阅读说明：本技术 一种提高牛大力生根率的培养方法 (A kind of cultural method improving beautiful millettia root rooting rate ) 是由 郑彬江 周国权 郑彬旭 罗志超 于 2019-07-22 设计创作，主要内容包括：本发明涉及一种牛大力的培养方法,依次包括以下步骤：步骤一,取牛大力幼苗茎尖组织进行无菌分离,并在固体培养基中培养14天；步骤二,将步骤一中得到的组织转移至含有细胞分裂素的第一液体培养基中,以150-200rpm进行振荡培养28天得到叶芽；步骤三,将步骤二中得到的叶芽转移至盛有不含细胞分裂素的第二液体培养基的锥形瓶中,在搅拌并通入空气的条件下培养21天,使叶芽组织再生并诱导生根。该培养方法能够有效提高牛大力的生根率,并避免褐化现象。(The present invention relates to a kind of cultural methods of beautiful millettia root, successively the following steps are included: step 1, takes beautiful millettia root seedling stem-tip tissue to carry out sterile separation, and cultivate 14 days in solid medium；Tissue obtained in step 1 is transferred in the first fluid nutrient medium containing the basic element of cell division by step 2, obtains leaf bud within shaken cultivation 28 days with 150-200rpm progress；Leaf bud obtained in step 2 is transferred in the conical flask for filling the culture medium of the second liquid without the basic element of cell division by step 3, is cultivated 21 days under conditions of stirring and being passed through air, and leaf bud regeneration and root induction are made.The cultural method can effectively improve the rooting rate of beautiful millettia root, and avoid browning.)

一种提高牛大力生根率的培养方法

技术领域

本申请属于植物培养技术领域，具体涉及一种提高牛大力生根率的培养方法。

背景技术

牛大力，别名猪脚笠、金钟根、山莲藕、倒吊金钟、大力薯。是一种药材。为豆科豆科崖豆藤属植物。牛大力在我国尚未产业化，可谓方兴未艾，所以很多种植户经常犯了认识上的错误，误以为一旦种植牛大力就成功的丰收。殊不知，牛大力有很多不同的种质品源，不同牛大力种源，其形态特性和产量存在一定的差异性，选对质优高产的品种方可成功丰收；反之，则可能失败。牛大力幼苗期管理不科学，将严重影响后期的收获，这是致命性的。科学合理的树冠会制造更多的光合产物向根部输送，促进根茎的快速膨大。

生根培养是植物组织培养的主要步骤，一般来说是当植物增殖培养后，采用适当的培养基配合一定浓度和比例的激素诱导植物生根的过程，采用现有技术中的培养方法培育牛大力，培养期长，生长的芽的大小不均匀，基部坚硬且难以分割，生根率低，且移植到土壤中成活率低，因此，如何提供一种提高牛大力生根率及移栽成活率的培养方法是本领域亟待解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种有效提高牛大力生根率及移栽成活率的培养方法。

具体地，本发明的牛大力培养方法依次包括如下步骤：

步骤一，取牛大力幼苗茎尖组织进行无菌分离，并在固体培养基中培养14天，所述固体培养基含有MS盐、0.5-1 mg/L BAP、10-20g/L蔗糖和2-10g/L琼脂，固体培养基的pH为5.8；

步骤二，将步骤一中得到的组织转移至含有细胞***素的第一液体培养基中，以150-200rpm进行振荡培养28天得到叶芽，所述第一液体培养基为含0.1-5mg/L BAP和10g /L蔗糖的MS培养基，第一液体培养基的pH为5.8；

步骤三，将步骤二中得到的叶芽转移至盛有不含细胞***素的第二液体培养基的锥形瓶中，在搅拌并通入空气的条件下培养21天，使叶芽组织再生并诱导生根，所述第二液体培养基含20-30g /L蔗糖和5-8g/L琼脂，第二液体培养基的pH为5.8。

优选地，步骤三中所述诱导生根的条件为：温度为25℃-28℃，湿度为90%-95％，光子照度为75μmol/ m ² / s -90μmol/ m ² / s。

优选地，步骤三中所述锥形瓶的容量为1500-1800ml，第二液体培养基的体积为1000-1200ml。

本发明的有益效果为：

本发明中的第一液体培养基中BAP的含量为0.1-5mg/L，如果BAP的含量小于下限值，叶原基不生长，故只能获得单株植物；如果BAP的含量超过上限值，则会抑制叶原基的形成，从而不能获得叶芽。

本发明中的牛大力幼苗茎尖组织先在固体培养基中生长至一定程度后，再转移至液体培养基，如果首先在液体培养基中进行振荡培养，植物组织会漂浮在液体培养基的表面上，并且在振荡中碰撞容器壁导致死亡。

与固体培养基相比，植物组织在液体培养基中的生长速度更快，且经本发明研究发现，先在含有细胞***素的液体培养基中培养一定时间后，再转移至不含细胞***素的液体培养基中培养，能够有效提高生根率。

具体实施方式

实施例1

本实施例牛大力培养方法依次包括如下步骤：

步骤一，取牛大力幼苗茎尖组织进行无菌分离，并在固体培养基中培养14天，所述固体培养基含有MS盐、0.5mg/L BAP、20g/L蔗糖和5g/L琼脂，固体培养基的pH为5.8；

步骤二，将步骤一中得到的组织转移至含有细胞***素的第一液体培养基中，以180rpm进行振荡培养28天得到叶芽，所述第一液体培养基为含3mg/L BAP和10g /L蔗糖的MS培养基，第一液体培养基的pH为5.8；

步骤三，将步骤二中得到的叶芽转移至盛有不含细胞***素的1000ml第二液体培养基的1800ml的锥形瓶中，在搅拌并通入空气的条件下培养21天，使叶芽组织再生并在温度为25℃，湿度为95％，光子照度为80μmol/ m ² / s的条件下诱导生根，所述第二液体培养基含20g /L蔗糖和6g/L琼脂，第二液体培养基的pH为5.8。

本实施例中牛大力的生根率为97%，且在生长过程中未出现褐化现象。

对比例1

本对比例牛大力培养方法依次包括如下步骤：

步骤一，取牛大力幼苗茎尖组织进行无菌分离，并在固体培养基中培养14天，所述固体培养基含有MS盐、0.5mg/L BAP、20g/L蔗糖和5g/L琼脂，固体培养基的pH为5.8；

步骤二，将步骤一中得到的组织转移至含有细胞***素的第一液体培养基中，以180rpm进行振荡培养28天得到叶芽，所述第一液体培养基为含3mg/L BAP和10g /L蔗糖的MS培养基，第一液体培养基的pH为5.8；

步骤三，将步骤二中得到的叶芽转移至盛有不含细胞***素的1000ml第二液体培养基的1800ml的锥形瓶中，在搅拌并通入空气的条件下培养21天，使叶芽组织再生并在温度为25℃，湿度为95％，光子照度为80μmol/ m ² / s的条件下诱导生根，所述第二液体培养基含20g /L蔗糖、0.5mg/L BAP和6g/L琼脂，第二液体培养基的pH为5.8。

本实施例中牛大力的生根率为75%，第二液体培养基中加入了BAP后，牛大力的生根率下降。

对比例2

本对比例牛大力培养方法依次包括如下步骤：

步骤一，取牛大力幼苗茎尖组织进行无菌分离，并在固体培养基中培养14天，所述固体培养基含有MS盐、0.5mg/L BAP、20g/L蔗糖和5g/L琼脂，固体培养基的pH为5.8；

步骤二，将步骤一中得到的组织转移至含有细胞***素的第一液体培养基中，以180rpm进行振荡培养28天得到叶芽，所述第一液体培养基为含10g /L蔗糖的MS培养基，第一液体培养基的pH为5.8；

步骤三，将步骤二中得到的叶芽转移至盛有不含细胞***素的1000ml第二液体培养基的1800ml的锥形瓶中，在搅拌并通入空气的条件下培养21天，使叶芽组织再生并在温度为25℃，湿度为95％，光子照度为80μmol/ m ² / s的条件下诱导生根，所述第二液体培养基含20g /L蔗糖和6g/L琼脂，第二液体培养基的pH为5.8。

本实施例中牛大力的生根率为60%，第一液体培养基中不含BAP，牛大力的生根率下降。

对比例3

本对比例牛大力培养方法依次包括如下步骤：

步骤一，取牛大力幼苗茎尖组织进行无菌分离，并在固体培养基中培养14天，所述固体培养基含有MS盐、0.5mg/L BAP、20g/L蔗糖和5g/L琼脂，固体培养基的pH为5.8；

步骤二，将步骤一中得到的组织转移至含有细胞***素的第一液体培养基中，以180rpm进行振荡培养28天得到叶芽，所述第一液体培养基为含6mg/L BAP和10g /L蔗糖的MS培养基，第一液体培养基的pH为5.8；

步骤三，将步骤二中得到的叶芽转移至盛有不含细胞***素的1000ml第二液体培养基的1800ml的锥形瓶中，在搅拌并通入空气的条件下培养21天，使叶芽组织再生并在温度为25℃，湿度为95％，光子照度为80μmol/ m ² / s的条件下诱导生根，所述第二液体培养基含20g /L蔗糖和6g/L琼脂，第二液体培养基的pH为5.8。

本实施例中牛大力的生根率为45%，第一液体培养基中BAP含量过高，牛大力的生根率下降。

对比例4

本对比例牛大力培养方法依次包括如下步骤：

步骤一，取牛大力幼苗茎尖组织进行无菌分离，并在第一固体培养基中培养14天，所述第一固体培养基含有MS盐、0.5mg/L BAP、20g/L蔗糖和5g/L琼脂，第一固体培养基的pH为5.8；

步骤二，将步骤一中得到的组织转移至含有细胞***素的第二固体培养基中，所述第二固体培养基为含3mg/L BAP和10g /L蔗糖的MS培养基，固体培养基的pH为5.8；在第二固体培养基中培养70天后，将其接种到第三固体培养基上，第三固体培养基含有MS盐、0.3mg/L BAP、20g/L蔗糖和3g/L琼脂，第二培养基的pH为5.8；

步骤三，在第三固体培养基中培养28天后，使叶芽组织再生并诱导生根。

本实施例中牛大力的生根率为70%，只在固体培养基中培养时，牛大力的生根率较低。