阅读说明：本技术 一种植物用复合菌剂及其制备方法 (A kind of plant composite bacteria agent and preparation method thereof ) 是由 束震 吕超田 束张静怡 束冰 于 2019-08-14 设计创作，主要内容包括：本发明公开了一种植物用复合菌剂及其制备方法,涉及植物复合菌剂技术领域,本发明以多黏芽孢杆菌微囊粒剂和木霉菌微囊粒剂复配剂对田间已发生枯萎病的西瓜苗进行灌根防治,经芽孢杆菌、木霉菌复配处理后与不使用任何药剂的对照相比西瓜枯萎病发病率明显降低,二者的复配药剂均可显著促进西瓜的生长发育,培育健壮植株,同时采用微囊粒剂具有货架期长,药效稳定,缓慢释放有效成分分解和挥发,减少用药量,防止漂移,减少环境污染,使用方便,提高药剂选择性等作用,是最具发展前景的剂型之一。(The invention discloses a kind of plant composite bacteria agents and preparation method thereof, it is related to plant composite bacteria agent technical field, the present invention carries out pouring root prevention and treatment with the watermelon seedling that field wilt disease has occurred for Bacillus polymyxa microcapsulated granule and Trichoderma microcapsulated granule compounding agent, through bacillus, watermelon blight disease incidence is substantially reduced compared with the control without using any medicament after Trichoderma complex treatment, the compound drug of the two can significantly promote the growth and development of watermelon, cultivate healthy and strong plant, have shelf life long using microcapsulated granule simultaneously, efficacy stability, slow release effective component is decomposed and volatilization, reduce dosage, it prevents from drifting about, it reduces environmental pollution, it is easy to use, improve the effects of medicament is selective, it is one of dosage form most with prospects.)

一种植物用复合菌剂及其制备方法

技术领域

本发明涉及植物复合菌剂技术领域，特别是指一种植物用复合菌剂及其制 备方法。

背景技术

西瓜枯萎病称死秧病、麦割病、萎凋病，是由西瓜专化型尖孢镰刀菌 (Fusariumoxysporum f.sp.niveum)侵染所引起的土传性病害，其病原能在土 壤中存活时间8～10年。西瓜整个生育期都会受到枯萎病的危害，可造成西瓜 产量下降30％，有些地块减产50％以上，甚至绝产。严重影响西瓜的优质、 高效生产。而且，随着西瓜种植面积的扩大，西瓜连作重茬也不断增加了西瓜 枯萎病的发生。目前国内外针对西瓜枯萎病的防治没有有效的办法，是西瓜生 产中的癌症。采用嫁接换根、抗病育种、轮作、换土等方法效果也不够理想， 成本高、技术要求严格。化学药剂防治药剂防治效果差。而生物防治除了有优 良的防效之外，还具有保护和改善农田生态环境，不污染环境，对人、畜安全 等优点。

随着农业的发达程度的不断提升，微生物农药剂型(复合菌剂为主)也不 断的涌现出来，但申请人在研究时发现，目前国内对相关微生物农药剂型的研 究不够深入，主要表现为剂型单一，缺乏高水平的剂型，目前制约微生物农药 剂型发展的最重要的一个因素就是微生物农药剂型存在货架期短，在使用时容 易发生药粉飞扬，对人员造成危害。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提出一种植物用复合菌剂及其制备方法以解 决现有技术中微生物农药剂型货架期短、用时容易发生药粉飞扬等问题，以及 在防治西瓜枯萎病上的应用。

基于上述目的本发明提供的一种植物用复合菌剂，包括如下质量百分比成 分，多黏芽胞杆菌微囊粒剂50～75％、木霉菌微囊粒剂25～50％。

可选的，括如下质量百分比成分，多黏芽胞杆菌微囊粒剂60％、木霉菌微 囊粒剂40％。

可选的，所述多黏芽胞杆菌微囊粒剂和木霉菌微囊粒剂的有效活菌数不低 于10亿CFU/g。

可选的，所述木霉菌已于2019年5月23日保藏在中国典型培养物保藏中 心，保藏号为，CCTCC NO：M2019337。

一种植物用复合菌剂的制备方法，采用包括如下步骤的方法制备而成：

微囊粒剂，将多黏芽胞杆菌和木霉菌分别依次经过一级种子扩大培养和二 级罐培养后，然后分别向两者的发酵罐中加入淀粉和硅藻土，在温度20～30℃ 下进行搅拌糊化混合均匀后，然后将两种糊化液分别通过低温真空喷射造粒技 术制作成小于200μm的微囊粒剂，得到多黏芽胞杆菌微囊粒剂和木霉菌微囊 粒剂；

复合菌剂的制备，将制备的多黏芽胞杆菌微囊粒剂和木霉菌微囊粒剂加入 到由玉米浆干粉、葡萄糖、硫酸铵和腐殖酸钾组成的温度为8～15℃的溶液中， 搅拌混合均匀，同时用磷酸二氢钾调节混合液的pH不低于5，得复合菌剂。

可选的，所述淀粉和硅藻土的质量比为5～15:1，且硅藻土的孔径大于淀粉 的粒径。

可选的，所述玉米浆干粉、葡萄糖、硫酸铵和腐殖酸钾的质量比为5:1:1:3。

可选的，所述复合菌剂的有效活菌数不低于10亿CFU/g。

一种植物用复合菌剂的应用，用于防治西瓜枯萎病和促进西瓜生长。

从上面所述可以看出，本发明提供的一种植物用复合菌剂及其制备方法， 多黏芽孢杆菌可分泌产生胞外抗菌蛋白质，对各种作物枯萎病病菌孢子萌发和 菌丝生长都有抑制作用，而木霉菌也是自然界普遍存在的生防真菌，可通过重 寄生作用，抗生作用等机制对病菌起到抑制和灭杀作用；同时多黏芽孢杆菌和 木霉菌都与土壤微生物中的有益微生物之间有一定的相互协同作用，其可能的 抗病机制为与尖孢镰刀菌在生存空间和营养方面存在一定的竞争作用；从而可 以在植物的体内、根际和体表大量繁殖，与病原菌争夺植物体周围的营养，阻 止病原菌对植物器官的侵染，进而抑制病原菌的繁殖速度；同时也能够间接诱 导植物自身存在的抗病机制，从而抵御病原菌的攻击，减少植物病株数，且本 发明采用微囊粒剂具有货架期长，药效稳定，缓慢释放有效成分分解和挥发， 减少用药量，防止漂移，减少环境污染，使用方便，提高药剂选择性等作用， 是最具发展前景的剂型之一。

具体实施方式

为下面通过对实施例的描述，本发明的具体实施方式如所涉及的制造工艺 及操作使用方法等，作进一步详细的说明，以帮助本领域技术人员对本发明的 发明构思、技术方案有更完整、准确和深入的理解。

需要说明的：本申请使用的木霉菌保藏于中国典型培养物保藏中心，地址： 中国.武汉.武汉大学；保藏日期为2019年5月23日，保藏编号：CCTCC NO.M2019337，保藏生物分类名称：哈茨木霉(Trichoderma harzianum)。

为了解决现有技术中复合菌种的全部或者部分不足，本发明提供的一种植 物用复合菌剂，包括如下质量百分比成分，多黏芽胞杆菌微囊粒剂50～75％、 木霉菌微囊粒剂25～50％。

同时提供的一种植物用复合菌剂的制备方法，采用包括如下步骤的方法制 备而成：

微囊粒剂，将多黏芽胞杆菌和木霉菌分别依次经过一级种子扩大培养和二 级罐培养后，然后分别向两者的发酵罐中加入淀粉和硅藻土，在温度20～30℃ 下进行搅拌糊化混合均匀后，然后将两种糊化液分别通过低温真空喷射造粒技 术制作成小于200μm的微囊粒剂，得到多黏芽胞杆菌微囊粒剂和木霉菌微囊 粒剂；

复合菌剂的制备，将制备的多黏芽胞杆菌微囊粒剂和木霉菌微囊粒剂加入 到由玉米浆干粉、葡萄糖、硫酸铵和腐殖酸钾组成的温度为8～15℃的溶液中， 搅拌混合均匀，同时用磷酸二氢钾调节混合液的pH不低于5，得复合菌剂。

复合菌种用于防治西瓜枯萎病和促进西瓜生长。

多黏芽孢杆菌可分泌产生胞外抗菌蛋白质，对各种作物枯萎病病菌孢子萌 发和菌丝生长都有抑制作用，而木霉菌也是自然界普遍存在的生防真菌，可通 过重寄生作用，抗生作用等机制对病菌起到抑制和灭杀作用；同时多黏芽孢杆 菌和木霉菌都与土壤微生物中的有益微生物之间有一定的相互协同作用，其可 能的抗病机制为与尖孢镰刀菌在生存空间和营养方面存在一定的竞争作用；从 而可以在植物的体内、根际和体表大量繁殖，与病原菌争夺植物体周围的营养， 阻止病原菌对植物器官的侵染，进而抑制病原菌的繁殖速度；同时也能够间接 诱导植物自身存在的抗病机制，从而抵御病原菌的攻击，减少植物病株数，且 本发明采用微囊粒剂具有货架期长，药效稳定，缓慢释放有效成分分解和挥发，减少用药量，防止漂移，减少环境污染，使用方便，提高药剂选择性等作用， 是最具发展前景的剂型之一。

更进一步本发明实施例1提供一种植物用复合菌剂，包括如下质量百分比 成分，多黏芽胞杆菌微囊粒剂60％、木霉菌微囊粒剂40％，且多黏芽胞杆菌 微囊粒剂和木霉菌微囊粒剂的有效活菌数10亿CFU/g。

一种植物用复合菌剂的制备方法，采用包括如下步骤的方法制备而成：

微囊粒剂，将多黏芽胞杆菌和木霉菌分别依次经过一级种子扩大培养和二 级罐培养后，然后分别向两者的发酵罐中加入淀粉和硅藻土，在温度20～30℃ 下进行搅拌糊化混合均匀后，然后将两种糊化液分别通过低温真空喷射造粒技 术制作成小于200μm的微囊粒剂，得到多黏芽胞杆菌微囊粒剂和木霉菌微囊 粒剂；

复合菌剂的制备，将制备的多黏芽胞杆菌微囊粒剂和木霉菌微囊粒剂加入 到由玉米浆干粉、葡萄糖、硫酸铵和腐殖酸钾组成的温度10℃的溶液中，搅 拌混合均匀，同时用磷酸二氢钾调节混合液的pH不低于5，得复合菌剂。

淀粉和硅藻土的质量比为10:1，且硅藻土的孔径大于淀粉的粒径；玉米浆 干粉、葡萄糖、硫酸铵和腐殖酸钾的质量比为5:1:1:3；复合菌剂的有效活菌数 不低于10亿CFU/g。

可选的，本发明实施例还提供了一种植物用复合菌剂，包括如下质量百分 比成分，多黏芽胞杆菌微囊粒剂50％、木霉菌微囊粒剂50％，同时采用下面 的性能测试的方法进行性能测试，测试的结果为主蔓粗度可增长35.68％、叶 面横径、纵径分别增加14.55％和14.82％，坐果率也增加35.8％，防效82.12％。

可选的，本发明实施例还提供了一种植物用复合菌剂，包括如下质量百分 比成分，多黏芽胞杆菌微囊粒剂75％、木霉菌微囊粒剂25％。同时采用下面 的性能测试的方法进行性能测试，测试的结果为主蔓粗度可增长41.68％、叶 面横径、纵径分别增加14.75％和14.82％，坐果率也增加38.5％，防效82.53％。

可选的，本发明实施例还提供了一种植物用复合菌剂，包括如下质量百分 比成分，多黏芽胞杆菌微囊粒剂70％、木霉菌微囊粒剂30％。同时采用下面 的性能测试的方法进行性能测试，测试的结果为主蔓粗度可增长38.68％、叶 面横径、纵径分别增加14.45％和14.52％，坐果率也增加37.4％，防效82.45％。

可选的，本发明实施例还提供了一种植物用复合菌剂，包括如下质量百分 比成分，多黏芽胞杆菌微囊粒剂55％、木霉菌微囊粒剂45％。同时采用下面 的性能测试的方法进行性能测试，测试的结果为主蔓粗度可增长38.14％、叶 面横径、纵径分别增加13.58％和13.75％，坐果率也增加36.45％，防效82.13％。

性能测试

1、测试材料，供试植物为西瓜，供试药剂为10亿CFU/g的多黏芽胞杆 菌微囊粒剂和10亿CFU/g的木霉菌微囊粒剂，以及实施例1制备的10亿CFU/g 复配的复合菌剂，多黏芽胞杆菌和木霉菌均由申请人筛选、分离和鉴定。对照 化学药剂为嘧菌酯。

2、试验方法

试验于2019年5月18日至6月14日在安徽省蚌埠市凤阳县有西瓜枯萎 病发病症状的田间土壤中进行。试验设5组：(1)不使用任何药剂的土壤(CK)， (2)10亿CFU/g多黏芽孢杆菌微囊粒剂300倍液，(3)10亿CFU/g木霉菌 微囊粒剂300倍液，(4)实施例1制备的10亿CFU/g复配的复合菌剂300倍 液，随机排列，每个处理2次重复。各处理区施药均使用量杯每株灌根500mL， 自第一次施药的7d后按相同方法和药量进行第二次施药，(5)使用嘧菌酯处理试验区周边西瓜苗土壤做化学药剂对照，其它常规管理。

3、预防效果测定

第一次施药前(5月18日)和第二次施药后的第20d(6月14日)时观 察并记录各处理区西瓜的发病情况，并参照王汉荣(王汉荣,方丽.西瓜和砧木 品种(系)抗枯萎病的鉴定与评价[J].北方园艺,2010,(8)；181-183)方法，病害 分级标准：0级：无病症；1级：1片或2片子叶轻微发黄，但生长正常；2 级：1～2片叶片黄化或1片子叶出现坏死斑，真叶稍变黄，出现轻微萎蔫；3 级：子叶全部枯死，真叶明显萎蔫，生长受阻；4级：全株严重萎蔫或死亡。根据调查结果并按照以下公式计算病情指数、发病率、防治效果。

发病率＝病株数/调查总株数×100％

病情指数＝[∑(各级病株数×相应级数)/(调查总植株数×最高级数)] ×100％

防治效果＝[(对照区病情指数-处理区病情指数)/对照区病情指数]×100％

4、西瓜主要生长指标的测定

试验结束后测定各处理区西瓜植株主蔓长度、主蔓直径、叶面纵径、叶面 横径、坐果数。每处理随机抽取3株，利用卷尺测定主蔓长度、叶面纵径、叶 面横径，利用游标卡尺测定主蔓直径。主蔓长度为子叶到主蔓顶端的长度。主 蔓直径为主蔓第十节间中间部位直径。

测试结果

1、对西瓜枯萎病的防治效果

表1 不同药剂对西瓜枯萎病的防效

结果表明，使用多黏芽孢杆菌300倍液、木霉菌300倍液以及两种制剂的 复配药剂500mL对西瓜灌根20d后，西瓜植株枯萎病发病率均比施药前减小， 并且每个处理发病率都明显低于空白对照的防治效果。多黏芽孢杆菌、木霉菌 以及多黏芽孢杆菌和木霉菌的复配试验药剂300倍液病情指数分别为10.78、 9.62、6.14。空白对照处理区的病情指数为16.49，三种菌剂处理的病情指数明 显低于对照处理组。复合菌剂处理的防效最高，达到82.78％，具有很好的防 治作用，特别是治疗作用显著。

2、对西瓜的促生作用

表2 不同药剂对西瓜生长的影响

五个处理对西瓜的长势的影响调查发现(表2)，多黏芽孢杆菌、木霉菌、 以及两种制剂的复配后处理的西瓜叶片浓绿、植株健壮、坐果数多，且茎蔓和 叶片生长较快，综合所有数据，复合菌剂处理后的主蔓长度、主蔓粗度、叶面 横径、叶面纵径以及坐果率显著高于空白对照和化学药剂。叶面纵横径均比空 白对照增加15％以上。多黏芽孢杆菌和木霉菌单独处理后两者间西瓜的长势并 无明显差异，但主蔓粗壮，叶片横径和纵径也均大于空白对照。化学农药嘧菌 酯处理后对西瓜主蔓长度起到了抑制作用。从调查的坐果数来看，复合菌剂坐 果数最高，总体来看三个菌剂处理后均对西瓜的长势起到明显的促进作用。其 中复合菌剂处理表现突出，主蔓粗度可增长42.68％、叶面横径、纵径分别增 加15.75％和15.82％，坐果率也增加41.5％。

同时对第2次施药后的第20d进行检测发现，施用多黏芽孢杆菌微囊粒剂 和木霉菌微囊粒剂以及复合菌剂的处理区均未发生药害，表明本发明实施例的 用药剂型、方法和剂量对西瓜生长安全。

所属领域的普通技术人员应当理解：以上任何实施例的讨论仅为示例性的， 并非旨在暗示本公开的范围(包括权利要求)被限于这些例子；在本发明的思 路下，以上实施例或者不同实施例中的技术特征之间也可以进行组合，步骤可 以以任意顺序实现，并存在如上所述的本发明的不同方面的许多其它变化，为 了简明它们没有在细节中提供。

本发明的实施例旨在涵盖落入所附权利要求的宽泛范围之内的所有这样 的替换、修改和变型。因此，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何省略、 修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。