一种抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂及制备方法
阅读说明：本技术 一种抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂及制备方法 (A kind of agent of common rabdosia leaf extract particles and preparation method of anti-mycobacterium tuberculosis ) 是由 盛玮 段永波 滕井通 薛建平 张爱民 朱艳芳 于 2019-09-04 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂及制备方法,其特征在于。本发明所述的颗粒剂由以下重量份的原料制成：王枣子提取物12-18份,药用淀粉58-76份,蔗糖4-8份,羟甲基纤维素钠1-2份,硬脂酸钠1-2份。本发明以王枣子为原料,加入辅料制备成具有抗结核杆菌功效的颗粒剂,充分利用了王枣子的有效成分,制备的王枣子提取物颗粒剂可以预防和治疗结核病,服用方便,而且对王枣子的开发利用具有重要意义。(The agent of common rabdosia leaf extract particles and preparation method the invention discloses a kind of anti-mycobacterium tuberculosis, it is characterised in that.Granule of the present invention is made of raw material from the following weight: 12-18 parts of common rabdosia leaf extract, 58-76 parts of medical starch, 4-8 parts of sucrose, 1-2 parts of sodium cellulose glycolate, 1-2 parts of odium stearate.The present invention is using common rabdosia leaf as raw material, auxiliary material is added and is prepared into the granule with anti-mycobacterium tuberculosis, takes full advantage of the effective component of common rabdosia leaf, the common rabdosia leaf extract particles agent of preparation can prevent and treat tuberculosis, it is convenient to take, and be of great significance to the development and utilization of common rabdosia leaf.)
技术领域
本发明涉及天然药物技术领域，尤其涉及一种抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂及制备方法。
背景技术
王枣子(Isodon amethystoides (Benth) Cy Wu et Hsuan)是唇形科香茶菜属植物，根茎叶都为药用部位，是安徽省宿州市地方特产的传统中草药，据《宿州志》、《宿县志》记载：“王枣子生长在宿县北部符离、夹沟、曹村、皇藏峪一带山区，是野生药食两用植物，具有抗菌消炎、退烧解毒、止咳平喘、整肠健胃等功效。”王枣子中含有萜类、生物碱、黄酮类、多糖及挥发油等多种天然活性物质，其中，萜类成分主要有王枣子甲素、乙素和丙素，毛叶醇、齐墩果酸和卜谷街醇等。研究表明王枣子具有抗菌消炎、清热解毒、抗衰老、抗疲劳、抗肿瘤、护肝和胃、醒酒保健、提高自身免疫力等作用，被誉为“天然植物抗生素”。目前，王枣子的开发甚少，民间直接用王枣子熬成汤喝，王枣子的有效成分利用不充分，因此研究开发一种治疗和预防结核病的王枣子提取物颗粒剂具有重要的意义。
结核病(tuberculosis，TB)是由结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis，MTB)引起的一种慢性致死性疾病，是危害人类健康和导致人类死亡的重大传染性疾病。其致死率仅次于艾滋病(acquiredimmunodeficiency syndrome，AIDS)。由于抗结核药物的大量使用和抗结核作用位点的突变，导致耐多药结核病 (multidrug-resistanttuberculosis，MDR-TB)不断出现。2016年世界范围内有1040万新发病例，我国是全球22个 TB流行最严重的国家之一，据2010年全国第五次结核病流行病学调查估计年发病人数为130万，占全球新发病人数的14.3％，是全球第二大结核病高负担国家。目前结核病的治疗周期较长，患者顺应性较差。一线抗结核药物和二线抗结核药物在临床上广泛使用，出现耐多药结核杆菌，不能达到有效控制结核病。我国中药的资源丰富，治疗时重视整体协同，而且毒副作用小以及不易产生耐药等特点和优势，使得抗结核中药在日益严峻的结核治疗方面展现出了越来越光明的应用前景。
发明内容
本发明的目的是提供一种新的抗结核杆菌的药物，具体而言，本发明提供了一种抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂及制备方法。
为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
一种抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂，其特征在于，由以下重量份的原料制成：王枣子提取物12-18份，药用淀粉58-76份，蔗糖4-8份，羟甲基纤维素钠1-2份，硬脂酸钠1-2份。
所述王枣子提取物通过以下方法制备得到：
(1)将王枣子全草清洗干净，干燥后粉碎，过80目的筛网，得王枣子粉；
(2)将(1)所得的王枣子粉与浸提剂比为1∶5-30(w/w)投料浸提萃取，浸提温度40-100℃，浸提时间10分钟-10小时，浸提萃取时，间歇搅拌原料，过滤提取液，收集得到滤液和滤渣；将滤渣重复浸提1-2次，重复过滤，最后合并所有滤液；
所用的浸提剂的组成成份及配比按照重量份数计为：60-95%乙醇95-100份，乳化剂0-5份；
(3)将(2)所得的王枣子提取液在真空度≤0.08MPa，65℃条件下浓缩至原体积的1/5-1/10；
(4)在(3)所得的王枣子浓缩提取液中，按王枣子全草质量的0.01-0.05倍加入羟丙基-β-环糊精，用搅拌器分散均匀后，经喷雾干燥得王枣子提取物。
所述的抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂的制备方法，包括以下步骤：先按上述重量份数称取原料；然后将王枣子提取物、药用淀粉、蔗糖、羟甲基纤维素钠、硬脂酸钠混合均匀，干法制粒，即得。
王枣子提取物的有效成分主要是萜类，而萜类化合物具有强疏水性，不利于吸收，生物利用度较低，因此在王枣子提取物加入羟丙基-β-环糊精，使萜类化合物与羟丙基-β-环糊精形成包合物，改善萜类化合物的溶解性能，调节释放速度，提高王枣子提取物的稳定性及生物活性。
本发明以王枣子为原料，加入辅料制备成具有抗结核杆菌功效的颗粒剂，充分利用了王枣子的有效成分，制备的王枣子提取物颗粒剂可以预防和治疗结核病，服用方便，而且对王枣子的开发利用具有重要意义。
说明书附图
图1是王枣子提取物颗粒剂对分枝杆菌H37Ra的杀菌作用实验照片。
具体实施方式
实施例1
一种抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂由以下重量份的原料混合制成：王枣子提取物16g，药用淀粉73g，蔗糖6g，羟甲基纤维素钠2g，硬脂酸钠1g。
其中王枣子提取物是通过以下方法制备得到：
(1)将王枣子全草清洗干净，干燥后粉碎，过80目的筛网，得王枣子粉。
(2)将(1)所得的王枣子粉与浸提剂比为1∶20(w/w)投料浸提萃取，浸提温度70℃，浸提3小时，浸提萃取时，间歇搅拌原料，过滤提取液，收集得到滤液和滤渣；将滤渣重复浸提1次，过滤，合并滤液。
所用的浸提剂的组成成份及配比按照重量份数计为： 90%乙醇98份，乳化剂2份。
(3)将(2)所得的王枣子提取液在真空度≤0.08MPa，65℃条件下浓缩至原体积的1/5-1/10。
(4)在(3)所得的王枣子浓缩提取液中，按王枣子全草质量的0.03倍加入羟丙基-β-环糊精，用搅拌器分散均匀后，经喷雾干燥得王枣子提取物。
一种抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂的制备方法：按重量份称取所有原料，然后将王枣子提取物、药用淀粉、蔗糖、羟甲基纤维素钠、硬脂酸钠混合均匀，干法制粒，即得。
实施例2
王枣子提取物18g，药用淀粉69g，蔗糖8g，羟甲基纤维素钠1.5g，硬脂酸钠1.5g。
所述王枣子提取物是通过以下方法制备得到：
(1)将王枣子全草清洗干净，干燥后粉碎，过80目的筛网，得王枣子粉；
(2)将(1)所得的王枣子粉与浸提剂比为1∶25(w/w)投料浸提萃取，浸提温度65℃，浸提时间3.5小时，浸提萃取时，间歇搅拌原料，过滤提取液，收集得到滤液和滤渣；将滤渣重复浸提1次，过滤，合并滤液；
所用的浸提剂的组成成份及配比按照重量份数计为： 95%乙醇100份；
(3)将(2)所得的王枣子提取液在真空度≤0.08MPa，65℃条件下浓缩至原体积的1/5-1/10；
(4)在(3)所得的王枣子浓缩提取液中，按王枣子全草质量的0.04倍加入羟丙基-β-环糊精，用搅拌器分散均匀后，经喷雾干燥得王枣子提取物。
抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂的制备方法同实施例1的方法。
实施例3
王枣子提取物15g，药用淀粉74g，蔗糖7g，羟甲基纤维素钠2g，硬脂酸钠2g。
所述王枣子提取物是通过以下方法制备得到：
(1)将王枣子全草清洗干净，干燥后粉碎，过80目的筛网，得王枣子粉；
(2)将(1)所得的王枣子粉与浸提剂比为1∶20(w/w)投料浸提萃取，浸提温度60℃，浸提时间5小时，浸提萃取时，间歇搅拌原料，过滤提取液，收集得到滤液和滤渣；将滤渣重复浸提1次，过滤，合并滤液；
所用的浸提剂的组成成份及配比按照重量份数计为： 85%乙醇96份，乳化剂4份；
(3)将(2)所得的王枣子提取液在真空度≤0.08MPa，65℃条件下浓缩至原体积的1/5-1/10；
(4)在(3)所得的王枣子浓缩提取液中，按王枣子全草质量的0.025倍加入羟丙基-β-环糊精，用搅拌器分散均匀后，经喷雾干燥得王枣子提取物。
抗结核杆菌的王枣子提取物颗粒剂的制备方法同实施例1的方法。
实施例4 药理实验
1 实验原理：采用常规的液体培养法确定王枣子提取物颗粒剂抗结核的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC)。
2 实验材料
王枣子提取物颗粒剂用30%乙醇溶解后，用95%的乙醇配制成含王枣子提取物100 mg/mL的溶液，备用。
M.tb菌株：弱毒株H37Ra，标准毒株H37R。
临床耐药菌株：耐利福平(RIF)菌株，耐异烟肼(INH)菌株，耐硫酸链霉素(STR)菌株，耐对氨基水杨酸(PAS)菌株。
3实验方法
3.1 菌株的活化 将冻存的M.tb菌株(包括H37Ra，H37R，临床菌株)置于冰上解冻，采用划线法取20 µL接种于7H10(含OADC)固体培养基平板上，在37℃培养3周后，挑取单菌落接种于10 mL 7H9(含OADC)液体培养基中，在37℃静置培养2～3周至OD600nm为0.8时制备种子液；按照1%的比例接种种子液于10 mL 7H9(含OADC)液体培养基中，在37℃静置培养2周至OD600nm为0.8时备用。
3.2 MIC测定
使用OD600nm为0.8的菌悬液配制细菌终浓度为105 CFU/mL的菌悬液，在48孔细胞培养板中加入1 mL的菌悬液，并加入王枣子提取物，使王枣子提取物最终浓度分别为16、8、4、2、1、0.5 µg/mL，在37℃，5% CO2细胞培养箱中培养2周后，根据菌液的浑浊情况判定MIC。
3.3 MBC测定
在MIC实验结束后，每孔取100 µL的菌悬液进行涂板处理，在涂板实验组分别设置16、8、4 µg/mL、95%乙醇及对照 (7H9)。涂板后，在37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养 3 周，观察平板生长情况判定MBC。
4 实验结果
4.1 王枣子提取物颗粒剂对结核分枝杆菌H37Ra的最小抑菌浓度(MIC)
以H37Ra作为模式菌株进行试验，在37℃，5% CO2细胞培养箱中培养2周后，其结果如表1。由表1可知王枣子提取物颗粒剂抗H37Ra的MIC为8 µg/mL。
4.2 王枣子提取物颗粒剂对结核分枝杆菌H37Ra的最小杀菌浓度(MBC)
以H37Ra作为模式菌株进行试验，将H37Ra菌株分别接种到含王枣子提取物16、8 、4 µg/mL的液体培养基中，在37℃，5% CO2细胞培养箱中培养3周后，分别涂平板继续培养3周，其结果如图1，由图1可知王枣子提取物颗粒剂抗H37Ra的MBC为16 µg/mL。
4.3王枣子提取物颗粒剂对临床菌株的抑制作用
将临床菌株分别接到含16 µg/mL的王枣子提取物的液体培养中，在37℃，5% CO2细胞培养箱中培养2周后，其结果如表2。由表2可知，异烟肼抗性的单耐药菌株菌株可以正常生长，其余类型的耐药菌株不生长，推断王枣子提取物颗粒剂的杀菌机理可能与异烟肼相似。
♦ RIF：耐利福平菌株，INH：耐异烟肼菌株，STR：耐硫酸链霉素菌株，PAS：耐对氨基水杨酸菌株。
*- 细菌不生长 + 细菌正常生长。