或第三)容器包括药学上可接受的缓冲剂，诸如抑菌性注射用水(BWFI)、磷酸盐缓冲盐水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。它可以进一步包括从商业和使用者角度来看所需的其它材料，包括其它缓冲剂、稀释剂、过滤器、针头和注射器。

多肽和核酸序列

本文描述了可用于本发明的基因(例如CHK1基因)的多肽和核酸序列。在某些实施例中，可用于本发明的多肽和核酸序列与本文中描述的或本文中通过数据库登记号提及的序列至少95％、96％、97％、98％或99％相同。在某些实施例中，可用于本发明的多肽和核酸序列与本文中描述的或本文中通过数据库登记号提及的任何选择性剪接的类似物序列至少95％、96％、97％、98％或99％相同。在某些实施例中，可用于本发明的多肽和核酸序列与本文找那个描述的或本文中通过数据库登记号提及的序列100％相同。

在两种或更多种核酸或多肽序列的情况下，术语“百分比同一性”是指当与最大一致性比较和比对时，如使用下面描述的序列比较算法(例如BLASTP和BLASTN或本领域技术人员可获得的其它算法)中的一种或通过目测所测量的，具有特定百分比的核苷酸或氨基酸残基的两个或更多个序列或子序列是相同的。根据应用，百分比“同一性”可以存在于正在比较的序列的一个区域上，例如在功能域上，或者可替代地存在于待比较的两个序列的全长上。对于序列比较，通常一个序列作为参考序列，测试序列与该参考序列进行比较。当使用序列比较算法时，将测试序列和参考序列输入计算机；如果需要，指定子序列坐标，并指定序列算法程序参数。然后，基于指定的程序参数，序列比较算法计算测试序列相对于参考序列的百分比序列同一性。例如，用于对比的序列的最佳比对可以通过Smith&Waterman,《应用数学进展(Adv.Appl.Math.)》2:482(1981)的局部同源性算法、Needleman&Wunsch,《分子生物学杂志(J.Mol.Biol.)》48:443(1970)的同源性比较算法、Pearson&Lipman,《美国国家科学院学报(Proc.Nat'l.Acad.Sci.USA)》85:2444(1988)的相似性搜索法、这些算法的计算机化实现(威斯康星遗传软件包(Wisconsin Genetics Software Package)，Genetics Computer Group，575Science Dr.，Madison，Wis.中的GAP、BESTFIT、FASTA和TFASTA)或者通过目测(一般参见Ausubel等，下文)来进行。适用于确定百分比同一性和序列相似性的算法的一个实例是BLAST算法，该BLAST算法在Altschul等人，《分子生物学杂志》215:403-410(1990)中进行了描述。用于进行BLAST分析的软件可通过国家生物技术信息中心(www.ncbi.nlm.nih.gov/)公开获得。

实例

下面是用于实施本发明的具体实施例的实例。这些实例仅用于说明目的，并不旨在以任何方式限制本发明的范围。已经做出努力确保所使用数字(例如量、温度等)的准确性，但是当然也应当允许一些实验误差和偏差。

除非另有说明，本发明的实践将采用本领域技术范围内的蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学。这些技术在文献中进行了充分说明。例如，参见T.E.Creighton，《蛋白质：结构与分子性质(Proteins:Structures and Molecular Properties)》(W.H.Freeman and Company，1993)；A.L.Lehninger，《生物化学(Biochemistry)》(WorthPublishers,Inc.，现行版)；Sambrook等人，《分子克隆：实验室手册(Molecular Cloning:ALaboratory Manual)》(第2版，1989)；《酶学方法(Methods In Enzymology)》(S.Colowick和N.Kaplan eds.，Academic Press,Inc.)；《雷明顿药物科学》，第18版(宾夕法尼亚州伊斯顿：麦克出版公司，1990)；Carey和Sundberg，《高级有机化学(Advanced OrganicChemistry)》，第3版。(Plenum出版社)A卷和B卷(1992).

筛选方法

简单来说，细胞系保存在液氮中，并且在含有全血清的生长培养基中解冻和扩增。当细胞达到预期的倍增时间时，开始筛选试验。将细胞接种到生长培养基中，并且通过离心达到平衡。将细胞培养物放置在培养箱中，然后进行处理。收集酶联板，并且测量ATP水平。在同时和顺序给药方案中，将酶联板与组合一起温育七十二(72)或九十六(96)小时。

作为对照，单独测试SRA737(“Sierra化合物1”或“ProNAi化合物1”)以量化针对相同细胞系的单一药剂活性，然后再次与PARP抑制剂组合以比较两者的协同活性。将它们各自的活性的聚类分析关联起来，以便分析目标或作用模式。这种分析证明是一种使在整个细胞系板上观察到SRA737活性增强模式的有用方法。

试验基于可通过多种方式(例如ATP产生或MTT试验)测量的细胞生长抑制来确定比较分数。

效力移位使用等效应图来评估，这表明与达到该效果所需的单药剂剂量相比，联合使用达到预期效果所需的药物要少得多。等效应图是通过识别与越过所指示的抑制水平的浓度轨迹来绘制的。这是通过找出剂量矩阵中每个单一药剂浓度与其它单一药剂的浓度的交叉点来实现的。实际上，每个垂直浓度C_Y保持固定，同时使用分半算法结合反应面Z(C_X,C_Y)中给出选定效果水平的垂直剂量来识别水平浓度C_X。然后，通过线性插值将这些浓度连接起来以产生等效应图显示。对于协同相互作用，等效应图轮廓低于相加性阈值并接近原点，而拮抗相互作用将高于相加性阈值。误差条表示由用于生成等效应图的单个数据点引起的不确定性。每个交叉点的不确定性使用分半法根据反应误差进行估计，以找到Z–σ_Z(C_X,C_Y)和Z+σ_Z(C_X,C_Y)与I_cut相交处的浓度，其中σ_Z是效果标度上的残留误差的标准偏差。

这些试验用于评估SRA737和协同增强剂的组合，在15个人类癌细胞系的面板中进行。筛选的目的是识别表现出选择性协同杀伤肿瘤细胞的强大组合。SRA737与PARP抑制剂化合物组合，并且早包括膀胱癌、结肠直肠癌、肺癌、卵巢癌、胰腺癌和头颈癌细胞系的细胞系板中进行测试。选择用于与SRA737组合的增强剂化合物广泛地选自肿瘤学治疗剂。筛选也为化合物的给药方案的效果提供信息。对整个细胞系板中的各种组合进行同时给药以及顺序给药。筛选使用ATPlite^TM端点创建48种独特组合。

评分

对抗肿瘤/抗癌试验筛选的结果进行分析并制定分数，以比较不同组合并评估每种组合超越单一药剂活性的能力。

生长抑制(GI)作为细胞生长的量度。GI百分比通过应用以下测试和等式来计算：

如果T＜V₀：

如果T≥V₀：

其中T是测试制品在72或96小时时的信号测量值，V是未处理的/载体处理的对照测量值，V_o是在时间0时的未治疗的/载体对照测量值(也通俗称为T₀板)。该公式来源于国家癌症研究所的NCI-60高通量筛选中使用的生长抑制计算。

此外，抑制是细胞活力的量度。0％抑制水平表示不会抑制癌细胞生长，100％抑制水平表示在治疗期间细胞数量没有倍增。抑制百分比计算如下：

I＝1-T/U

其中T是经过治疗的，U表示未治疗的。

协同作用分数

标量协同作用分数设计为量化组合的协同相互作用。协同作用分数计算如下：

协同作用分数＝log f_x log f_yΣmax(0,I_数据)(I_数据-I_loewe)

Loewe体积分数

计算Loewe体积分数以量化超过单一药剂观察到的相加性的组合活性的量值。相加性计算如下：

I_Loewe满足(X/X_i)+(Y/Y_i)＝1

其中XI和YI是观察到的组合效果I的单一药剂有效浓度。

单一药剂评估

将保存在液氮中的细胞系解冻，并且在含有全血清的生长培养基中扩增。一旦细胞达到预期的倍增时间，便开始筛选。将细胞接种到黑色384孔组织培养物处理板中的生长培养基中，细胞密度如并入本说明书并作为本说明的一部分的附录1所列举的。通过离心是细胞在酶联板中平衡，并且在处理前置于37℃的培养箱(附接至配量模块)中24小时。在处理时，收集一组酶联板(不接受处理)，并且通过使用ATP监测发光监测试验(购自PerkinElmer的ATPLite^TM)检测ATP代谢来测量ATP水平。使用Envision读板仪上的超灵敏发光来读取这些T₀板。将酶联板与化合物一起温育72，然后使用ATPLite^TM进行分析。

Chalice分析仪允许两种可视化单一药剂剂量反应曲线的方式。分析仪中的Logistics曲线拟合建模使用数据点的S形建模。在大多数情况下，Logistics曲线拟合会精确地模拟剂量反应曲线。对实例中包含的单一药剂和SRA737的组合活性的所有后续分析均使用线性插值曲线拟合。

组合评估

利用SRA737结合PARP抑制剂对Chk1的抑制进行高通量筛选。SRA737可与本文中所用的术语“Sierra化合物1”和“ProNAi化合物1”互换。PARP抑制剂在本文中称为“配偶体化合物”和/或“增强剂”。

这种组合筛选使用SRA737和配偶体化合物的共同治疗给药方案来进行(图1)。在时间0(0h)时加入被增强剂(SRA737)和增强剂(配偶体化合物)。将细胞暴露于SRA737和增强剂达到整个72小时治疗时间。通过自动化过程收集所有数据点，并且使用专有软件对这些数据点进行质量控制和分析。如果酶联板通过以下质量控制标准，则接受这些酶联板：相对原始值在整个实验中是一致的，Z因子分数大于0.6，并且未处理/载体对照在板上表现一致。

生长抑制(GI)用作细胞生长的量度。GI百分比通过应用以下测试和等式来计算：

如果

如果

其中T是测试制品在72或96小时时的信号测量值，V是未处理的/载体处理的对照测量值，V_o是在时间0时的未治疗的/载体对照测量值(也通俗称为T₀板)。该公式来源于国家癌症研究所的NCI-60高通量筛选中使用的生长抑制计算。

0％的GI读数表示没有生长抑制，并且在72或96小时的T读数与相应时间段的V读数相当的情况下发生。GI 100％表示完全生长抑制(白细胞郁滞)，并且在这种情况下，用化合物处理了72或96小时的细胞将具有与T0对照细胞相同的终点读数。200％的GI表示培养孔中所有细胞的完全死亡(细胞毒性)，并且在这种情况下，在72或96小时的T读数会低于T₀对照(接近或为0的值)。这些GI计算用于组合筛选的所有单一药剂和组合数据分析。

抑制作为细胞活力的量度：0％抑制水平表示通过治疗不会抑制细胞生长。100％抑制表示在治疗窗口期间细胞数没有倍增。细胞抑制和细胞毒性处理都可以产生100％的抑制百分比。抑制百分比计算如下：I＝1-T/U，其中T是经过治疗的，U是未治疗的。

协同作用分数分析

为了测量超过Loewe相加性的组合效果，使用标量测量来表称为协同分数的协同相互作用的强度。协同作用分数计算如下：

协同作用分数＝log f_x log f_yΣmax(0,I_数据)(I_数据-I_loewe)

相对于所有载体处理的对照孔的中值，计算矩阵中各种组分药剂和组合点的分数抑制。协同作用分数等式将矩阵中超过模型表面的各点处的实验观察的活性量进行积分，该模型表面是使用Loewe相加性模型从组分药剂的活性数值地导出的。协同作用等式(上述)的其它术语用于标准化单独药剂的各种稀释因子，并且允许在整个实验中比较协同作用分数。包含正抑制门控或Idata乘法器次凹处了零效应水平附近的噪音，并且偏置了在高活性水平下发生的协同相互作用的结果。具有较高最大生长抑制(GI)效应或在低浓度下具有协同效应的的组合将具有较高协同作用分数。具有在统计学上取代基线自交叉值的协同作用分数的那些组合可以视为是协同作用的。GI效应的量值可能与细胞的生长速率相关，而生长速率对于所检测的每个细胞系是变化的。

效力移位使用等效应图来评估，这表明与达到该效果所需的单药剂剂量相比，联合使用达到预期效果所需的药物要少得多。等效应图是通过识别与越过所指示的抑制水平的浓度轨迹来绘制的。这是通过找出剂量矩阵中每个单一药剂浓度与其它单一药剂的浓度的交叉点来实现的。实际上，每个垂直浓度C_Y保持固定，同时使用分半算法结合反应面Z(C_X,C_Y)中给出选定效果水平的垂直剂量来识别水平浓度C_X。然后，通过线性插值将这些浓度连接起来以产生等效应图显示。对于协同相互作用，等效应图轮廓低于相加性阈值并接近原点，而拮抗相互作用将高于相加性阈值。误差条表示由用于生成等效应图的单个数据点引起的不确定性。每个交叉点的不确定性使用分半法根据反应误差进行估计，以找到Z–σ_Z(C_X,C_Y)和Z+σ_Z(C_X,C_Y)与I_cut相交处的浓度，其中σ_Z是效果标度上的残留误差的标准偏差。

Loewe体积分数分析

Loewe体积分数用于评估超过Loewe相加性模型的组合相互作用的总体量值。在区分表型活性(阳性Loewe体积)与协同拮抗性(阴性Loewe体积)的协同增加时，Loewe体积特别有用。当观察到拮抗作用时，如在当前数据集中，对Loewe体积进行评估以检查拮抗作用与特定药物靶活性或细胞基因型之间是否存在任何相关性。该模型将相加性定义为非协同组合相互作用，其中不能将组合剂量矩阵表面不能与自身交叉的任何药物区分开。

相加性的计算如下：I_Loewe满足(X/X_Ii)+(Y/Y_I)＝1，其中X_I和Y_I是观察到的组合效果I的单一药剂有效浓度。例如，如果通过1μM的药物A或1μM的药物B单独实现了50％抑制，则0.5μM的A和0.5μM的B的组合也应该抑制50％。

观察到的超过Loewe相加性的活性鉴定了协同相互作用。对于本分析，将经验导出的组合矩阵与各自的Loewe相加性模型进行比较，Loewe相加性模型是根据实验收集的单一药剂剂量反应曲线来构建的。在整个剂量反应矩阵中的这种过量相加性的总和称为Loewe体积。阳性Loewe体积表明协同作用，而阴性Loewe体积表明拮抗作用(图2)。如上所述，协同作用分数是正门控值，不能用于测量潜在的拮抗作用。

实例1：单一药剂评估

对SRA737和四种PARP抑制剂分别在10种癌细胞系(包括乳腺癌细胞、卵巢癌细胞、***癌细胞、肉瘤细胞和头颈癌细胞)中的单一药剂活性进行评估(图3至图9)。检测的10种癌细胞系是：A673、B-474、CAL-27、DU-145、MDA-MB-231、OVCAR-3、OVCAR-5、PC-3、HT-29和SK-BR-3。利用72小时治疗时间表对细胞系进行筛选。通过使用ATP监测发光监测试验(ATPLite^TM)检测ATP代谢来测量细胞活力。对GI50、IC50、观察到的最大反应(MaxResponse)进行计算(图5)。

作为单一药剂，SRA737在10种癌细胞系中的8种中表现出活性。SRA737在两种最敏感的细胞系中具有适度的细胞活性，而在剩余六种细胞系中具有细胞抑制性。OVCAR-5和SK-BR-3细胞对SRA737的敏感性最高。HT-29、DU145、A673和OVCAR-3细胞表现出中等敏感性，而PC-3、MDA-MB-231、BT-474和CAL-27细胞对SRA737的敏感性最低(图6)。这些发现与先前对细胞系CAL-27、HT-29和OVCAR-3的研究一致(图7)。

测试的四种PARP抑制剂BMN 673(他拉唑帕尼)、尼拉帕尼、奥拉帕尼和卢卡帕尼在大多数测试的癌细胞系中也表现出活性。具体地，细胞系A673和SK-BR-3始终对PARP抑制敏感(图8和图9)。

实例2：组合评估

使用10x10组合矩阵，共同处理72小时处理之间，并使用ATPliteTM作为终点，对细胞系进行筛选。如上所述计算协同作用分数和Loewe体积(图10至图23)。

SRA737与PARP抑制剂表现出协同相互作用。在10种细胞系中的8种中观察到与BMN673(他拉唑帕尼)的最强协同作用和最大活性幅度，这些细胞系包括对单一药剂PARP抑制不敏感的细胞系(图10至图13)。虽然低协同作用分数相对于BMN 763较低，但是也观察到与尼拉帕尼、奥拉帕尼和卢卡帕尼组合的协同作用。CAL-27和OVCAR-3细胞系中与奥拉帕尼的协同相互作用结构与先前的研究一致(图23)。

实例3：Chk1抑制剂的组合评估

通过评估单独的Chk1抑制剂在如上所述的10种细胞系(A673、B-474、CAL-27、DU-145、MDA-MB-231、OVCAR-3、OVCAR-5、PC-3和SK-BR-3)中的单一药剂活性，然后评估各Chk1抑制剂与四种PARP抑制剂(即BMN 673(他拉唑帕尼)、尼拉帕尼、奥拉帕尼和卢卡帕尼)中的每一种的组合活性，来确定结构不同的Chk1抑制剂与PRAP抑制剂的协同活性。协同作用分数分析和Loewe体积分数分析如上所述。结构不同的Chk1抑制剂包括但不限于：SRA737、普瑞色替(LY2606368)、PF-477736、AZD7762、雷布色替(LY2603618)、MK-8776(SCH 900776)、CHIR-124、SAR-020106或CCT245737。

实例4：治疗人类肿瘤生长的组合方法

用Chk1抑制剂和PARP抑制剂的组合治疗患有肿瘤的人类受试者，从而减少肿瘤生长。

选择或识别需要治疗的受试者。受试者的识别可以在临床环境中进行。受试者患有由癌症引起的肿瘤，例如受试者患有膀胱癌、乳腺癌、结肠直肠癌、食道癌、胃癌、头颈癌、肝细胞癌、白血病、肺癌、淋巴瘤、间皮瘤、黑素瘤、骨髓瘤、卵巢癌、***癌、胰腺癌、肾细胞癌、小细胞肺癌或头颈部鳞状细胞癌。

在时间0时，向受试者单独或组合给药合适的第一剂量的Chk1抑制剂和PARP抑制剂。例如，PARP抑制剂是奥拉帕尼、卢卡帕尼、维利帕尼、尼拉帕尼、伊尼帕利、他拉唑帕尼、维利帕尼、氟唑帕利、BGB-290、CEP-9722、BSI-201、EZ449、PF-01367338、AZD2281、INO-1001、MK-4827、SC10914或3-氨基苄胺。例如，Chk1抑制剂是SRA737、普瑞色替(LY2606368)、PF-477736、AZD7762、雷布色替(LY2603618)、MK-8776(SCH 900776)、CHIR-124、SAR-020106或CCT245737。Chk1抑制剂和PARP抑制剂如本文所述来配制。

在第一次给药一段时间候，例如，通过测量肿瘤生长来评价受试者的病状。这种测量可以伴随测量细胞中标记基因的表达、细胞中Chk1活性的抑制和细胞中PARP活性的抑制。其它相关临床终点也如本文所述来测量。

给药的次数和强度根据受试者的需要来调节。

治疗后，受试者的肿瘤生长速率相对于治疗前存在的速率降低，或相对于些类似患病但未治疗的受试者中测量的速率降低。

虽然已经参照优选实施例和各种替代实施例具体示出并描述了本发明，但是相关领域的技术人员应当理解，在不脱离本发明的精神和范围的情况下，可以在形式和细节上做出各种改变。

出于所有目的，本说明书正文中引用的所有参考文献、授权专利和专利申请均通过引用全部并入本文。

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